Summary
Fremgangsmåden beskrevet her tillader visualisering af IL-8-promotorafhængig inflammationsaktivering i lungerne af mus gennem ikke-invasiv bioluminescensbilleddannelse (BLI). Det samme dyr kan udsættes for BLI flere gange i op til to måneder fra leveringstidspunktet for luciferase-reporterkonstruktionen.
Abstract
Luftvejsinflammation er ofte forbundet med bakterielle infektioner og udgør en vigtig determinant for lungesygdomme. In vivo- bestemmelsen af de proinflammatoriske evner hos forskellige faktorer er udfordrende og kræver terminale procedurer, såsom bronchoalveolær skylning og fjernelse af lunger til in situ- analyse, hvilket udelukker langsgående visualisering i den samme mus. Her induceres lungebetændelse ved intratracheal inddrivning af Pseudomonas aeruginosa- kultursupernatant (SN) i transientt transgeniserede mus, som udtrykker luciferase-reportergenet under kontrol af en heterolog IL-8 bovinpromotor. Luciferaseekspression i lungen overvåges ved in vivo bioluminescerende billede (BLI) analyse over en 2,5- til 48-timers tidsramme efter indstillingen. Proceduren kan gentages flere gange inden for 2 - 3 måneder, hvilket således muliggør evaluering af det inflammatoriske respons i de samme mus medUd behovet for at opsige dyrene. Denne fremgangsmåde tillader overvågning af pro- og antiinflammatoriske faktorer, der virker i lungen i realtid, og forekommer egnet til funktionelle og farmakologiske undersøgelser.
Introduction
Kroniske lungesygdomme, såsom astma, kronisk obstruktiv lungesygdom (COPD), cystisk fibrose (CF) og bronchiectasis, er karakteriseret ved luftvejsinflammation. Luftvejsinflammation er kendetegnet ved ødem, cellulær infiltration, T-lymfocyt- og mastcelleaktivering, øgede luftvejsafskærmninger og overdreven kollagenaflejring. CF er en multisystemforstyrrelse, og dens største årsag til dødelighed og morbiditet er lungebakterieinfektion med øget lungekræftdannelse. Nedgang i lungefunktion forudsiger et signifikant fattigere resultat 1 , 2 , 3 , 4 .
Betændelsestilstande i luftvejene observeres sædvanligvis ved evaluering af immunologiske markører, der rekrutteres under den inflammatoriske proces i materiale afledt fra de nedre og øvre luftveje, såsom sputum, som tilvejebringer variabel resÜLTS. Bronkoskopier udføres også 5 . Murine-modeller er værdifulde værktøjer til undersøgelse af patogenese og udvikling af sygdomme præget af luftvejsinflammation, og for hvilke effektive behandlinger eller helbredelser endnu ikke er blevet identificeret. Dyremodeller af lungeinfektion og betændelse er blevet brugt til at studere astma og værtspatogeninteraktioner, herunder kemikaliernes rolle som simulerer menneskelige forhold ( f.eks. Eksponering af cigaretrøg, LPS, elastase, ovalbumin, poly I: C osv . Som Såvel som kombinationer af ovenstående) 6 . Måling af inflammationsrelaterede parametre kræver dyrets ofre, da invasive tilgange er nødvendige for at måle faktorer som bakteriel belastning, cytokiner i lungerne og indsamlet bronkoalveolær lavage (BAL) væske. Histologiske undersøgelser er ofte også nødvendige. Muligheden for at indhente oplysninger om inflammatorisk responskinetik kræver anvendelse af numHævede mus. Derfor er en teknik, der giver mulighed for at indhente sådanne oplysninger uden behov for at ofre dyrene værdifulde på tekniske, etiske, økonomiske og operationelle grundlag.
IL-8 er en vigtig spiller i inflammationsprocessen, der rekrutterer leukocytter til det betændte væv. Det repræsenterer en molekylær udlæsning til undersøgelsen af inflammatorisk pathwayaktivering. MIP-2 og KC kan være funktionelle homologer af human IL-8 hos mus. Mus udtrykker kun en potentiel IL-8 receptor, en homolog af human CXCR2 7 , 8 , men de er i stand til at modulere en heterolog IL-8-genpromotor, der driver et reportergen. En lungeinflammationsmine-model er for nylig udviklet efter observationen, at en bovin IL-8-promotor / luciferase-reporterkonstruktion kan transaktiveres i mus. Denne funktion gør det muligt at anvende bioluminescensbilleddannelse (BLI) til at overvåge det inflammatoriske respons i levende aNimals 9 .
Denne model er blevet tilpasset til at studere inflammation udløst af bakterielle exoprodukter ( fx LPS eller produkter frigivet af bakteriestammer) eller TNFalpha 10 , 11 . Lægemiddelopdagelsesprocessen er fokuseret på udvikling og optimering af gamle og nye antiinflammatoriske molekyler, der kan behandle lungesygdomme, såsom CF, astma og COPD. Disse nye kemiske enheder skal hurtigt og bekvemt testes i dyremodeller, der kan knyttes til specifikke kliniske fænotyper for at lette udformningen af klare kliniske forsøg.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyreforsøg, der blev beskrevet, blev godkendt af det intramurale dyrevelfærdskomité for dyreforsøg af Interdepartmental Center for Eksperimentel Forskningstjeneste ved University of Verona og i overensstemmelse med det europæiske direktiv 2010/63 UE, italienske D.Lgs 26/2014 og den reviderede "Guide til pleje og brug af laboratoriedyr", Washington, DC: National Academy Press, 1996. Denne protokol og eksperimenter blev godkendt af National Institutes of Health (n 273/15). Dyr havde fri adgang til standard gnaverchow og blødt vand fra vand og blev akklimatiseret i mindst 5 dage til de lokale vivariumforhold (stuetemperatur: 20-24 ° C, relativ luftfugtighed: 40-70%; lys mørk cyklus: 12 h ) Før nogen behandling.
1. In vivo genleverance
- Brug en laminær strømningshætte til fremstilling af in vivo- leveringsreagens / nukleinsyrekomplekser.
- Definer den eksperimentelle protokol aNd parametre efter producentens in vivo instruktioner.
- Brug en samlet injektionsvolumen på 200 μl komplekser pr. Mus.
- Start med 40 μg DNA suspenderet i endotoksinfri vand; Optimeringsområdet kan nå 60 μg.
BEMÆRK: Den endelige koncentration af nukleinsyre i indsprøjtningsvolumen må ikke overstige 0,5 μg / μL, i henhold til producentens anvisninger. - Brug et N / P forhold på 6 - 8 (0,12 - 0,16 μL leveringsreagens pr. Μg nukleinsyre). Beregn det tilsvarende volumen af leveringsreagens.
BEMÆRK: Komplekserne skal være kationiske for effektiv celleindgang. N / P-forholdet defineres som antallet af nitrogenrester (N) på in vivo- leveringsreagenset pr. Nukleinsyrephosphat (P) og repræsenterer måling af ionbalancen inden for komplekserne.
- Fortynd den beregnede mængde (se trin 1.2.1) af nukleinsyre i 5% glucose (slutkoncentrationRation) ved anvendelse af 10% glucose stamopløsning (tilvejebragt) og sterilt vand. Sørg for, at fortyndingsvolumenet er halvdelen af det endelige injektionsvolumen. Vortex forsigtigt eller bland ved pipettering op og ned.
- Fortynd den beregnede mængde (se trin 1.2.3) af leveringsreagenset til halvdelen af injektionsvolumenet 5% glucose (slutkoncentration) ved hjælp af 10% glucose-stamopløsningen (medfølger) og sterilt vand. Vortex forsigtigt og spin ved 13.000 xg i 15 s.
- Tilsæt ovennævnte fortyndede afgivelsesreagenser til den fortyndede nukleinsyre på en gang. Bland dem ved forsigtig vortexing og spind ned ved 13.000 xg i 15 s.
- Inkubér blandingen fra trin 1,5 i 15 minutter ved stuetemperatur.
BEMÆRK: Fra dette tidspunkt er komplekserne stabile i 4 timer ved stuetemperatur og i op til 7 dage, når de opbevares ved 4 ° C. - Udfør hale-vein injektioner ved hjælp af komplekser ækvilibreret ved stuetemperatur. Placer musens hale i varmt vand (50-53 ° C) i 30 s for at tillade en veneudvidelse.
- Placer musen inde i fastholdelsesanordningen. Indsæt en 27- til 30 gauge nål i halevenen ved en 20-30 ° vinkel og injicer langsomt 200 μl. Efter færdiggørelse skal du fjerne nålen og lægge pres på injektionsstedet.
BEMÆRK: En lille bøjning i halen under injektionen indikerer forkert positionering. Hvis dette sker, skal du fjerne nålen og gentage processen proximalt til det forrige websted.
- Placer musen inde i fastholdelsesanordningen. Indsæt en 27- til 30 gauge nål i halevenen ved en 20-30 ° vinkel og injicer langsomt 200 μl. Efter færdiggørelse skal du fjerne nålen og lægge pres på injektionsstedet.
- Visualiser genekspression ved at udføre in vivo BLI (se trin 2) ved 24 og 48 timer efter intravenøs injektion.
2. In vivo BLI
BEMÆRK: Forbered en frisk lageropløsning af 15 mg / ml D-luciferin i DPBS, filtrer steriliser det med en 0,22 μm filtreringsenhed og opbevar den ved -20 ° C.
- Placer musene i et klart plexiglas anæstesi kammer. Sørg for, at isoflurankammeret er fyldt. Når du er klar til at bedøve dyrene, skal du sikre dig, at pumpen (lEft) og kammer (højre) kontakter er tændt. Drej isofluran urskiven til 2,5% til induktion og 2% til vedligeholdelse. Dyr inde i IVIS-kammeret holdes under 2,5% isofluorananæstes under billedkøb.
- Efter at musene er bedøvet fuldstændigt, injicer 10 ml / kg legemsvægt af D-luciferinopløsningen ved en intraperitoneal vej 15 minutter før billeddannelse.
BEMÆRK: En kinetisk undersøgelse af D-luciferin bør udføres for at bestemme tidspunktet for signalstoppen efter indgivelse af D-luciferin. - Åbn in vivo billeddannelsessystemet og forbered billedkammeret ved at forene det med et stykke sort karton (kassere ved afslutning). Placer næse kegler efter behov for korrekt bedøvelse (brug en kegle pr mus).
BEMÆRK: Røret, der leverer anæstesen til instrumentet, er opdelt, så den samme koncentration af anæstesi bliver plumbed til anæstesionsmanifoldene placeret inde i billeddannelsessystemet. - Overfør musene (op til 5) fra bOkse til næsekeglerne fastgjort til manifolden i billeddannelsessystemet og lukke døren. Billedoptagelse varer 5 min.
- Indhent en BLI ved hjælp af producentens software, som følger.
- Initialiser softwaren. I indlæsnings kontrolpanelet in vivo imaging system skal du sætte et mærke ved siden af Luminescent . Bekræft, at excitationsfilterindstillingen er Blok, og indstillingsfilterindstillingen er åben.
- Klik på pilene: Vælg Luminescent Imaging Mode, 5-min eksponeringstid, Binning 8 og F / Stop 1; For billedbilleddannelsesfunktionen skal du vælge Binning 4 og F / stop 8.
- Fra rullegardinlisten Field of View skal du vælge D, 19 cm og en Emnehøjde på 1,5 cm. Klik på Acquire, når du er klar til at erhverve billedet.
- Når billedopsamlingen er færdig, placer musene tilbage i deres bur.
- Kvantificere fotoner udsendt fra bestemte regioner ved hjælp af producentens software.
- Klik
- Klik på ikonet Kvadrat og tegne en kvadreret ROI med de korrekte dimensioner for at dække brystet af et dyr. Kopier og indsæt ROI for hvert dyr for at opnå ROI'er med samme dimensioner. Klik på Mål ROI for at opnå målingerne af den samlede intensitet i ROI'erne i ROI-værktøjspanelet.
- Overhold ROI-måldataene for alle ROI'er, der er oprettet i billederne eller sekvenserne i løbet af en session (en ROI pr. Række). Klik på Eksporter, og vælg den mappe, hvor filen vil blive gemt.
- Klik
3. Mus Udfordring med Pro-Inflammatorisk Stimuli
BEMÆRK: Forud for musens udfordring med proinflammatoriske stimuli, kontroller baselineaktivering ved hjælp af i n vivo BLI (se trin 2). Mindst 7 dage skal passere mellem in vivo genafgivelse og mousE udfordring for at lade den milde og forbigående betændelse forsvinde.
- Forbered udstyret til intratracheal indstilling (se figur 1 og figur 2 ).
- Tilslut 5 ml disponible sprøjter med fjederen (C, E), en 100 μL sprøjte (B) og en disponibel måle (D) til 3-vejs stopknappen (A). Anbring systemet på understøtningen (H). Anbring systemet på understøtningen (H).
- Tilslut PE190 mikromedicinsk slange (F) til disponibel måle (D) og til penhundredet (G).
- Fyld 5 ml sprøjten med 800 μL luft og drej 3-vejs stopknappen.
BEMÆRK: Fyld røret med Pseudomonas aeruginosa kultur supernatant ved at aspirere 50 μl i 100 μl sprøjten.
Figur 1: Skematisk gengivelseNtation af en enkelt komponent af den intratracheale enhed.
(A) 3-vejs stopdæmper, (B) 100 μL Hamilton sprøjte, (C) engangs sprøjte på 5 ml, (D) engangsmåler, (E) engangssprøjte med 5 ml sprøjte med fjeder, (F) PE190 mikromedicinsk slange , (G) penhundrede og (H) støtte. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Repræsentation af den samlede intratracheale enhed.
Identifikationerne er de samme som i figur 1 . Klik venligst påHer for at se en større version af denne figur.
- Bedøve musene ved anvendelse af et isofluran-fordampningskammer sat til 2,5% isofluran blandet med oxygen.
- Overvåg dyret for at evaluere virkningerne af bedøvelsen efter 3 - 5 min.
BEMÆRK: For at bekræfte, at musen er bedøvet, skal du overvåge følgende tegn omhyggeligt: Den langsomme vejrtrækningshastighed skal sænke, manglende armstrækning, når du opfanges af nakken og manglende reaktion, når baglederne stimuleres. Vent et par ekstra minutter og tjek igen, før du fortsætter til næste trin, hvis disse kriterier ikke er opfyldt. - Placer den bedøvede mus på plexiglass intubationsplatformen, hæng den ved sine fortænder, som er anbragt på ledningen.
- Tænd laryngoskopet med venstre hånd (til højrehåndede forskere) og tag et par stumper af tunge ende. Brug spidsen af laryngoskop og tangen til forsigtigt at åbne munden.
- Træk tungen ud og hGamle den til siden ved hjælp af pincet. Før laryngoskopbladet mod mundens bagside. Hold laryngoskopet trykt ned meget forsigtigt i 90 ° vinkel, indtil åbningen af luftrøret er synlig. Hold laryngoskopet på plads.
- Ved hjælp af den anden side skal du tage tilførselsrøret tilsluttet enden af PE-slangen og indsætte den i luftrøret. Drej trevejsventilen for at levere inokulumet. Træk røret ud af luftrøret så hurtigt som muligt. Hold musen oprejst i et par sekunder til det tilladte inokulum, der skal indåndes i lungerne.
BEMÆRK: Musene kvæles og dør, hvis luftrøret er blokeret for længe. - Fjern musen fra platformen. Gendannelsestiden kan variere baseret på stammer; Overvåge musen flittigt og sørg for, at dyret er helt vågen inden for 30 minutter efter proceduren.
- Intraperitoneally injicer 150 mg / kg D-luciferin og billedet lungerne ved anvendelse af et in vivo billeddannelsessystem 4, 24 og 48 timer efter intratrachealInstillation af stimuli. Kvantificere fotoner udsendt fra bestemte regioner ved hjælp af producentens software.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den bIL-8-Luc transiente transgene musemodel blev anvendt til in vivo overvågning af lungebetændelse hos mus udfordret med koncentreret bakteriel supernatant (30x) indeholdende udskillede virulensfaktorer. Den inducerede inflammatoriske respons var detekterbar ved in vivo billeddannelse som en stigning i BLI signalet. Proinflammatorisk aktivitet var klart detekterbar 2,5 timer efter instillation, selvom BLI-signalet nåede højeste spids mellem 5 og 24 timer og var stadig detekterbart ved 48 timer ( figur 3 ).
Figur 3: Repræsentativ in vivo- billeddannelse af lungeinflammation induceret af P. aeruginosa SN i IL-8 transientt transgene mus.
Øvre panel: Repræsentative billeder af mus (n = 2 pr. Gruppe) intratrachealt insTilled med bakteriel cellefri 30x SN fra en Pseudomonas aeruginosa stamme (Pae) efter transient transgenisering med bIL-8-Luc. Mus blev overvåget ved BLI ved 2,5, 5, 4, 24 og 48 timer efter stimulation med et område af interesse trukket over brystet. Nedre panel: Kombineret data udtrykt som fotoner / s / cm 2 . Hver værdi repræsenterer middelværdien ± SEM. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 4: Transient lungeinflammation efter transfektion.
Reduktion af brystet BLI fra den første vurdering (dag 3) efter IV-inokulationen af bIL-8-Luc. Data udtrykkes som fotoner / s / cm 2 ± SEM (n = 6).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I et tidligere arbejde 11 blev der vist en kontrast mellem bIL-8-Luc-afhængige BLI og BAL markører. Den var afhængig af den differentielle grad af følsomhed inden for musestammer 12 . Af denne årsag kræver den første anvendelse af bIL-8-Luc-modellen til en anden musestamme en indledende undersøgelse af inflammatorisk respons, både hvad angår BLI og mere standardiserede inflammatoriske markører.
Mustransfektion medfører mild lungebetændelse og aktiveringen af bIL-8-Luc, som kan påvises af BLI i op til 3 - 4 dage efter DNA-injektion ( Figur 4 ). Det forsvinder så helt efter 1 uge 1 . Ekspressionen af bIL-8-Luc efter genafgivelse bør altid verificeres af in vivo BLI, da dette er en nødvendig betingelse for succesen af de følgende eksperimentelle trin. Efter 7 dage og forud for musens udfordring skal baselineaktivering registreres til konfIrm forsvinden af den transfektionsinducerede inflammation.
Denne fremgangsmåde er blevet testet i den akutte fase af inflammation, men dets anvendelse til den kroniske fase er ikke blevet testet. Det vides ikke, hvordan udfordringen med levende mikroorganismer kan påvirke aktiviteten af den promotor, der anvendes i denne indstilling. En øget forståelse af patogenesen af akut og kronisk inflammation og den deraf følgende ændring af lungefunktionen er afgørende for udviklingen af effektive terapier til en række kroniske lungesygdomme 3 , 9 . Dyrmodeller fortsætter med at være nødvendige til dette formål, selv om begrænsninger i nøjagtigt reflekterende sygdomspatofysiologi hos mennesker er til stede.
In vivo overvågningen af inflammatoriske parametre hos små gnavere, der anvender luciferase reportergener afledt af andre arter, er af stor værdi. Denne fremgangsmåde tillader undersøgelsen af patofysioLogi af inflammatoriske reaktioner samt evnen til at teste interventioner rettet mod deres modulering. Dette blev testet med succes ved anvendelse af en tidligere velkendetegnet bovint IL-8 promotor / luciferase transient transgeniseret (boviniseret) musemodel 1 . Desuden viste en nylig undersøgelse 10 , at den her beskrevne model er egnet til overvågning af lungeinflammatorisk respons induceret af bakterielle exoprodukter og til undersøgelse af virkningsmekanismen for de pågældende forbindelser. BLI er en ikke-invasiv tilgang, der muliggør longitudinel observation af lungeinflammatorisk proces efter intratracheal instillation med relevante stimuli, herunder P. aeruginosa kultur supernatant 9 , 10 , 11 . Dette er en åbenbar fordel ved at studere akut lungebetændelse sammenlignet med klassiske metoder, som kræver dyrets ofre til kolLæse BAL væske og lungerne. Dens værdi til undersøgelsen af kronisk infektion / betændelse er ikke blevet behandlet.
Den nuværende model kan bruges til at uddybe den tilgængelige viden om patogenesen af lungeinflammatoriske sygdomme, herunder karakterisering af bakterielle / ikke-bakterielle faktorer med proinflammatorisk aktivitet. Desuden kan det lette evalueringen af de mulige terapeutiske virkninger af molekyler med kendte / formodede antiinflammatoriske handlinger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af det italienske Cystic Fibrosis Foundation Project FFC # 18/2013, FFC # 29/2015 og af den italienske Cystic Fibrosis League gennem Veneto Branch-Associazione Veneta Lotta Contro Fibrosi Cistica Onlus.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| FMT 2500 Fluorescence Tomography System | Perkin Elmer Inc. | Experimental Builder | |
| IVIS Lumina serie II Pre-clinical In Vivo; Imaging System | Perkin Elmer Inc. | Experimental Builder | |
| MMPsense 750 FAST | Perkin Elmer Inc. | NEV10001EX | Protect from light, store the probe at 4 °C |
| Female inbred BalbC | Harlan Laboratories Italy | Prior to use, animals were acclimatized for at least 5 days to the local vivarium conditions | |
| bIL-8-Luc plasmid | Department of Medical Veterinary Science, University of Parma, Italy | Store the plasmid at -20 °C | |
| pGL3basic vector | Promega | E1751 | Store the vector at -20 °C |
| JetPEI DNA transfection reagent | Polyplus transfection | 201B-001G | The DNA and JetPEI mix was formulated with a final N/P ratio of 7 |
| D-luciferin potassium salt 1 g | Perkin Elmer Inc. | 122796 | Protect from light, store at -20 °C |
| Living Image software | Caliper Life Sciences, | Experimental Builder | |
| Isoflurane | ESTEVE spa | 571329.8 | Do not inhale |
| Bio-Plex Cytokine Assay Kit | Bio-Rad Laboratories | M60-009RDPD | Store the unopened kit at 4 °C |
| Automated cell counter | Dasit XT 1800J | Experimental Builder | |
| Penn-century model DP-4M Dry power insufflator | Penn-century | DPM-EXT | |
| Gas anesthesia system XGI-8 | Perkin Elmer Inc. | Experimental Builder | |
| PE190 micro medical tubing | 2biological instruments snc | BB31695-PE/8 | |
| Syringe without needle 5 mL | Terumo | SS*05SE1 | Cut the boards of the piston by a scissors |
| Hamilton 0,10 mL (model 1710) | Gastight | 81022 | |
| Discofix 3-way Stopcock | Braun | 4095111 | |
| Syringe with needle 1 mL | Pic solution | 3,071,260,300,320 | Use without needle |
| Plastic feeding tubes 18ga x 50 mm | 2biological instruments snc | FTP-18-50 | Cut obliquely the tip |
References
- Barnes, P. J. Therapeutic approaches to asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap syndromes. J Allergy Clin Immunol. 136 (3), 531-545 (2015).
- Cohen-Cymberknoh, M., Kerem, E., Ferkol, T., Elizur, A. Airway inflammation in cystic fibrosis: molecular mechanisms and clinical implications. Thorax. 68 (12), 1157-1162 (2013).
- Dhooghe, B., Noel, S., Huaux, F., Leal, T. Lung inflammation in cystic fibrosis: pathogenesis and novel therapies. Clin Biochem. 47 (7-8), 539-546 (2014).
- Durham, A. L., Caramori, G., Chung, K. F., Adcock, I. M. Targeted anti-inflammatory therapeutics in asthma and chronic obstructive lung disease. Transl Res. 167 (1), 192-203 (2015).
- Sagel, S. D. Noninvasive biomarkers of airway inflammation in cystic fibrosis. Curr Opin Pulm Med. 9 (6), 516-521 (2003).
- Starkey, M. R., et al. Murine models of infectious exacerbations of airway inflammation. Curr Opin Pharmacol. 13 (3), 337-344 (2013).
- Cacalano, G., et al. Neutrophil and B cell expansion in mice that lack the murine IL-8 receptor homolog. Science. 265 (5172), 682-684 (1994).
- Simonet, W. S., et al. Long-term impaired neutrophil migration in mice overexpressing human interleukin-8. J Clin Invest. 94 (3), 1310-1319 (1994).
- Stellari, F. F., et al. In vivo imaging of transiently transgenized mice with a bovine interleukin 8 (CXCL8) promoter/luciferase reporter construct. PLoS One. 7 (6), e39716 (2012).
- Stellari, F., et al. In vivo imaging of the lung inflammatory response to Pseudomonas aeruginosa and its modulation by azithromycin. J Transl Med. 13, 251 (2015).
- Stellari, F., et al. In vivo monitoring of lung inflammation in CFTR-deficient mice. J Transl Med. 14 (1), 226 (2016).
- De Simone, M., et al. Host genetic background influences the response to the opportunistic Pseudomonas aeruginosa infection altering cell-mediated immunity and bacterial replication. PLoS One. 9 (9), e106873 (2014).
