Summary
Apresentamos aqui um método para alimentar pesticida alimentos contaminados se tanto a um indivíduo abelha do mel e uma colónia colmeia. O procedimento avalia o efeito pesticida em abelhas de mel individuais por alimentação in vivo de dieta da larva de base e também na condição natural da colónia colmeia.
Introduction
A presença de pesticidas no meio ambiente é um dos problemas mais graves que os impactos a vida de uma abelha do mel 1, 2, 3. Vários estudos têm demonstrado a presença de resíduos de pesticidas comum em colónias de abelhas e produtos das abelhas. Em Taiwan, a aplicação média de pesticidas foi 11-12 kg / ha a cada ano (de 2005 a 2013). A quantidade de pesticidas utilizados em Taiwan é maior do que a dos países da UE e os países da América Latina 4, 5. Em outras palavras, o ambiente apícola está sofrendo sério estresse de pesticidas, especialmente em Taiwan e possivelmente em outros países.
O mel de abelha Apis mellifera é um dos principais polinizadores em sistemas agrícolas 6 e também produz produtos valiosos, como mel. No entanto, as abelhas são exposed para vários pesticidas e estes pesticidas podem ser trazidos de volta para colmeias depois das pastagens em flores que foram pulverizados com pesticidas ao recolher néctar e pólen 7, 8. Eles também podem ser expostos a pesticidas pelos apicultores-se com o objetivo de controlar os problemas de pragas dentro das colmeias 9, 10, 11. Porque as larvas de abelhas de mel são alimentados por abelhas enfermeira para o seu desenvolvimento, larvas, parasitas e mesmo a rainha podem ser expostos a estas néctares contaminados com pesticidas e pólen 12. A toxicidade de vários pesticidas para as abelhas precisa ser tratada 13.
Muitos esforços têm sido feitos para avaliar as questões de resíduos de pesticidas ambientais. Yang et al. testado a influência do inseticida imidacloprid neurotóxicos no desenvolvimento de larvas de abelhas mel nocolmeia e relataram que uma dose sub-letal de imidacloprid resultou num comportamento associativo olfactiva das abelhas adultas 14. Além disso, Urlacher et al. examinaram os efeitos sub-letais de um dos pesticidas organofosforados, clorpirifos, sobre o desempenho de aprendizagem de um trabalhador da abelha do mel, em condições laboratoriais 15. No nosso estudo anterior, foi avaliado o impacto de um regulador de crescimento de insectos (IGR), piriproxifeno (PPN), em abelhas de mel larvais 16.
Neste artigo, apresentamos métodos para avaliar os impactos químicos sobre o desenvolvimento das abelhas. métodos de alimentação de abelhas de mel foram descritos e aplicada quer abelhas produtoras de mel individuais ou a uma colónia. No primeiro, testaram-se diferentes concentrações de dieta da larva básica contaminada-pesticida (BLD) em larvas nas colónias para avaliar o impacto do pesticida em abelhas de mel individuais in vivo. Passamos então para simular o Condit naturaisiões do pesticida usando xarope contaminado-pesticida dentro de colmeias. Neste método, PPN, que é amplamente utilizado contra pragas de insectos 17 e é prejudicial para o desenvolvimento de larvas e pupas da abelha do mel 16, 18, 19, será um indicador para representar o efeito negativo do pesticida no campo.
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Protocol
1. Preparações
- Adicione 1 L de 50% de xarope de açúcar. Dissolve-se 1 kg de sacarose em 1 L de ddH 2 O.
- Preparar a soluo de piriproxifeno (PPN) em BLD. Adicione 1,1 L de solução de estoque de 10000 ppm PPN e diluir 100 mL de solução de PPN em 1 L esterilizados ddH 2 O. Armazenar a 4 ° C.
- Dilui-se a solução estoque PPN para concentrações finais de 0,1, 1, 10 e 100 mg / kg (ppm) no BLD para a experiência seguinte.
- Faça PPN-xarope (para o nível de colônia). Dilui-se a estoque PPN para concentrações finais de 10 e 100 ppm em 50% de xarope de açúcar para a experiência seguinte.
- Mel criação de abelha.
Nota: Aqui, a localização experimental é o apiário Universidade Nacional Ilan (NIU), Yi-Lan City, Taiwan; (Coordenadas GPS: N24.747278, E121.746200).- Verificar mel de abelha (Apis mellifera L.) colónias semanal para a quantidade de alimentos e alimentos para animais com 1 litro de 50% de xarope de açúcar, se necessário (a área de armazenamento de mel está vazio). Definir uma saudávelcolónia como 9 quadros de favos de mel de abelha, em cada colónia com uma rainha postura dos ovos normalmente.
- Preparar 100 mL de dieta da larva de base (BLD). Dissolve-se 6% de D-glucose, 6% de frutose, e 1% de extracto de levedura em água desionizada destilada esterilizada (ddH2O) e completar com 50% a geleia real. Armazenar a 4 ° C, mas não mais de 3 dias.
Nota: Pré-quente a 35 ° C antes da experiência e utilizar no prazo de 3 dias.
2. In Vivo método de alimentação
Nota: In vivo método de alimentação foi modificado a partir de Hanley et al. 20
- Mel de abelha selecção larvas e rotulagem.
- Inserir um excluidora para dividir 9 quadros de uma colónia saudável para 4 quadros e quadros 5, limitando a rainha para a secção de armação 4. Deixe pelo menos uma moldura vazia na seção 4 moldura para colocar ovos.
- Após a rainha de pôr ovos por 1 dia, Veja os quadros para o aparecimento de ovos e manter os ovos no interior das colmeias de 72 h (a 4 ° dia) até 1 dia de idade larvas eclodem. Tomar um dos quadros contendo larvas trabalhador com 1 dia de idade (tracejado dentro de 24 h) para fora a partir do ramo de teste pela mão e remover os trabalhadores da abelha do mel a partir da estrutura com uma escova de abelha.
- Cobrir o quadro com uma lâmina transparente (tamanho = comprimento x largura x espessura = 29,7 milímetros x 21 mm x 0.1 mm) e pregar a lâmina transparente na extremidade da armação com percevejos (Figura 1A).
- Para cada tratamento, seleccionar aleatoriamente 50 um dia de idade, as larvas (a 4 ° dia) e marcar cada célula ninhada utilizando canetas permanentes na transparente corrediça (Figuras 1A e 1B).
Nota: Adicione a informação de cada tratamento sobre a armação e corrediça transparente assim usando canetas permanentes para evitar a confusão entre os diferentes tratamentos. Remova os slides marcados e manter para o in vivo </ Em> alimentação e observação.
- Na alimentação in vivo.
- Adicionar diferentes concentrações de PPN-BLD (0,1, 1, 10 e 100 ppm) para cada célula ninhada marcado por pipetagem no dia 1, 2 e 3 com 10 mL, 10 mL e 20 mL, respectivamente, de acordo com a quantidade de admissão do idade larvas. Adicionar a mesma quantidade de BLD (sem PPN) a um grupo de controlo. Desse modo, a dose total de PPN-BLD em cada célula de cria marcado acumula-se 4, 40, 400, e 4000 pg.
NOTA: Reconhecer as células de cria rotulados pelas lâminas transparentes marcados e remover as lâminas transparentes marcados após a alimentação. Use fresco BLD para alimentar para prevenir a limpeza das células de cria pelas abelhas obreiras. - Devolver os quadros-tratados PPN para as colónias originais para observações adicionais.
NOTA: Cada tratamento tem quatro repetições biológicas em quatro colônias.
- Adicionar diferentes concentrações de PPN-BLD (0,1, 1, 10 e 100 ppm) para cada célula ninhada marcado por pipetagem no dia 1, 2 e 3 com 10 mL, 10 mL e 20 mL, respectivamente, de acordo com a quantidade de admissão do idade larvas. Adicionar a mesma quantidade de BLD (sem PPN) a um grupo de controlo. Desse modo, a dose total de PPN-BLD em cada célula de cria marcado acumula-se 4, 40, 400, e 4000 pg.
- Observação de larvas tratadas no dia 7.
- Para observar the PPN-tratada larvas, retornar os slides transparentes etiquetados para os quadros para gravar a mortalidade e taxa máxima nas células de cria rotulados.
- Observação de taxas de eclosão e de pupa tratados no dia 13.
- Remova a cera de abelha de células criação selada.
- Coloque as pinças macio derrubado na célula de cria e prender o pupas muito ligeiramente em seguida, tomar pupas suavemente.
- Transferir as pupas em placas de 24 cavidades de cultura de tecido com uma camada dupla de tecidos de laboratório sob cada poço. Grave o dano e mortalidade durante a transferência de pupa.
- Manter as placas de 24 cavidades de cultura de tecidos em uma incubadora a 34 ° C e 70% de humidade relativa até emergência (cerca de 8 dias).
- Observar e registar a pupas e abelhas surgiram.
- Estatisticas
- Calculam-se os dados gravados e presente como uma média ± SD
- Analisar os dados utilizando análise de variância (ANOVA), SAS e usar o teste de diferença mínima significativa (LSD) para analisar as diferenças entre os dois meios de diferentes tratamentos. Definir estatisticamente significativa como P -valor <0,05. Letras diferentes na mesma coluna da tabela mostraram um efeito significativo, a análise estatística.
3. A toxicidade de PPN na Colony Nível em colmeia
- Configure os grupos de abelhas.
- Inserir um excluidora verticalmente para dividir 9 quadros de uma colónia saudável para 4 quadros (Parte A) e 5 quadros (Parte B), enquanto que limitam a rainha para a secção de armação 4. Deixar, pelo menos, um quadro vazio na secção 4-quadro para a postura dos ovos.
Nota: Dito de outra rainha Excluder o em cima da parte rainha para evitar a rainha de se mover entre as partes. - Após a rainha de pôr ovos por 1 dia, verifique os quadros para o aparecimento de ovos. Pegue os quadros apropriados contendo ovos para fora da parte A com a mão e retirar os trabalhadores da abelha do mela partir da moldura com uma escova de abelha.
- Cobrir o quadro com corrediça transparente e pregar a lâmina transparente para a borda do quadro com tachas.
- Aleatoriamente selecionar 100 células de cria contendo ovos e marcar cada célula de cria usando marcador permanente sobre a lâmina transparente. Atribuir estes 100 células de cria como Grupo 1. Adicione a informação de cada tratamento sobre a armação e corrediça transparente usando o marcador permanente para evitar a confusão entre os diferentes tratamentos.
- Devolver o quadro rotulado a parte A, durante 3 dias e depois transferir a rainha a parte B para colocar ovos.
- Após 1 dia, veja os quadros de parte B, escolher uma estrutura apropriada e rotular 100 células de cria contendo ovos, tal como descrito no passo 3.1.4. Atribuir esses 100 células de cria como Grupo 2.
- Devolver o quadro rotulado com a parte B por 3 dias e, em seguida, transferir a rainha à parte A para pôr ovos.
- Repetir a troca rainha entre a parte A e parte B mais 6 vezes e atribuir grupos numericamente,respectivamente (Figura 2). Deve haver total de 9 grupos.
- Inserir um excluidora verticalmente para dividir 9 quadros de uma colónia saudável para 4 quadros (Parte A) e 5 quadros (Parte B), enquanto que limitam a rainha para a secção de armação 4. Deixar, pelo menos, um quadro vazio na secção 4-quadro para a postura dos ovos.
- T mel reat colónia de abelhas com PPN xarope de açúcar no dia 13 (Figura 2).
- Adicionar 1 L 50% PPN xarope de açúcar contendo 10 ou 100 ppm em uma caixa de plástico alimentador de abelha (W x L x H = 20 cm x 30 cm x 3,5 cm) e colocar a caixa no topo dos quadros nas colónias experimentais.
Nota: O Grupo 1 não receber o PPN em 13 dias, como as células de cria foram selados. - Alimentar o grupo de controlo com 1 L de 50% de xarope de açúcar (não PPN) como descrito na etapa 2.2.
- Adicionar 1 L 50% PPN xarope de açúcar contendo 10 ou 100 ppm em uma caixa de plástico alimentador de abelha (W x L x H = 20 cm x 30 cm x 3,5 cm) e colocar a caixa no topo dos quadros nas colónias experimentais.
- Contagem de larvas de um dia de idade e ficha como a taxa de eclosão de ovos de 100 células de cria marcadas para cada grupo no dia 5 (figura 2). Mel ovos de abelhas costumam levar 3 dias para eclodir em 0 larvas dia; portanto, verificar e rotular 100 ovos células contendo ninhada no dia 1 e contar o número de larvas de um dia de idade para cada grupo no dia 5 para se obter a percentagem de taxa de eclosão.
- Count as células criação selada e ficha como a taxa de nivelamento larvar de 100 células de cria marcadas para cada grupo no dia 11 (Figura 2). 6 a 7 de células de cria larval dia de idade serão cobertas com cera de abelha por trabalhadores de abelhas para pupating larvas.
- Observar pupas maturação e registar a taxa de eclosão de 100 células de cria marcadas para cada grupo no dia 17 (Figura 2).
- Remova a cera de abelha de células criação selada e tomar pupas com uma pinça com ponta macia suavemente. Transferir as pupas para uma placas de cultura de tecidos de 24 cavidades com uma camada dupla de tecidos de laboratório sob cada poço.
- Manter as placas de 24 cavidades de cultura de tecidos em uma incubadora a 34 ° C e 70% de humidade relativa até emergência.
- Observar e registar a pupas e emergiu abelhas para cada grupo até Grupo 9 (49 dias experimentais).
Nota: Cada tratamento tem quatro repetições biológicas.
- Estatisticas
- Calculam-se os dados gravados e presente como a mia± SD.
- Analisar as diferenças significativas entre os pares de tratamentos (por exemplo, 0 ppm / 10 ppm, 10 ppm / 100 ppm e 0 ppm / 100 ppm) em cada grupo através da utilização de duas caudas teste t de Student. Definir como estatisticamente significativa se P -valor <0,05.
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Representative Results
Para o teste de campo da abelha do mel, uma rainha foi limitado à secção 4-quadro para a postura dos ovos. Este passo poderia aumentar a densidade de ninhada em um quadro e facilitar observações subsequentes. Cada tratamento foi rotulado, e desenvolvimento das abelhas foi claramente observado através de um slide transparente. Na alimentação in vivo de PPN-BLD para as larvas de abelhas na colmeia foi realizada para avaliar com precisão a influência de PPN sobre o desenvolvimento das abelhas na colónia. Usando o método de alimentação in vivo facilitou a observação dos impactos dos tratamentos químicos na colmeia.
Para cada dose de PPN-BLD, um total de cinquenta células de crias foram marcados e tratados. Após a adição de PPN-BLD, os quadros tratados foram devolvidos para as colónias originais para observação sob condições naturais. Os efeitos negativos da PPN-BLD sobre abelhas larval estágio eram facilmente OBSErved. Foi observado um efeito dependente da dose. A Tabela 1 mostra o número de abelhas que morreram na fase de larva nas duas doses mais elevadas de 10 e 100 ppm. Como mostrado na Tabela 1, nas duas doses (0,1 e 1 ppm), a taxa máxima, dias a taxas de emergência e de eclosão não foram significativamente diferentes de 0 (BLD alimento adicionado) ou o controlo de jejum, com apenas uma percentagem significativamente mais elevada de abelhas com asas deformados a 1 ppm. Melanização de pupas foi observada a baixas concentrações de PPN. Além disso, a proporção de abelhas adultas apareceu com asas deformadas aumentou com doses mais elevadas de PPN (Tabela 1).
Para simular as colónias de abelhas sofrendo de resíduo PPN ambiental, alimentar de xarope de PPN a toda a colónia de abelhas mel foi realizada. Antes do tratamento, cada colónia foi dividida em 9 grupos temporais diferentes em intervalos de 3 dias por dois excluidora rainha (Figura 2). Por conseguinte, foram observados simultaneamente sob condições semelhantes às do ambiente natural dos efeitos de PPN sobre as taxas de eclosão, o nivelamento e a eclosão.
As colónias foram alimentados com xarope de 10 ou 100 ppm PPN no dia 13 (indicado pelo ponteado vermelho na Figura 2). Teoricamente, o grupo 1 era um controlo PPN-livre porque o PPN-xarope foi alimentada no dia 13 e as abelhas no grupo 1 foram na fase de pupa e tampado; as abelhas na fase larval começou a ser afectada nos grupos 2 e 3, e os ovos serão afectados em grupos de 4-9 devido ao maior tempo de exposição nas colmeias PPN-contaminados (Figura 2).
Neste ensaio, que alimentado colónias de abelhas com xarope de PPN e observado o desenvolvimento quando as abelhas adultas consumido o xarope e, presumivelmente, alimentados a rainha e larvas. Esta suposição foi confirmada pela hatcHing, nivelamento e as taxas de eclosão e as abelhas alados deformados foram observadas após os tratamentos de PPN, como mostrado nas Figuras 3A - 3D. Todos os parâmetros diferiram significativamente com a dose mais elevada (100 ppm), a partir do grupo 3, excepto a taxa de incubação (Figura 3A - 3D). Além disso, após os tratamentos de PPN-xarope, muitos pupas morreu com cutículas de black ou ao não emergir. No tratamento de 100 ppm PPN, as células foram cobertas destruído, e as pupas lesionado foram removidos a partir da colónia (Figura 3E).
Figura 1: Esquema de rotulagem células ninhada. (A) um trabalhador larvas dias de idade, coberto por papéis de deslizamento transparente e foram marcadas pelo marcador permanente. (B) identificada como 1 células de cria larvais trabalhador um dia de idade; a seta branca indica um 1 dias de idade larva do trabalhador dentro. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: tempo de vida para quando PPN é iniciado em relação aos 9 grupos experimentais. Diferentes concentrações de PPN foram alimentados no dia 13 (linha pontilhada vermelho). A colónia tratada foi dividida em Parte A e Parte B. As trocas rainha de parte A para parte B e vice-versa para a postura dos ovos são mostrados. Este foi reproduzido com permissão de Elsevier 16. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Figura 3: Desenvolvimento de larvas de abelhas mel antes e após a alimentação 1 kg de xarope de PPN em colónias de abelhas testados. Um total de nove grupos foram pesquisados nesta experiência: (A) taxa de eclosão; (B) taxa de nivelamento; (C) eclosão taxa; e (D) taxa de asa mal formado. Média ± SD são apresentados; As setas vermelhas indicam o tempo durante o qual PPN pode começar a agir sobre as abelhas. asteriscos pretas mostram significância estatística em comparação com o controlo (0 ppm). asteriscos vermelhos mostrou significância estatística entre 10 e 100 ppm; (E) 100 ppm xarope PPN abelha tratada colónia mostrou células não niveladas, pupas presumivelmente deformado e pupas preto e deformada. Este foi reproduzido com permissão de Elsevier 16. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
| PPN-BLD (ppm) | Larvas No. | desenvolvimento larval | ||
| taxa nivelada (%) | A taxa de eclosão (%) | asas malformados (%) | ||
| 100 | 140 | 0b | 0b | - |
| 10 | 139 | 22,2 ± 33.2b | 0b | - |
| 1 | 140 | 72,3 ± 17.9a | 67,7 ± 17.6a | 7,7 ± 5.7a |
| 0,1 | 136 | 78,3 ± 17.5a | 75,4 ± 22.8a | 1,4 ± 2.8b |
| 0 | 138 | 78,9 ± 5.4a | 78,9 ± 5.4a | 0b |
| Não alimentação | 122 | 87,8 ± 9.1a | 86,1 ± 7.2a | 0,8 ± 1.5b |
Tabela 1: Efeitos de continuaram 3 dias de alimentação de PPN sobre larvas 1 dia de idade. Para cada célula de larvas, 10, 10 e 20 uL de BLD foram adicionados a partir de dia de 1 a 3, respectivamente. Cada ensaio continha 25-38 larvas numa colónia e 4 colónias foram testadas. Média ± SD são apresentados. Letras diferentes na mesma coluna s significativamente diferentes pelo teste de diferença dos mínimos quadrados (P <0,05) após a ANOVA revelou um efeito significativo. Este foi reproduzido com permissão de Elsevier 16.
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Discussion
O método de postura de ovos limitados-rainha e método de permuta rainha são etapas críticas para a criação de grupos de abelhas para testes de campo dentro deste protocolo. O método de postura de ovos limitados-rainha permite a sincronização do ciclo de vida das abelhas de mel. Consequentemente, os pesquisadores podem selecionar um dia de idade larvas da mesma idade para o tratamento com diferentes doses de pesticidas. Para o método de permuta rainha, a rainha foi trocada entre a parte A (4 frames) e B (5 quadros) para obter diferentes estágios de desenvolvimento de mel de abelha para testes de campo para avaliar os impactos de resíduos de pesticidas e pesticidas. Além disso, um grande número de células de cria seleccionados foram registados no teste de campo usando lâminas transparentes para rotulagem. No entanto, ovo sobre-laying ocasionalmente resulta em células de cria insuficientes para a rainha postura dos ovos. Portanto, a preparação de quadros de vazios é necessário para o método de permuta rainha. Alternativamente, o método de postura de ovos limitados-rainha poderia ser também utilizado parapreparar os diferentes grupos de abelhas para testes na colméia. A separação das estruturas em 2 armações na parte A e 7 quadros na parte B, e a colocação da rainha na Parte A (2 frames) pode limitar os ovos postos pela rainha dentro dos quadros 2.
Para o método de alimentação in vivo em, PPN-BLD foi adicionada a cada célula de ninhada. As abelhas exibiu maior aceitação de BLD que o xarope 16, 20. Mel larvas de abelhas pode sobreviver e crescer em uma dieta artificial composta de geléia real, açúcares, extrato de levedura e água destilada 22, 23. A composição de glucose e frutose do BLD não afectou as taxas de sobrevivência das larvas in vitro 21, e, por conseguinte, BLD seria mais estável para o crescimento de abelhas na colmeia. Notavelmente, o uso de BLD fresco para a alimentação também pode impedir a exclusão larval as abelhas operárias durantea experiência de alimentação larvar. Além disso, durante o processo de alimentação, alimentação suave é inicialmente necessária a fim de evitar a morte de larvas de um dia de idade.
Durante os testes de campo, químicamentecontaminados BLD na exclusão larval ocasionalmente causado colméia devido à alta sensibilidade olfativa de abelhas de enfermagem. A composição de açúcar afecta significativamente a sobrevivência médio larvar, pré-pupa pesos larvares, pesos adultos, e ovaríolos 21. Quando o xarope foi utilizado para entregar o pólen transgénico ou um pesticida diazinão controlo positivo para as larvas de abelhas de mel, os trabalhadores removido poucos larvas a partir das células de crias de adição de alimentos contaminados ou 21. Assim, a composição de açúcar deve ser observado. O aumento do número de larvas de um dia de idade ou dispersar os locais de células reprodutoras indivíduo testado pode também melhorar os problemas. Com efeito, com base na observação de processos de tratamento de PPN-BLD e os impactos dependentes da dose de dramáticasPPN-BLD no desenvolvimento de abelhas, assumimos que os enfermeiros não remover o BLD adicionado artificialmente para as células de cria. Baixas concentrações de PPN causa melanização de pupas, possivelmente devido a um aumento da actividade de fenoloxidase, que regula e melanização pupation 24, 25, 26. Com base na utilização de um método de alimentação artificial para cada célula de cria, os impactos dramáticos de PPN-BLD sobre o desenvolvimento de abelhas de mel pode ser devido ao contacto directo com PPN a partir do primeiro dia de incubação.
As dosagens químicas utilizadas nas experiências de alimentação podem ser concebidos com base em dados de estudos de resíduos de pesticidas em amostras de pólen frescas colhidas de colmeias de abelhas de mel. Há uma variedade de rotas de contaminação por pesticidas de colônias no ambiente natural. Os contaminantes químicos poderiam ser trazidos de volta para as colónias de abelhas de mel e ingerido pelas larvas devido à mot alimentaçãoion das abelhas trabalhador, eventualmente, influenciar o desenvolvimento das larvas. Para avaliar o impacto de PPN ao nível colónia na colmeia, xarope foi usada em vez de pólen de alimentação neste estudo como o meio mais rápido e mais directa para garantir que as abelhas consumido o produto químico. Além disso, a condição do xarope pode ser definido, enquanto que o teor de pólen é difícil de controlar (por exemplo, agentes patogénicos ou contaminação por pesticidas).
Sob condições de campo, diferentes fases de desenvolvimento (ovos, larvas, pupas e adultos) de abelhas abelhas em uma colónia de abelhas mel sofrer o mesmo factor ambiente. Em nossa configuração experimental, as condições naturais foram simulados para avaliar os impactos da química sobre as fases de desenvolvimento de abelhas em um ambiente dinâmico. Por conseguinte, após o tratamento PPN (13 dias), pode-se observar a taxa de capeamento não influenciado no grupo 1, a taxa de cobertura influenciado nos outros grupos de oito, e a fase larval influenciados dos grupos 2 e 3, etc. Sob estas condições, os verdadeiros efeitos no interior da colónia e da via de dispersão do produto químico para toda a colónia são claras.
As colónias de abelhas tratadas com xarope de PPN exibiu distorção de células tapados e remoção de pupas da colónia. Além disso, foi observada extensa melanização de pupas na 100 ppm tratamento PPN. Assim, o método de alimentação PPN-xarope permitido o impacto dinâmico de produtos químicos no ciclo de vida das abelhas na colmeia a ser observado. Neste ensaio, o xarope captado pelas abelhas operárias e de enfermagem foi presumivelmente alimentado para a rainha e as larvas. Para confirmação, os nossos estudos futuros irão utilizar marcadores químicos (tais como um corante comestível) no xarope contendo química para facilitar ainda mais o estudo da dinâmica das colmeias quimicamente contaminados.
A fonte de alimento das abelhas enfermeira deve vir de forrageiras ou mandibular e hypopharyng colméia e larvas são alimentadassecreções das glândulas eal produzidos pelas abelhas enfermeira 21, 25, 26, 27, 28. Quando as larvas são alimentados por abelhas enfermeira, secreções produzidas pela glândula hipofaringe nas mandíbulas podem diluir a PPN-xarope. Esse efeito de diluição biológica se assemelha mais de perto as condições naturais, mas explica os resultados divergentes para o método de alimentação in vivo em. Vários materiais, incluindo outros pesticidas, metais pesados e patogénios de abelhas mel poderia ser aplicada a este método de alimentação para avaliar e tratar os papéis em populações de abelhas de mel.
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Disclosures
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Acknowledgments
Esta pesquisa foi apoiada por Grant 105AS-13.2.3-BQ-B1 do Bureau of Animal e Inspeção de Saúde de Plantas e Quarentena, o Conselho de Agricultura, Yuan Executivo e Grant 103-2313-B-197-002-MY3 do Ministério da Ciência e Tecnologia (MOST).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Honey bee box | SAN-YI Honey Factory | W1266 | Honeybees rearing |
| Queen excluder (between frames) | SAN-YI Honey Factory | I1575 | Queen limitation |
| Queen excluder (on top) | SAN-YI Honey Factory | I1566 | Queen limitation on top |
| Bee brush | SAN-YI Honey Factory, Taiwan | W1414 | clean the bees on frame gently |
| Bee feeder | SAN-YI Honey Factory, Taiwan | P0219 | feed sugar syrup to colony |
| Transparent slide | Wan-Shih-Chei, Taiwan (http://www.mbsc.com.tw/a01goods.asp?s_id=40) | 1139 | Mark the larval area on the frames (Material: Polyethylene Terephthalate, PET) (Size = Length*Width*thick = 29.7 mm * 21 mm * 0.1 mm) |
| 24 well tissu culture plate | Guangzhou Jet Bio-Filtration Co., Ltd | TCP011024 | Rearing pupae from extraction |
| Autoclave | Tomin medical equipmenco., LTD. | TM-321 | Make sterilized distilled deionized water (ddH2O) |
| P20 pipetman | Gilson | F123600 | Add PPN into bee larval food pool |
| Incubator | Yihder Co., Ltd. | LE-550RD | Rearing pupae from extraction |
| Kimwipes | COW LUNG INSTRUMENT CO., LTD | KCS34155 | Rearing pupae from extraction |
| Royal jelly | National Ilan University (NIU) | NIU | Make basic larval diet (BLD) |
| D-(+)-Glucose | Sigma | G8270 | Make basic larval diet (BLD) |
| D-(-)-Fructose | Sigma | F0127 | Make basic larval diet (BLD) |
| Yeast extract | CONDA, pronadisa | 1702 | Make basic larval diet (BLD) |
| Sucrose | Taiwan sugar coporation | E01071010 | Make sugar syrup for bee food |
| Pyriproxyfen (11%) | LIH-NUNG CHEMICAL CO.. LTD. | Registration No. 1937 | Insect growth regulator (IGR) used in the experiment |
References
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