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Neuroscience

L'uso di traccia Eyeblink condizionamento classico per valutare la disfunzione Hippocampal in un modello del ratto dei disturbi dello spettro fetale alcol

Published: August 5, 2017 doi: 10.3791/55350

Summary

Traccia eyeblink condizionamento classico (ECC) è stata usata per valutare apprendimento associativo hippocampal-dipendenti nei ratti adulti che sono stati somministrati un'alta concentrazione (11,9% v/v) di alcol durante lo sviluppo iniziale del cervello neonatale. In generale, le procedure ECC sono suoni strumenti diagnostici per la rilevazione di disfunzione del cervello attraverso molti contesti psicologici e biomedicale.

Abstract

Ratti neonatali sono stati amministrati una concentrazione relativamente alta di alcool etilico (11,9% v/v) durante giorni postnatali 4-9, un momento in cui il cervello fetale subisce rapidi cambiamenti organizzativi ed è simile a accelerato cambiamenti cerebrali che si verificano durante il terzo acetonide in esseri umani. Questo modello dei disordini di spettro di alcool fetale (FASDs) produce gravi danni cerebrali, che imita la quantità e il modello di binge drinking che si verifica in alcune madri alcoliche incinte. Descriviamo l'uso di traccia eyeblink condizionamento classico (ECC), una variante di ordine superiore di apprendimento associativo, per valutare la disfunzione hippocampal a lungo termine che in genere è visto nella prole adulto alcol-esposti. A 90 giorni di età, roditori erano chirurgicamente preparati con registrazione e stimolanti elettrodi, che ha misurato elettromiografici (EMG) lampeggiano attività dal muscolo della palpebra sinistra e consegnato lieve scossa posteriore all'occhio sinistro, rispettivamente. Dopo un periodo di recupero di 5 giorni, hanno subito 6 sessioni di traccia ECC per determinare le differenze di apprendimento associativo tra alcool-esposti e ratti di controllo. Traccia ECC è uno dei molti possibili procedure ECC che possono essere facilmente modificate utilizzando le stesse attrezzature e software, cosicché diversi sistemi neurali possono essere valutati. Procedure ECC in generale, possono essere utilizzate come strumenti diagnostici per la rilevazione di patologia neurale in diversi sistemi cerebrali e diverse condizioni che insultano il cervello.

Representative Results

Il software di eyeblink è in grado di fornire un insieme ampio e completo di dati per molti tipi di misure. Per brevità, segnaliamo che in questo studio, rappresentante risultati per apprendimento e prestazioni misure che includono adattivo percentuale di CR, adaptive CR ampiezza, percentuale di UR e ampiezza di UR. Il periodo di CR adattivo è stato scelto in quanto rappresenta l'acquisizione di risposte tempestive eyeblink sopra formazione ripetuta, a seguito di una maggiore plasticità sinaptica nell'ippocampo durante traccia ECC50,51,52. Le misure di UR sono stati scelti per delucidare se il deficit d'apprendimento indotti da alcool neonatale in traccia ECC erano dovuti a interruzioni nell'apprendimento associativo o interruzioni nella risposta allo shock noi - che può indicare le differenze motivazionali o motore, piuttosto che le differenze di apprendimento tra i gruppi di trattamento. Dati per ogni misura sono stati analizzati utilizzando 2 (sesso) x 3 (gruppo neonatale) x 6 (sessione) miscelati ANOVAs, con sessione come il fattore di ripetere-misure. Significativi effetti principali per il trattamento neonatale sono stati analizzati mediante test post-hoc di Tukey e interazioni significative sono stati analizzati mediante test semplici effetti. Tutte le analisi statistiche sono state condotte utilizzando un livello minimo di alfa di 0,05 e risultati nei grafici sono media ± SEM

Cominciando con la misura di percentuale di CR adattiva, l'ANOVA indicato un significativo effetto principale del gruppo neonatale, F(2,21) = 11,69, p < 0.001, ma nessun significativo effetto principale del sesso (p = 0.71) o interazione significativa fra questi fattori (p = 0,20). Come previsto, adaptive CR percentuale aumentata sopra le sei sessioni di formazione, F(5, 105) = 81.15, p < 0,001 e le differenze tra gruppi neonatale dipendevano da un certo livello di sessione, F(10, 105) = 4,58, p < 0.001. Non c'erano nessun altre interazioni significative che coinvolgono il fattore di sessione. Allo stesso modo per ampiezza di CR adattivo, c'era ancora un significativo effetto principale del gruppo neonatale, F(2,21) = 22,32, p < 0.001, ma nessun significativo effetto principale del sesso (p = 0,21) o interazione significativa fra questi fattori (p = 0.48). Ampiezza di CR inoltre è aumentato significativamente nel corso di sei sessioni di formazione, F(5, 105) = 59.27, p < 0,001 e le differenze tra gruppi neonatale dipendevano da un certo livello di sessione, F(10, 105) = 4,31, p < 0.001. Nel complesso, sia misure di CR hanno mostrato differenze significative tra i mezzi del gruppo e questi mezzi separati significativamente alle diverse sessioni di formazione. Per confermare che i gruppi hanno differito significativamente, test post-hoc di Tukey ha mostrato che i ratti (AI) alcol intubati eseguito significativamente peggio su entrambe le misure CR rispetto alla unintubated-controllo (UC) e intubati sham ratti (SI) (p < 0,01 per percentuale di CR; p < 0,001 per ampiezza di CR), che non hanno differito da altro (p> 0.05). Effetti semplici test eseguiti su gruppo neonatale significativo x interazioni di sessione per entrambe le misure CR, ha confermate che i ratti AI più significativamente sono stati alterati nell'acquisizione di CRs inizio alle sessione 2 e proseguendo attraverso sessione 6 rispetto ai ratti sia UC e SI (tutti p< 0,05), che non hanno differito da ogni altro in tutto sei sessioni. L'unica eccezione era adattivo ampiezza di CR per ratti non SI hanno cominciato a differire significativamente dai ratti AI fino alla sessione 3. Questi risultati sono mostrati in Figura 5A, 5B.

Non c'erano differenze significative nelle misure di UR a causa del sesso, gruppo neonatale o interazioni di questi fattori con il fattore di sessione. Questi risultati negativi hanno indicato che ogni gruppo è stato in grado di emettere eyeblink risposte allo shock noi altrettanto, e che i deficit di apprendimento osservati nei ratti AI non erano influenzati da differenze motivazionali o motore a lampeggiare (Figura 6A, 6B).

Figure 5
Figura 5 : Acquisizione di traccia condizionata risponde (media ± SEM). L'esposizione precoce di alcool (gruppo IA) significativamente influenzato acquisizione di percentuale di risposta adattativa condizionati (CR) (A) e ampiezza (B). Traccia ECC è intrinsecamente difficile da acquisire, quindi le misure sono relativamente più basse per tutti i gruppi - con ritardo ECC, percentuali possono raggiungere l'80-85% nei modelli del roditore di FASD21,53. Tuttavia, la traccia procedura ECC è più faticoso sull'ippocampo, che è suscettibile agli effetti di alcool durante lo sviluppo iniziale del cervello. * = p < 0.05, * * = p < 0,01, * * * = p < 0,001 tra UC e AI ratti; campione sono indicate tra parentesi. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Figure 6
Figura 6 : Acquisizione delle risposte unconditioned (media ± SEM). Prestazioni di eyeblink (percentuale di UR e ampiezza di UR) non era significativamente differente tra i gruppi. La mancanza di differenze indicano che l'intensità della scossa usata durante l'allenamento di acquisizione non ha alterato in modo differenziale motivazione nei ratti AI o la loro capacità di produrre difensiva lampeggiare le risposte allo shock, rispetto ai due gruppi di controllo (UC e SI). Campione sono indicate tra parentesi. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

Discussion

Cuccioli di ratto neonatale che ricevuto alcol etilico durante giorni postnatali 4-9 ha esibito traccia eyeblink condizionata disabilità in età adulta. Questi risultati sostengono l'idea che l'alcol è un teratogeno con effetti nocivi sulla funzione hippocampal di resistere. Nel complesso, condizionato blocca nella procedura traccia era più bassa per i ratti esposti all'alcol rispetto ai ratti in entrambi i gruppi di controllo. Le disabilità di apprendimento associativo nei ratti esposti di alcool non sono state influenzate dalle differenze motivazionali o motore (cioè., nessuna differenza in lampeggiante all'intensità della scossa U.S.).

Mentre traccia ECC è un attrezzo diagnostico utile per illuminante neuropatologia hippocampal indotta da sfida, i risultati di questo metodo devono essere inseriti nel giusto contesto. In primo luogo, gli elementi procedurali chiave in questa dimostrazione coinvolto la somministrazione mirata di alcol durante una nota finestra di vulnerabilità per lo sviluppo del cervello, fabbricazione di hardware di elettrodo che permette la registrazione di attività elettromiografica e fornisce la resistenza agli urti, impianto chirurgico di suddetto hardware e successivi la sperimentazione animale con un paradigma di apprendimento che valuta una funzione cognitiva di interesse. In ogni fase del processo, si deve prestare attenzione a non causare danni inutili/non intenzionale ai soggetti del roditore e monitorare regolarmente i loro segni di salute. Loro risultati comportamentali forniscono la "finestra" di cognizione, un costrutto psicologico che è solo accuratamente descritto quando la loro salute non è compromessa da errori sperimentali che comprende la somministrazione di alcool, difetti dell'hardware o l'impianto chirurgico. Così, ogni elemento procedura nel processo di ricerca deve essere implementato in maniera sana al fine di garantire che i risultati da ECC possono essere estrapolati per risultati in esseri umani. In secondo luogo, il paradigma ECC fornisce informazioni sulla natura dell'apprendimento associativo, ma deve prestare attenzione per non estendere i risultati utilizzando questo approccio e largamente li attribuiscono ad altri dominii conoscitivi - come memoria di lavoro, memorie di breve/lungo termine e coscienza - a meno che uno ha integrato alcune sfaccettature di questi domini all'interno di uno studio ECC di disegno sperimentale. Ad esempio, questa dimostrazione ha esaminato la fase di acquisizione dell'apprendimento ECC traccia, ma non ha esaminato la conservazione della memoria nei ratti dopo hanno completato la formazione. Memoria è quindi un processo psicologico indipendente che deve essere valutato oltre ad apprendere. Per impostazione predefinita, si può incorporare un intervallo di mantenimento memoria per valutare o capacità di memoria a breve termine o a lungo termine. In terzo luogo, riconoscimento che ci sono sistemi di memoria parallela54 che possono lavorare simultaneamente con i fattori motivazionali, esperienziali e ormonali che contribuiscono al comportamento, è essenziale per la comprensione che l'associatività (durante ECC) è ma uno dei molti processi che rivelano ciò che è "buono" o "poveri" di apprendimento. Infine, traccia ECC non è un compito puramente hippocampal-dipendente, come altre regioni del cervello possono mediare alcuni componente del CR. Così, la comprensione delle interazioni tra diversi circuiti neurali e/o il tipo di parametri dello stimolo che sono utilizzati in uno studio, devono essere presi in considerazione quando si effettuano le implicazioni sulla base dei risultati discreti. Ad esempio, il cervelletto, contribuisce anche alla traccia ECC, dove essa influenza le caratteristiche topografiche del CR e CR tempismo, specialmente quando l'ISI è breve durata. Traccia ECC non è interessato in esseri umani con danno cerebellare che vengono testati con un intervallo lungo traccia (1.000 ms), ma è interessato a coloro che ricevono un più breve intervallo (400 ms) di traccia34. Inoltre, lesioni bilaterali della corteccia prefrontale mediale dorsale (mPFC) destinati a regioni anteriore del cingulate e mediale agranular in topi, evitare l'acquisizione della traccia CRs55, mentre la distruzione del mPFC caudale nei conigli produce simili risultati46. Questi risultati sottolineano anche l'importanza di considerare le differenze tra specie in contributi prefrontali cerebellare-cervello stelo guidato apprendimento associativo, come traccia ECC. Mentre l'esposizione neonatale dell'alcool durante l'acquisizione di 4-9 influenzata negativamente PD di 500-ms traccia CRs per adulto ratti in questo studio e altri47,56, questo non è lo stesso caso di ratti neonatali alcol-esposti che verificano un intervallo traccia di 300 ms, anche quando ha sfidato a dosi relativamente elevate di alcol (5 g/kg)57, suggerendo che il danno di traccia in ratti alcool-esposti dipende la durata dell'intervallo traccia.

In questo studio, l'ippocampo è stato sottolineato come essendo di vitale importanza per la mediazione traccia ECC e quando sfidato da esposizione neonatale dell'alcool, esibisce danni neurali che si riflette da disturbi nell'acquisizione della traccia CRs. Esso deve ammonito, tuttavia, che il circuito di gambo cervelletto-cervello, in particolare il nucleo di interpositus, è essenziale per molte sfaccettature di ECC, compresa l'acquisizione, espressione e caratteristiche topografiche del CR, a seconda del tipo di attività ECC tra cui traccia ECC36,40,55,58,59. Infatti, questo circuito neurale interagisce con l'ippocampo per guidare l'espressione di CRs durante forme di ordine superiore di ECC, come traccia ECC60. Non è del tutto chiaro se l'esposizione dell'alcool durante lo sviluppo iniziale del cervello in particolare riguarda la funzione hippocampal nella traccia ECC. Molte regioni differenti del cervello sono vulnerabili ai primi insulto di alcool, inclusi mPFC, cervelletto e ippocampo18,19,23,47,61,62, ed è molto probabile che alcol pregiudica il funzionamento di queste strutture a vari livelli e variano, ma funzionalmente importanti differenze attraverso molte procedure ECC. Nonostante le insidie per quanto riguarda l'interpretazione dei risultati da studi di traccia ECC, acquisizione di traccia CRs è stato indicato per almeno fare affidamento su un ippocampo intatto, come supportato da lesione animale studi42,44,63,64,65. Questa procedura rimane così un approccio altamente prezioso per dimostrare i legami tra l'esposizione dell'alcool inerente allo sviluppo per traccia condizionata blocca perché i circuiti neurali sottostante, è molto meglio compreso che quello degli altri compiti di hippocampal-dipendente, come luogo di apprendimento nel labirinto dell'acqua di Morris, riconoscimento di oggetti nuovi e contestuale e traccia di paura condizionata.

ECC come un metodo del comportamento di "saggiare" cognizione, ha applicabilità diffusa nel campo della neuroteratology inerente allo sviluppo. Infatti, i risultati recenti dal nostro laboratorio sostengono la nozione che l'ippocampo in via di sviluppo è altamente sensibile agli effetti di alcol, che possono essere mitigati da diverse strategie interventistiche18,47. Il vantaggio chiave è che con una migliore comprensione dei deficit d'apprendimento ECC traccia indotta da alcool, possono essere predittivi di altri problemi nella base di hippocampal funzioni di fuori di apprendimento associativo - particolarmente quelli conosciuti per essere mediato tramite la stessa neurocircuiti hippocampal.

Applicazione di traccia ECC e le sue altre varianti (ad es., ritardo, inversione, discriminazione, composto) per delucidare i meccanismi neurobiologici e sistemi neurali coinvolti nell'apprendimento associativo, può essere esteso oltre il campo della ricerca sull'alcool fetale. Ad esempio, questo paradigma ha ricevuto molta attenzione in casi umani e modelli animali di patologie psichiatriche come schizofrenia66,67, malattie neurodegenerative come il morbo di Alzheimer68,69e le droghe di abuso70,71,72. Suoi benefici come un metodo di ricerca per valutare la disfunzione e la funzione neurocognitiva sono così evidenti attraverso molte discipline psicologiche e biomedicale, tra cui neuroscienze.

Disclosures

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Acknowledgments

Questo lavoro è stato supportato da una sovvenzione di TDT da alcool bevanda Medical Research Foundation (ABMRF).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Neonatal Alcohol Exposure
190 Proof Ethyl Alcohol (USP) Pharmco-AAPER 225-36000 [ECU Medical Storeroom] Can be substituted; should be USP; avoid using 200 proof ethyl alcohol
Container/Basket for Pups Any
Corn Oil Any Food grade
Heated Water Therapy Pump w/ Pads Gaymar TP-500 To keep pups warm; can be substituted
Hypodermic Needles 22G x 1 in, Sterile Any
Hypodermic Needles 30G x 1/2 in, Sterile Any
Isopropyl Alcohol 70% EMD Millipore PX1840-4 [Fisher Scientific] Can be substituted; reagent grade
www.fishersci.com
Long-Evans Rats (Female and Male Breeders) Charles River Laboratories N/A [ECU Dept. of Comparative Medicine] Age and weight need to be specified; pricing varies by these factors
www.criver.com
Micro Dissecting Scissors, 3.5 in, 23 mm Blades Biomedical Research Instruments 11-2200 For cutting PE tubing
brisurgical.com
Polyethylene 10 Tubing (0.011 in. I.D.; 0.024 in. O.D.) BD Diagnostic Systems 22-204008 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Polyethylene 50 Tubing (0.023 in. I.D.; 0.038 in. O.D.) BD Diagnostic Systems 22270835 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Regulated water heater or baby milk bottle warmer Any Optional; helps with warming up cold milk solutions
Tuberculin Syringes, Sterile, 1.0 ml Any
Tuberculin Syringes, Sterile, 10 ml Any Can be used to draw out ethyl alcohol or use appropriate size micropipet
Weigh Scale Any Should have good resolution (in gram units)
Name Company Catalog Number Comments
EMG Headstage Fabrication and Bipolar Electrode Modification
Bipolar Electrode, 2 Channel SS Twisted Plastics One, Inc. MS303/2-B/SPC  ELECT SS  2C TW .008" Must specify custom length of 20 mm below pedestal
www.plastics1.com
Centi-Loc Strip Socket Insulator (aka, Micro Strip) ITT Cannon / ITT Interconnect Solutions CTA4-IS-60* or CTA4-1S-60* *Depends on vendor; see www.onlinecomponents.com or www.avnetexpress.avnet.com
Dental Pliers, Serrated CMF Medicon 390.20.05 Can be substituted; use to crimp wires to male contact pins
www.medicon.de
Micro Dissecting Scissors, 3.5 in, 23 mm Blades Biomedical Research Instruments 11-2200 Only use to cut 3T wires; cutting 10T wires will damage the blade - use the blade of the wire stripper instead
brisurgical.com
PTFE-Coated Stainless Steel Wire, 10T (Bare Diameter .010 in) Sigmund Cohn-Medwire 316SS10T
www.sigmundcohn.com
PTFE-Coated Stainless Steel Wire, 3T (Bare Diameter 0.003 in) Sigmund Cohn-Medwire 316SS3T
www.sigmundcohn.com
Razor Blade Any To strip 1 mm from prongs of bipolar electrode
Relia-Tac Socket Contact Pin, Male Cooper Interconnect 220-P02-100 See Allied Electronics Cat # 70144761
www.alliedelec.com
Tweezers, High Precision, Serrated, 4 3/4 in Electron Microscopy Sciences 78314-00D To grasp 10T wire firmly while stripping PTFE with smooth tweezers
www.emsdiasum.com
Tweezers, High Precision, Smooth, 4 3/4 in Electron Microscopy Sciences 78313-00B
www.emsdiasum.com
Tweezers, Ultra Fine Tips, 4 3/4 in Electron Microscopy Sciences 78510-0 To strip 1 mm of PTFE from one end of 3T wire; grasp shielded portion with smooth tweezers
www.emsdiasum.com
Wire Stripper, 16-26 AWG Any Use the blade end to cut micro strips
Name Company Catalog Number Comments
Eyelid Surgery
Surgical Instruments (High Quality Stainless Steel)
2 x Dressing Forceps, 4 in Serrated Biomedical Research Instruments 30-1205 Can be substituted; extra forceps for grasping electrodes/screws outside of surgery tray
brisurgical.com
Dressing Forceps, 3 in Serrated Biomedical Research Instruments 30-1200 Can be substituted
brisurgical.com
Instrument Tray Biomedical Research Instruments 24-1355 Can be substituted
brisurgical.com
Knife Handle No. 3, 5 in Biomedical Research Instruments 26-1000 Can be substituted
brisurgical.com
Micro Dissecting Forceps, 3.5 in, Fine Points Biomedical Research Instruments 10-1630 Can be substituted
brisurgical.com
Micro Dissecting Forceps, 3.5 in, Smooth Platform (0.3 x 5 mm) Biomedical Research Instruments 10-1720
brisurgical.com
Micro Dissecting Scissors, 3.5 in, Extremely Delicate, 15 mm Blades Biomedical Research Instruments 11-2000 Can be substituted
brisurgical.com
Plain Splinter Forceps, 3.5 in  Biomedical Research Instruments 30-1600 Can be substituted
brisurgical.com
#10 Stainless Steel Surgical Blade for #3 Handle, Sterile Any Can be substituted
0-80 x 0.125 in Stainless Steel Screws Plastics One, Inc. 0-80 x 0.125 Can be substituted
www.plastics1.com
Alcohol Prep Pads, Sterile Fisher Scientific 22-363-750 [Fisher Scientific Can be substituted
www.fishersci.com
Betadine Povidone-Iodine Purdue Frederick Co. 6761815101 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Betadine Povidone-Iodine Prep Pads Moore Medical 19-898-946 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Cotton-Tipped Swabs, Autoclavable Any Typically 7.6 cm or 15.2 cm length
Drill Bit for Pin Vise, #55 (0.052 in) Any Metal should resist rusting and corrosion
Gauze Pads, 2 in x 2 in Fisher Scientific 22-362-178 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
General Purpose Latex/Nitrile/Vinyl Gloves Any
Glass Bead Sterilizer Any Sterilize instruments between surgeries
Heated Water Therapy Pump w/ Pads x 2 Gaymar TP-500 Can be substituted; separate pumps are recommended - 1 for surgery, 1 for recovery
Hypodermic Needles 26G x 3/8 in, Sterile Any
Isoflurane Vedco NDC 50989-150-12 Manfacturer can be substituted; veterinary approval may be required
Isoflurane Vaporizer System, Tabletop, Non-Rebreathing Parkland Scientific V3000PK Can be substituted
www.parklandscientific.com
Jewelers Screwdriver w/ 1.8-2 mm Blade Any Metal should resist rusting and corrosion
Ortho-Jet BCA Package (Dental Cement) Lang Dental B1334 Contains powder (1 lb) and liquid
www.langdental.com
Oxygen Tank with Pressure Regulator, Large Local supplier
Porcelain Crucible, High-Form, Glazed, 10 ml CoorsTek, Inc. 07-965C [Fisher Scientific] Can be substituted with Fisher FB-965-I Wide-Form Crucible
www.fishersci.com
Puralube Veterinary Ophthalmic Ointment, Sterile Henry Schein Company NC0144682 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Quatricide PV-15 Pharmacal PV-15 Antimicrobial disinfectant; can be substituted
www.pharmacal.com
Rat Gas Anesthesia Masks for Stereotaxic Surgery  Stoelting Company 51610
www.stoeltingco.com
Rat Stereotaxic Apparatus w/ Ear Bars (45 Degree) Any 45 degree bars are recommended to prevent damaging eardrums
Roboz Surgical Instrument Milk Roboz Surgical NC9358575 [Fisher Scientific] Can be substituted; for lubricating instruments during autoclaving
www.fishersci.com
Rodent Hair Trimmer Any
Sodium Chloride Fisher Scientific S641-500 [Fisher Scientific] To make 0.9% saline; reagent grade; USP
www.fishersci.com
Stainless Steel Microspatula (Blade: 0.75 L x 0.18 in. W) Fisher Scientific 21-401-15 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Starrett Pin Vise, 0.000 in - 0.055 in Any Nickel-plated or equivalent recommended to resist rusting and corrosion
Sterile Surgical Gloves Any
Sterilization Wraps, 20 in x 20 in, Autoclavable Propper Manufacturing 11-890-8C [Fisher Scientific] Useful for wrapping autoclavable supplies and on sterile field during surgery
www.fishersci.com
Surgical Drape, Sterile/Autoclavable Any May need to cut to size for rats
Surgical Gown* Any *If required by IACUC
Surgical Mask Any
Tuberculin Syringes, Sterile, 1.0 ml Any
Weigh Scale Any Should have good resolution (in gram units)
Name Company Catalog Number Comments
Eyeblink System and Components (assuming 4-rodent system)
5 Channel Commutator x 4 Plastics One, Inc. SL2 + 3C
www.plastics1.com
Bipolar Electrode Cable, Dual 305 x 4 Plastics One, Inc. 305-305 80CM TT2 (C) Provides plug end to bipolar electrode on rat and to commutator; must be modified
www.plastics1.com
Cable, 5 Channel, Shielded, 26 AWG x 4 Any To fabricate commutator cable; this must be made from scratch
Chamber for Operant Test Box (Inside: 24 H x 23 W x 14 D in) x 4 Med-Associates Can be substituted; inner dimensions should fit operant test box comfortably, with room for acoustical foam; fit with fan - 55-60 dB
www.med-associates.com
Eyeblink System and Software JSA Designs N/A Proprietary and customized for research lab
Heat Shrink Tubing (3/16 in, 1/4 in, 3/8 in, 1/2 in Diameters) Any To protect modified commutator cable soldered ends and splices
Melamine Triple Peak Acoustical Foam w/Black Hypalon (24 x 48 in) McMaster-Carr 9162T5 Can be substituted; cut to fit 4 housing chambers
www.mcmaster.com
Operant Test Box (Exterior 12.5 L x 10 W x 13.5 in H), Complete x 4 Med-Associates ENV-007 Custom Package With stainless steel grid floor and custom top (3 in hole in center for commutator cable)
www.med-associates.com
Oscilloscope (Optional) Any Recommended minimum specs: 200 MHz analog bandwidth, 1 GS/s real-time sampling, 4 channels; see www.picotech.com
/td>
Piezo Tweeters (Speakers) x 4 (7 x 3 in) MCM Electronics 53-805 Must match frequency range specifications for eyeblink system (2500 Hz - 25 KHz)
www.mcmelectronics.com
Soldering Station, Solder, Flux, Tinner Any For soldering 26 AWG cables to female sockets (that fit male relia-tac contact pins) and bipolar plugs
Stimulus Isolators x 4 WPI International A365 These units run on 16-9V alkaline batteries; a suitable rechargeable version (A365R) is available
www.wpiinc.com
Tripolar Electrode Cable for SL3C Commutator x 4 Plastics One, Inc. 335-335 80cm TT3 C Provides plug end to EMG headstage on rat and to commutator; must be modified
www.plastics1.com
USB LED Lights x 4 Any USB-based lights do not cause electrical "noise" with the EMG signals from the rats
www.plastics1.com
Webcams x 4, Surveillance Software Any
PC Computer Running MS Windows OS Any

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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L'uso di traccia Eyeblink condizionamento classico per valutare la disfunzione Hippocampal in un modello del ratto dei disturbi dello spettro fetale alcol
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Tran, T. D., Amin, A., Jones, K. G., Sheffer, E. M., Ortega, L., Dolman, K. The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders. J. Vis. Exp. (126), e55350, doi:10.3791/55350 (2017).

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