Abstract
Bu protokol uzamış kritik hastalığın merkezi Kateterize fare modeli tarif etmektedir. İnsan klinik ayarını taklit etmek sıvılar, uyuşturucu ve besin yönetimi için bir merkezi venöz kateter kullanımı ile sepsis ikna etmek çekal ligasyon ve delme yöntemi birleştirir. Kritik hastalarda hayatta kalmak için yoğun tıbbi desteğe ihtiyaç. Hastaların çoğunluğu birkaç gün içinde iyileşir ederken, hastaların yaklaşık dörtte uzamış yoğun bakım ihtiyacı ve çoklu organ yetmezliği olmayan çözme ölme riski yüksektir. Bundan başka, kritik hastalık uzun faz patogenezi halen tam olarak anlaşılmamış olan derin kas zayıflığı ve endokrin ve metabolik değişiklikler dolayı ayar edilmektedir. yoğun bakım araştırmalarında en çok kullanılan hayvan modeli sepsis ikna etmek çekal bağlama ve delme modelidir. Bu, insan sep benzer akut enflamatuar ve hemodinamik değişiklikler ile çok tekrarlanabilir bir model, birHastalığın akut faz incelemek üzere tasarlanmıştır sis,. Ancak, bu model klinik insan durumdan farklıdır ve kritik hastalık uzamış aşamasını incelemek için geliştirilmemiştir yüksek öldürücülüğü ile hallmarked edilir. Bu nedenle, daha iyi kritik hastalığın insan klinik durumu taklit etmek için, bize klinik açıdan destekleyici bakım yönetmek için izin şah damarında bir santral venöz kateter yerleştirerek tekniğini uyarladı. Bu fare modeli hayvanların geniş bir cerrahi işlem ve günlük yoğun bakım gerektirir, ancak Hastalığın akut ve uzun süreli fazın ilgili bir modelde sonuçlanır.
Introduction
Kritik hastalık, bir ya da daha fazla organ sistemlerinin işlev yoğun tıbbi destek tatbik sürece hastanın ölür ölçüde engellenmektedir edildiği bir hastalık durumudur. Yoğun bakım ünitesi (ICU), travma, karmaşık operasyon, yanıklar, sepsis hastalık alevlenmeler arasında değişen, değişebilir kabul için başlangıç nedeni ise, her kritik hasta diğerleri arasında, hipoperfüzyon, hipoksi ve aşırı enflamasyonun neden olduğu hücresel hasara muzdarip , olan, organ yetmezliğine yol açar. Hastaların çoğu akut hakaret hayatta ancak hastaların önemli bir kısmı hemen kurtarmak ve uzun süreli yoğun bakım gerekmez. Bunlar nedeniyle çoklu organ yetmezliği olmayan çözümünde ölüm riski yüksektir. Bundan başka, kritik hastalık uzun faz patogenezi halen tam olarak anlaşılmamış olan derin kas zayıflığı ve endokrin ve metabolik değişimi ile hallmarked edilir.
Çeşitli rOdent modeller kritik bakım araştırma ortamında kullanılmaktadır. iki çok kullanılan model lipopolisakarit (LPS) ve çekal bağlama ve delme (CLP) eksojen bulunmaktadır. Her iki model enfeksiyona, düzeni bozulmuş bir konakçı tepkisi neden olduğu bir yaşamı tehdit eden organ fonksiyon bozukluğu olarak tanımlanır sepsis, akut faz, taklit edilmesi için geliştirilmiş ve dünya çapında yoğun bakım ünitesinde, 1, 2 giriş için ana nedenlerinden biridir. Sadece geçici olarak sitokinlerin salgılanmasını ve hayvan 3 hemodinamik durumunu etkileyen olarak LPS modeli birçok dezavantajı vardır. İnsanlarda farklı olarak, kemirgenler de endotoksin karşı dayanıklıdırlar ve endotoksin, 'yüksek dozlarda' kullanımı burada ayrıca bu yöntem 4, 5 geçerlilik endişelere yol, hipotansiyon ve mortaliteyi üretmek için gereklidir. Diğer model çekal bağlama ve delme modeli (CLP)Bir iğne deliği boyunca ve üzerinden, ardından çekum bir bölümünün bir ligasyonu bulunmaktadır. Bu prosedür, kan bölmesi içine bakteri translokasyonu ile doku hasarı ile polimikrobial karın enfeksiyonu neden olur. Bu sistemik inflamatuar yanıt ve sepsis gelişimi tetikler. Hyperinflammation, vazodilasyon, hipotansiyon ve artmış kardiyak çıkışı 6, 7: CLP modeli geniş ölçüde sepsis ana özelliklerini üretir akut kritik hastalık için bir hayvan modeli olarak kabul edilmiştir. Ancak, bu model olmayan çözme çoklu organ yetmezliği, kas zayıflaması ve endokrin ve kritik hastalığın uzun süreli aşaması için tipik olan metabolik değişimler, çalışma izin vermez. Fare modellerinden bulgular her zaman insan 8 ayara tercüme edilemez çünkü Dahası, son zamanlarda kritik hastalık için fare modellerinin geçerliliği, sorguya çekildi, 9, 10. Olası bir açıklama, hasta insan hastaları önemli bir biçimde sağlanan destekleyici bakım kritik fareler için sağlanmıştır bakımı büyük ölçüde farklı olduğunu olabilir.
Bu nedenle, daha yakın insan ayar benzemeye ve kritik hastalık uzun faz araştırılmasını sağlamak için, bu tür yaygın damar içi sıvı uygulama ve antibiyotik olarak, insanlarda, verilen akut yoğun bakım taklit eden bir fare modeli geliştirilmiştir ve izin veren örneğin beslenme desteği olarak kritik hastalık, uzun süreli faz hayatta kalmak için destekleyici tedavi uygulanması. Bu amaçla, sepsis altın standardı olan, CLP kaynaklı sepsis fare modeli uyarlanmış ve akışkanların, beslenme ve ilaç verilmesini sağlayan bir merkezi venöz hat yerleştirilmiştir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
protokol Hayvan Araştırmaları Leuven Etik İnceleme Kurulu Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
Venöz Hattının 1. Hazırlık
- hızlı bir şekilde sıcak (> 220 ° C), susam yağı içinde 60 cm mikrorenatan (MRE) boru orta kısmını daldırarak venöz kateter ucu hazırlayın. Daha sonra yavaşça birbirinden boru uçlarının hareket ettirerek dar bir çapa (dış çap (OD) <0.5 mm) elde edecek tüpün orta kısmına uzanır.
- 30 cm, her (bakınız Şekil 1, Tablo 1) iki parçaya boru kesmek için bir bisturi bıçağını kullanarak.
- polietilen PE50 konnektörü kullanılarak polietilen boru PE10 için MRE boru bağlayın ve döner taban kısmına, bu PE10 boru bağlayın. PE10 boru için döner üst kısmı bağlayın ve Şekil 1 'deki gibi PE50 konektör boru ile bir Luer saplama iğneye bağlayın.
- Uygula güçlü hızlı actiBütün bağlantıların yapışkan yapıştırıcı ng ve hava ile yıkama ile sızıntı kateter test edin. Gaz kullanımdan önce kateter sterilize.
Şekil 1: Venöz Hattı inşaatı. Venöz hat küçük bir çapa MTA, boru gerilmesi ve bir kemirgen döner cihaza polietilen boru ile bağlayarak hazırlanırlar. Farklı parçaların uzunlukları ile ilgili talimatlar için Tablo 1 'e bakınız. Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.
| efsane | uzunluk | hacim |
| 1) Luer saplama iğnenin 22G, | ||
| 2) PE50 - polietilen dan, 023" x .038" | 5 cm | 13 ul |
| 3) PE10 - polietilen 0,011" x 024” | 50 cm | 30 uL |
| 4) Kemirgen Döner 20G | ||
| 5) PE-10 | 15 cm | 9 uL |
| 6) PE-50 (bağlayıcı) | 5 cm | 13 ul |
| 7) MRE025 İpucu gergin mikrorenatan .025" x 0,012" | 30 cm | 27 ul |
| Toplam | 105 cm | 92 uL |
Tablo 1: Venöz Hattı inşaatı. Bu tablo, Şekil 1 için bir açıklama sağlamaktadır.
2. Anestezi ve Ön cerrahi İşleme
- (- 32 gr 27), 24 haftalık erkek C57BL / 6J fareleri kullanın.
NOT: Bu yaş yoğun bakım hastalarının yaş ortalaması daha iyi karşılık olarak biz 24 haftalık fareleri (olgun yetişkin) kullanın. Biz östrojenlerin halkalı etkisini önlemek için sadece erkek fareler kullanın. Tercih edilen ise teknik aynı zamanda, daha küçük (16 haftalık farelerde test) Hayvanlar ve kadın üzerinde de kullanılabilir. - Kullanmadan önce tüm cerrahi aletler sterilize. herhangi bir hava kabarcıklarını çıkarmak için ve açıklık ve potansiyel sızıntı testi için tuzlu su ile steril ev yapımı venöz kateter yıkayın.
- 80 cm uzunluğunda bir metal teli (0.8 mm çap) Kesme katlanarak iki katını ve bir döngü yaptırın. döngü iki tel üzerinden 3 inci kurşun. 3 inci yoluyla sondanın ucunu kılavuz metal telin, kateterin takın.
NOT: Metal bağlantı teli kateter bağlı olduğu döner dönme için gereklidir. Bu şekilde, fare venöz hat engellemeden, serbestçe hareket edebilir. - m anestezisi0.03 ml ketamin (100 mg / kg) ve 0.02 ml ksilazin (/ kg, 13 mg) karışımı bir intraperitoneal (İP) enjeksiyon ile ouse. Bu anestezi reflekslerin yokluğu kontrol ederek yeterli olduğundan emin olun. Yavaşça dilin yutma yoluyla boğulma tehlikesini forseps ile dış fare dilini çekin.
Not: 10 dakika sonra, fare hala geri çalışırsa konusu uzuvların bir 0.01 mL bolus olarak ek ketamin verir. - karın, boynun ventral tarafına (çene, sternum ve köprücük kemiğinin arasındaki üçgen) dahil olmak üzere cerrahi alanı tıraş ve) kafa tabanındaki kürek kemikleri arasında.
- Bir önceden ısıtılmış ısıtma yastığı üzerinde pozisyonda fare yerleştirin,% 70 etanol ile cilt dezenfekte ve kurumasını gözü korumak için oftalmik yağlayıcı küçük bir miktar uygulanır. 0.2 ml ropivakain (/ kg 0.67 mg) ile cerrahi siteleri (arka karın, boyun-ön ve arka) infiltre.
- Fare yüzükoyun pozisyonda hareketsiz iken, sırt tarafında dibinde küçük bir kesi yapmakbistüri veya makas ile başın. arka servikal kas Açığa ve kas altında bir 3.0 naylon iplik gelen 3,0 naylon bağlantı telinin döngü kas bağlar.
- onun sağ tarafta fare yerleştirin. bir neşter veya makas ile ventral boyun derisinde küçük bir kesi yapın. Görsel kılavuzluğunda, tünel iğne boyunca önceden yapılmış ve kateteri iplik arkasında insizyon doğru ventral kesikten 18-gauge iğne deri altından ventral tarafında da exteriorize.
- Sırtında fare yerleştirin. ısıtma yastığına fare ve bandın aşağı üst kesici dişleri arkasında 3.0 naylon geçirin. oksijen (/ dk 2L) vermek için bir yüz maskesi baş elde edin. kuyruk ve iki ön ayakları aşağı bantlayarak gerilmiş bir pozisyonda fare sabitleyin.
Not: tek başına ketamin-ksilazin anestezi yeterli değilse, inhale izofluran (0,5-1,5%) ameliyat sırasında teslim edilebilir.
- mikroskop altında fare yerleştirin. şahdamarı görüntülenmiştir kadar ventral boyun önceden yapılan kesi olarak, nazikçe uzak forseps ile yağ dokusu ve bezleri kızdırmak.
- Açık açık ven ve bağ dokusu ile forseps ucu yerleştirme ve damar paralel olarak sürekli forseps açarak geminin üzerinde ve çevresinde bağ ve subkütan doku jugular damar boşaltmak için teşrih. Bu itibarla, damara hasar kaçınılacaktır.
- ven altında künt forseps koyarak şah damarı izole edin. damar altında 3.0 ipek iplik üç adet besleme, juguler ven (kafatası bağ) ve sternocleidomastoid kas (kaudal bağ) yakın bir parçanın bifürkasyon pozisyonu tek parça yakın. kranyal bitişik harfleri ve ven esneme ve kateter yerleştirilmesi sırasında aşırı kanamayı önlemek için kaudal ligatürün sıkın. Tyani orta iplikle gevşek bir ligatür sonradan kateterin kolayca sabitlenmesini sağlamak için.
- Mikro makas kullanarak, kranial ve kaudal bitişik harfler ve kateter geçecek kadar büyük arasındaki damar boyunca bir kesi yapmak. forseps ile kateter tut ve kateter damar içine 11 mm yerleştirin. Gevşek orta bitişik harfleri kapalı bağlayarak deriye tespit ve yavaşça steril tuzlu su ile yıkanmak suretiyle doğru yerleşimi onaylayın.
- sıkıca gemi ve kateter etrafında orta ve kaudal bitişik harfleri kapalı bağlayarak kateter sabitleyin. Kravat sıkıca kateteri sabitlemek için bir araya kaudal ve orta ligature uçları. knot her düğüm yaptıktan sonra kateter ile yıkanması ile, damar tıkayan olmadığından emin olun. Son olarak, kaudal ve kranial ligatures kravat. 5.0 ipek dikişlerle kesi kapatın.
4. çekal bağlama ve delme
- bistüri veya makas ile karın alt yarısının deri yoluyla 1 cm ensizyon olun;periton boşluğuna nüfuz için dikkatli olun.
- Karın kas linea alba belirlemek ve periton boşluğuna giriş kazanmak için bir intermusküler kesi yapmak. çekum bulun ve çekum izole etmek ve bunu exteriorize künt anatomik forseps kullanır.
- 3.0 ipek sütürle uzunluğunun% 50 çekum Arter. Bağırsak süreklilik korunur, böylece ileoçekal valf bağlanması için değil emin olun.
- yoluyla ve üzerinden tek bir tarafından 18-gauge iğne ile çekum delikli ligasyonu ve çekum ucu arasındaki delik yarıda. iğne ayrılmasından sonra, açıklık sağlamak için delik dışkıların bir miktar a'ya.
- karın boşluğunda bağırsak yeniden getirin ve 5.0 ipek sütür ile periton ve cilt kapatmak.
NOT: Ortalama olarak, yeni bir stajyer sorunsuz venöz kateter yerleştirmek ve 45 dakika içinde CLP gerçekleştirmek edebilmek için 10 ila 15 hayvan gerektirir. eğitim dönemi, bir anestezi / cerrahi rela sonra% 10 ted ölüm beklenebilir.
5. Post-cerrahi tedavi ve Akışkan Resüsitasyon
- yatar pozisyonda fare yerleştirin ve bantla eki tele kateteri sabitleyin. bağımsız bir kafese fareyi hareket ettirin. döner cihaz fare üzerinde 25 cm tutmak için ayarlanabilir kelepçe ile bir stand kullanın ve sıkı bir şekilde döner dönme noktasına metal bağlanma telin serbest bir bantlayın.
- venöz hat sıvı canlandırma başlatmak için: dengeli kolloid ve kristaloid (4 1) karışımını ihtiva eden bir şırınga takın.
- 12 saatlik aydınlık ve karanlık döngüsü ile kontrol edilen bir sıcaklıkta (27 ° C), hayvan kabininde kafes yerleştirin ve doğru bir şırınga odaklı infüzyon pompası ile intravenöz sıvı replasmanını (10 mL / kg / saat) başlar. Bu tür iç içe malzeme ve ahşap bir blok olarak kafes zenginleştirme sağlar.
6. Yoğun Bakım
- 6 saat post-operatif olarak, deri altından ağrı medicatio enjekteburada n ve antibiyotikler (0.3 mL buprenorfin (0.15 mg / kg) ve 0.2 mL imipenem (16.67mg / kg)). NOT: Kurumun veteriner politikaları yönettiği gibi standart laboratuvar hayvanları hekimliği uygulaması sonrasında ağrı kesici ilk dozu daha sonra başlangıçtaki cerrahi kesi öncesi ve verilir. Deri altı enjeksiyonları dikkatli bir şekilde deri altı alana enjekte edilmelidir.
- 20 sonra, - sıvı verilmesi 24 saat sonra, toplam parenteral beslenme (6.67 ml / kg / saat) kristaloidler / kolloidleri değiştirin.
NOT: uygulanan total parenteral beslenmenin (5.8 kcal / 24 saat) yoğun bakım ünitesinde hastaların erken kalori alımı benzer farelerin, günlük kalori ihtiyacının% 40 civarında kapsar. - Subkutanöz olarak enjekte edilmiş ağrı kesiciler ve antibiyotikler (0.6 mL buprenorfin (0.3 mg / kg) ve 0.2 mL imipenem (16.67 mg / kg) kritik hastalık dönemi boyunca, her 12 saatte bir uygulanması.
- Gün boyunca hayvanlar en az 3 saatte bir kontrol edin. Bir acı vererek ıstırabı değerlendirinvalide fare face ölçeğine 11 dayalı puanı. yüksek ağrı skoru hayvanlar için izleme yoğunlaştırılması.
Deney 7. Sonu
NOT: onaylanması ve modeline ve insan uç noktaları için yönergeleri ve politikalarının şiddeti düzeyine önerileri Hayvan Araştırmaları Yerel Kurumsal Etik İnceleme Kurulundan aranmalıdır.
Not: bloke kateterin kateter yöresizleştirilmesi gibi fonksiyonel olmayan bir venöz hat halinde, bir şırınga pompası ile ilgili sorunlar, hayvan çalışma dışı ve ötenazi.
- Deney süresi sonunda, derin 0.03 ml ketamin (100 mg / kg) ve 0.02 mL (13 mg / kg), ksilazin karışımı kullanılarak fare anestezi. kalp ponksiyonu ile kanı ile fare öldürülür. Mağaza -80 ° C'de ilgi dondurulmuş doku örnekleri ek.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Yukarıda tarif edildiği gibi, C57BL / 6 fareleri kritik yapılmıştır. İki zaman noktalarında kadar sonrası CLP hayatta kalmasını değerlendirmek için iki deney gerçekleştirildi: hayatta kalma gün 7 (n = 22) kadar günde 5 (n = 15) ve hayatta kalma sonrası CLP kadar. iki deneyin hayatta kalma eğrileri deney düzeneği tekrarlanabilirliğini gösteren (gün 5 kadar karşılaştırıldığında) önemli ölçüde farklı değildi. Sigara hayatta kalan hayvanlar sebebiyle ulaşan insan uç noktalara ölümü bulunamadı veya ötenazi uygulandı. 3 gün sonra antibiyotik, vena jugularis bir damar kateteri vasıtası ile sıvı verilmesi ve tam parenteral beslenme ile kombinasyon halinde çekum% 50 ligasyonu, tarif edildiği gibi, kritik hastalık 1 gün sonra% 13 ölüm ile sonuçlanmıştır,% 24 mortalite kritik hastalık, 27 - kritik hastalık 5 gün sonra% 31 ölüm oranı ve kritik hastalık 7 gün sonra% 36. kalori olan sağlıklı çift beslenen fareler, kritik besin alımı ile sınırlıhasta fareler, herhangi bir mortalite ortaya koymamıştır.
Şekil 2: kritik hastalık, 5 veya 7 gün sonra, hayatta kalma eğrileri. (- cerrahi olmayan sağlıklı hayvanlar, A, B, kesikli çizgi), sağlıklı hayvanların grubunda mortalite vardı. Beş gün cerrahi (A), daha sonra, ölüm oranı% 27 (düz çizgi) idi. Yedi gün sepsis (B) indüksiyonundan sonra, ölüm oranı% 36 idi. sızıntı ya da yerinden sökülmüş kateter olan fareler deney (% 15) dahil edilmiştir. Bu rakamın büyük halini görmek için buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Biz sıvılar, uyuşturucu ve besin yönetimi için bir merkezi venöz kateter kullanımı ile sepsis ikna etmek çekal bağlama ve delme yöntemi birleştirerek, kritik hastalığın klinik açıdan daha anlamlı fare modelini geliştirdi. Bu deney düzeneği yeniden üretilebilir, burada insan klinik durumu 1 taklit eden bir kararlı ölüm oranı kritik hastalık ve uzun süreli bir faz çalışma sağlar.
Çekal bağlama ve delme yoğun sepsis 6, 7 ana özellikleriyle üretir akut kritik hastalık bir hayvan modeli olarak kabul edilmiştir. Ancak akut kritik hastalık bu model olmayan çözme çoklu organ yetmezliği, kas zayıflaması ve endokrin ve kritik hastalığın uzun süreli aşaması için tipik olan metabolik değişimler, çalışma izin vermez. Ayrıca, bu model ile klinik öncesi bulgular sıklıkla Translat başarısız8, 9, 10 ayar klinik insana e. Bu nedenle, bir merkezi venöz hat yerleştirilmesi araştırmacı geniş sıvı replasmanını, uyuşturucu ve total parenteral besin uygulaması sağlayan bir model geliştirmiştir. Bunlar destekleyici önlemler Hastalığın akut faz hayatta kalmak için kritik hastalar için hayati önem taşıyor. Bu santral venöz hattın yerleştirilmesi rağmen, hayvanlar hala serbestçe nispeten küçük rahatsızlık hareket edebiliyoruz. Ağrı 11 fare face ölçeği ile değerlendirilen Günlük ağrı kesici, acıları hafifletmeye yardımcı olur. Bu model aynı zamanda, örneğin, antibiyotik tedavisi ve ağrı kesici olarak kritik hastalarda, destekleyici bakım diğer unsurlar içermektedir.
Bu model çeşitli sınırlamalar vardır. İlk olarak, geniş çaplı cerrahi işlemler zorlu ve yeterli eğitim gerektirir. Aslaetkilen- memişti yeterli eğitim ameliyat edilen hayvanlar 10 ortalama% sırasında ya da ameliyattan hemen sonra ölür. Daha da ötesi, yerleştirilmez kateterler, hayvanın toraksa canlandırma sıvıları veya parenteral beslenmenin sızıntıya neden olabilir. Ortalama olarak, hayatta kalan hayvanların% 15'i nedeniyle bu kateter ile ilgili sorunlara çalışma sırasında kesin olarak kullanılamazlar. Bir deney için hayvanlar arasında gerekli sayıda hesaplar Böylece, bir hesaba cerrahi ve kateter ile ilgili kayıpları nedeniyle, bir% 25 fazlası almak zorundadır. İkinci olarak, tek bir damar erişim noktası ile, antibiyotikler, ağrı tedavisi hala günde iki kez deri altından uygulanması gerekir. Gerçekten de, antibiyotikler, ağrı tedavisi ilaçlarla parenteral beslenme uyumluluğu garanti edilemez ve bu nedenle eş infüzyon kaçınılmalıdır. bir bolus enjeksiyonu ve ardından hattın yıkanması sonucu farelerin sınırlı kan hacmine teknik de mümkün değildir. Üçüncü olarak, anestezi ve cerrahi gerekli to tek başına şiddetli bir stres tepkisi oluşturacaktır kateter yerleştirin. Biz kontrol grubu olarak ameliyat olmadan sağlıklı hayvanların kullanılması ve insan cerrahi yoğun bakım hastaları katlanmak zorunda ne karşılaştırılabilir kritik hastalık parçası olarak kateter ilişkili cerrahi düşünün. Dördüncü olarak, ameliyat sonrası ağrı kesici ve antibiyotikler ve parenteral beslenme tatbikatına murin CLP modelinde klinik önemi artar sağlanması için bir merkezi venöz hat kullanımı ise, modeli hala tam olarak gösteren klinik durumu taklit etmez. Nitekim nedeniyle küçük hayvan boyutuna böyle renal replasman tedavisi olarak çeşitli gelişmiş destekleyici teknikleri tanıtmak zordur. Ancak, bu modelin kullanımı kritik hastalık patogenezi çözülüyor hayati, genetik parazitleri tanır.
CLP prosedürün mortalite ve şiddetini gösterilmiştir bağlanır çekum kısmı ile, gerekli görüldüğü takdirde boyutu ve num tarafından, manipüle edilebilirdeliklerin ber, deri altı sıvı canlandırma ve günlük antibiyotik tedavisi 6, 12. Biz ölüm 13 geliştirir daha önce gösterilmiş olduğu gibi, biz, ilk 20 saat için 10 mL / kg / saat oranında geniş sıvı replasmanını mesafede olan bir protokol seçin. Uzun bir kritik hastalık modeli yerine öldürücülüğünün bir modelin isteniyorsa Bizim uyarlamalar protokole dahil edilmelidir. İnsan sepsis 1 hayatta kalma oranını taklit olan uzun süreli hayatta kalma eğrileri ile gösterildiği gibi bu fare modeli, kritik hastalık bir klinik açıdan daha anlamlı bir model oluşturmak için bir orta dereceli CLP intravenöz sıvı verilmesi ve antibiyotik tedavisi kullanır. Yoğun bakım hasta popülasyonu, genel nüfus olarak, 14 yaşlanıyor. Bir olgun fareler (6 ay) kullanabilirsiniz daha da yakından insan yoğun bakım ayarını taklit etmek amacıyla, içinde, bu çalışmada kullanılan veyader deneysel modelin klinik ilgisinin artırılması.
Sonuç olarak bu fare modeli hayvanların geniş bir cerrahi işlem ve günlük yoğun bakım gerektirir, ancak araştırmacının kritik hastalığın uzun süreli fazının yönlerini incelemek sağlayan kritik hastalık modelinde sonuçlanır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Buprenorphine | Ecuphar | Vetergesic 0.3 mg/mL | |
| C57BL/6 | Janvier labs | C57BL/6JRj | |
| colloids | Fresenius Kabi | Volulyte 6% | |
| crystalloids | Baxter | Plasmalyte a viaflo | |
| Ethilon 3.0 | Ethicon | F3211 | |
| Imipenem | MSD | Tienam 500 mg powder for injection fluid | |
| Isoflurane | Eurovet | Iso-vet | |
| Ketamine | Eurovet | Nimatek 100 mg/mL | |
| LocTite Super glue3 all plastics | Rectavit | 119818 | |
| Mersilk 3.0 | Ethicon | L192 | |
| Mersilk 5.0 | Ethicon | F682 | |
| Microrenathane .025" O.D. x .012" I.D. | Bioseb | MRE-025 | |
| olimel N7E | Baxter | ||
| PE10 - Polyethylene .011" x .024" | Instech Solomon | BTPE-10 | |
| PE-50 tubing .023" x.038" | Instech Solomon | BTPE-50 | |
| Rodent Swivel 20 G | Bioseb | RS-20G | |
| Ropivacaïne | Astrazenica | Naropin 2 mg/mL | |
| Xylazine | VMD | Xylazine hydrochloride 2% |
References
- Angus, D. C., van der Poll, T. Severe sepsis and septic shock. N Engl J Med. 369 (9), 840-851 (2013).
- Singer, M., et al. The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3). JAMA. 315 (8), 801-810 (2016).
- Remick, D. G., Newcomb, D. E., Bolgos, G. L., Call, D. R. Comparison of the mortality and inflammatory response of two models of sepsis: lipopolysaccharide vs. cecal ligation and puncture. Shock. 13 (2), 110-116 (2000).
- Copeland, S., et al. Acute inflammatory response to endotoxin in mice and humans. Clin Diagn Lab Immunol. 12 (1), 60-67 (2005).
- Seok, J., et al. Genomic responses in mouse models poorly mimic human inflammatory diseases. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (9), 3507-3512 (2013).
- Rittirsch, D., Huber-Lang, M. S., Flierl, M. A., Ward, P. A. Immunodesign of experimental sepsis by cecal ligation and puncture. Nat Protoc. 4 (1), 31-36 (2009).
- Zolfaghari, P. S., Pinto, B. B., Dyson, A., Singer, M. The metabolic phenotype of rodent sepsis: cause for concern. Intensive Care Med Exp. 1 (1), 25 (2013).
- Radermacher, P., Haouzi, P. A mouse is not a rat is not a man: species-specific metabolic responses to sepsis - a nail in the coffin of murine models for critical care research. Intensive Care Med Exp. 1 (1), 26 (2013).
- Dyson, A., Singer, M. Animal models of sepsis: why does preclinical efficacy fail to translate to the clinical setting. Crit Care Med. 37 (1 Suppl), S30-S37 (2009).
- Osuchowski, M. F., et al. Abandon the mouse research ship? Not just yet. Shock. 41 (6), 463-475 (2014).
- Langford DJ1, B. A., Chanda, M. L., Clarke, S. E., Drummond, T. E., Echols, S., Glick, S., Ingrao, J., Klassen-Ross, T., Lacroix-Fralish, M. L., Matsumiya, L., Sorge, R. E., Sotocinal, S. G., Tabaka, J. M., Wong, D., van den Maagdenberg, A. M., Ferrari, M. D., Craig, K. D., Mogil, J. S. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nat Methods. 7, (2010).
- Hollenberg, S. M., et al. Characterization of a hyperdynamic murine model of resuscitated sepsis using echocardiography. Am J Respir Crit Care Med. 164 (5), 891-895 (2001).
- Heuer, J. G., et al. Cecal ligation and puncture with total parenteral nutrition: a clinically relevant model of the metabolic, hormonal, and inflammatory dysfunction associated with critical illness. J Surg Res. 121 (2), 178-186 (2004).
- Conti, M., Merlani, P., Ricou, B. Prognosis and quality of life of elderly patients after intensive care. Swiss Med Wkly. 142, (2012).
