Summary
Birçok ülkede insan trichinellosisli önlenmesi dünya çapında manyetik karıştırıcı yöntemi altın standart olarak kabul edilen sindirimi, yöntemleri ile duyarlı hayvanlardan kas örneklerinin laboratuvar incelemesinde dayanmaktadır.
Abstract
Trişinolozis insanlarda bir zayıflatıcı bir hastalıktır ve cinsi Trichinella nematod larvaları ile enfekte hayvanların çiğ ya da az pişmiş et tüketiminin neden olur. İnsan enfeksiyonlarının en önemli kaynakları, dünya çapında oyun eti ve domuz eti veya domuz eti ürünlerdir. Birçok ülkede, insan trichinellosisli önlenmesi duyarlı hayvan leşleri kas örneklerinin yapay sindirim yoluyla enfekte hayvanların tanımlanmasında dayanmaktadır.
Etin sindirimi ama manyetik karıştırıcı yöntemi altın standart olarak kabul edilir dayalı çeşitli yöntemler vardır. Bu yöntem, kas numuneleri ve müteakip filtrasyon ve çökelme adımları enzimatik sindirimden sonra mikroskop ile Trichinella larva algılanmasını sağlar. Bu yöntem, özel ve pahalı ekipman gerektirmez, ancak, iç kontrol kullanılamaz. Bu nedenle, sıkı kalite yönetimi applie edilmelidirtest boyunca d. Mevcut çalışmanın amacı ayrıntılı talimatlar ve Parazitler Avrupa Birliği Referans Laboratuarı ve Trichinella için Almanya'nın Ulusal Referans Laboratuarı deneyime dayalı analistlere yöntemin, kritik kontrol noktalarını sağlamaktır.
Introduction
Cinsi Trichinella ve Nematodlar dünya çapında etçil ve Hepçil memeliler, kuşlar ve sürüngenlerin çizgili kaslar tespit edilebilir. Bu zoonotik nematodlar domuz, attan insanı ham ya da yarı-çiğ et ve et türevi ürünler ulaşabilir ve av hayvanları yutulur edilir. Bu zoonoz patognomonik belirti ve bulgular, örneğin ishal, ateş, periorbital ödem ve miyalji ve miyokardit, tromboembolik hastalık ve ensefalit 1 olarak olası komplikasyonlar ile karakterize insanlarda ciddi bir hastalık olabilir.
Trichinella spiralis vahşi ve evcil hayvanlarda Trichinella enfeksiyonunun en yaygın etiyolojik ajanıdır ve dünya çapında insan enfeksiyonların çoğu neden olur. Avrupa, Kuzey ve Batı Afrika ve Batı Asya'da, Trichinella britovi insan enfeksiyonların kaynağıdır. Buna ek olarak, diğer on takson daha az yaygın etken olarak rapor edilir ve insan hastalığı maddeleri, genellikle, vahşi hayvanlar 2, dünyanın farklı bölgelerinde bulunurlar. Böyle yaban domuzu, ayı, mors ve porsuk gibi yabani hayvanlara ek olarak, domuz dünyada insan enfeksiyonunun en önemli kaynağını oluşturmaktadır.
Trişinolozis önlemenin en iyi yolu çiğ et ürünleri yemekten kaçınmaları ve herhangi bir et, güvenli sıcaklıklarda (özellikle oyun eti pişirmek için> 65 ° C 1 dakika boyunca, yani özünde kahverengi pembe et rengini değiştirmek için et ürünü) 3. Avrupa Birliği ve USDA et 4, 5 T. spiralis larvaları öldürmek için kullanılabilir domuz ürünleri dondurma ve pişirme süreleri ve sıcaklıkları belirttiniz. Ayrıca, et ve et ürünlerinde Trichinella inaktivasyonu için önerileri trişinolozis Uluslararası Komisyonu tarafından yayınlanan"xref"> 6. Avrupa'da, Trichinella enfeksiyon riskinin ihmal edilebilir ticari domuz sürüleri kontrollü barınma koşullarının tanıtılması yanında, insan trichinellosisli önlenmesi duyarlı hayvanlardan 4 kas örneklerinin laboratuvar incelemesinde dayanmaktadır.
Gıda güvenliği amacıyla, sindirim deneyleri et 3, 7 Trichinella larvaların doğrudan saptanması için tek güvenilir işlemlerdir. Sindirim testinin çeşitli varyasyonlar olsa bile, manyetik karıştırıcı yöntemi uluslararası kabul görmüş referans metot 3, 4, 7. Bu tahlil çizgili kas dokularında Trichinella larvaları tespit dayanmaktadır. Kas örnekleri enzimatik sindirimi ve ardından filtrasyon ve çökelme basamakları, Tri sonrachinella larva mikroskopi ile tanımlanır. ticaret yükümlülükleri ve ulusal mevzuata bağlı olarak, manyetik karıştırıcı yönteminin genel protokolde küçük varyasyonlar çok sayıda vardır. Burada, teknik detaylar AB gereklilikleri 4, ISO özellikleri 8, BİT kurallar 6 ve Parazitler (EURLP) Avrupa Birliği Referans Laboratuvarının tecrübe ve Trichinella Alman Referans Laboratuvarının dayanmaktadır.
Protocol
1. hazırlıklar
- Örnek koleksiyon
Not: Manyetik karıştırıcı yöntemi, tek veya toplanmış kas örnekleri için kullanılabilir.- Uygun tercih sitelerinden ve uygun miktarda 9 örnekleri toplamak. Ülke koşullarına veya ICT, OIE veya ISO tavsiyelerine başvurun.
- Avrupa Birliği için, örneğin, yerli domuz asma kısmına geçişte bir diyafram ayağı 1 gr örnek almak. Tüm kas örnekleri tüm yağ ve fasya serbest olduğundan emin olun.
- dil test edilirse, test öncesinde yüzey katmanı kaldırmak.
- Numuneler donmuş, en Trichinella larva dirençli dondurmak ve ölümden sonra çözülmek değil gibi, özen, sindirime daha az dirençlidir ve azalmış tahlil duyarlılık sonuçlanan konteyner duvarları sopa eğilimindedir.
Not: Dondurulmuş ise l numune büyüklüğünü iki katınadoğusunda sedimantasyon süresi (aşağıya bakınız) artırmak.
- Uygun tercih sitelerinden ve uygun miktarda 9 örnekleri toplamak. Ülke koşullarına veya ICT, OIE veya ISO tavsiyelerine başvurun.
- Sindirim sıvısının hazırlanması
- 3 L'lik bir cam kabın içine 48 ° C - 46 bir ön ısıtmaya tabi musluk suyu 2 L% 25 HCI (16 ± 0.5 mL) ekleyin. eksik sindirim sıcaklık sonuçlarının çok düşük; Bir sıcaklık çok yüksek pepsin enzimatik özellikleri devre dışı bırakır.
- beher içinde, bir karıştırma çubuğu yerleştirin ve önceden ısıtılmış bir plaka çözelti karıştırıldı (46-48 ° C).
- (: 10,000 NF, 1: 12.500 BP, 2000 FIP 1) asidik solüsyona pepsin 10 ± 0.2 g ekleyin.
Not: pepsin kalitesi büyük önem ve enzim aktivitesi üretici tarafından tasdik edilmelidir biridir. Laboratuvar Güvenlik nedenlerinden dolayı ve pepsin aktivitesini sürdürmek için, sindirim sıvısı bileşenlerini ekleme sırası bağlı kalınmalıdır.
- Kas numune hazırlama
- bir blender veya öğütücü kas numuneleri 100 g kıymak. Blen kolaylaştırmakding, numunelere 2 ml su önceden ısıtılmış ekleyip 2 maksimum hızda uyum - 3 sn.
- İkinci harmanlama önce, blender açın ve alt ve tekrar karıştırma karıştırma kase kenar marjı üstündeki herhangi bir kas örnek aktarmak. Etin görünür hiçbir parça kalmayıncaya kadar 3 sn - 2 patlamaları ile karıştırma devam edin.
Not: Çok az karıştırma eksik sindirim neden olabilir, çok fazla karıştırma örneklerinde 6 Trichinella larva hediyesi zarar verebilir süre.
2. Prosedür
- Kas örnek sindirim
- bir silindir içine sindirim sıvısının 1 L aktarın. beher içine kıyma aktarın ve bir kaşık ya da çatalla sindirim sıvısı içinde yaymak. İyice 3 L behere önceden ısıtılmış sindirim sıvısı, 500 mL blender kapağı, bıçak ve blender kase durulayın.
Not: Eksik durulama sens kaybına neden olabiliriTivity. - alüminyum folyo ile örtün beher ve 44 sabit bir sıcaklıkta tutmak - 46 ° C ve bir termometre ile izleyin.
- Et parçacıkları kayboluncaya kadar 30 dakika sıçramasına olmadan derin bir girdap oluşturmak için sindirim sıvısı karıştırın. Test et (vahşi hayvanların örneğin et) türüne bağlı olarak, 60 dakika maksimum kadar sindirim süresini uzatır.
- bir silindir içine sindirim sıvısının 1 L aktarın. beher içine kıyma aktarın ve bir kaşık ya da çatalla sindirim sıvısı içinde yaymak. İyice 3 L behere önceden ısıtılmış sindirim sıvısı, 500 mL blender kapağı, bıçak ve blender kase durulayın.
- Filtrasyon ve sindirim sıvısının sedimantasyon
- sindirilmemiş doku miktarını belirlemek için, sıfır ölçek ayarlamak Kullanmadan önce elek tartmak ve ağırlığını not edin. Elek temiz ve sedimantasyon huni ulaşan Trichinella larvaları engel olabilecek herhangi bir doku parçacıklarının, yoksun olmalıdır. ayırma hunisi dikey tesviye olup olmadığını kontrol edin.
- Sindirimden sonra, dikkatli bir şekilde ayrılması cam huni içine 180 um'lik bir elekten sindirim sıvısı dökün. Ayırma cam huni genişliği b olmamalıe uzunluğu daha büyük% 55 iyi larva sedimantasyon izin vermek. Herhangi bir taşmasını önlemek için özen gösterin.
- duyarlılık kaybını önlemek için, iyice cam beher ve bir sıkmak yıkama şişesinden musluk suyu yaklaşık 200 mL elek durulayın ve sedimantasyon cam huni içine durulama suyunu aktarın. dikkatle 3 L beher kenarlarını durulama özen gösterin. elek kaldırın ve iyice elek altındaki alanı durulayın.
- Sindirilmemiş doku miktarının belirlenmesi
Not: Yöntemin uygulanmasında hatalar nedeniyle, kas dokusu iyi fasya ve sindirilemeyen olan bağ dokusu olarak, elek üzerinde kalabilir. sindirilmemiş doku miktarı ilk 10 dakika sedimantasyon adım (2.5 bakınız) sırasında belirlenir. kalıntı su sindirilmemiş doku, belirlenen ağırlığı; etkileyebilir gibi bu elek kuru yaklaşık 30 dakika izin verir.- bir ölçekte bir kağıt havlu yerleştirin ve undiges ile elek tartmakted dokular.
- Sindirilmemiş dokularla elek ağırlığı filtrasyon öncesi elek ağırlığının çıkartılması. Başlangıç numune ağırlığının en fazla% 5'ten elek (örneğin, 5 g / 100 g başlangıç maddesi) üzerinde kalır, eğer bir ayrıştırma işlemi tatmin edici olarak kabul edilmektedir.
- sindirilmemiş doku miktarı% 5 aşarsa, taze kas örnekleri kullanarak testi tekrarlayın. Kalan doku ağırlıklı sindirilmemiş kas dokusunun oluşması ve taze örnekleri mevcut değildir durumunda, tekrar sindirilmemiş kalıntıları sindirmek ve özgün örneklerin yanı sıra inceler.
- Sindirim sıvısı sedimantasyon
- 30 dakika boyunca ayırıcı bir huni içinde filtrelendi sindirim sıvısı tutun. Bozulmamış bırakılırsa, Trichinella larvaları huninin alt kısmında çözecek.
- Dondurulmuş numuneler kullanıldığında, 60 dakikalık bir maksimum çökelme süresi artar.
- sedimentasyon tamamlandıktan sonra, tam musluğunu açmakayırma hunisi hızla en az 40 ml sindirim sıvısı izin (kas örnekleri önceden dondurulmuş olsaydı 80 ml) bir ölçüm silindirine kaçıp.
- İlk olarak, silindir içine sıvının yarısı izin sonra tam geçmek sindirim sıvısının 10 mL izin vermek için ters yönde musluğunu açın. Son olarak, başka bir 10 ml ters yönde musluğunu açın. Bu prosedür Trichinella larvaları musluk içinde sıkışıp olmadığını garanti eder.
Not: yeterli hızı, hassasiyeti azalan ayırma hunisi içinde kalan larva önlemek için gereklidir.
- Silindir sindirim sıvısının sedimantasyon
- Larvalar çöktürmek için izin vermek için 10 dakika boyunca silindirde tortu bırakın. 10 ml sediment bozmadan bir pipet ile aspirasyon yoluyla 30 ml süpernatantı.
- numune doku liflerinin miktarını azaltmak için, tortu 30 ml musluk suyu ekleyin ve başka bir 10 m bırakınSıvı berrak hale gelene kadar. tekrarlayın.
- Süpernatantı ve 10 ml bir ızgarah Petri kabı veya larva sayım havzasına tortuları yıkanmış aktarın. 10 ml musluk suyu ile silindir durulayın ve ardından numune su ekleyin.
Not: Gerekirse örnek döküntü olarak büyük miktarlarda Trichinella larvaları (Şekil 1) belirlenmesini önleyebilir, daha yıkama aşamaları, yapılmalıdır.
- Mikroskobik inceleme
- Hemen yıkama aşamalarından sonra ve numuneler incelemek için 15 20x büyütmede bir trichinoscope veya ayarlanabilir bir yoğunluk alt aşama iletilen ışık kaynağı olan bir stereo-mikroskop kullanarak.
- Gridlenmiş Petri kabı içine numune döküldükten sonra, ızgara tarafından çanak / sistematik havza ızgara inceleyin. Hiçbir şüpheli yapılar bulunursa, yavaşça herhangi Trichinella la izin dairesel bir şekilde Gridlenmiş Petri kabı veya larva sayım havzasında sıvıyı taşımakPotansiyel olarak gözardı rvae, Petri kasesinin ortasına birikir. muayene tekrarlayın.
- Şüpheli bir yapı tespit edilirse, 40 büyütme artırmak - 100X. Bir pipet ile çanak / havzası Trichinella larvaları çıkarın ve% 90 etanol ile bir tüp içine toplayınız.
- tam çanak incelenmiştir sonra, çanak / havzanın nazik sallayarak başlayarak, prosedürü tekrarlayın. en az üç kez veya daha fazla larva kadar aynı işlemi tekrarlayın bulunur.
- larvaların sayısını. kas dokusunun miktarına korelasyon test edilmiş ve gram (lpg) başına larva olarak mevcut.
- çok larvalar güvenilir larva sayısını belirlemek için sindirim sıvısında varsa, ölçüm silindirine larvaları içeren sıvıyı geri dönmek sıkmak yıkama şişesinden musluk suyu ile durulayın ve dibe için larva bırakın.
- 10 dakika sedimentasyon süresinden sonra, belirli bir hacme süpernatant azaltılması (örneğin10 mL) eklenmiştir. kesin hacmini belirlemek için, bir pipet yardımıyla yeni bir silindirin içine süpernatant aktarın.
- dinç sallayarak sıvı içinde homojen larvaları Askıya. çalkalama hareketi sırasında, bir Petri kabı üzerine 20 uL, larva süspansiyon 12 damla ekleyin.
- mikroskopta her damla inceleyin. 240 uL larvaların sayısını belirlemek ve en yüksek ve en düşük sayısını silin. Yüzer toplam hacmine (örneğin 10 mL) larva sayısı tahmin.
Not: stereo-mikroskop kalitesi Trichinella larvaların tanımlanması için büyük önem taşımaktadır. - Larvalar bir pipetle bir tüp içinde toplanan zaman, larvalar pipet duvara sopa yoktu ama tüpüne aktarılır olduğunu dikkatlice kontrol edin.
Not: toplanmış örneklerin Olumlu Trichinella bulguları menşe karkas geri havuzundan takip edilmelidir. Pozitif karkas kimliklerini kadar burada, havuz boyutu giderek azaltılmalıdırtified. Örnek büyüklüğü, duyarlılığı artırmak için, bu işlem sırasında artabilir. ortak bir örnek incelenmesi pozitif ya da belirsiz bir sonuç üretir durumunda, bir 20 gramlık bir numune, her domuz alınır. Beş domuz 20 g numuneleri bir araya getirilmiş ve tarif edilen yöntem kullanılarak incelenmiştir. Bu şekilde beş domuz 20 gruplarından örnekleri incelenecektir. Trichinella beş domuz bir havuza numunede tespit edildiğinde, 20 gr örnekleri grubunda bireysel domuzlar toplanan ve menşe olumlu karkas tespit edilinceye kadar ayrı ayrı incelenir.
Representative Results
sindirim sonra, enfektif kas larva şekli belirlenmesi daha zor hale değişebilir. Tipik formlar sıkıca sarılmış larvaları hafifçe kıvrılmış larvaları ya da C-şekilli ya da tamamen boş larvalarına (- 2C Şekil 2B) içerir. gramı başına bulunan larva sayısı önemli ölçüde değişebilir ve birkaç yüz larvalarına karşı bir larva arasında olabilir.
Enfeksiyon kas larva morfolojisi Şekil 2A'da gösterilmiştir. Uzun 0.7 1.5 mm ve genişliği yaklaşık 0.3 mm Trichinella larvaları vardır. Özofagus dar ve hafifçe yuvarlatılmış uca sahiptir. manikür pürüzsüz. vücut boşluğuna, stichosome ön yarısında, bir yapı 45 55 büyük hücreler (stichocytes) bir sıra ile çevrili uzun ince borunun oluşturduğu, görülebilmektedir. Rektum, 11 herhangi projeksiyonlar olmadan da yuvarlak veya 10 uzantıları.
t "> Diğer yapılar, Trichinella larvaları yanı sıra, kas sindirim sonra bulunabilir bazı örnekler Şekil 3A gösterilmiştir -.. 3F Yabani hayvanlar genellikle canlandırılır tarafından eviserasyon sürecinde kontamine diğer parazitler ya da test için kullanılabilir kas örnekleri ile enfekte ya da cansız yapılar / organizmalar. larvaların boyu, anterior ve posterior uçları görünümü ve stichosome yardım oluşumu farklı nematod cins 12 arasında ayrım.
Şekil 1: (A) Yetersiz ve (B) Yeterli çalkalama Adımlar sonra Trichinella Larva mikroskopik incelenmesi. Ölçek çubukları 100 um göstermektedir. Daha büyük bir ettik görmek için buraya tıklayınızBu rakamın rsion.
Şekil 2: Larva (A) Rektum, Stichosome ve yemek borusu Gösterilen Morfoloji Bulaşıcı ve Trichinella Larva. Sindirim gösteren (B) uygulanmasından sonra kas larvaların olası şekilleri sıkıca sarılmış ve hafifçe larvaları ve (C) hareket larvaları çekilerek sarılır. Ölçek çubukları 100 um göstermektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 3: Manyetik Karıştırıcı Yöntemi ile sindirim Kası Örnekleri sonra Rastlantısal Bulguların örnekleri. (A) 'nın bir kıl benzer saçyaban domuzu bulunan dünya solucan; (B) yaban domuzu gelen Alaria alata; (C) yaban domuzu kas lifi; (D) Metastrongylus sp. yaban domuzu gelen; Toxocara sp: (E) bitkisel elyaf yaban domuzu (F) bulundu. yaban domuzu gelen larva. Ölçek çubukları 100 um göstermektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Discussion
manyetik karıştırıcı yöntemi kolayca yapılabilir rağmen, kesinlikle teknik detaylar bağlı kalarak değil, böylece tüketici sağlığını tehlikeye yetersiz duyarlılık yol açar. kritik kontrol noktaları yukarıdaki metinde vurgulanmıştır. Buna ek olarak, uygun ekipman kullanımı test başarılı bir sonuç için çok önemlidir. Tüm kaplar yüzeye larva yapışmayı azaltmak için silikon ile kaplanmış cam ve pipet uçları arasında yapılmalıdır.
Sindirim yöntemin duyarlılığı kaslarında larva yoğunluğu ve test edilen kas numunenin miktarına bağlıdır. 3 Bir larva yoğunluğu için - kas dokularının 5 lpg,% 100'lük bir duyarlılık bildirilmiştir, ancak 1 lpg Aşağıdaki duyarlılık% 40 13 düştü. Test edilen bir ev sahibi hayvan türlerine bağlı olarak, test duyarlılığı kullanılan örnek miktarı artırılarak geliştirilebilir. benYaban hayatı nfection yükü dolayısıyla daha büyük örnekler boyutları 14 kullanılır, genellikle düşüktür. Predilection siteleri de ev sahibi hayvanlar arasında değişir. Burada, aynı zamanda daha büyük bir örnek neden olabilir dil dikkate alınması gereken bu gibi kas dokularının alt sindirilebilirliği, 15 boyutları.
Bundan başka, manyetik karıştırıcı yöntemi, iç kontrol içermez anlamak önemlidir. Bu nedenle, belgelere örnekleme kalite güvence yönetimi doğru ve kesin sonuçlar elde etmek için esastır. Kas örneklerinde Trichinella larvaları tespit etmek için laboratuvar performansının kalitesi yeterlilik testlerinde her analisti düzenli katılımı ile izlenmelidir.
Yöntemin daha fazla sınırlamalar mikroskobu ile kas larvalarının son kimlik aşaması son derece öznel ve hea olduğunu vardırinceleyerek analizci tarafından larva morfolojisi bilgisine vily bağımlı.
Bu sorunu aşmak için ilginç bir alternatif yöntem lateks aglütinasyon testi ile larva tespit ardından filtre izolasyonu manyetik karıştırıcı yöntemi / olduğunu. Ancak, AB mevzuatına göre bu yöntem sadece bu tür yaban domuzu 4 yerli domuz değil enfeksiyon riski daha fazladır hayvanlar için et test etmek için eşdeğer olarak kabul edilir. Monoklonal antikorlar ile, larva antijenin belirlenmesi testi daha objektif hale getirir, ancak LABORATUAR et 16 gramı başına larvaların sayısını belirlemek imkan vermemektedir.
manyetik karıştırıcı yönteminin daha ileri varyasyonları mekanik destekli havuza örnek sindirim yöntemi / sedimantasyon tekniği, mekanik destekli toplanmış örnek kazı dahilFiltre izolasyon tekniği Sorusuna yöntemi / ve en fazla 35 gr tekniğinin toplanmış numuneler için otomatik sindirim yöntemi. Bu teknikler tüm et ve Trichinella larvaların görselleştirme ve sayma yapay sindirim dayalı, ama filtreleme ve sedimantasyon adımlar için kullanılan ekipman farklılık vardır.
Izole edilmiş larva ayrıca bir moleküler test (örneğin, çoklu PCR) 17 tür düzeyinde tespit edilebilir. AB mevzuatına göre, tüm pozitif örnekler Trichinella türleri belirlenmesi için ulusal referans laboratuarına veya EURLP iletilmesi gerekiyor.
Disclosures
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.
Acknowledgments
Biz nazik mükemmel teknik yardım ve destek için Sabine Reckinger teşekkür ederiz.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Knife, Scissors, Tweezers | Cutting samples and removing non-digestible tissue | ||
| Blender | With a sharp chopping blade | ||
| Magnetic stirrer | With thermostatically controlled heating plate | ||
| Stirring Rod | Teflon-coated, approximately 5 cm long | ||
| Conical glass separation funnel | Capacity of at least 2 L, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation. | ||
| Stands, rings and clamps | |||
| Sieve | Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh | ||
| Funnel | Internal diameter not less than 12 cm, to support the sieves | ||
| Glass beaker | Capacity 3 L | ||
| Glass measuring cylinder | Capacity 50 to 100 mL, or centrifuge tube | ||
| Stereo-microscope | With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table | ||
| Petri dishes | 9 cm diameter, marked on their undersides into 10 × 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope | ||
| Aluminium foil | Alternatively a lid to cover the beakers | ||
| 25% hydrochloric acid | |||
| Pepsin | Strength: 1:10,000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12,500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2,000 FIP (Fédération internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/mL | ||
| Ethanol | 70-90% ethyl alcohol | ||
| Tap water | Heated to 46-48 °C before use | ||
| Balance | Accurate to at least 0.1 g | ||
| Metal tray | Capacity 10 to 15 L, to collect the remaining digestive juice | ||
| Pipettes and pipette holder | Different sizes (1, 10 and 25 mL) | ||
| Thermometer | Accurate to 0.5 °C, temperature range at least from 20 ° C to 70 °C | ||
| Siphon | For tap water |
References
- Gottstein, B., Pozio, E., Nöckler, K. Epidemiology, Diagnosis, Treatment, and Control of Trichinellosis. Clin. Microbiol. Rev. 22, 127-145 (2009).
- Pozio, E., Murrell, D. K. Systematics and epidemiology of Trichinella. Adv. Parasitol. 63, 367-439 (2006).
- OIE World Organisation for Animal Health. Principles and methods of validation of diagnostic assays for infectious diseases. OIE Terrestrial Manual. , Available from: http://wahis2-devt.oie.int/fileadmin/Home/fr/Health_standards/tahm/1.01.05_VALIDATION.pdf 1-16 (2013).
- European Commission. Commission Implementing Regulation (EU) 2015/1375 of 10 August 2015 laying down specific rules on official controls for Trichinella in meat. Off. J. EU. 212, Available from: http://eur-lex.europa.eu/legal-content/EN/TXT/?uri=celex%3A32015R1375 7-34 (2015).
- United States Department of Agriculture, Food Safety and Inspection Service. 9 CFR Part 318.10 - Prescribed treatment of pork and products containing pork to destroy trichinae. U.S. Government Publishing Office. , Available from: https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf (2012).
- Gamble, H. R., et al. International Commission on Trichinellosis: recommendations on methods for the control of Trichinella in domestic and wild animals intended for human consumption. Vet. Parasitol. 93 (3-4), 393-408 (2000).
- Gajadhar, A. A., Forbes, L. B. An internationally recognized quality assurance system for diagnostic parasitology in animal health and food safety, with example data on trichinellosis. Vet. Parasitol. 103, 133-140 (2002).
- ISO. Microbiology of the food chain -- Detection of Trichinella larvae in meat by artificial digestion method 18743. ISO. , Available from: http://www.iso.org/ (2015).
- Nöckler, K., Kapel, C. M. O. Chapter 3, Detection and surveillance for Trichinella: meat inspection and hygiene, and legislation. FAO/WHO/OIE Guidelines for the surveillance, management, prevention and control of trichinellosis. , World Organization for Animal Health (OIE). Paris. 69-98 (2007).
- Boch, J., Schnieder, T., Supperer, R. Veterinärmedizinische Parasitologie. , Parey Verlag. Stuttgart. 6. Aufl (2006).
- Despommier, D. D., Müller, M. The stichosome and its secretion granules in the mature muscle larva of Trichinella spiralis. J. Parasitol. 62 (5), 775-785 (1976).
- Marucci, G., Interisano, M., La Rosa, G., Pozio, E. Molecular identification of nematode larvae different from those of the Trichinella genus detected by muscle digestion. Vet Parasitol. 194, 117-120 (2013).
- Forbes, L. B., Gajadhar, A. A. A validated Trichinella digestion assay and an associated sampling and quality assurance system for use in testing pork and horse meat. J. Food Prot. 62, 1308-1313 (1999).
- Malakauskas, A., et al. Molecular epidemiology of Trichinella spp. in three Baltic countries: Lithuania, Latvia, and Estonia. Parasitol. Res. 100 (4), 687-693 (2007).
- Kapel, C. M., Webster, P., Gamble, H. R. Muscle distribution of sylvatic and domestic Trichinella larvae in production animals and wildlife. Vet. Parasitol. 132 (1-2), 101-105 (2005).
- Interisano, M., et al. Validation of a latex agglutination test for the detection of Trichinella infections in pigs. Vet. Parasitol. 194, 121-124 (2013).
- Pozio, E., La Rosa,, G, PCR-derived methods for the identification of Trichinella parasites from animal and human samples. Methods Mol. Biol. 216, 299-309 (2003).
