Introduction
El desarrollo de nuevas estrategias de refinamiento de los ratones de laboratorio es una tarea difícil que contribuye al cumplimiento de las 3R (reemplazo, reducción y refinamiento) de la ciencia del animal de laboratorio 1. Las mejoras en el campo de refinamiento pueden contribuir aún más al bienestar de los millones de animales que se utilizan con fines experimentales. Por lo tanto, es necesaria una intensa investigación en el campo. Este es también un objetivo definido de la Directiva 2010/63 de la Unión Europea. Directiva 2010/63 / UE señala que la experiencia de vida de los animales de laboratorio tiene que ser mejorada y que "Los establecimientos deben elaborar programas de formación y habituación convenientes para los animales, los procedimientos y la duración del proyecto" (Artículo 3.7) 2.
Los animales de laboratorio pueden experimentar muchas situaciones de estrés, mientras que se mantienen y se crían para los experimentos. Por lo general, la interacción entre la mano de obraAtory los ratones y las personas responsables son bastante limitados. Por lo tanto, una relación de confianza no puede desarrollarse. Esto puede provocar aumento de la ansiedad y el estrés en reacción a la manipulación, que es perjudicial para el comportamiento y fisiología, y por lo tanto, el bienestar, de los animales 3, 4, 5, 6. Por otra parte, realizada de forma rutinaria los procedimientos de laboratorio como la manipulación general, restricción, y la sangre o muestras de tejidos puede causar respuestas de estrés, que pueden ser examinadas mediante la medición de diferentes parámetros, tales como hormonas o comportamientos 7, 8 estrés. Se ha demostrado que los programas de manejo pueden disminuir de manera eficiente la ansiedad hacia el investigador en roedores de laboratorio 9, 10, 11. Manejo de programas, por tanto, pueden mejorar los animales 'condiciones y podrían contribuir considerablemente al bienestar animal 5.
El objetivo de este estudio es dar a conocer la formación refuerzo positivo para los ratones como un programa de tratamiento específico. formación refuerzo positivo es una forma de condicionamiento operante que da el investigador un medio para moldear el comportamiento animal. Cuando el animal realiza un comportamiento deseado, es seguido por un estímulo positivo (aquí, una recompensa de comida). La intención es que el animal vincula la recompensa al comportamiento respectivo. El adiestramiento con clicker es una forma de entrenamiento de refuerzo positivo utilizando un reforzador secundario acondicionado, el "clic" de un clicker, y se ha demostrado para reforzar un comportamiento específico 12.
Más específicamente, el sonido de clic sirve como un "puente» entre el comportamiento y el próximo 13 de recompensa. El entrenador de encaje, precisamente cuando el animal realiza el deseadocomportamiento, sin ningún tiempo de demora 14, y luego presenta la recompensa de comida. Esto refuerza el comportamiento recompensado, que se realiza con una frecuencia más alta. El adiestramiento con clicker es ampliamente utilizado con animales de compañía y ha hecho su camino en la ciencia de animales de laboratorio, en donde se ha aplicado con éxito con primates no humanos 13, 15, 16. Dado que los ratones aprenden más rápidamente cuando se enfrentan con los paradigmas de condicionamiento operante, la introducción de un segundo refuerzo no debe sobreesfuerzo sus capacidades cognitivas 5, 17, 18, 19.
Mediante la introducción de la formación clicker para el mantenimiento de los ratones, permitimos a los ratones para experimentar el enriquecimiento cognitivo. El diseño de enriquecimiento cognitivo debe permitir a los ratones para utilizar sus habilidades cognitivas para sølvProblemas con el correo y para obtener el control sobre su entorno 20, 21. Varios estudios con diferentes especies demuestran el impacto positivo de enriquecimiento cognitivo sobre el bienestar de los animales en cautiverio 22, 23, 24. Aumento de la capacidad de los animales para hacer frente con éxito a los retos medioambientales contribuye a su bienestar, 25, 26.
Además, si los animales experimentan niveles bajos de estrés durante su vida, son menos propensos a desarrollar estrategias de supervivencia perjudiciales cuando se enfrentan a factores estresantes que se producen en la investigación biomédica. Por lo tanto, la aplicación coherente de enriquecimiento cognitivo puede contribuir a una homogeneización de los fenotipos de los sujetos. Esto contribuirá al principio 3R de reducción, ya que puede reducir el número de sujetos requeridospara satisfacer los requisitos estadísticos 27.
Mediante el desarrollo de un protocolo fiable que se puede integrar fácilmente en la rutina diaria de mantener a los ratones de laboratorio, podemos mejorar sustancialmente su experiencia de vida de bienestar.
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Protocol
Declaración de Ética: El manejo de los ratones y los procedimientos experimentales se llevaron a cabo de acuerdo con el europeo, nacional y directrices institucionales para el cuidado de los animales.
NOTA: El protocolo incluye cinco días de intervenciones (de lunes a viernes), con pausas en los fines de semana (sábado y domingo). El protocolo se puede adaptar fácilmente a las necesidades específicas.
1. La determinación de una adecuada recompensa como segundo reforzador
NOTA: Utilice recompensas de comida, como los alimentos envasados al vacío o alimentos para animales que cumpla con las normas de seguridad alimentaria. Por ejemplo, diferentes tipos de frutos secos, chocolate, ositos de goma, o frutos secos son adecuados.
- Insertar una pequeña placa de Petri con diferentes recompensas de comida (trozos de 0,5 cm 3) en la casa-jaula (Figura 1).
- Después de 10 minutos, comprobar si hay restos de comida.
- Si todos los premios se comen después de 10 minutos, acortar el lapso de tiempo hasta que una preferencia puede ser estimado.
- En los días 4 y 5 (por ejemplo, ThursdaY y viernes), añadir pequeñas cantidades de la) de recompensa preferida ( "ganador" de la casa-jaula para establecer una afectación de todos los ratones en la jaula a la recompensa.
- Si los ratones no están habituados a los túneles de ratón, añadir un túnel a la jaula (al menos 2 días antes de comenzar el entrenamiento, por ejemplo, el fin de semana).
- Repita los pasos 1.2 a 1.4 en 3 días consecutivos (por ejemplo, de lunes a miércoles).
2. Formación Clicker
- Las preparaciones para cada sesión de entrenamiento
NOTA: Cada vez que tiene que ser levantado en este protocolo un ratón, levantarlo de una manera tranquila y apacible. Ponga una mano debajo del ratón para levantarla. Durante los primeros tiempos, los ratones podría ser agitado, pero el proceso de habituación se terminará después de varios días. Si este paso se crea dificultades, es útil hacer referencia al protocolo de "ahuecamiento en la mano abierta" 28.- Preparar una jaula con material de cama.
- Transfer la jaula del ratón que está siendo entrenado a un lugar tranquilo.
- Preparar la recompensa y tienen un contador de tiempo y la combinación palo de clicker / blanco fácil.
NOTA: Si los ratones se habituaron a la manipulación y ya tiene una relación de confianza con el experimentador, los ratones pueden ser alimentados a mano. De lo contrario, conecte la recompensa a un palo o una pinza de tal manera que los ratones pueden mantener una distancia de la experimentador. - Retire todos los objetos de la casa-jaula, que ahora sirve como el área de formación (por ejemplo, casas de ratón, material de construcción de nidos, etc.).
- La transferencia de los compañeros de jaula a una jaula preparada.
- normas generales que se aplican para todas las sesiones de entrenamiento
NOTA: Se aplican las siguientes reglas generales para todas las sesiones y no se mencionan de nuevo todo el protocolo.- Capacitar a cada ratón durante 5 min. Alterna entre la formación de 30 s y 15 s-períodos de descanso.
- Deje el ratón roer la recompensa de no más de un segundo. Entonces, tomo el palo (con la recompensa) fuera de la jaula.
- Ejecute el siguiente patrón de recompensa:
1 - 10 actuaciones de comportamiento: recompensa cada vez.
11-21 desempeño de comportamiento: recompensar a cada segundo tiempo.
Del 22 rendimiento de la conducta en: recompensar cada tres veces. - Después de 4 minutos de la formación, la próxima realización de la conducta deseada se ve reforzada por una recompensa bote. Deje que el ratón para roer en la recompensa de comida tres veces más tiempo que antes.
- sesión de entrenamiento Día 1: "La vinculación del reforzador secundario con el premio de comida"
- Ajuste el temporizador de 5 minutos, pulse Inicio, y añadir el túnel de ratón para el hogar-jaula.
NOTA: Tome ventaja de los thigmotaxis innatas de ratones y colocar el túnel junto a una pared (Figura 2). Para las primeras sesiones, esto aumentará la probabilidad de que el ratón entra en el túnel. - Espere hasta que el ratón inspecciona el túnel. Tan pronto como el mouse entra en el túnel, haga clic y presentar la recompensa al final del túnel.
- Dejar que la alimentación del ratón sobre la recompensa mientras está sentado en el túnel.
- Haga clic de forma continua durante 15 s, mientras que el ratón está sentado en el túnel.
- Tan pronto como el ratón sale del túnel, vuelva al paso 3.2.
- Ajuste el temporizador de 5 minutos, pulse Inicio, y añadir el túnel de ratón para el hogar-jaula.
- Días sesión de entrenamiento de 2 - 5: "Corriendo a través de un túnel"
- Ajuste el temporizador de 5 minutos, pulse Inicio, y añadir el túnel de ratón para el hogar-jaula.
- Tan pronto como el ratón entra en el túnel, haga clic y presentar la recompensa al final del túnel.
- Siempre y cuando el ratón está en el túnel, haga clic y presentar inmediatamente la recompensa de la misma manera.
- Repita este procedimiento para los próximos 30 s, y luego hacer una pausa durante 15 s para tomar el túnel fuera de la jaula.
- Añadir el túnel de nuevo y haga clic en el ratón inmediatamente cuando vuelve a entrar en el túnel.
- Presentar la recompensa al final del túnel.
- Deje que el ratón para roer para un máximo de 1 s. Para llevar la recompensa.
- Tan pronto como se inicia el ratón re-entrar en el túnel por sí mismo, presentar la recompensa en frente del final del túnel (Figura 3).
- sesión de entrenamiento la semana 2: "Después de un palo de destino"
- Ajuste el temporizador de 5 minutos, pulse Inicio, y colocar el globo en el extremo del palo de destino en la jaula.
- Tan pronto como el ratón muestra interés en el mundo, haga clic y presentar la recompensa al lado del globo (Figuras 4 y 5).
- Recompensar el ratón solamente después de que toque el globo con su nariz.
- Cuando el ratón se ha vinculado la acción realizada a la recompensa, cambiar la posición del globo durante la sesión de entrenamiento (Figura 6).
- Espere a que el ratón para cumplir con este último reto.
- Coloque el globo en la jaula.
- Poco antes de la del ratón toca el globo, lenta y cuidadosamente cambiar la posición del globo por 1 cm. Haga clic y recompensar si el ratón ha recorrido la distancia y toca el globo.
- Repita este procedimiento hasta que el ratón sigue de forma fiable.
- Lentamente extienda la distancia que el ratón tiene que cruzar.
- sesión de entrenamiento la semana 3: "Tras el bastón diana de la mano del investigador"
- Coloque una mano en la jaula de entrenamiento mientras se mantiene la combinación palo de clicker / objetivo y la recompensa con la otra mano.
- Ajuste el temporizador de 5 minutos, pulse Inicio, y colocar el globo en el extremo del palo de destino junto a la mano.
- Tan pronto como el ratón muestra interés en el mundo, haga clic y presentar la recompensa al lado del globo.
- Tan pronto como el ratón se ha reunido este desafío, mover el globo varios pasos más cerca de la mano.
- Coloque el mundo en la palma de la mano. Haga clic y recompensar mientras que el ratón está sentada en la palma de la mano (Figura 7).
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Representative Results
La primera y también uno de los pasos más importantes fue la determinación de un premio de comida apropiada. Por lo tanto, los ratones se ofrecen diferentes tipos de frutos secos, una solución de azúcar, mermelada, y diferentes tipos de chocolate en una placa de Petri (Figura 1). En nuestra experiencia, los ratones mostraron una evidente preferencia por el chocolate blanco. Por lo tanto, hemos utilizado el chocolate blanco para todos los procesos de formación complementaria.
La formación real se llevó a cabo con una cohorte de 12 ratones BALB / c endogámicos de cada sexo. Todos los ratones fueron altamente interesado en la formación. Para la evaluación del éxito de la formación, nos registramos para el desempeño adecuado del comportamiento deseado: "siguiendo el bastón diana" (Figura 4). La gran mayoría de los ratones-todos formados ratones hembras y 83% de los ratones-seguido el palo objetivo macho (Figura 8). Ratones hembra muestra un altomotivación er para la formación en general y realiza el comportamiento respectivo con una mayor frecuencia durante las sesiones de entrenamiento. Después de completar 4 días de entrenamiento, los ratones hembra siguió el palo de objetivo con una media de 64 veces por 5 min, mientras que los ratones macho muestra este comportamiento sólo 50 veces por 5 min. En 5 min, la tarea "siguiente para la palma de la mano" se realizó una media de 55 veces por ratones hembra y 35 veces por ratones machos (Figura 9).
Para comprobar si el entrenamiento tuvo un efecto positivo sobre el bienestar de los ratones entrenados, se evaluó la tolerancia a las manipulaciones después de completar el entrenamiento. Por lo tanto, se analizaron los comportamientos relacionados con la ansiedad, mientras que los ratones fueron restringidos sin ayuda (es decir, agarrando la piel del cuello y la base de la cola con una mano) durante 15 s. micción espontánea, defecación y la vocalización se registraron. Un coho sin entrenar pero con cuidado manejadort de 12 ratones BALB / c endogámicos de cada sexo sirvió como grupo de control. ratones entrenados muestran una frecuencia significativamente menor de los comportamientos relacionados con la ansiedad que los ratones no entrenados. (Figura 10). Se obtuvieron resultados similares cuando la grabación de la vocalización relacionado con el manejo mientras se realiza la prueba del laberinto de agua de Morris (Figuras 11 y 12). Los ratones entrenado chirriaba significativamente menor que los ratones sin entrenamiento (Figura 11) y el número total de chirridos por chirridos ratón se redujo significativamente. Para evaluar más a fondo esta cuestión, analizamos el comportamiento flotante durante la prueba del laberinto de agua de Morris. el comportamiento flotante durante el laberinto acuático de Morris se describe como períodos de tiempo cuando los ratones no son la natación, sino que simplemente flotando en la superficie. Este comportamiento flotante relacionado con la depresión resultó ser significativamente reducido en el grupo entrenado (Figura 12).
Figura 1. Presentación de posibles recompensas. Seis posiciones para la presentación de las recompensas están marcados en una placa de Petri.
La Figura 2. Posición del Ratón Túnel. Para aumentar la probabilidad de que el ratón entra en el túnel, el túnel se coloca al lado de una pared de la jaula. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3. La presentación de la recompensa. La posición adecuada para la presentación de la recompensa fuera de la final de la maSe muestra nnel. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4. El éxito de Formación. Un ratón entrenado sigue el bastón diana mientras que siendo entrenado. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 5. gratificante. Un ratón es recompensado al lado del palo de destino durante la sesión de entrenamiento. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 6. alterna Objetivo del palillo Las posiciones en la segunda semana de entrenamiento. Las posiciones de la palanca de formación se indican en este dibujo esquemático. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 7. El éxito de Formación. Un ratón ha seguido el bastón diana en la mano del entrenador. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 8. El éxito del protocolo de entrenamiento. Una cohorte de 12 ratones BALB / c endogámicos ratones de la cepa de cada sexo fue entrenado. Hacia el final de la sesión de entrenamiento la semana 2: "Después de un palo de destino," todos los ratones hembra y el 83% de los ratones machos superaron con éxito el desafío. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 9. Las repeticiones de comportamiento respectivo después de una semana de entrenamiento. Una cohorte de 12 ratones BALB / c en ratones criados de cada sexo fue entrenado. En el último día de la sesión de entrenamiento de la semana 2: "Después de un palo de destino" y 3: "Tras el bastón diana a la mano", las repeticiones de la conducta respectiva se contaron durante una sesión de entrenamiento de 5 min. En ambas semanas, DISPL ratones hembraayed el comportamiento reforzado con una frecuencia significativamente mayor que los ratones macho ( "palo de destino": 63,92 ± 3,72, p = 0,0300; "En la mano": 54.92 ± 4.01, p = 0,0069). La frecuencia de la conducta reforzado no varió significativamente en ratones hembra de semana dos a tres semanas. Sin embargo, los ratones macho mostró una disminución significativa en las repeticiones de semana dos a tres semanas ( "Target palo": 50,42 ± 4,48; "En la mano": 35.92 ± 5; p = 0,0408). Se realizó una prueba U de Mann-Whitney. Los resultados de los datos se expresaron como la media ± SEM favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 10. Comportamiento de preferencia Desencadenada por Scruff Holding. Una cohorte de 12 ratones BALB / c endogámicos de cada s ex fue entrenado siguiendo el protocolo de entrenamiento del clicker. Una cohorte sin entrenar pero con cuidado manejado de 12 ratones BALB / c endogámicos de cada sexo sirvió como grupo de control. Los ratones fueron restringidos sin ayuda (es decir, agarrando la piel del cuello y la base de la cola con una mano) durante 15 s. micción espontánea, la defecación, y la vocalización se registraron. Había una profunda diferencia entre el comportamiento que se muestra de la formación y el grupo de control. ratones entrenados muestran todos los comportamientos con una frecuencia significativamente menor que los ratones no entrenados. ( "Micción": p <0,001; "defecación": p <0,001; "vocalización": p <0,001). Se realizó una prueba U de Mann-Whitney. Las columnas se expresan como el porcentaje de todos los ratones ensayados. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 8 "src =" / files / ftp_upload / 55415 / 55415fig11.jpg "/>
Figura 11. Se muestra comportamientos Durante la prueba del laberinto de agua de Morris. Una cohorte de 12 ratones BALB / c endogámicos de cada sexo fue entrenado siguiendo el protocolo de entrenamiento del clicker. Una cohorte sin entrenar pero con cuidado manejado de 12 ratones BALB / c endogámicos de cada sexo sirvió como grupo de control. Una prueba del laberinto Morris Water se realizó con todos los ratones después de la tercera semana de la formación. el comportamiento flotante y la vocalización vinculado a la manipulación se registraron. el comportamiento flotante se produjo significativamente menor en los ratones entrenados (p <0,001). Además, hubo una diferencia profunda en la vocalización de la formación y el grupo de control. los ratones entrenados chirriaba mucho menos cuando se maneja que los ratones del grupo de control sin entrenamiento (p <0,001). Se realizó una prueba U de Mann-Whitney. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 12. Prevalencia de chirridos por ratón. Una cohorte de 12 ratones BALB / c endogámicos de cada sexo fue entrenado siguiendo el protocolo de entrenamiento del clicker. Una cohorte sin entrenar pero con cuidado manejado de 12 ratones BALB / c endogámicos de cada sexo sirvió como grupo de control. Una prueba del laberinto Morris Water se realizó con todos los ratones después de la tercera semana de la formación. Se registró la vocalización relacionado con el manejo de los ratones. los ratones sin entrenamiento chirriaba una frecuencia significativamente mayor que los ratones entrenados. los ratones sin formación está representada la vocalización 1.167 ± 0,7 veces y los ratones sin entrenamiento 4.071 ± 0.83 veces. Se realizó una prueba t no apareado con corrección de Welch. Los resultados de los datos se expresaron como la media ± SEM favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. <p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1">
Figura 13. Otras aplicaciones. Un ratón está siguiendo un palo de destino para cruzar un puente de una jaula a otra. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Discussion
La aplicación efectiva del protocolo de entrenamiento del clicker con una cohorte de 12 ratones BALB / c endogámicos de cada sexo resultó ser complicada. Estudios previos han confirmado la eficacia de la formación clicker con varias especies, y ampliado esta a ratones. Dado que los ratones son los mamíferos más bajo desarrollados entre los animales de laboratorio, sus capacidades son a menudo subestimados. Por lo tanto, el aspecto más sorprendente de los datos es que el éxito de formación podría conseguirse con casi todos los ratones.
Un paso crítico en este protocolo es el momento de la segunda reforzador, lo que es muy importante para establecer una conexión entre el comportamiento que se muestra y el refuerzo. Dado que los ratones son muy agitado, es un poco difícil de marcar una actuación exacta antes de que se están correteando alrededor. Es decir, el éxito del entrenamiento más rápido se puede lograr el más experimentado entrenador. Hemos observado que los ratones aprendió muy rápidamente, incluso con el tren sin experienciaERS. Incluso pequeños errores podrían ser compensadas en el curso del protocolo de entrenamiento del clicker. Fuentes de error comunes incluyen reforzar un comportamiento incorrecto y una falta de interés en el premio de comida después de hacer clic.
Un factor incontrolable es el carácter individual de cada ratón. Aunque este estudio se realizó con ratones endogámicos, nacidos y criados en las mismas condiciones, desarrollan una variedad de diferentes personajes. Debido a las investigaciones anteriores y nuestros propios datos empíricos, sabemos que esto incluye diferentes gustos, diferentes expresiones de apetito, y diferentes comportamientos de exploración 29, 30. El primer paso fundamental era encontrar una recompensa de comida apropiada. Los ratones se ofrecen diferentes tipos de frutos secos, una solución de azúcar, mermelada, y diferentes tipos de chocolate. Para los ratones en este estudio, chocolate blanco resultó ser la recompensa más apropiado. El éxito de este protocolo depende de la interrelaciónest de los ratones en el entrenamiento. Si todo lo demás despierta su interés más, la formación llega a sus límites. El más equipo que se ha añadido a la jaula para cumplir con una sesión de entrenamiento, menos los ratones participó en el entrenamiento. La eliminación de todos los elementos que llaman la atención en el entorno es esencial (por ejemplo, dejando incluso una pequeña cantidad de material de cama en la jaula para evitar que los ratones de la madriguera). A veces los ratones adquieren más interés en la formación después de una habituación al nuevo entorno durante varios minutos.
Protocolos de manejo suave ya han sido determinados en beneficio del bienestar de los ratones cuando se les trata de manera amistosa 9, 10, 11. Los resultados del presente estudio indican que una relación entre humanos y animales más cerca contribuye a la tolerancia de ratón a los tratamientos. En virtud de la manipulación, los animales entrenados muestran un menor número de comportamientos relacionados con la ansiedad (i.e., micción, defecación y vocalización) 31. En la prueba de laberinto acuático de Morris, los ratones no entrenados, pero con cuidado manejados expresaron una mayor prevalencia del comportamiento flotante. Ratones entrenados muestran menos de este comportamiento relacionado con la depresión 32. Se podría argumentar que los resultados positivos se debieron a un mayor bienestar en los ratones entrenados.
Una limitación de este estudio es que sólo una cepa de ratones endogámicos se estudió. Debido a las altas diferencias de comportamiento entre diferentes cepas de ratones, cepas puras adicionales, así como cepas de outbred, debe investigarse 29. En otros estudios, información complementaria sobre el bienestar de ratón, como una batería de comportamiento conjunto, los datos fisiológicos (por ejemplo, los niveles de corticosterona), o el impacto de la formación en el desarrollo del cerebro, debe ser recogida.
Otras aplicaciones de entrenamiento del clicker podrían ayudar in mejorar las condiciones de salud e higiene en las instalaciones de animales. Mediante la aplicación del protocolo de entrenamiento del clicker, tuvimos éxito en la enseñanza de los ratones a seguir un palo de destino y de cruzar un puente de una jaula a otra (Figura 13). Si se perfecciona esta técnica, se hace manual de jaula de cambio innecesario. Además, los ratones que posiblemente podrían ser entrenados para caminar voluntariamente en equipos de medición (por ejemplo, la escala o áreas de comportamiento). Esto podría proporcionar una protección fiable contra la transmisión de enfermedades antropozoonóticas, ya que el contacto directo con los animales ya no será necesario.
El refuerzo positivo de formación es muy recomendable para los animales en cautiverio, ya que contribuye a su salud mental 33. Si los ratones experimentan un alto nivel de bienestar, muestran algunas estrategias de afrontamiento individualmente diferentes. El adiestramiento con clicker, por lo tanto, contribuye de manera notable a las 3R, como el trabajo anterior muestra que una reducción en la variabilidad de los ratones fenotipos conduce a una reducción del número de animales necesarios para satisfacer los requisitos estadísticos 27. Este estudio ha demostrado que la formación clicker en ratones se correlaciona fuertemente con un miedo reducido de las interacciones de humanos y ratones resultados coincidencias observados en estudios anteriores con diferentes especies 34. El adiestramiento con clicker tiene un mayor potencial, ya que se podría considerar el enriquecimiento cognitivo. La amplia aplicación de la formación refuerzo positivo en las instalaciones de animales de laboratorio podría hacer una contribución valiosa al principio 3R, ya que refina el mantenimiento y la investigación biomédica de los ratones.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Lid for open housing | Tecniplast | GM500LID117 | |
| SealSAfe Plus top for open housing | Tecniplast | GM500400SU | |
| Type II long, filter top cages | Tecniplast | GM500PFSPC | |
| Aspen bedding material | Lab & Vet Service GmbH | H0234-300 | Environmental enrichment |
| Red polycarbonate Mouse House | Tecniplast | ACRE011 | Environmental enrichment |
| Tissue papers | Tork, SCA Hygiene Products GmbH | 290179 | Environmental enrichment |
| Food - ssniff M-H Extrudat | ssniff | V1126-000 | ad libitum |
| Target Stick with Clicker | Trixie | 2282 | |
| PVC Tube (Tunnels) | Thyssen Krupp | RTPVCU04003005 | |
| White Chocolate/ white chocolate cream | Company doesn't matter, preferable organic quality | ||
| Forceps | FineScienceTools | e.g. 11150-10 | Or any other tool to fixate chocolate |
| Prism Version 6.0 for Windows | GraphPad Software |
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