Introduction
Malaria er et væsentligt globalt sundhedsproblem. 1 Alvorlig malaria er karakteriseret delvist af cerebral inddragelse og er ofte en dårlig prognostisk faktor. Cerebral involvering er almindelig hos børn under fem år i områder med høj malaria transmission og udgør den største årsag til malaria relateret død i denne aldersgruppe. 1 Mens aggressiv behandling kan være livreddende, kan det være svært at påvise cerebral malaria, især i tidlige stadier. De patologiske processer involveret i cerebral malaria omfatter mikrovaskulær forstyrrelse og cerebralt ødem, hvilket kan føre til alvorlig hjerne hævelse. I denne artikel præsenterer vi en magnetisk resonansbilleddannelsesprotokol (MRI), der muliggør helhjertet in vivo billeddannelse af eksperimentel cerebral malaria (ECM). Hele hjernens højopløselige billeddannelsesmetoder har været meget underudnyttet i denne sygdom, selvom der ikke er meget kendt om, hvordan ECM initierer i det centraleNervesystemet eller hvilke specifikke mekanismer der fører til sygdommen. In vivo MR, der dækker hele hjernen, repræsenterer et vigtigt forskningsværktøj til at få en bedre forståelse af ECM patologi. MR er i stand til at vurdere global hjerne hævelse, som for nylig er blevet anerkendt som en vigtig forudsigelse for døden, ikke kun i ECM, men også i human cerebral malaria. 2 , 3 Alvorlig hjerne hævelse opstår i dødelig sygdom og repræsenterer en af flere patologiske træk mellem ECM-modellerne og den menneskelige sygdom, en sygdom, som er præget af både inflammatoriske og mikrovaskulære ændringer. 4
ECM kan induceres i CBA eller C57BL mus gennem infektion med letalt Plasmodium berghei ANKA. 5 ECM indtræder typisk mellem dag 6 og 10 efter infektion og resulterer i montering, ataksi, åndedrætsbesvær og koma, hvilket fører til rapId død. 4 Rapid Murine Coma and Behavior Scale (RMCBS) er en nyttig score til evaluering af kliniske symptomer på ECM. Den består af 10 parametre, hver scorede fra 0 til 2, med en maksimal score på 20. 6 For nylig viste vi god overensstemmelse mellem sværhedsgraden af RMCBS score i ECM mus og patologiske ændringer demonstreret af MR. 7 I denne protokol beskriver vi ECM induktion i mus og in vivo magnetisk resonansbilleddannelse af mus med ECM.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyreforsøg, der er rapporteret i denne artikel, blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne for sammenslutninger for laboratorie dyre videnskabsforeninger (FELASA) kategori B og retningslinjerne for laboratoriedyrs videnskab (GV-SOLAS) og blev godkendt af de lokale tyske myndigheder i Karlsruhe (Regierungspräsidium Karlsruhe , Tyskland). Bemærk at biosikkerhedsniveau 2 gælder for myg og Plasmodium berghei ANKA sporozoit arbejde.
1. Infektion
- Infect Anopheles stephensi myg med Plasmodium berghei ANKA ved at fodre dem i 15 minutter på en gametocytemisk mus. Opbevar de smittede myg med 80% fugtighed og 21 ° C.
- Saml kvindelige myg fra deres bur 17 til 22 dage efter blodmålet. Placer dem på is for at bedøve dem.
- Ved hjælp af pincett placeres tre til fire myg på et glasskærm dækket med en dråbe kold RPMI-medium. Placer diaset under et mikroskop. <Li> Brug tang, stræk forsigtigt myggen mellem hoved og krop. Isolér spytkirtlen ved hjælp af en sprøjte og en nål. Gentag denne procedure med de resterende myg.
- Saml spytkirtlerne fra glasskinnen ved at suge dem op med en glaspipette og samle dem i et 1,5 ml centrifugerør.
BEMÆRK: Afhængigt af infektionshastighederne kan der normalt opnås 8.000 til 15.000 smitsomme sporozoitter pr. Spytkirtlen. - I ca. 3 min. Smadre de isolerede spytkirtler inden i centrifugerøret med en lille plastikpind for at isolere sporozoitterne fra spytkirtlen.
- Centrifuger i 3 minutter ved 1000 xg og 4 ° C for at rense sporozoitterne fra det resterende væv.
- Pipetter supernatanten, som indeholder sporozoitterne (SPZ), til et nyt centrifugerør og tæller de oprensede sporozoitter i et Neubauer hæmocytometer.
- Juster koncentrationen af oprensede sporozoitter til 10.000 / ml ved at tilsætte phOsphat-bufret saltvand.
- Injicer i alt 1.000 sporozoitter (0,1 ml) i halevenerne af indavlede C57BL / 6 mus for at indlede infektion. For at lette injektionerne placeres C57BL / 6-musene i en restrainer og sætter halerne i varmt vand (ca. 37 ° C) for at hjælpe med visualisering af svalevener;
BEMÆRK: Injektionen i sig selv er en kort procedure, der kan udføres inden for få sekunder. - Kontroller blodpesteparasitæmi en gang om dagen på blodudslæt fra dag 3 og fremefter efter SPZ-infektionen.
BEMÆRK: Overvågning af parasitæmi er tidligere blevet visualiseret i en JoVE-artikel af Mueller et al. 8 - Bedøm musene en gang dagligt med den hurtige murin Coma and Behavior Scale (RMCBS) score, startende fra dag 5 efter sporozoit injektionen.
BEMÆRK: En detaljeret beskrivelse af denne procedure, herunder en video demonstration, er blevet offentliggjort af Caroll et al. 6 - VurdereMusene med MRI-billeddannelse i henhold til RMCBS-scoren og det forskningsspørgsmål, der skal behandles. 6
2. Indstilling af magnetisk resonansbilleddannelse
- Udfør MR på en 9.4T lille dyre scanner ved hjælp af en volumen resonator til radiofrekvens transmission og en 4-kanals faset array overflade modtager spole. Tænd det temperaturstyrede vandbad til 42 ° C for at opretholde musens kropstemperatur.
- Inducer anæstesi i et kammer ved anvendelse af 2% isofluran og trykluft, indtil musen ikke længere reagerer på en tåhinde. Vedligehold anæstesi på 1-1,5%.
- Placer et halevenekateter i musens haleåre. Placer musen for MR ved at placere den tilbøjelig og med en knust ryg på en dyre seng udstyret med et hovedlås og tandstang for at minimere hovedbevægelsen. Pas på ikke at rette musens cervikale rygsøjle.
- Tilslut et kontrastmiddelindsprøjtningssystem til halevenekateteret. Brug et specialfremstillet injektionssystem fyldt med en Gd-DTPA (0,3 mmol / kg) sprøjte eller brug PE-rør tilsluttet en Gd-DTPA (0,3 mmol / kg) sprøjte.
- Påfør dexpanthenol øjensalve til begge øjne. Placer 4-kanals-faset array-overflademodtagerens hovedspole på hovedet på musen. Anbring en åndedrætspude på bagsiden af musen og tilslut den til en respirationsovervågningsenhed.
3. Imaging Protocol
BEMÆRK: Vælg billeddannelsessekvenser fra nedenstående protokol i henhold til de forskningsspørgsmål, der skal behandles. Alle listede parametre er gyldige for MR-softwaren, men det kan være nødvendigt at justere, hvis andre softwareprogrammer anvendes.
- Start med at udføre en lokaliseringsscanning for at sikre, at musens hjerne er i magnetens isocenter.
- For at kvalitativt vurdere det vasogene ødem skal du bruge 3D T2-vægtet billeddannelse ved at vælge en multi-slice RARE-sekvens.
- Indtast følgende paRammere i MR-softwaren: gentagelsestid = 2.000 ms, ekkotid = 22 ms, isotrop opløsning = 0,1 mm synsfelt = 20 x 10 x 12 mm 3 ; Matrix = 200 x 100 x 120, flip vinkel = 90-180 °; (Spin-echo) og sjældne faktor = 8. Start sekvensen og vent 10 min 48 s for at erhverve de røde billeder.
- For at kvantitativt vurdere vasogent ødem udføre T2 relaxometri ved at vælge en multi-skive, multiple spin-ekkosekvens.
- Brug følgende parametre: Gentagelsestid = 3.100 ms, ekkotid = 8-136 ms i intervaller på 8 ms, antal skiver = 17, skive tykkelse = 0,7 mm, i plan opløsning = 0.116 mm x 0.116 mm synsfelt 20 X 20 mm 2 , matrix = 172 x 172, flip vinkel = 90-180 grader; (Spin-ekko). Start sekvensen og vent 8 min 53 s for at hente de rå billeder.
- For kvantitativt at vurdere både vasogen ødem og cytotoksisk ødem, udfør diffusionsvægtet billeddannelse / tilsyneladende diffusionskoeFiktive (ADC) kortlægning ved at vælge en spin-echo EPI diffusionssekvens.
- Brug følgende parametre: Gentagelsestid = 3.400 ms, ekotid = 20 ms, skive tykkelse = 0,7 mm, antal skiver = 17, antal diffusionsfølsomme retninger = 30, b værdi = 1.500 s / mm 2 , δ = 3 ms , Δ = 9 ms, partiel Fourier-kodningsaccelerationsfaktor = 1,51, synsfelt = 12 x 15 mm 2 , matrix = 96 x 128, opløsning i planet = 0.125 mm x 0.117 mm, flipvinkel = 90-180 grader, og Antal mætningsskiver (sagittal) = 1. Start sekvensen og vent 7 min 56 s, indtil de rå billeder er erhvervet.
- For at vurdere mikrohemorragier skal du bruge 3D T2 * -vægtet billeddannelse. Vælg en flowkompenseret FLASH-sekvens.
- Indtast følgende parametre i MR-softwaren: Gentagelsestid = 2.000 ms, ekkotid = 22 ms, isotrop opløsning 0,08 mm, synsfelt = 32 x 15 x 8 mm 3 , matrixstørrelse = 400 x 188 x 100 og fLæbevinkel = 12 grader. Start sekvensen og vent 15 min. 40 s for at hente de rå billeder.
- For at vurdere arteriel patency, brug tid for flyvningsangiografi ved at vælge en 3D FLASH-sekvens.
- Brug følgende parametre i MR-softwaren: Gentagelsestid = 16 ms, ekkotid = 3,5 ms, skive tykkelse = 0,07 mm, opløsning i planet = 0.104 x 0.104 mm, synsfelt = 20 x 20 x 10 mm 3 , matrix = 192 x 192 x 142 og flip vinkel = 15 grader. Start sekvensen og vent 7 min 16 s, indtil billederne er erhvervet.
- For at bedømme blod-hjernebarriereafbrydelse skal du bruge 3D T1-vægtet billeddannelse før og efter en kontrastmiddelinjektion på 0,3 mmol / kg. Vælg en radiofrekvens-ødelagt FLASH-sekvens med en global radiofrekvens excitation.
- Brug følgende sekvensparametre i MR-softwaren: gentagelsestid = 5 ms, ekkotid = 1,9 ms, isotrop opløsning = 0,156 mm, synsfelt 20 x 18,7X 18,7 mm 3 , matrix 128 x 120 x 120 og flip vinkel = 8,5 °; Start sekvensen og vent 1 min 14s, indtil billederne er erhvervet.
4. Billedbehandling og analyse
- For at analysere blod-hjerne barriere forstyrrelser, trækker 3D ikke-forbedrede T1-vægtede billeder fra forbedrede T1-vægtede billeder med det aritmetiske værktøj eller billedregner værktøj i ImageJ. Evaluere subtraktion billeder for en stigning i signal, hvilket svarer til blod-hjerne barriere forstyrrelse. 9
- For at analysere hjernevolumen skal du bruge native 3D T1- eller 3D T2-vægtede datasæt. Delinerer hjernen fra olfaktorisk pære til cerebellum ved hjælp af segmenteringsredaktøren. 10
- Vasogent ødem
- Behandle T2-relaxometri-dataene med MRI-software eller brug en ikke-lineær mindst kvadreringskodeprocedure. 11 Proces diffusionsvægtede data for at opnå ADC-kort ved hjælp af MR-sofTware eller FDT værktøjskasse (se Materialebord ).
- Placer regioner af interesse manuelt ind i de forskellige anatomiske regioner.
BEMÆRK: Automatisk placering af områder af interesse kan registrere sig forkert på grund af betydelig hjerne hævelse. T2-tiderne og ADC-værdierne for de valgte anatomiske regioner opnås på denne måde.
- For at analysere mikrohemoragevolumen, afgrænse mikrohemorrhager, der fremstår som ujævne, mørke foci på T2 * -vægtede datasæt ved hjælp af segmenteringseditoren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hos C57BL / 6-mus kan de første kliniske symptomer på ECM observeres mellem dag 6 og 10 efter infektion med P. berghei ANKA- sporozoitter. ECM udvikler sig hos 60-80% af inficerede mus og udvikler sig hurtigt til koma og død inden for 24 til 48 timer. I modsætning hertil er mus, der ikke udvikler ECM, dør efter den anden uge efter infektion fra alvorlig anæmi på grund af hyperparasitæmi. 12
I MRI-billeddannelse er de tidligste tegn på ECM synlige i lygtepæren, som tilhører musens luktende system og er placeret i den rostralale del af hjernen. 7 , 13 En stigning i blod-hjernebarriereafbrydelse (set på kontrastforstærkede T1-vægtede billeder) og en væskestigning (stigning i T2-signal på T2-vægtede billeder, T2-relaxometri og diffusionsvægtet billeddannelse) indikerer tidligt vasogent ødemI lygtepæren, der allerede findes i mild sygdom (RMCBS score 20-16) og begynder at sprede sig efterhånden som sygdommens sværhedsgrad øges. Relative T1-signalbilleder hjælper med at opdage subtile blod-hjernebarriereafbrydelser ( Figur 1 ). Blod-hjerne barriereforstyrrelse og vasogent ødem fremskridt på en bestemt måde. Disse patologiske forandringer spredes langs rostral migrationsstrømmen, en migrerende rute for neuroblaster, mod hjernestammen, som nås i meget alvorlig sygdom (RMCBS sår 9-0). På T2-kort kan sværhedsgraden af vasogent ødem kvantificeres ved at tegne områder af interesse i specifikke anatomiske regioner, som vist i figur 2 . For hver region kan der opnås en T2 afslapningstid, der øges med stigende ødem. Sammen med vasogen ødem og blod-hjerne barriere forstyrrelser, begynder hjerne hævelse, da ECM sværhedsgraden stiger. Hjernevolumen, der tyder på ødem, begynder at stige betydeligt hos moderat syge mus som comPareret til baseline og yderligere stigninger i alvorligt syge mus ( figur 3 ).
Mikrovaskulær patologi, som det fremgår af mikrohemorrhagationer og en stigning i modtagelseskontrast (svarende til langsom strømning) forekommer efter de første tegn på blod-hjerne barriereafbrydelse og vasogent ødem og kan visualiseres med T2 * -vægtet billeddannelse. Mikrohemorrhager forekommer overvejende i lygtepæren ( figur 4 ). Antallet af mikrohæmninger øges med progressiv sygdom. Med progressiv sygdom er mikrohemorationer også tydelige i cortex, basalganglia, cerebellum, hvidt stof og hjernestamme.
Faldet arteriel patency ses ved angiografi i luften som tegn på makrovaskulær svækkelse parallelt med mikrovaskulære ændringer. Cerebral infarkt er ikke en nøglefinding i ECM. I meget alvorlig sygdom er der imidlertid fokusområder forADC-fald kan identificeres, hvilket indikerer cerebrale infarkt.
Figur 1: Blood-brain Barrier Disruption. ( A ) Et repræsentativt koronalt 3D T1-vægtet billede. En stigning i T1 signal er synlig i den centrale region af den olfaktoriske pære. ( B ) På det tilsvarende T1-relativsignalbillede (T1-kontrastbilledet subtraheret fra T1-postkontrastbilledet) er kontrastmiddel-ekstravasation lettere at afgrænse. Kontrastmiddel-ekstravasation er synlig i de frontale kortikale regioner (hvide pile). Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: T2 Slap afometry. Prøve T2 kort på forskellige højder fra en alvorligt syg mus med en RMCBS score på 5 ( A ), og fra baseline scanningen ( B ) vises i farveskala, i grå skala og i grå skala med ROI som farvede overlejringer. Mørkblå = RMS, grøn = cortex, turkis = ekstern kapsel, gul = basal ganglia, lyseblå = DMS, orange = thalamus og rød = hjernestam Klik venligst her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Hjernevolumenmålinger. Hjernevolumen øges signifikant hos moderat syge mus (RMCBS 15-10). Repræsentative værdier på 10 mus er vist. Data præsenteres som den gennemsnitlige standardafvigelse. En parret Elevens t-test blev brugt til at analysere forskellene i bhI hævelse mellem grupper. Hos moderat / alvorligt syge mus blev hjernemængden signifikant øget sammenlignet med baseline (p = 0,021 / 0,001). Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 4: Mikrohæmninger. Repræsentative T2 * -vægtede billeder af en mus før indtræden af blodstadieinfektion ( A ) og på dag 8 efter infektion med en RMCBS-score på 14 ( B og C ) vises. I det første billede er der ingen mikrohemorrhager ( A ), mens der i de andre og tredje billeder er flere mikrohemorrhager synlige, med overvejende betydning i lygtepæren (B: plankoronal billede; C: 3D-projektion med segmenterede mikrohemorrhager).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne artikel beskriver vi en helhjertet MR-protokol for at afgrænse ændringer i eksperimentel cerebral malaria. Vi mener, at MR har været underudnyttet i malariaforskningen til dato og håber, at vores protokoller vil hjælpe andre efterforskere. Vi vil gerne beskrive nogle yderligere punkter, der kan være nyttige.
Hvis alvorligt syge mus er afbildet, er positionering afgørende. På grund af øget intrakranielt tryk er musene modtagelige for døden, og derfor bør den cervikale rygsøjle ikke strækkes. Anæstesi bør også opretholdes til et minimum. Hvis mus med mild sygdom er afbildet, er det bedste tidspunkt for MRR 12-24 timer forud for den forventede begyndelse af de første kliniske symptomer. Mildt vasogent ødem i lygtepæren er synlig hos mus, der ikke udviser kliniske tegn på ECM (RMCBS score på 20).
Længden af selve MR-protokollen kan tilpasses i henhold til det specifikke forskningsspørgsmål. Den minimale protoCol bør indeholde en T2-vægtet sekvens eller T2-relaxometri og en T2 * -vægtet sekvens for at bedømme tilstedeværelsen af vasogen ødem og mikrohæmningsbelastning / mikrovaskulær svækkelse. For at få billeder af god kvalitet bør bevægelsesgenstande holdes på et minimum. Bevægelsen vil blive reduceret ved korrekt placering af musen og ved at holde vejrtrækningen ved ca. 60-80 åndedrag pr. Minut.
Andre in vivo billeddannelsesmetoder, såsom intravital mikroskopi, viser løfte ved visualisering af patologiske ændringer i ECM på cellulært niveau. 14 , 15 , 16 , 17 Sammenlignet med MR, kan intravital mikroskopi tilbyde høj rumlig opløsning på bekostning af kun at dække et begrænset kortikalt område. I modsætning hertil er MRI i stand til at dække hele hjernen med en opløsning på op til 80 μm. MR kan derfor lede yderligere cellulære undersøgelser ved at identificereFortilstedeværelsesstederne - begyndelsen af sygdommen - såvel som sygdomsfasen, som derefter kan vurderes ved hjælp af yderligere metoder. MR-fund i ECM kan sammenlignes med patologiske ændringer, der påvises med MR i human cerebral malaria. Både human og eksperimentel cerebral malaria viser vasogent ødem i områder af neurogenese, såvel som mikrovaskulær patologi, såsom sekundære cerebrale infarkter i vandområder. 7 , 18 Hvidt og gråt stof påvirkes på samme måde, og hjerne hævelse i både human og eksperimentel cerebral malaria involverer hjernestammen i svær sygdom, der forklarer komatos tilstand. 2 , 7
Vi håber, at in vivo billeddannelse vil hjælpe med at løse den underliggende patologiske mekanisme for cerebral malaria, som i øjeblikket forbliver uforskammet. Som ødem og hjerne hævelse er næppe synlige ex vivo, migThods til at visualisere denne patologi in vivo er nøgle og vil bidrage til at forbedre evalueringen af nye terapier og vaccinationer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Miriam Reinigs faglige tekniske bistand er taknemmeligt anerkendt. AH modtog finansiering fra et postdoktoralt stipendium fra det medicinske fakultet ved universitetet i Heidelberg. MP understøttes af et mindesmål fra Else-Kröner-Fresenius-stiftelsen. AKM er modtager af barselsorlov ved DZIF-akademiet for det tyske center for infektionsforskning (DZIF). JP er modtager af en Heidelberg Research Center for Molekylær Medicin (HRCMM) Karriereudvikling Fellowship. Vi anerkender endvidere taknemmeligt Julia M. Sattler og Friedrich Frischknecht for at give et eksemplarisk film af sporozoitisk bevægelse.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane | Baxter | 1001747 | for anesthesia |
| Dotarem | Guebert | 1086923 | Gd-DTPA contrast agent; 0.5 mmol/mL |
| Amira (Image Processing Program) | FEI Group | Version Amira 5.3.2 | |
| MATLAB | The MathWorks, Inc., | Release 2012b | |
| FDT toolbox | FMRIB's Software Library | http://www.fmrib.ox.ac.uk/fsl/fdt/index.html |
References
- World Health Organization. World Malaria Report. , (2014).
- Seydel, K. B., et al. Brain swelling and death in children with cerebral malaria. N Engl J Med. 372 (12), 1126-1137 (2015).
- Penet, M. F., et al. Imaging experimental cerebral malaria in vivo: significant role of ischemic brain edema. J Neurosci. 25 (32), 7352-7358 (2005).
- de Souza, J. B., Riley, E. M. Cerebral malaria: the contribution of studies in animal models to our understanding of immunopathogenesis. Microbes Infect. 4 (3), 291-300 (2002).
- Curfs, J. H., van der Meide, P. H., Billiau, A., Meuwissen, J. H., Eling, W. M. Plasmodium berghei: recombinant interferon-gamma and the development of parasitemia and cerebral lesions in malaria-infected mice. Exp Parasitol. 77 (2), 212-223 (1993).
- Carroll, R. W., et al. A rapid murine coma and behavior scale for quantitative assessment of murine cerebral malaria. PLoS One. 5 (10), (2010).
- Hoffmann, A., et al. Experimental Cerebral Malaria Spreads along the Rostral Migratory Stream. PLoS Pathog. 12 (3), e1005470 (2016).
- Mueller, A. K., Behrends, J., Blank, J., Schaible, U. E., Schneider, B. E. An experimental model to study tuberculosis-malaria coinfection upon natural transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei. J Vis Exp. (84), e50829 (2014).
- Hynynen, K., McDannold, N., Sheikov, N. A., Jolesz, F. A., Vykhodtseva, N. Local and reversible blood-brain barrier disruption by noninvasive focused ultrasound at frequencies suitable for trans-skull sonications. Neuroimage. 24 (1), 12-20 (2005).
- Nag, N., Mellott, T. J., Berger-Sweeney, J. E. Effects of postnatal dietary choline supplementation on motor regional brain volume and growth factor expression in a mouse model of Rett syndrome. Brain Res. 1237, 101-109 (2008).
- Giri, S., et al. T2 quantification for improved detection of myocardial edema. J Cardiovasc Magn Reson. 11, 56 (2009).
- Engwerda, C., Belnoue, E., Gruner, A. C., Renia, L. Experimental models of cerebral malaria. Curr Top Microbiol Immunol. 297, 103-143 (2005).
- Zhao, H., et al. Olfactory plays a key role in spatiotemporal pathogenesis of cerebral malaria. Cell Host Microbe. 15 (5), 551-563 (2014).
- Nacer, A., et al. Experimental cerebral malaria pathogenesis--hemodynamics at the blood brain barrier. PLoS Pathog. 10 (12), e1004528 (2014).
- Nacer, A., et al. Neuroimmunological blood brain barrier opening in experimental cerebral malaria. PLoS Pathog. 8 (10), e1002982 (2012).
- Pai, S., et al. Real-time imaging reveals the dynamics of leukocyte behaviour during experimental cerebral malaria pathogenesis. PLoS Pathog. 10 (7), e1004236 (2014).
- Shaw, T. N., et al. Perivascular Arrest of CD8+ T Cells Is a Signature of Experimental Cerebral Malaria. PLoS Pathog. 11 (11), e1005210 (2015).
- Potchen, M. J., et al. Acute brain MRI findings in 120 Malawian children with cerebral malaria: new insights into an ancient disease. AJNR Am J Neuroradiol. 33 (9), 1740-1746 (2012).
