Summary
व्यवहार परीक्षण पूर्व नैदानिक परीक्षणों में प्रयोग किया जाता है एक बीमारी या एक जानवर की भलाई पर उपचार के phenotypic प्रभाव का आकलन है । आदेश में विश्व स्तर पर मोटर कामकाज का आकलन करने के लिए, हम जनरल गतिवान, मांसपेशियों की शक्ति, और समंवय के लिए परीक्षण का चयन: ओपन फील्ड टेस्ट, मेष परीक्षण, और rotarod परीक्षण, क्रमशः ।
Abstract
व्यवहार परीक्षण पूर्व में प्रयोग किया जाता है नैदानिक परीक्षणों phenotypic प्रभाव और परिणाम है कि एक विशेष रोग या उपचार है पशुओं की भलाई और स्वास्थ्य पर है आकलन करने के लिए । वहां कई व्यवहार परीक्षण है कि लागू किया जा सकता है । हम जनरल गतिवान, ओपन फील्ड टेस्ट (बहुधा) के लिए एक परीक्षण का चयन किया; मांसपेशियों की ताकत के लिए एक परीक्षण, मेष टेस्ट (एमटी); और समंवय के लिए एक परीक्षण, rotarod टेस्ट (आरआर) । परीक्षण एक साप्ताहिक या मासिक आधार पर पूरा किया जा सकता है । सामान्य गतिवान के लिए एक परीक्षण के रूप में, अक्सर एक खुले क्षेत्र उपकरण में माउस है, जबकि बहुधा काम करने के लिए आंदोलन मापदंडों की निगरानी द्वारा कार्य करता है । क्षेत्र आम तौर पर एक 2 ' x 2 ' बॉक्स है, और आंदोलनों लेजर संवेदन के माध्यम से या वीडियो पर कब्जा के माध्यम से दर्ज कर रहे हैं । माउस खुले मैदान के केंद्र में रखा गया है और परीक्षण के लिए स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित करने की अनुमति दी । मीट्रिक टन एक माउस के लिए विलंबता का उपयोग करता है मांसपेशियों की ताकत का एक उपाय के रूप में एक औंधा स्क्रीन गिर जाते हैं । एक माउस एक स्क्रीन है, जो एक स्पष्ट बॉक्स पर औंधा है पर रखा गया है, और उनके विलंबता के लिए समय पर गिर जाता है । तीन परीक्षणों के तीन परीक्षण के सर्वश्रेष्ठ के साथ प्रदर्शन कर रहे हैं, उस दिन के लिए रन बनाए । ६० s का स्कोर एक माउस औंधा छोड़ दिया है अधिकतम समय है । चूहों मेष परीक्षण परीक्षण के बीच एक 5 मिनट आराम अवधि दिया जाता है । अंत में, आरआर पर एक त्वरित प्रोटोकॉल मोटर समंवय और धीरज का आकलन है । एक परीक्षण के दौरान, एक माउस एक घूर्णन छड़ी पर चलता है के रूप में यह 4 rpm से 5 मिनट से अधिक ४० rpm को गति में बढ़ जाती है । परीक्षण समाप्त होता है जब माउस गिरने पर चुंबकीय दबाव संवेदक को छूता है । प्रत्येक माउस तीन परीक्षणों से गुजरती है, और सबसे अच्छा परीक्षण उस दिन के लिए रन बनाए है । यह संयुक्त व्यवहार डेटा गतिशीलता, समंवय, शक्ति, और परीक्षण जानवरों के आंदोलन के वैश्विक आकलन के लिए अनुमति देता है । तीन व्यवहार परीक्षण के उपायों में से कम से दो एक जानवर के लिए सुधार दिखाने के लिए समग्र सुधार मोटर समारोह होने के रूप में अर्हता प्राप्त करना चाहिए ।
Introduction
व्यवहार के परीक्षण के लक्ष्य को मापने के लिए है phenotypic लक्षण वर्णन, चाहे अध्ययन में केंद्रीय तंत्रिका तंत्र को प्रभावित करने वाले रोगों के एक नए माउस मॉडल के लिए या एक नए इलाज के एक परीक्षण के लिए । वहां व्यवहार परीक्षण की एक किस्म से चुन रहे हैं । व्यवहार परीक्षण का एक संयोजन का उपयोग करने के लिए तर्क अक्सर पूरी तरह से पूर्व नैदानिक उपचार परिणामों का आकलन करने के लिए है. व्यवहार परीक्षण के साथ साथ की बैटरी ओपन फील्ड टेस्ट (बहुधा), मेष टेस्ट (एमटी), और rotarod टेस्ट (आरआर) शामिल हैं ।
बहुधा सामान्य हरकत गतिविधि1,2,3,4,5,6,7का एक माप के रूप में उपयोग किया जाता है । यह आकलन माउस को स्वतंत्र रूप से एक खुले क्षेत्र में स्थानांतरित करने के लिए अनुमति देता है, और माप लिया व्यवहार परीक्षण के पाठ्यक्रम पर माउस की गतिविधियों रहे हैं । मात्रात्मक विश्लेषण का उपयोग कर एक बार बार शामिल पालन, दूरी ले जाया गया, समय बढ़ खर्च (जैसे, चलने और चल रहा है), और समय के साथ गतिविधि में परिवर्तन (जैसे, कूद और धीमी/अतिसक्रिय आंदोलनों), यही वजह है कि यह एक उपयोगी है और मूषक व्यवहार का गहन विश्लेषण ।
मीट्रिक टन चूहों की ताकत का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है1,2,8,9,10,11. सभी चार अंगों के उपयोग के लिए एक तार ग्रिड मेष के बंद लटका चूहों की क्षमता का गैर इनवेसिव माप के लिए अनुमति देता है निरंतर अंग तनाव दिखाने के लिए गुरुत्वाकर्षण के प्रभाव का विरोध करते हुए । यह आकलन एक उल्टे जाल पर एक माउस रखकर किया जाता है और गिरावट के लिए अपने विलंबता समय । यह परीक्षण बंद गिरने से पहले उल्टे स्क्रीन पर खुद को पकड़ कर सकते हैं कितना समय मापने के द्वारा माउस की मांसपेशियों की ताकत का आकलन.
आरआर एक माउस के समंवय का आकलन करते हुए तेजी प्रोटोकॉल1,2,7,8,9,12,13का उपयोग कर । rotarod तंत्र एक बेलनाकार बीम कि 4 rpm पर शुरू हवा में घूमता के होते हैं । माउस इस मोटर समंवय कौशल सीख सकते है और फिर धीमी गति से चुनौती दी है, वृद्धिशील ४० rpm तक बढ़ जाती है । , आरआर के लिए तेजी प्रोटोकॉल समंवय, धीरज, और मांसपेशियों की ताकत1,2,7का आकलन है, जबकि प्रतिष्ठित, लगातार गति प्रोटोकॉल मांसपेशियों की ताकत का एक उपाय है, 14.
इन तीन व्यवहार परीक्षण के लाभ कर रहे है कि वे पूरी तरह से कुतर व्यवहार परीक्षण समुदाय में स्वीकार किए जाते है2,7,8,9, और जब बस के योग के रूप में नहीं लिया व्यक्तिगत परीक्षणों, लेकिन सामूहिक रूप से, वे phenotypic व्यवहार के एक वैश्विक आकलन के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है जब प्रयोगात्मक उपचार के विभिंन परिणामों की जांच । बहुधा समग्र हरकत गतिविधि2के लिए केवल परीक्षणों में से एक है । आरआर भी एक ही तरीके से समंवय2का आकलन करने के लिए, के अलावा अंय चाल विश्लेषण सॉफ्टवेयर है, जो यहां चर्चा नहीं की जाएगी का उपयोग करें । वहां कुछ तरीके है जिसमें एक चूहे की मांसपेशियों की ताकत का आकलन किया जा सकता है; हालांकि, मीट्रिक टन, या एक तार लटका परीक्षण का उपयोग कर, प्रचलित साहित्य में इस्तेमाल किया गया है और मांसपेशियों की ताकत के परीक्षण के लिए एक विश्वसनीय विधि के रूप में स्वीकार कर लिया है2,8,9,10, 11. सामांय गतिवान और समंवय को मापने के लिए कई अंय तकनीकों बहुत समय लगता है और विश्वसनीय डेटा का उत्पादन नहीं कर सकते है (उदा, मैंयुअल रूप से समय माउस आंदोलन या स्वयं को चाल विश्लेषण के लिए पंजे पेंटिंग) । बहुधा और आरआर के लिए स्वचालित सिस्टम विश्वसनीयता और उत्पादित डेटा की वैधता में वृद्धि और समय और प्रयास को बचाने के ।
उदाहरण के लिए, Sandhoff रोग माउस मॉडल के neurodegeneration दिया, जब परीक्षणों की इस बैटरी प्रदर्शन, अक्सर इन परीक्षणों के पहले मोटर विषमताओं है कि आम तौर पर इस माउस मॉडल में देखा जाता है की उंर के 3 महीने में शुरू मूल्यांकन का इस्तेमाल किया जाएगा । मोटर समंवय में घाटा भी उंर के 12 हफ्तों में शुरू स्पष्ट हो जाना चाहिए । मांसपेशियों की ताकत में घाटा उंर के 14 सप्ताह के आसपास शुरू हो जाना चाहिए, लेकिन वे अंततः 16 सप्ताह से ज्यादा महत्वपूर्ण हो जाते हैं ।
ये परीक्षण उपयोगी है जब रोगों का अध्ययन है कि महत्वपूर्ण मोटर विकलांगता के कारण, neurodegenerative रोगों सहित9 जैसे Sandhoff रोग1,8,13, पार्किंसंस रोग7, हटिंगटन की बीमारी, मल्टीपल स्केलेरोसिस । परीक्षण भी उंर बढ़ने का अध्ययन करने के लिए और तुलनात्मक बुढ़ापे आकलन या स्वास्थ्य की माप बनाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । चाल गड़बड़ी और गतिवान और संतुलन में परिवर्तन इन रोग राज्यों के कई में देखा जाता है । हालांकि, इन परीक्षणों की उपयोगिता प्रचलित neuromuscular लक्षणों के साथ रोगों तक ही सीमित नहीं है ।
कृपया ध्यान दें कि वहां कोई ढूंढने की प्रेरणा या वर्णित व्यवहार परीक्षण उपायों में से किसी की नवीनता के संबंध में उल्लेख किया चर गया है । यह कुछ रोग राज्यों और विकृतियों के लिए आवश्यक है कि शोधकर्ताओं ने प्रारंभिक व्यवहार डेटा प्राप्त करने से पहले माउस किसी भी phenotypic लक्षण दिखाता है; शोधकर्ता तो आवधिक (साप्ताहिक) सुनिश्चित करना चाहिए कि सभी मोटर विकलांगता के लिए खाते हैं । कई रोगों phenotypic लक्षण की एक त्वरित शुरुआत है, और साप्ताहिक परीक्षण के बिना, इन लक्षणों के लिए हिसाब नहीं होगा ।
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Protocol
सभी प्रोटोकॉल वर्णित के साथ साथ अनुसार प्रदर्शन किया गया, और द्वारा अनुमोदित किया गया, महारानी विश्वविद्यालय पशु देखभाल समिति । व्यवहार परीक्षण की आवृत्ति साप्ताहिक या मासिक, या दो का एक संयोजन (यानी, साप्ताहिक जब एक सबसे बड़ा अंतर देखने की उंमीद है, और कहीं मासिक) हो सकता है ।
नोट: Murine व्यवहार अध्ययन मोटे तौर पर सेक्स/उम्र/तनाव-निर्भर है, और इसलिए यह उचित समय अंक इकट्ठा करने के लिए और प्रयोगात्मक समूहों में संगत रहने के लिए आवश्यक है । पर्यावरणीय कारकों (जैसे, scents, शोर, तापमान, आर्द्रता प्रकाश, आदि) बहुत चूहों में व्यवहार और चिंता को प्रभावित । इन पर्यावरणीय कारकों को यथासंभव कम करने का प्रयास करें ।
1. ओपन फील्ड टेस्ट
नोट: व्यवहार परीक्षण से पहले, जानवरों के कमरे जहां परीक्षण के लिए 10-15 मिनट के लिए जगह लेने के लिए परीक्षण की शुरुआत से पहले है आदत होना चाहिए । सुनिश्चित करें कि उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण और सभी स्थानीय सुविधा दिशानिर्देश व्यवहार परीक्षण प्रोटोकॉल के लिए पीछा कर रहे हैं ।
नोट: परीक्षण से पहले कोई प्रशिक्षण नहीं ।
- सुनिश्चित करें कि कंप्यूटर और बहुधा प्रोग्राम चालू हैं, चल रहे हैं, और ठीक से कैमरा या खोलें फ़ील्ड बॉक्स से कनेक्टेड है । smartware कार्यक्रम पर क्लिक करें, खुले मैदान आइकन, और "ठीक है." कैमरा विकल्प से "डिजिटल एनालॉग कनवर्टर" स्रोत चुना है । पर क्लिक करें "पता लगाने" और यकीन है कि पूरे खुले मैदान अंतरिक्ष और कल्पना है कि आयाम 30 सेमी x 30 सेमी कर रहे हैं ।
नोट: उपकरण लेआउट अंतरिक्ष बाधाओं के आधार पर भिंन हो सकते हैं, लेकिन यह सुनिश्चित करें कि कंप्यूटर और खुले क्षेत्र तंत्र उचित वीडियो कैप्चर के लिए एक अच्छी तरह से जलाया कमरे में एक दूसरे के पास हैं । - क्लिक करें "अंशांकन," "स्नैपशॉट," और उसके बाद यह सुनिश्चित करने के लिए "ठीक" माउस का पता लगाया जा रहा है कि खुले मैदान के दायरे में । चूहों का परीक्षण करने के लिए समय की एक राशि पूर्व निर्धारित करने के लिए "समय" पर क्लिक करें; इस मामले में, 5 मिनट सेट करें ।
- विषय "विषय" आइकन पर क्लिक करके दर्ज करें । क्लिक करें "शेड्यूलर" और सभी परीक्षण विषयों पर प्रकाश डाला और फिर डबल हरे तीर पर क्लिक करें और "चरण एक, सत्र एक;" यह सभी विषयों में लाने के लिए डेटा का संग्रह शुरू करने के लिए होगा ।
- खुले मैदान के केंद्र में एक माउस प्लेस और "प्रारंभ" आइकन पर क्लिक करें कार्यक्रम रिकॉर्डिंग शुरू करने के लिए संकेत करने के लिए । एक समय में केवल एक ही माउस का परीक्षण ।
- एक बार 5 मिनट पूरा हो गया है, प्रोग्राम स्वचालित रूप से अगले विषय के लिए कदम होगा । इस स्थिति में, परीक्षण पूर्ण कर लिया है जो माउस को निकालें और अगले विषय को खुले फ़ील्ड में रखें । क्लिक करें "प्रारंभ."
- उपकरण नीचे पोंछ । शेष परीक्षण विषयों के लिए चरण १.३-१.४ दोहराएँ ।
- आदेश में एक बार सभी विषयों के परीक्षण के माध्यम से चला गया है डेटा का विश्लेषण करने के लिए, स्क्रीन के ऊपर दाईं ओर "विश्लेषण" आइकन पर क्लिक करें । "विश्लेषण" फिर से क्लिक करें और फिर "सारांश रिपोर्ट." वैकल्पिक रूप से, डेटा को USB पर निर्यात करें ।
2. मेष टेस्ट
नोट: सतह क्षेत्र और मीट्रिक टन पर जाल के आकार प्रदर्शन को प्रभावित कर सकते हैं । मीट्रिक टन पर, अगर एक चूहा पहले के भीतर बंद हो जाता है 10 एस पहले 2 संग्रह समय अंक के दौरान, वे वापस मेष पर एक दूसरे का प्रयास के लिए तुरंत डाल दिया जाएगा । इस के साथ साथ इस्तेमाल किया जाल एक तार जाल था, जाल छेद के साथ लगभग १.५ मिमी व्यास में.
नोट: दिन के एक ही समय में इन परीक्षणों को चलाने की सिफारिश की है, के बाद से शारीरिक और जैव रासायनिक मापदंडों दिन भर में उतार चढ़ाव । Bodyweight इस परीक्षण में प्रदर्शन को प्रभावित कर सकता है और इसलिए इसे ध्यान में रखा जाना चाहिए ।
- एक जाल के केंद्र में एक माउस प्लेस और एक स्पष्ट कंटेनर के ऊपर कम से 20 सेमी जाल उलटा । एक बार औंधा, टाइमर शुरू करते हैं ।
- समय और गिरावट के लिए विलंबता के समय रिकॉर्ड । यदि माउस ६० एस के भीतर गिर नहीं है, यह ६० एस का स्कोर दे और कोई आगे परीक्षण आचरण । की अनुमति दें माउस के लिए आराम करने के लिए ंयूनतम 5 मिनट । यह परीक्षण के अंत 1 है ।
- उपकरण नीचे पोंछें और 5-ंयूनतम अंतर-परीक्षण अंतराल के दौरान, यदि आवश्यक हो, तो एक दूसरे माउस का परीक्षण करें । दोहराएं चरण २.१-२.२ के लिए परीक्षण 2 और 3, यदि आवश्यक हो (जब तक माउस ६० s स्कोर नहीं है, यह तीन परीक्षणों से गुजरना चाहिए) ।
3. Rotarod टेस्ट
नोट: सतह और आरटी पर रॉड के व्यास प्रदर्शन को प्रभावित कर सकते हैं । आरटी पर, यदि एक चूहा पहले के भीतर बंद हो जाता है 10 एस पहले 2 संग्रह समय अंक के दौरान, यह छड़ी पर वापस डाल दिया एक दूसरे का प्रयास के लिए तुरंत ।
नोट: दिन के एक ही समय में इन परीक्षणों को चलाने की सिफारिश की है, के बाद से शारीरिक और जैव रासायनिक मापदंडों दिन भर में उतार चढ़ाव । Bodyweight इस परीक्षण में प्रदर्शन को प्रभावित कर सकता है और इसलिए इसे ध्यान में रखा जाना चाहिए ।
- IITC rotarod और कंप्यूटर चालू करें । सुनिश्चित करें कि वे डेटा रिकॉर्डिंग के लिए ठीक से कनेक्टेड हैं ।
- सुनिश्चित करें कि प्रोग्राम त्वरित प्रोटोकॉल चल रहा है । rotarod परीक्षण की इच्छित लंबाई xxx करने के लिए सेट करें (मान्य श्रेणी ९९९ के माध्यम से 000 है); इस स्थिति में, ३०० * दबाएं । xxx करने के लिए इस्तेमाल किया जा करने के लिए गलियों की संख्या सेट (मान्य रेंज 005 के माध्यम से 001 है); इस मामले में, 005 * दबाएं । प्रारंभ गति xxx rpms करने के लिए सेट करें (5 rpms के लिए ३००५ दर्ज करें; मांय श्रेणी है 001 ०४५ के माध्यम से); इस मामले में, 004 * दबाएं ।
- शीर्ष गति xxx rpms करने के लिए सेट करें (30 rpms के लिए ४,०३० दर्ज करें; मांय श्रेणी है 001 ०४५ के माध्यम से); इस स्थिति में, ०४० * दबाएं । एस में xxx करने के लिए रैंप गति सेट (शीर्ष गति के लिए एक 30-s रैंप के लिए ५,०३० दर्ज करें; मांय श्रेणी ९९९ के माध्यम से 000 है); इस मामले में प्रेस ३०० * । माउस मोड के लिए इकाई सेट (माउस रिवर्स के लिए माउस आगे और ६००२ के लिए ६००१ दर्ज करें); इस स्थिति में, ६००१ * दबाएं ।
- सुनिश्चित करें कि सभी चुंबकीय गलियों परीक्षण शुरू करने से पहले संतुलित कर रहे हैं । rotarod के प्रत्येक लेन में एक माउस प्लेस ।
- प्रोग्राम आरंभ करने के लिए प्रारंभ दबाएं । के रूप में चूहों गिर, उंहें अपनी गलियों से तुरंत हटाने के लिए सुनिश्चित करें कि वे "यात्रा" अंय गलियों नहीं है ।
- चूहों को एक 10 मिनट के अंतर परीक्षण अंतराल के लिए आराम करने की अनुमति दें । यह परीक्षण के अंत 1 है । अंतर-परीक्षण अंतराल के दौरान, उपकरण नीचे पोंछें और चूहों के अगले सेट के लिए परीक्षण शुरू करते हैं ।
- आवश्यक के रूप में 4-6 चरण दोहराएँ । यदि कोई माउस पूर्ण 5-ंयूनतम परीक्षण के लिए rotarod पर रहता है, कोई आगे परीक्षण उस माउस के लिए आवश्यक हैं ।
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Representative Results
अध्ययन जानवरों व्यवहार परीक्षण प्रतिमान साप्ताहिक या मासिक विश्लेषण के लिए आवश्यक समय आवश्यक बिंदुओं को समायोजित करने के लिए गुजरना कर सकते हैं । व्यवहार परीक्षण समय पर उदाहरणों के लिए चित्र 1 देखें । नीचे दिए गए प्रतिनिधि डेटा में, Osmon एट alसे लिया गया । (२०१६), चूहों व्यवहार मासिक परीक्षण की बैटरी से गुजरा, उम्र के 12 हफ्तों में शुरू, उम्र के ४० सप्ताह के आसपास उनके मानवीय समापन बिंदु तक. व्यवहार परीक्षण के समय के लिए एक प्रयोग, खासकर जब अनुपचारित बनाम इलाज जानवरों के अस्तित्व काफी है और तुलना की आवश्यकता होती है के लिए महत्वपूर्ण है ।
हालांकि इन परीक्षणों केवल neurodegenerative विकारों के लिए इस्तेमाल नहीं कर रहे हैं, हम Sandhoff चूहों का इस्तेमाल किया ( चित्रा 2देखें). इस माउस मॉडल तेजी से अस्थिर हो जाता है और उंर के 12-16 सप्ताह से बेबुनियाद अगर अनुपचारित और सामांय रूप से 16 की उंर के सप्ताह में euthanization की आवश्यकता होतीहै1 । चित्रा 2d में डेटा rotarod के उपयोग को दर्शाता है कि कैसे इलाज चूहों सामांय heterozygous चूहों की तुलना में व्यवहार कर रहे है देखने के लिए एक साधन के रूप में । ४० सप्ताह में दो समूहों के विचलन सामांय नियंत्रण की तुलना में उपचार समूह की कमी समंवय की शुरुआत अर्थ है । अंय माउस मॉडल में जहां एक हल्के phenotype जांच की जा रही है, और विस्तार और परीक्षणों की इस बैटरी की विशेषज्ञता की सिफारिश की है ।
प्रकाशन के लिए प्रासंगिक परिणामों का चयन करते समय, यह दो मुख्य कारकों को ध्यान में रखना महत्वपूर्ण है । पहला यह है कि इस्तेमाल किया मीट्रिक पशु मॉडल के लिए विशिष्ट होना चुना जाना चाहिए किया जा रहा है । बहुधा, मीट्रिक में सबसे अधिक उपयोग किया जाता है "समय बढ़ रहा है" (जैसा कि चित्र 2में देखा गया है); हालांकि, "दूरी यात्र" भी सामान्य गतिवान के लिए एक आम मीट्रिक है । आरआर में, "अंत rpm" और "दूरी यात्रा" सामांयतः मैट्रिक्स का उपयोग किया जाता है । जो मीट्रिक एक उपयुक्त परिणाम के रूप में चुना जाना चाहिए के चयन में दूसरा कारक है जो लगभग मीट्रिक व्यवहार परिणामों में सबसे महत्वपूर्ण फर्क या अभिसरण से पता चलता है, जिसके आधार पर परिणाम प्रत्याशित हैं घूमती है ।
एकत्र डेटा एकाधिक सांख्यिकीय परीक्षणों का उपयोग कर विश्लेषण किया जा सकता है, लेकिन एक ही चूहों का उपयोग लगातार साप्ताहिक या मासिक व्यवहार परीक्षण के लिए, एक 2-तरीका दोहराया-प्रसरण का विश्लेषण उपायों (2-way RM-ANOVA) का सुझाव दिया है । दोहराया उपायों ANOVA एक ही जानवर से परिणामों के अनुदैर्ध्य आकलन में सक्षम बनाता है, और समय के साथ पशु व्यवहार में परिवर्तन की तुलना के लिए अनुमति देता है, साथ ही समूहों के बीच । Bonferroni करेक्शन का सुझाव भी दिया है । जब एक ही timepoint के भीतर उपचार की तुलना, एक तरह ANOVA का सुझाव दिया है, के रूप में चित्रा 2में देखा ।
चित्र 1: व्यवहार परीक्षण के लिए संभावित प्रायोगिक समयरेखा के उदाहरण. व्यवहार परीक्षण समय की एक किस्म के साथ किया जा सकता है, प्रायोगिक जरूरत पर निर्भर करता है । परीक्षण एक मासिक, साप्ताहिक, या मिश्रित आधार पर किया जा सकता है । उपलब्ध उदाहरण में, अध्ययन की अवधि 23 सप्ताह, जहां 0 सप्ताह उपचार प्रशासन है के लिए रहता है । जब परीक्षण मासिक आधार पर होता है, तो परीक्षण सप्ताह 4, 8, 12, 16 और 20 पर निष्पादित किए जाते हैं । जब परीक्षण एक साप्ताहिक आधार पर होता है, परीक्षण हर हफ्ते (सप्ताह 1-22) 23 सप्ताह समापन बिंदु से पहले आयोजित की जाती हैं । परीक्षण एक मिश्रित आधार पर होती है, जब परीक्षण साप्ताहिक सप्ताह 1-8 पर किया जाता है, और उसके बाद परीक्षण मासिक 23 सप्ताह समापन बिंदु से पहले 12, 16 और 20 सप्ताह पर किया जाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 2: मासिक व्यवहार परीक्षण के परिणाम जहां इलाज जानवरों अनुपचारित जानवरों को मात । 12 सप्ताह में, इलाज पशुओं "बार में चलती" अक्सर (एक) और "विलंबता पर गिर करने के लिए" मीट्रिक टन (ई)में पर अनुपचारित जानवरों को मात । वहां इलाज और अनुपचारित पशुओं के बीच कोई सांख्यिकीय मतभेद है "rotarod अंत rpm" 12 सप्ताह में (C)पर । मासिक व्यवहार परीक्षण से अधिक, इलाज चूहों में सामान्य heterozygous नियंत्रण करने के लिए इसी तरह प्रदर्शन करते हैं (ख), आरआर (डी), और मीट्रिक टन (एफ). सभी सांख्यिकीय विश्लेषण (जैसे GraphPad) सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर का उपयोग किया गया, एक तरह से ANOVA परीक्षण सप्ताह 12 विश्लेषण (2a, सी, और ई) पर प्रदर्शन किया और 2-way RM-ANOVA परीक्षण मासिक विश्लेषण पर प्रदर्शन किया गया ( b बी, डी, और एफ) । सभी त्रुटि सलाखों SEM रहे हैं । यह आंकड़ा Osmon एट अल से संशोधित किया । 1 और मरियम Ann Liebert प्रकाशकों, Inc से अनुमति के साथ पुनर्मुद्रित कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
सभी परीक्षणों के लिए, साफ और चूहों को contagions और विरोधियों को कम करने के लिए सतह को संक्रमित । इसके अलावा, निश्चित है कि चूहों परीक्षणों के बीच पर्याप्त आराम समय दिया जाता है और व्यवहार परीक्षण के बीच जब अक्सर, आरआर, और मीट्रिक टन का उपयोग कर ।
अक्सर में, यह महत्वपूर्ण है कि प्रत्येक माउस खुले मैदान के बीच में रखा गया है और यह कि कार्यक्रम केंद्र में माउस की रिहाई पर शुरू कर दिया है । सुनिश्चित करें कि वहां कोई हाथ आंदोलनों सेंसर कार्यक्रम शुरू करने पर रजिस्टर कर सकते हैं ।
मीट्रिक टन के लिए, यह जाल क्षेत्र के बीच एक बाधा है, जहां माउस और लटका होगा कंटेनर वे में गिर रहे है के पक्ष में महत्वपूर्ण है । यह नोट किया गया है कि जब चूहों कंटेनर के पक्ष तक पहुँच सकते हैं, वे धीरे-धीरे उनके सामने पंजे जारी है और फिर उनके पीछे पंजे नीचे कूद करने के लिए । टेप दीवारों और जाल के केंद्र के बीच एक बाधा बहुत इस व्यवहार को कम कर देता है और मांसपेशियों की ताकत का एक और अधिक सटीक उपाय के लिए अनुमति देती है ।
अकेले, इन परीक्षणों के प्रत्येक सामान्य गतिवान (ओपन फील्ड टेस्ट), मांसपेशियों की ताकत (मेष टेस्ट) और समन्वय (rotarod)2,7,8के लिए एक अच्छा उपाय है । हालांकि, एक साथ लिया, इन तीन व्यवहार परीक्षण का पूरा संग्रह चूहों में गतिवान के व्यापक आकलन के लिए अनुमति देता है । परीक्षणों के इस समूह को स्वतंत्र रूप से जटिल मोटर कामकाज पर मोटर हानि में पाया प्रभाव की कमी की पुष्टि करता है । इन तरीकों की मुख्य सीमा गतिवान के अपने सामांय आकलन है, जो व्यवहार के कामकाज में अत्यंत विशिष्ट घाटे के लिए समस्याग्रस्त है । इसके अलावा, इन परीक्षणों, सभी व्यवहार परीक्षण की तरह, बाहरी तनाव के कारण व्यवहार में परिवर्तन के अधीन हैं, जैसे ध्वनि, तापमान परिवर्तन, और प्रकाश चक्र. यह सभी परीक्षा विषयों के लिए एक सुसंगत बाहरी वातावरण बनाए रखने के लिए विवेकपूर्ण है । व्यवहार परीक्षण की इस बैटरी गतिभंग और स्मृति के लिए परीक्षण शामिल करने के लिए विस्तारित किया जा सकता है । मांसपेशियों की शक्ति का अध्ययन करने के लिए अन्य तरीकों2,8,9 शामिल मीट्रिक टन के साथ मांसपेशियों की ताकत के परिणाम सहसंबंधी करने के लिए लगातार गति आरआर का आयोजन । मांसपेशियों की ताकत, समंवय, या गतिभंग पर अधिक विशिष्ट आकलन के लिए, वहां रहे है पकड़ शक्ति2 और वजन15 और शेष बीम परीक्षण या चाल विश्लेषण परख2, क्रमशः ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
हम अपने निरंतर समर्थन और हमारे अनुसंधान के वित्तपोषण के लिए नई आशा Resarch फाउंडेशन का शुक्रिया अदा करना चाहूंगा । हम भी इस काम के लिए आंशिक वित्तीय सहायता के लिए IITC शुक्रिया अदा करना चाहूंगा ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| IITC Life Sciences Rotarod with Series 8 computing software | IITC Life Sciences | 755 | |
| Square Open Field 45 x 45 x 40 cm (grey color). Other floor color available: white, black. | Harvard Aparatus (PanLab) | 760190 | |
| Open Field Preconfigured Module | Harvard Aparatus (PanLab) | 760688 | |
| Smart V3.0 Software Platform | Harvard Aparatus (PanLab) | 760681 | |
| Video converter (analog/digital) | Harvard Aparatus (PanLab) | 760262 | |
| Roof fixing sys for camera | Harvard Aparatus (PanLab) | 760277 | |
| Analog Sony Camera & lenseNTSC | Harvard Aparatus (PanLab) | 760505 |
References
- Osmon, K. J., et al. Systemic Gene Transfer of a Hexosaminidase Variant Using an scAAV9.47 Vector Corrects GM2 Gangliosidosis in Sandhoff Mice. Human Gene Therapy. 27 (7), 497-508 (2016).
- Brooks, S. P., Dunnett, S. B. Tests to assess motor phenotype in mice: a user's guide. Nature Reviews, Neuroscience. 10, 519-529 (2009).
- Ma, M., Basso, D. M., Walters, P., Stokes, B. T., Moser, P. Behavioural and histological outcomes following graded spinal cord contusion injury in the C57Bl/6 mouse. Exp. Neurol. 169, 239-254 (2001).
- Menalled, L. B., et al. Early motor dysfunction and striosomal distribution of huntingtin microaggregates in Huntington's disease knock-in mice. J.Neurosci. 22, 8266-8276 (2002).
- Grusser, C., Grusser-Cornehls, U. Improvement in motor performance of Weaver mutant mice following lesion of the cerebellum. Behav. Brain Res. 97, 189-194 (1998).
- De Leonibus, E., et al. Spatial deficits in a mouse model of Parkinson's disease. Psychopharmacology (Berl). 194, 517-525 (2007).
- Morris, M., Koyama, A., Masliah, E., Mucke, L. Tau Reduction Does Not Prevent Motor Deficits in Two Mouse Models of Parkinson's Disease. PLoS ONE. 6 (12), 1-7 (2011).
- Abo-ouf, A., et al. Deletion of tumour necrosis factor-α ameliorates neurodegeneration in Sandhoff disease mice. Human Molecular Genetics. , 1-16 (2013).
- Dumont, M. Behavioral Phenotyping of Mouse Models of Neurodegeneration. Neurodegeneration : Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology. 793, 229-237 (2011).
- Cabe, P. A., Tilson, H. A., Mitchell, C. L., Dennis, R. A simple recording grip strength device. Pharmacol. Biochem. 8, 101-102 (1978).
- Barnēoud, P., Loliver, J., Sanger, D., Moser, P. Quantitative motor assessment in FALS mice: a longitudinal study. Neuroreport. 8, 2861-2865 (1997).
- Lui, Y., et al. Mouse model of GM2 activator deficiency manifests cerebellar pathology and motor impairment. Proc. Natl. Acad. Sci. 94, 8133-8143 (1997).
- Sango, K., et al. Mouse models of Tay-Sachs and Sandhoff diseases differ in neurologic phenotype and ganglioside metabolism. Nature Genetics. 11 (2), 170-176 (1995).
- Jones, B. J., Roberts, D. J. A rotarod suitable for quantitative measurements of motor inco-ordination in naïve mice. Nauyn-Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 259 (2), 211 (1968).
- Deacon, R. M. J. Measuring the Strength of Mice. Journal of Visualized Experiments JoVE. (76), (2013).
