Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Exponering av Pig CNS för histologisk analys: en handbok för halshuggning, Skull öppningen och Brain Borttagning

Published: April 13, 2017 doi: 10.3791/55511

Summary

Målet med detta dokument och instruktionsvideo är att beskriva hur man avslöja och ta bort döden gris hjärnan och hypofysen i ett intakt tillstånd, lämplig för efterföljande makroskopisk och histologisk analys.

Abstract

Grisar har blivit allt populärare i stora djur translationell neurovetenskaplig forskning som ett ekonomiskt och etiskt genomförbart substitut till icke-mänskliga primater. Den stora hjärnans storlek av grisen tillåter användning av konventionella klinisk hjärnkameror och direkt användning och testning av neurokirurgiska ingrepp och utrustning från den mänskliga kliniken. Ytterligare makroskopisk och histologisk analys, kräver emellertid postmortem exponering av grisen centrala nervsystemet (CNS) och efterföljande avlägsnande av hjärnan. Detta är inte en lätt uppgift, som grisen CNS är inkapslad av en tjock, benig skalle och ryggraden. Målet med detta dokument och instruktionsvideo är att beskriva hur man avslöja och ta bort döden gris hjärnan och hypofysen i en intakt tillstånd, lämplig för efterföljande makroskopisk och histologisk analys.

Introduction

Translation neurovetenskap studier på grisar har blivit allt populärare under de senaste två decennierna. Den stora storleken på grishjärna möjliggör användningen av konventionella klinisk hjärn avbildare och direkt användning och testning av neurokirurgiska förfaranden och utrustning från den humana kliniken 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. Under de senaste 20 åren, grisar, särskilt minigrisar (t.ex. Göttingen minigris), har använts för att undersöka neuromodulatoriska behandlingsmodaliteter, såsom stamcellstransplantation; viral vektor transfektion; och djup hjärnstimulering riktad mot Parkinsons sjukdom, fetma, depression och Alzheimers sjukdom 2, 6,= "xref"> 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. Detta har följts av utvecklingen av stereotaktiska och kirurgiska metoder för att manipulera minigris CNS 3, 18, 19, 20, 21. De inletts CNS förändringar har utvärderats i levande djur med användning av hjärnavbildning (PET 10, 13, 22, 24 och MR 23), cystometri 11, 12, 25, gånganalys17, neurologisk utvärdering 9, 17, och obduktionsundersökning baserad på histologi och stereologisk analys 14, 15, 17, 26, 27, 31. Kräver dock obduktion analys exponering och avlägsnande av gris hjärnan, vilket inte är en lätt uppgift, som en tjock, beniga skalle och en fiber dural täcker omger gris hjärnan.

Målet med detta dokument och instruktionsvideo är att beskriva hur döden gris hjärnan och hypofysen kan utsättas och tas bort i en intakt tillstånd i 15-20 min med hjälp av icke-motoriserade kirurgiska instrument. Instruktionsvideon och fotografiska bilder visar manliga minigrisar (Ålder: 6 månader, kroppsvikt: 20-25 kg) används för en anatomisk undersökning om minigris hypofysen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Animal anestesi och euthanesia utfördes i enlighet med "Principles of försöksdjurs vård" (NIH publikation nr 86-23, reviderad 1985) och godkändes av det danska rådet för Animal forskningsetik.

1. instrument

  1. Samla de instrument som presenteras i videon och som anges i tabellen of Materials.

2. Decapitation

OBS: Anestesi inducerades genom en intramuskulär injektion av 5 ml av midazolam (5 mg / ml) och 5 ml av ketamin (25 mg / ml). 5-10 min senare, när djuret var djupt sedated, var en öronven kanyleras och en dödlig överdos (100 mg / kg av kroppsvikt) av natriumpentobarbital (200 mg / ml) gavs intravenöst. För att säkerställa att djuret var helt euthanized, var den interdigitala smärtreflexen testades såsom visas av Ettrup et al. (2011) 20. Fullständig eutanasi säkerställdes såsom beskrivits ietik uttalande ovan och följt av en transcardial perfusion med 5 L av isotonisk saltlösning, vilket framgår av Ettrup et al. (2011) 20. Samtliga visade procedurer utförs obduktion, vilket utesluter behovet av försiktighetsåtgärder som krävs för långsiktig anestesi och postprocedural överlevnad välfärd.

  1. Decapitate grisen av en hög cirkulär cervikalt snitt, med användning av en kirurgisk skalpell, precis under mandibular vinkel (Figur 1A).
  2. Fortfarande med det kirurgiska skalpell, fortsätter snittet anteriort genom den mjuka vävnaden av halsen, inklusive struphuvudet och matstrupen, tills den beniga ryggraden uppnås, ungefär vid nivån för den kraniocervikala korsningen.
  3. Avancera snittet med en kirurgisk skalpell från den främre sidan av kraniocervikala korsningen, ovanför den främre båge av atlas, och genom den främre atlaskotan och membranet, därigenom exponera den spinala kanalen och ryggmärgen (Figur 1B). Samtidigt ber en assistent för att dra grisen kroppsdelar borta från grishuvudet för att underlätta tillgången mellan skallbasen och den första halskotan.
  4. Fortsätta det kirurgiska snittet genom den durala säcken och ryggmärgen (Figur 1B). Var särskilt noga med att se till att uppnås en komplett tvärsnitt av ryggmärgen.
    OBS: Om du inte utföra föregående steg kan leda till oönskade dragkraft på ryggmärgen och hjärnan under de följande stegen i halshuggning processen.
  5. Kraftfullt förlänga cranocervical korsningen på avdelningsnivå (Figur 1C). På samma gång, använda den kirurgiska skalpell för att avsnittet de återstående atlaskotan och ligamenten för att frigöra leden mellan de occipital kondylerna och den övre artikulerade processen för atlas. Separera grisen huvudet från kroppen.

Figur 1
Figur 1: minigris halshuggning. (A) Neck snitt (pil, mandibulär vinkel). (B) Incision genom mellan atlaskotan och ligament och den dura-omgiven ryggmärgen (SC) vid kraniocervikala korsningen (C1, anterior båge av atlas, OC, occipital ledhuvudet). (C) Den bakre delen av atlaskotan och artikulation frigörs genom en kraftfull förlängning (pilar) på avdelningsnivå. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

3. Skallen Öppning

  1. Placera grishuvud på ett bord.
  2. Gör en rygg längsgående snitt med ett kirurgiskt skalpell genom huden och den underliggande mjukvävnad från baksidan av nosen över vertex av huvudet och ner genom den bakre delen avbakhuvudsregionen.
  3. Exponera den dorsala och bakre delen av skallen genom att ta bort den mjuka vävnaden som ligger lateralt till den initiala snittet med en kirurgisk skalpell.
  4. Frigöra den temporala muskeln bilateralt från skallen (Figur 2A) med en kirurgisk skalpell. Se till att den bakre nack benet rengörs av mjukvävnad.
  5. Använda den bakre ingången till foramen magnum att avlägsna occipital benet med en Kerrison ben punch och skelett rongeurs och exponera den dura-täckta cerebellum (Figur 2B).
  6. Återgå till den exponerade främre sidan av skallen och välj en ingångspunkt i pannbenet, precis framför ögonen. Vid denna punkt, använder ett ben mejsel med en hammare för att penetrera skallen och ange frontal sinus (figur 2C).
  7. Använda omfattningen av den frontala sinus att främja dorsoposterior avlägsnande av den yttre skallen lamina med ett ben rongeur eller ben stans och exponera det inre, tunnabeniga skalle lamina som täcker hjärnan (Figur 2D).
  8. Öppna försiktigt den inre beniga skallen lamina anteriort med en hammare och ett ben mejsel för att exponera den dura-täckta hjärnan (Figur 2E).
  9. Fortsätta avlägsnandet ben i sidled med hjälp av ett ben mejsel och ett ben rongör genom den tidsmässiga och parietala benet för att frigöra den slutliga dorsoposterior delen av skallen, som ligger mellan de redan exponerade delarna av den dura-täckta cerebrum och cerebellum (Figur 2F).
    OBS: Det är ofta möjligt, under det sista steget i detta förfarande att använda mejseln att bryta upp det återstående bakre skallbenet från den ena sidan, precis som man öppnar en dörr.

figur 2
Figur 2: minigris skalle öppning. (A) Exponering av dorsoposterior skallytan, inklusive avlägsnandet av occipital och temporalis. (B) Avlägsnande av occipital ben (CB, dura-täckt cerebellum; OB, occipital ben; OC, occipital kondylen; och SC, ryggmärgen). (C) En hammare och ett ben mejsel används för att penetrera skallen anteriort och att gå in i frontal sinus vid nivån för ögonen. (D) Omfattningen av den frontala sinus (FS) används för att ta bort det yttre tjocka skallbenet (1), att exponera en inre tunn ben lamina (2) som täcker storhjärnan. (E) Avlägsnande av den tunna ben lamina, utsätta den dura-täckta hjärnan (pil). (F) Slutligen en hammare och ett ben mejsel används för att i sidled förbinda de främre och de bakre skalle öppningar. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

4. Brain Avtagbaral

  1. Använda kirurgisk tång för att lyfta dura och skapa en mild snitt nära den venösa sinus sagittalis superior hjälp av en fin kirurgisk skalpell (figur 3A).
  2. Använda mikro-sax eller ett dura-kniv för att ytterligare öppna dura täcker den dorsala ytan av hjärnan.
    OBS: Särskild försiktighet måste iakttas vid demontering av dura som motsvarar den cerebellär tentoriet (figur 3B), såsom bevarande av denna dural blad kommer att förhindra efterföljande avlägsnande av hjärnan.
  3. Positionera grishuvudet vertikalt (figur 3C).
  4. Använda benet mejsel eller en dissektorn att frigöra ventroanterior hjärnan genom trubbig dissektion av luktloben från den dura-täckta golvet i hjärnskålen (Figur 3D).
  5. Använda en fin kirurgisk skalpell till avsnittet exponerade optisk chiasm (figur 3E). Exponera och avsnitt hypofysen stjälken och okulomotoriska nerverna.
  6. Släpp den ventrala hjärnstammen genom sektionering av lower kranialnerver (figur 3F) med en fin kirurgisk skalpell. Säkerställa att den durala cerebellär tentoriet var helt inciderades (figur 3B), eftersom detta dural blad annars kommer att skära igenom hjärnstammen under utgivningsprocessen.

figur 3
Figur 3: minigris hjärnavlägsnande. (A) Dural öppning med kirurgisk tång och en dura kniv. (B) Man måste vara försiktig för att fullständigt incisionsfilm den durala bladet (pil), som ligger mellan cerebrum och cerebellum. (C) Den grishuvudet är placerat vertikalt för bättre visualisering av skallen basstrukturer och för att tyngdkraften för att hjälpa till vid den avsedda förskjutningen av hjärnan. (D) En dissektorn eller ett ben mejsel används för att lindra luktloben genom trubbig sektion från den dura-covered skallbasen. (E) Den dissektion fortsätter i en posterior riktning längs skallen bas för exponering och snittning av synnerven chiasm (pil), TRATTFORMIG stjälk, och okulomotoriska nerver. (F) Hjärnan frisättning avslutas med den del av de nedre kraniala nerverna som de avviker från den ventrala ytan av hjärnstammen (III, oculomotor nerv; IV, trochlear nerv; V, trigeminal nerve; och VI, abducens nerv). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

5. Hypofys Avlägsnande

  1. Identifiera hypofysen stjälk och dess omgivande dural blad (den diapragma sellae) i skallen golvet (figur 4A).
  2. Incisionsfilm den durala blad sidled till hypofysen stjälken med hjälp av en fin kirurgisk skalpell (Figur 4B).
  3. Använd en DISSEKTOR att släppa gropenuitary och lyfta den ut från hypofysen fossa (Figur 4C).

figur 4
Figur 4: minigris hypofysen borttagning. (A) Hypofysen fossa (*) identifieras i skallen golvet (1, luktloben; 2, synnerven chiasm; och PF, bakre skall fossa). (B) Den durala beläggning (sellar diagphragm, (pil)) snittas i sidled. (C) Den hypofysen (pil) frigörs med en dissektorn och lyftas ut ur hypofysen fossa. Scale bar (AC) = 10 mm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

För att förhindra att vävnadsmaterialet från att torka ut, är det rekommenderat att lagra avlägsnas hjärnan och hypofysen i en burk fylld med fixativ eller isotonisk saltlösning omedelbart efter makroskopisk analys har utförts. Det vävnadsmaterial kan lagras i fixativ för år, medan lagring i isotonisk koksaltlösning, även i kylskåp, kommer att leda till vävnads förfall med tiden.

Den avlägsnades hypofysen kan också frysas direkt genom nedsänkning i torris-kyld vätska 2-metylbutan, medan den intakta grishjärna är för stor för direkt frysning 28. Istället, är det rekommenderat att skiva den grishjärna, såsom tidigare visat 28, in 9-15 mm tjocka parallella koronala vävnadsplattor som kan frysas in toto och kryostat-sektione in i 40 | j, m-tjocka sektioner 5, 18, 26, 28. Alternativt kan specifika hjärnområden vara fria-dissekerades från den borttagna intakta hjärnan eller skivad hjärna platta och utsattes för ytterligare histologisk bearbetning efter vibratome sektione 30, paraffin / metakrylat inbäddning och mikrotom snittning 6, 17, 27, eller frysning och kryostat sektione 6, 14, 15, 25. I vår inställning, är svinkadaver slutligen placeras i specificerade plastbehållare och förvaras i en särskild kylrum tills de samlas in och transporteras till en biologisk förnedrande anläggning.

Med användning av icke-motoriserade kirurgiska verktyg (tabell av material), den beskrivna tekniken (fig 1 g> - 3) möjliggör, hos cirka 15-20 min, avlägsnande av den intakta grishjärna (figur 5AB), medan de avhuggna kraniala nerver och hypofys förblir anslutna till skallen golvet (figur 4A). Likaså kan hypofysen enkelt avlägsnas, intakt, efter avlägsnande av överliggande hjärnan och frigöra den durala sellar membranet (Figur 4 och 5C).

Den resulterande hjärnan och / eller hypofys (fig 5) kan därefter lämnas till makroskopisk analys att, bortsett från direkt visuell inspektion, kan inkludera storlek och volymmätningar 31. Detta kan följas av orienterade sektione i mindre hjärnplattor 28, 29 som lämpar sig för kemisk analys och / eller ytterligare histologisk beredning, färgning och mikroskopisk analys 6,s = "xref"> 14, 15, 17, 25, 26, 27.

figur 5
Figur 5: Minigris hjärna (A och B) och hypofysen (C). (A) Hjärna, laterodorsal vy (BS, hjärnstammen, CB, cerebellum; och CRB, cerebrum). (B) Hjärna, ventrala vy (BS, hjärnstammen, CB, cerebellum; och CRB, cerebrum). (C) Hypofys, posterior vy (AH, adenohypofysen och NH, neurohypophysis). Skala bar (A och B) = 10 mm, (C) = 5 mm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De flesta experimentella neurovetenskap studier utförs i små djurarter, såsom möss och råttor, där tillträde till CNS underlättas av en tunn skull- och dural-tjocklek. Emellertid, i större försöksdjur som grisar 1, 4, 8, får 32, och icke-mänskliga primater, den avsevärda tjockleken av dessa strukturer nödvändiggör användning av robusta instrument (tabell av material) och lämpliga startpunkter för avlägsnande benet (Figur 2). Kunskap att begränsa durala blad (fig 3 och 4) krävs innan CNS kan nås och hjärnan på ett säkert sätt avlägsnas.

Det rekommenderas att lämna dura intakt under avlägsnandet skallbenet, eftersom detta kommer att skydda den underliggande hjärnan från skador. Föregående transcardial fixering 20 kan likaledes hårdna och slightly krympa hjärnan, vilket gör att benet och dural borttagningsprocessen som skall utföras med större lätthet och säkerhet. En speciell egenskap hos grisen skalle, i motsats till den får och icke-human primat, är den progressiva expansionen av front sinus med åldern, vilket kan vara fördelaktigt i skallbenet borttagningsprocessen (Figur 2). Den presenterade tekniken kan således användas på alla stora djurarter, men bara hos grisar, särskilt de som är äldre än 6 månader, kommer den främre sinus utvecklas tillräckligt för att ge stöd i skallbenet borttagningen. Slutligen är fullständig sektionering av ryggmärgen under halshuggning processen (Figur 1B) och fullständig sektionering av den durala cerebellär tentoriet (Figur 3B) innan det slutliga hjärn frisättning absolut nödvändigt för att undvika efterföljande skada på hjärnstammen.

I vissa studier, kan det vara fördelaktigt att ha en del av den rostrala cervikala ryggmärgen fäst till hjärnan.Detta kan erhållas genom att placera den inledande halshuggning snitt (Figur 1A) mer kaudalt på halsen, som ger tillgång till ryggmärgen genom en mellankotskiva cervikal skiva i stället för den kraniocervikala korsningen, vilket visas i den aktuella videon. Avlägsnandet bakre ben måste då utgå från den exponerade caudal lamina. Bortsett från detta, kommer tekniken att vara liknande, så det är viktigt att komma ihåg att ryggmärgen måste vara helt sektionerad innan halshuggning avslutas med kraftfull förlängning på avdelningsnivå (fig 1). Det nuvarande förfarandet demonstreras på ofixerade djur, eftersom den faktiska bakgrundsstudie nödvändig HPLC-analys av den härledda hypofysen. Observera dock att exakt samma teknik används på djur transkardiellt fixerade med paraformaldehyd 3, 5, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 26, 27, 28, 31, även om alla förfaranden i ett sådant fall måste utföras under god ventilation som tillhandahålls av ett dragskåp 20. Valet av nativ dissektion kontra in toto -fixation och efterföljande dissektion bör därför enbart bero på förfarandet (t ex konventionell histologi, immunhistokemi, HPLC, och FISH) 32 den erforderliga efterbearbetning.

Som diskuteras i de följande avsnitten, har vi föredragit att använda icke-motoriserade kirurgiska instrument. Skallen grisar i åldern över 1-2 år kan dock vara så robust att skallen avlägsnas med den demonstrerade instruments inte är möjlig, vilket nödvändiggör användningen av motoriserade instrument, såsom craniotomes, oscillerande sågar, och elektriska borrar 32. I det fallet är det fortfarande rekommenderas att följa protokollsteg som anges ovan, och därigenom dra nytta av de naturligt förekommande skalle ingångspunkter och frontal sinus utveckling. Den presenterade främre tillgång till skallbasen är elegant och lätt, men den beskrivna trubbiga frisättningen av luktsinnet glödlampor måste utföras utan direkt visuell ledning (Figur 3D), i motsats till de mer bakre utsläpp av hjärnan (figur 3EF). Den ventrala delen av lukt glödlampor kan därför drabbas av någon grad av okontrollerad skador som endast kan undvikas, om det behövs, genom att borra den främre skallbasen ut ventrala till lökarna före utgivningen processen initieras. Observera att manipulation, speciellt ofixerade hjärnvävnad under skallen borttagning har antytts att resultera i histologi cal mörk neuron artefakt, vilket kan leda till felaktiga slutsatser neurotoxikologiska studier 33.

Skallbenet borttagningsprocessen kan även utföras med maskiner som craniotomes, oscillerande sågar, och elektriska borrar 32. Dessa kan påskynda processen, men de kommer också att öka risken för skador på de underliggande neurala strukturer. Sådan utrustning kan också vara kostsamt och kommer sannolikt att vara tillgänglig för de flesta laboratorier. Vi har därför föredragit att visa det nuvarande förfarandet med användning av icke-motoriserade kirurgisk utrustning (Table of Materials) som är lätt att komma åt och använda.

Den beskrivna och illustrerade teknik kommer, när de används på rätt sätt, gör det möjligt för exponering och avlägsnande av den postmortem grishjärna, hypofysen, och / eller cervikala ryggmärgen (fig 5), vilket resulterar i vävnadsbitar som är väl lämpade för ytterligare makroskopisk analys"xref"> 5, 6, 19, 26, 31, sektione in hjärn plattor 28, och efterföljande kemisk analys och / eller histologisk bearbetning 6, 14, 15, 16, 17, 25, 26, 27, 31.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna har ingenting att lämna ut.

Acknowledgments

Författarna erkänner med tacksamhet skickliga hjälp av Fru Trine W. Mikkelsen, Mrs. Lise M. Fitting, och personalen på Påskehøjgaard. Det danska Medical Research Council, den Lundbeck Foundation, och Novo Nordisk Foundation ekonomiskt stöd studien.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Heavy Scalpel Handle #4 FST (Fine Science Tools) 10008-13 Good for skin incision and soft tissue removal
Non-Sterile Scalpel Blades #23 FST  10023-00
Scalpel Handle #7 FST  10007-12 Optimal for dural incision and precision work
Non-Sterile Scalpel Blades #11 FST  10011-00
Surgical Forceps FST  11024-18 The tip of the surgical forceps ensure a firm grip 
Kerrison Bone Punch Aesculap Neurosurgery FF713R Must be robust, bite size 3-5 mm
Bone Rongeur Aesculap Neurosurgery MD615 Must be robust, bite size 15 x 5 mm
Bone Rongeur Aesculap Neurosurgery FO551R Must be robust, bite size 25 x 15 mm 
Bone Chisel Lawton 67-0335 The size of the chisel head should not exceed 20 mm
Mallet (Hammer) Millarco 5624108 Weigth 300 g, length 30 cm, head hit area size 2 x 2 cm
Micro-Scissor FST  14002-14  
Dissector Aesculap Neurosurgery OL165R
Göttingen minipigs Ellegaard Göttingen Minipigs A/S, Denmark
Euthanimal pentobarbital
Ketamine Pfizer
Midazolam  Hameln Pharmaceuticals

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lind, M. N., Moustgaard, A., Jelsing, J., Vajta, G., Cumming, P., Hansen, A. K. The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders. Neurosci Biobehav Rev. 31, 728-751 (2007).
  2. Bjarkam, C. R., et al. Neuromodulation in a minipig model of Parkinson disease. British J Neurosurg. 22 (Suppl. 1), S9-S12 (2008).
  3. Bjarkam, C. R., Cancian, G., Glud, A. N., Ettrup, K. S., Østergaard, L., Sørensen, J. C. MRI-guided stereotaxic targeting in pigs based on a stereotaxic localizer box fitted with an isocentric frame and use of SurgiPlan computer-planning software. J Neurosci Methods. 183 (2), 119-126 (2009).
  4. Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. H. The pig model in brain imaging and neurosurgery. Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).
  5. Bjarkam, C. R., et al. Safety and function of a new clinical intracerebral microinjection instrument for stem cells and therapeutics examined in the Göttingen minipig. Stereotact Funct Neurosurg. 88 (1), 56-63 (2010).
  6. Fjord-Larsen, L., et al. Long-term delivery of nerve growth factor by encapsulated cell biodelivery in the minipig basal forebrain. Mol Therapy. 18 (12), 2164-2172 (2010).
  7. Sørensen, J. C., et al. Development of neuromodulation treatments in a large animal model - Do neurosurgeons dream of electric pigs? Prog Brain Res. 194, 97-103 (2011).
  8. Dolezalova, D., et al. Pig models of neurodegenerative disorders: utilization in cell replacement-based preclinical safety and efficacy studies. J Comp Neurol. 522 (12), 2784-2801 (2014).
  9. Mikkelsen, M., Moller, A., Jensen, L. H., Pedersen, A., Harajehi, J. B., Pakkenberg, H. MPTP-induced Parkinsonism in minipigs: A behavioral, biochemical, and histological study. Neurotoxicol Teratol. 21, 169-175 (1999).
  10. Danielsen, E. H., et al. The DaNEX study of embryonic mesencephalic, dopaminergic tissue grafted to a minipig model of Parkinson's disease: Preliminary findings of effect of MPTP poisoning on striatal dopaminergic markers. Cell Transplant. 9 (2), 247-259 (2000).
  11. Dalmose, A., Bjarkam, C. R., Sørensen, J. C., Jørgensen, T. M., Djurhuus, J. C. Effects of high frequency deep brain stimulation on urine storage and voiding function in conscious minipigs. Neurourol Urodyn. 23 (3), 265-272 (2004).
  12. Dalmose, A., Bjarkam, C. R., Djurhuus, J. C. Stereotactic electrical stimulation of the pontine micturition center in the pig. Br J Urol. 95, 886-889 (2005).
  13. Andersen, F., Watanabe, H., Bjarkam, C. R., Danielsen, E. H., Cumming, P. The DaNeX Study Group. Pig brain stereotaxic standard space: Mapping of cerebral blood flow normative values and effect of MPTP-lesioning. Brain Res Bull. 66 (1), 17-29 (2005).
  14. Glud, A. N., et al. Direct gene transfer in the minipig CNS using stereotaxic lentiviral microinjections. Acta Neurobiol Exp. 70 (3), 1-8 (2010).
  15. Glud, A. N., et al. Direct MRI-guided stereotaxic viral mediated gene transfer of alpha-synuclein in the minipig CNS. Acta Neurobiol Exp. 71 (4), 508-518 (2011).
  16. Ettrup, K. S., Sørensen, J. C., Rodell, A., Alstrup, A. K. O., Bjarkam, C. R. Hypothalamic deep brain stimulation influences autonomic and limbic circuitry involved in the regulation of aggression and cardiocerebrovascular control in the minipig. Stereotact Funct Neurosurg. 90 (5), 281-291 (2012).
  17. Nielsen, M. S., et al. Continuous MPTP intoxication in the minipig results in chronic parkinsonian deficits. Acta Neurobiol Exp. 76, 198-210 (2016).
  18. Bjarkam, C. R., et al. A MRI-compatible stereotaxic localizer box enables high-precision stereotaxic procedures in pigs. J Neurosci Methods. 139 (2), 293-298 (2004).
  19. Bjarkam, C. R., Jorgensen, R. L., Jensen, K. N., Sunde, N. A. A., Sørensen, J. C. H. Deep brain stimulation electrode anchoring using BioGlue®, a protective electrode covering, and a titanium microplate. J Neurosci Methods. 168, 151-155 (2008).
  20. Ettrup, K. S., et al. Basic Surgical Techniques in the Minipig: Intubation, Transurethral Bladder Catheterization, Femoral Vessel Catheterization, and Transcardial Perfusion. J Vis Exp. (52), e2652 (2011).
  21. Ettrup, K. S., Tornøe, J., Sørensen, J. C., Bjarkam, C. R. A surgical device for minimally invasive implantation of experimental deep brain stimulation leads in large research animals. J Neurosci Methods. 200 (1), 41-46 (2011).
  22. Danielsen, E. H., et al. Positron emission tomography of living brain in minipigs and domestic pigs. Scand J Lab Anim Sci Suppl. 25 (1), 127-135 (1998).
  23. Røhl, L., et al. Time evolution of cerebral perfusion and ADC measured by MRI in a porcine stroke model. J Magn Reson Imaging. 15 (2), 123-129 (2002).
  24. Cumming, P., Gillings, N. M., Jensen, S. B., Bjarkam, C. R., Gjedde, A. Kinetics of the uptake and distribution of the dopamine D2/3 agonist (R)-N-[1-11C]n-propylnorapomorphine in brain of healthy and MPTP-poisoned Gottingen miniature pigs. Nucl Med Biol. 30 (5), 547-553 (2003).
  25. Jensen, K. N., Deding, D., Sørensen, J. C., Bjarkam, C. R. Long-term implantation of deep brain stimulation electrodes in the pontine micturition centre of the minipig. Acta Neurochir. 151 (7), 785-794 (2009).
  26. Rosendal, F., et al. Does chronic low dose treatment with ciclosporin influence the brain? A histopathological study in pigs. Transplantation Proc. 37 (8), 3305-3308 (2005).
  27. Nielsen, M. S., Sørensen, J. C., Bjarkam, C. R. The substantia nigra pars compacta of the minipig: An anatomical and stereological study. Brain Struct Funct. (4-5), 481-488 (2009).
  28. Sørensen, J. C., Bjarkam, C. R., Simonsen, C. Z., Danielsen, E., Geneser, F. A. Oriented sectioning of irregular tissue blocks in relation to computerized scanning modalities. Results from the domestic pig brain. J Neurosci Methods. 104, 93-98 (2000).
  29. Bjarkam, C. R., Pedersen, M., Sørensen, J. C. New strategies for embedding, orientation and sectioning of small brain specimens enable direct correlation to MR-images, brain atlases, or use of unbiased stereology. J Neurosci Methods. 108, 153-159 (2001).
  30. Bjarkam, C. R., Sørensen, J. C., Geneser, F. A. Distribution and morphology of serotonin-immunoreactive axons in the hippocampal region of the New Zealand white rabbit. I. Area dentata and hippocampus proper. Hippocampus. 13 (1), 21-37 (2003).
  31. Bjarkam, C. R., Glud, A. N., Orlowski, D., Sørensen, J. C., Palomero-Gallagher, N. The telencephalon of the minipig, cytoarchitecture and cortical surface anatomy. Brain Struct Funct. , e-pub ahead of print (2016).
  32. Boltze, J., Nitzsche, B., Geiger, K. D., Schoon, H. A. Histopathological investigation of different MCAO modalities and impact of autologous bone marrow mononuclear cell administration in an ovine stroke model. Transl Stroke Res. 2, 279-293 (2011).
  33. Jortner, B. S. The return of the dark neuron. A histological artifact complicating contemporary neurotoxicologic evaluation. Neurotoxicology. 27, 628-634 (2006).

Tags

Neuroscience anatomi hjärnkirurgi kranialnerver Dura minigris neurokirurgi hypofysen skallbasen Sus Scrofa Technique ungulate
Exponering av Pig CNS för histologisk analys: en handbok för halshuggning, Skull öppningen och Brain Borttagning
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bjarkam, C. R., Orlowski, D.,More

Bjarkam, C. R., Orlowski, D., Tvilling, L., Bech, J., Glud, A. N., Sørensen, J. C. H. Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal. J. Vis. Exp. (122), e55511, doi:10.3791/55511 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter