Introduction
Malaria is een belangrijk wereldwijd gezondheidsprobleem. 1 Ernstige malaria wordt in het bijzonder gekenmerkt door cerebrale betrokkenheid en is vaak een slechte prognostische factor. Cerebrale betrokkenheid is gebruikelijk bij kinderen jonger dan vijf jaar in gebieden met een hoge transmissie van malaria en vertegenwoordigt de belangrijkste oorzaak van malariaverwante dood in die leeftijdsgroep. 1 Terwijl agressieve behandeling levensreddend kan zijn, kan het opsporen van cerebrale malaria, vooral in vroege fasen, moeilijk zijn. De pathologische processen die betrokken zijn bij cerebrale malaria omvatten microvasculaire verstoring en cerebrale oedeem, die kan leiden tot ernstige hersenzwelling. In dit artikel presenteren we een magnetisch resonantiebeeldvorming (MRI) protocol dat de gehele hersenen in vivo beeldvorming van experimentele cerebrale malaria (ECM) mogelijk maakt. Gehele hersenen met hoge resolutie beeldvormingsmethoden zijn in deze ziekte wijd ondergebracht, alhoewel weinig bekend is over de manier waarop ECM in de centrale startZenuwstelsel of welke specifieke mechanismen leiden tot de ziekte. In vivo MRI, die de hele hersenen bedekt, vertegenwoordigt een belangrijk onderzoeksinstrument om een beter begrip van ECM pathologie te krijgen. MRI is in staat om wereldwijde cerebrale hersenswelling te beoordelen, die onlangs werd erkend als een belangrijke voorspeller van de dood, niet alleen bij ECM, maar ook bij menselijke cerebrale malaria. 2 , 3 Ernstige hersenzwelling komt voor bij dodelijke ziekte en vertegenwoordigt één van verschillende pathologische kenmerken tussen de ECM-modellen en de menselijke ziekte, een ziekte die wordt gekenmerkt door zowel inflammatoire als microvasculaire veranderingen. 4
ECM kan geïnduceerd worden in CBA- of C57BL-muizen door infectie met dodelijke Plasmodium berghei ANKA. 5 Het ontstaan van ECM komt meestal voor tussen de dagen 6 en 10 na infectie en resulteert in montage, ataxie, ademhalingsstoornissen en coma, die tot rap leidenId dood. 4 De Rapid Murine Coma and Behavior Scale (RMCBS) is een nuttige score om klinische symptomen van ECM te evalueren. Het bestaat uit 10 parameters, elk gescoord van 0 tot 2, met een maximale score van 20. 6 Onlangs hebben we een goede afspraak gemaakt tussen de ernst van de RMCBS scores in ECM muizen en pathologische veranderingen aangetoond door MRI. 7 In dit protocol beschrijven we ECM-inductie bij muizen en in vivo magnetische resonantiebeeldvorming van muizen met ECM.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dierproeven die in dit artikel zijn gerapporteerd, werden uitgevoerd volgens de richtlijnen Federatie voor Laboratorium Diervoederverenigingen (FELASA) categorie B en de richtlijnen Samenleving van Laboratorium Diervoederkunde (GV-SOLAS) en werden goedgekeurd door de lokale Duitse autoriteiten in Karlsruhe (Regierungspräsidium Karlsruhe , Duitsland). Let op dat biosavety level 2 van toepassing is op muggen en Plasmodium berghei ANKA sporozoite werk.
1. Infectie
- Infect Anopheles stephensi muggen met Plasmodium berghei ANKA door ze 15 minuten op een gametocytemische muis te voeden. Bewaar de geïnfecteerde muggen bij 80% vochtigheid en 21 ° C.
- Verzamel vrouwelijke muggen uit hun kooi 17 tot 22 dagen na de bloedmaaltijd. Plaats ze op ijs om hen te verdoving.
- Met behulp van pincet, plaats drie tot vier muggen op een glazen glijbaan bedekt met een druppel koud RPMI medium. Plaats de dia onder een microscoop. <Li> Trek de muskus zorgvuldig uit tussen het hoofd en het lichaam. Isoleer de speekselklier met behulp van een spuit en naald. Herhaal deze procedure met de overige muggen.
- Verzamel de speekselklieren uit de glazen glijbaan door ze met een glazen pipet te zuigen en ze te verzamelen in een 1,5 ml centrifugebuis.
OPMERKING: Afhankelijk van de infectiesnelheden, kunnen bij voorkeur 8000 tot 15.000 infectieuze sporozoieten per speekselklier worden verkregen. - Breek ongeveer drie minuten de geïsoleerde speekselklieren binnen de centrifugebuis met een kleine plastic stok om de sporozoieten van het speeksel van speeksel te isoleren.
- Centrifugeer gedurende 3 minuten bij 1000 xg en 4 ° C om de sporozoieten te zuiveren uit het resterende weefsel.
- Pipetteer de supernatant, die de sporozoieten (SPZ) bevat, naar een nieuwe centrifugebuis en tel de gezuiverde sporozoieten in een Neubauer hemocytometer.
- Pas de concentratie van gezuiverde sporozoieten aan op 10.000 / ml door phOsfaat-gebufferde zoutoplossing.
- Injecteer in totaal 1 000 sporozoieten (0,1 ml) in de staartvenen van ingeboren C57BL / 6 muizen om infectie te starten. Om de injecties te vergemakkelijken, plaats de C57BL / 6-muizen in een restrainer en zet de staarten warm in (ongeveer 37 ° C) water om te helpen bij het visualiseren van de staartvenen;
OPMERKING: De injectie zelf is een korte procedure die binnen enkele seconden kan worden uitgevoerd. - Eens daags, controleer bloedstamsparasitemie op bloeduitstrijkjes vanaf dag 3 na de SPZ-infectie.
OPMERKING: Monitoring parasitemie is eerder in een JoVE-artikel van Mueller et al voorgesteld . 8 - Evalueer de muizen eenmaal per dag met de score van de snelle muizencommando en gedragscode (RMCBS), vanaf 5 dagen na de injectie van de sporozoïet.
OPMERKING: een gedetailleerde beschrijving van deze procedure, inclusief een videodemonstratie, is gepubliceerd door Caroll et al. 6 - schattenDe muizen met MRI beeldvorming volgens de RMCBS score en de onderzoeksvraag die moet worden aangepakt. 6
2. Magnetische Resonantie Imaging Setup
- Voer MR uit op een 9.4T kleine dieren scanner met behulp van een volume resonator voor radiofrequentie transmissie en een 4-kanaals fase-array oppervlak ontvanger spoel. Zet het temperatuurgestuurde waterbad aan op 42 ° C om de lichaamstemperatuur van de muis te behouden.
- Verdamp anesthesie in een kamer met 2% isofluraan en perslucht totdat de muis niet meer reageert op een teenknijp. Behoud de anesthesie bij 1-1,5%.
- Plaats een staartvaatkatheter in de staartader van de muis. Plaats de muis voor MRI door het gevoelig te maken en met een gekrompte rug op een dierenbed uitgerust met een hoofd- en tandbalk om de hoofdbeweging te minimaliseren. Zorg ervoor dat u de cervicale wervelkolom van de muis niet rechtstelt.
- Sluit een injectie systeem voor het contrastmiddel aan op de staartvaatkatheter. Gebruik een op maat gemaakt injectiesysteem gevuld met een Gd-DTPA (0,3 mmol / kg) spuit of gebruik een PE-buis aangesloten op een Gd-DTPA (0,3 mmol / kg) spuit.
- Breng dexpanthenol oogsalf aan beide ogen aan. Plaats de 4-kanaals-fase-array-oppervlaktontvangerkopspoel op het hoofd van de muis. Plaats een ademhalingstapje op de achterkant van de muis en sluit deze aan op een ademhalingsbewakingsapparaat.
3. Imaging Protocol
OPMERKING: Kies afbeeldingssequenties uit het onderstaande protocol volgens de te onderzoeken onderzoeksvragen. Alle vermelde parameters zijn geldig voor de MRI-software, maar moet mogelijk worden aangepast als andere softwareprogramma's worden gebruikt.
- Begin door een lokaliserende scan uit te voeren om ervoor te zorgen dat de muisbrein in het isocenter van de magneet zit.
- Om het vasogenische oedeem kwalitatief te beoordelen, gebruik 3D T2-gewogen beeldvorming door een multi-slice RARE-volgorde te selecteren.
- Voer de volgende pa inRameters in de MRI-software: herhalingstijd = 2.000 ms, echo-tijd = 22 ms, isotrope resolutie = 0,1 mm, zichtveld = 20 x 10 x 12 mm 3 ; Matrix = 200 x 100 x 120, fliphoek = 90-180 °; (Spin-echo) en zeldzame factor = 8. Start de volgorde en wacht 10 min 48 s om de ruwe beelden te verkrijgen.
- Om vasogeen oedeem kwantitatief te bepalen, voer T2 relaxometrie uit door een multi-slice, multiple spin echo sequentie te selecteren.
- Gebruik de volgende parameters: herhalingstijd = 3.100 ms, echo tijd = 8-136 ms in stappen van 8 ms, aantal slices = 17, slice dikte = 0,7 mm, in vlakke resolutie = 0.116 mm x 0.116 mm, zichtveld 20 X 20 mm 2 , matrix = 172 x 172, fliphoek = 90-180 graden; (Spin-echo). Start de volgorde en wacht 8 min 53 s om de ruwe beelden te verwerven.
- Om kwantitatief zowel vasogeen oedeem als cytotoxisch oedeem te beoordelen, voer diffusiegewogen beeldvorming / schijnbare diffusiecoëFficient (ADC) mapping door een spin-echo EPI diffusie sequentie te selecteren.
- Gebruik de volgende parameters: herhalingstijd = 3.400 ms, echo-tijd = 20 ms, schijfdikte = 0,7 mm, aantal slices = 17, aantal diffusiegevoelige richtingen = 30, b waarde = 1.500 s / mm 2 , δ = 3 ms , Δ = 9 ms, gedeeltelijke Fourier coderende versnellingsfactor = 1,51, gezichtsveld = 12 x 15 mm 2 , matrix = 96 x 128, in-vlak resolutie = 0.125 mm x 0.117 mm, fliphoek = 90-180 graden, en Aantal verzadigingsplaten (sagittal) = 1. Start de volgorde en wacht 7 min 56 s tot de ruwe beelden worden verkregen.
- Om microhemorrhages te beoordelen, gebruik 3D T2 * -gewogen beeldvorming. Selecteer een flow-gecompenseerde FLASH-volgorde.
- Voer de volgende parameters in in de MRI-software: herhalingstijd = 2.000 ms, echo-tijd = 22 ms, isotrope resolutie 0,08 mm, zichtveld = 32 x 15 x 8 mm 3 , matrixgrootte = 400 x 188 x 100 en fLiphoek = 12 graden. Start de volgorde en wacht 15 min 40 s om de ruwe beelden te verwerven.
- Om arteriële patency te beoordelen, gebruik de tijd van de vlucht angiografie door een 3D FLASH-sequentie te selecteren.
- Gebruik de volgende parameters in de MRI-software: herhalingstijd = 16 ms, echo-tijd = 3,5 ms, schijfdikte = 0,07 mm, in-plane resolutie = 0.104 x 0.104 mm, zichtveld = 20 x 20 x 10 mm 3 , matrix = 192 x 192 x 142, en fliphoek = 15 graden. Start de volgorde en wacht 7 min 16 s tot de afbeeldingen worden verkregen.
- Om de bloed-hersenbarrière verstoring te beoordelen, gebruik 3D T1-gewogen beeldvorming voor en na een injectie van een contrastmiddel van 0,3 mmol / kg. Selecteer een radiofrequentie-verwende FLASH-sequentie met een globale radiofrequentie excitatie.
- Gebruik de volgende volgordeparameters in de MRI-software: herhalingstijd = 5 ms, echo-tijd = 1,9 ms, isotrope resolutie = 0,156 mm, gezichtsveld 20 x 18,7X 18,7 mm 3 , matrix 128 x 120 x 120 en fliphoek = 8,5 °; Begin de volgorde en wacht 1 min 14s tot de beelden zijn verkregen.
4. Beeldverwerking en analyse
- Om de bloed-hersenbarrière verstoring te analyseren, trek 3D niet-verbeterde T1-gewogen beelden af van verbeterde T1-gewogen afbeeldingen met het rekenkundig gereedschap of beeldrekenaargereedschap in ImageJ. Evalueer de aftrekbeelden voor een toename van het signaal, dat overeenkomt met bloed-hersenbarrière verstoring. 9
- Om hersenvolume te analyseren, gebruik native 3D T1- of 3D T2-gewogen datasets. Delineer de hersenen van de olfactorische bol naar het cerebellum met behulp van de segmenteringsredacteur. 10
- Vasogeen oedeem
- Verwerk de T2 relaxometrie data met MRI software of gebruik een nonlinear least squares fit procedure. 11 Proces diffusie gewogen gegevens om ADC kaarten te verkrijgen met behulp van MRI sofTware of FDT toolbox (zie Material Table ).
- Plaats gebieden van belang handmatig in de verschillende anatomische gebieden.
OPMERKING: Automatische plaatsing van belangengebieden kan onjuist inschrijven als gevolg van significante hersenzwelling. De T2-tijden en ADC-waarden van de gekozen anatomische gebieden worden op deze wijze verkregen.
- Om microhemoragevolume te analyseren, worden microhemorrhages afgebeeld die als ovoide, dark foci op T2 * -gewogen datasets verschijnen, met behulp van de segmenteringsredacteur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bij C57BL / 6 muizen kunnen de eerste klinische symptomen van ECM tussen dagen 6 en 10 worden waargenomen na infectie met P. berghei ANKA sporozoites. ECM ontwikkelt zich in 60-80% van de geïnfecteerde muizen en komt snel binnen 24 tot 48 uur naar de coma en de dood. In tegenstelling tot deze, komen muizen die geen ECM ontwikkelen na de tweede week na infectie af aan ernstige bloedarmoede door hyperparasitemie. 12
Bij MRI-beeldvorming zijn de vroegste tekenen van ECM zichtbaar in de olfactorische bol, die bij het olfactorische systeem van de muis zit en in het rostrale deel van de hersenen ligt. 7 , 13 Een toename van de bloed-hersenbarrière verstoring (gezien op contrastversterkte T1-gewogen beelden) en een vloeistofverhoging (toename van het T2-signaal op T2-gewogen afbeeldingen, T2-relaxometrie en diffusie-gewogen beeldvorming) duiden vroegtijdig vasogeen oedeem aan.In de olfactorische bol die al in milde ziekte aanwezig is (RMCBS score 20-16) en begint te verspreiden aangezien de ernst van de ziekte toeneemt. Relatieve T1-signaalafbeeldingen helpen bij het detecteren van subtiele bloed-hersenbarrière verstoring ( Figuur 1 ). Bloed-hersenbarrière verstoring en vasogeen oedeem vorderen op een specifieke manier. Deze pathologische veranderingen verspreiden zich langs de rostrale migratiestroom, een migrerende route voor neuroblasten, naar de hersenstam, die wordt bereikt in een zeer ernstige ziekte (RMCBS sore 9-0). Op T2-kaarten kan de ernst van het vasogene edeem worden gekwantificeerd door gebieden van belang in specifieke anatomische gebieden te tekenen, zoals getoond in figuur 2 . Voor elke regio kan een T2 ontspanningstijd die toeneemt met toenemend edeem, worden verkregen. Samen met vasogenisch oedeem en verstoring van de bloed-hersenbarrière begint de zwelling van de hersenen, aangezien de ernst van de ECM toeneemt. Het hersenvolume indicatief voor oedeem begint significant te toenemen bij matig zieke muizen als comVergeleken met de basislijn en verdere stijgingen bij ernstig zieke muizen ( Figuur 3 ).
Microvasculaire pathologie, zoals blijkt uit microhemorrhages en een toename van het vat-gevoeligheidscontrast (overeenkomend met de trage stroom), komt voor na de eerste tekenen van bloed-hersenbarrière verstoring en vasogeen oedeem en kan worden geïllustreerd met T2 * -gewogen beeldvorming. Microhemorrhages komen voornamelijk voor in de olfactorische bol ( figuur 4 ). Het aantal microhemorrhages neemt toe bij progressieve ziekte. Met progressieve ziekte zijn microhemorrhages ook zichtbaar in cortex, basale ganglia, cerebellum, witte stof en hersenstammen.
Verlaagde arteriële patency wordt gezien door de angiografie van de tijd van de vlucht als teken van macrovasculaire inkorting in parallel met microvasculaire veranderingen. Serebrale infarct is geen sleutelbevinding in ECM. In zeer ernstige ziekte, echter, brandpunten vanADC afname kan geïdentificeerd worden, wat de cerebrale infarcten aangeeft.
Figuur 1: Bloed-hersenbarrièreafwijking. ( A ) Een representatief coronaal 3D T1-gewogen beeld. Een verhoging van het T1-signaal is zichtbaar in het centrale gebied van de olfactorische gloeilamp. ( B ) Op het bijbehorende T1 relatieve signaalbeeld (T1 pre-contrastbeeld afgetrokken van het T1 post-contrastbeeld), is het extravaseren van contrasteren makkelijker te definiëren. Contrastmiddel extravasatie is zichtbaar in de frontale corticale gebieden (witte pijlen). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: T2 Ontspanometry. Voorbeeld T2-kaarten op verschillende hoogtes van een ernstig zieke muis met een RMCBS-score van 5 ( A ) en vanaf de basislijn scan ( B ) worden in kleurenschaal, grijsschaal en grijsschaal weergegeven met ROI's als gekleurde overlays. Donkerblauw = RMS, groen = cortex, turquoise = externe capsule, geel = basale ganglia, lichtblauw = DMS, oranje = thalamus en rood = hersenstam Gelieve hier te klikken om een grotere versie van deze figuur te zien.
Figuur 3: Brein Volume Maten. Het hersengrootte neemt significant toe bij matig zieke muizen (RMCBS 15-10). Representatieve waarden van 10 muizen worden getoond. Gegevens worden weergegeven als de gemiddelde standaardafwijking. De t-test van een gepaarde student werd gebruikt om de verschillen in beha te analyserenBij zwelling tussen groepen. Bij matig / zwaar zieke muizen is het hersengrootte significant verhoogd in vergelijking met de basislijn (p = 0,021 / 0,001). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4: Microhemorrhages. Representatieve T2 * -gewogen beelden van een muis voor het begin van de bloedstadium infectie ( A ) en op dag 8 na infectie met een RMCBS score van 14 ( B en C ) worden getoond. In de eerste afbeelding zijn geen microhemorrhagen zichtbaar ( A ), terwijl in de tweede en derde afbeeldingen meerdere microhemorrhages zichtbaar zijn, met een overheersing in de olfactorische bol (B: vlakkoronale afbeelding; C: 3D projectie met gesegmenteerde microhemorrhages).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
In dit artikel beschrijven we een volledig hersen MRI protocol om veranderingen in experimentele cerebrale malaria te definiëren. Wij zijn ervan overtuigd dat MRI tot op heden onvoldoende benut is in het onderzoek naar malaria en hoop dat onze protocollen andere onderzoekers zullen helpen. We willen graag enkele extra punten omschrijven die nuttig kunnen zijn.
Als ernstig zieke muizen worden afgebeeld, is positionering van cruciaal belang. Vanwege de verhoogde intracraniale druk zijn muizen gevoelig voor de dood, waardoor de cervicale wervelkolom niet gestrekt moet worden. Anesthesie moet ook tot een minimum worden behouden. Als muizen met lichte ziekte worden afgebeeld, is het beste tijdstip voor MRI 12-24 uur voor de verwachte aanvang van de eerste klinische symptomen. Mild vasogeen oedeem in de olfactorische bol is zichtbaar in muizen die geen klinische symptomen hebben van ECM (RMCBS score van 20).
De lengte van het MRI-protocol zelf kan aangepast worden aan de hand van de specifieke onderzoeksvraag. De minimale protoCol moet een T2-gewogen sequentie of T2-relaxometrie en een T2 * -gewogen sequentie omvatten om de aanwezigheid van vasogeen oedeem en microhemorrhage belasting / microvasculaire inkorting te beoordelen. Om beelden van goede kwaliteit te krijgen, moeten bewegingsartefacten tot een minimum worden behouden. Beweging wordt verminderd door de juiste positionering van de muis en door de ademhalingssnelheid bij ongeveer 60-80 ademhalingen per minuut te houden.
Andere in vivo beeldvormingsmethoden, zoals intravitale microscopie, tonen belofte bij het visualiseren van pathologische veranderingen in ECM op cellulair niveau. 14 , 15 , 16 , 17 In vergelijking met MRI kan intravitale microscopie een hoge ruimtelijke resolutie aanbieden ten koste van een beperkte corticale zone. In tegenstelling hiermee kan MRI de hele hersenen bedekken met een resolutie van maximaal 80 μm. MRI kan daarom verdere cellulaire onderzoeken begeleiden door te identificerenDe voorliefde plaatsen - het begin van de ziekte - evenals het stadium van de ziekte, die vervolgens kan worden beoordeeld met behulp van verdere methodologieën. MRI bevindingen in ECM kunnen worden vergeleken met pathologische veranderingen die bij MRI bij menselijke hersenmariaria zijn vastgesteld. Zowel menselijke als experimentele cerebrale malaria tonen vasogeen oedeem in gebieden van neurogenese, evenals microvasculaire pathologie, zoals secundaire cerebrale infarcten in watergebieden. 7 , 18 Witte en grijze stof worden op een soortgelijke manier beïnvloed, en de zwelling van de hersenen bij zowel menselijke als experimentele cerebrale malaria houdt de hersenstam in ernstige ziekte in, waarbij de comatose staat verklaard wordt. 2 , 7
Wij hopen dat in vivo beeldvorming het onderliggende pathologische mechanisme van cerebrale malaria zal helpen ontrafelen, die op dit moment onduidelijk blijft. Aangezien oedeem en hersenzwelling nauwelijks zichtbaar zijn ex vivo, ikThods om deze pathologie in vivo te visualiseren zijn essentieel en zullen de evaluatie van nieuwe therapieën en vaccinaties verbeteren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
De deskundige technische bijstand van Miriam Reinig wordt dankbaar erkend. AH heeft financiering ontvangen van een postdoctorale beurs van de Medische Faculteit van de Universiteit van Heidelberg. MP wordt ondersteund door een memorandum van de Stichting Else-Kröner-Fresenius. AKM is een ontvanger van een moederschapsverlof van de DZIF Academie van het Duitse Centrum voor Infectie Onderzoek (DZIF). JP is de ontvanger van een Heidelberg Research Center for Molecular Medicine (HRCMM) Loopbaanontwikkelingsgenootschap. We erkennen ook dankbaar Julia M. Sattler en Friedrich Frischknecht voor het verschaffen van een voorbeeldige film van sporozoite beweging.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane | Baxter | 1001747 | for anesthesia |
| Dotarem | Guebert | 1086923 | Gd-DTPA contrast agent; 0.5 mmol/mL |
| Amira (Image Processing Program) | FEI Group | Version Amira 5.3.2 | |
| MATLAB | The MathWorks, Inc., | Release 2012b | |
| FDT toolbox | FMRIB's Software Library | http://www.fmrib.ox.ac.uk/fsl/fdt/index.html |
References
- World Health Organization. World Malaria Report. , (2014).
- Seydel, K. B., et al. Brain swelling and death in children with cerebral malaria. N Engl J Med. 372 (12), 1126-1137 (2015).
- Penet, M. F., et al. Imaging experimental cerebral malaria in vivo: significant role of ischemic brain edema. J Neurosci. 25 (32), 7352-7358 (2005).
- de Souza, J. B., Riley, E. M. Cerebral malaria: the contribution of studies in animal models to our understanding of immunopathogenesis. Microbes Infect. 4 (3), 291-300 (2002).
- Curfs, J. H., van der Meide, P. H., Billiau, A., Meuwissen, J. H., Eling, W. M. Plasmodium berghei: recombinant interferon-gamma and the development of parasitemia and cerebral lesions in malaria-infected mice. Exp Parasitol. 77 (2), 212-223 (1993).
- Carroll, R. W., et al. A rapid murine coma and behavior scale for quantitative assessment of murine cerebral malaria. PLoS One. 5 (10), (2010).
- Hoffmann, A., et al. Experimental Cerebral Malaria Spreads along the Rostral Migratory Stream. PLoS Pathog. 12 (3), e1005470 (2016).
- Mueller, A. K., Behrends, J., Blank, J., Schaible, U. E., Schneider, B. E. An experimental model to study tuberculosis-malaria coinfection upon natural transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei. J Vis Exp. (84), e50829 (2014).
- Hynynen, K., McDannold, N., Sheikov, N. A., Jolesz, F. A., Vykhodtseva, N. Local and reversible blood-brain barrier disruption by noninvasive focused ultrasound at frequencies suitable for trans-skull sonications. Neuroimage. 24 (1), 12-20 (2005).
- Nag, N., Mellott, T. J., Berger-Sweeney, J. E. Effects of postnatal dietary choline supplementation on motor regional brain volume and growth factor expression in a mouse model of Rett syndrome. Brain Res. 1237, 101-109 (2008).
- Giri, S., et al. T2 quantification for improved detection of myocardial edema. J Cardiovasc Magn Reson. 11, 56 (2009).
- Engwerda, C., Belnoue, E., Gruner, A. C., Renia, L. Experimental models of cerebral malaria. Curr Top Microbiol Immunol. 297, 103-143 (2005).
- Zhao, H., et al. Olfactory plays a key role in spatiotemporal pathogenesis of cerebral malaria. Cell Host Microbe. 15 (5), 551-563 (2014).
- Nacer, A., et al. Experimental cerebral malaria pathogenesis--hemodynamics at the blood brain barrier. PLoS Pathog. 10 (12), e1004528 (2014).
- Nacer, A., et al. Neuroimmunological blood brain barrier opening in experimental cerebral malaria. PLoS Pathog. 8 (10), e1002982 (2012).
- Pai, S., et al. Real-time imaging reveals the dynamics of leukocyte behaviour during experimental cerebral malaria pathogenesis. PLoS Pathog. 10 (7), e1004236 (2014).
- Shaw, T. N., et al. Perivascular Arrest of CD8+ T Cells Is a Signature of Experimental Cerebral Malaria. PLoS Pathog. 11 (11), e1005210 (2015).
- Potchen, M. J., et al. Acute brain MRI findings in 120 Malawian children with cerebral malaria: new insights into an ancient disease. AJNR Am J Neuroradiol. 33 (9), 1740-1746 (2012).
