Summary
דימום בלתי מבוקר, גורם חשוב לתמותה בקרב חולי טראומה, יכול להיות מעוצב באמצעות חתך כבד רגיל במודל Murine. מודל זה גורם איבוד דם עקבית, הישרדות, ומאפשר בדיקות סוכני המוסטטי. מאמר זה מספק את שלב אחר שלב תהליך לבצע מודל זה יקר.
Abstract
דימום בלתי מבוקר הוא גורם חשוב למותם של חולי טראומה. פיתחנו מודל Murine של דימום בלתי מבוקרת באמצעות laceration כבד המוביל איבוד דם עקבית, שינויים המודינמיים, והישרדות.
עכברים עוברים כריתה סטנדרטית של האונה השמאלית האמצעית של הכבד. הם מורשים לדמם ללא התערבות מכנית. סוכני Hemostatic יכול להיות מנוהל כטיפול מראש או טיפול הצלה בהתאם האינטרס של החוקר. בזמן הדימום, בזמן אמת ניטור המודינמי באמצעות קו עורק הירך השמאלית מבוצעת. עכברים הם הקריב אז, אובדן דם הוא לכמת, הדם נאסף לניתוח נוסף, ואיברים נקצרים לניתוח של פגיעה. עיצוב ניסיוני מתואר על מנת לאפשר בדיקה סימולטנית של בעלי חיים מרובים.
דימום כבד כמודל של דימום בלתי מבוקר קייםN הספרות, בעיקר במודלים של חולדות וחזירים. כמה מודלים אלה לנצל ניטור hemodynamic או לכמת אובדן דם אבל חוסר עקביות. המודל הנוכחי משלב כימות של איבוד דם, ניטור המודינמי בזמן אמת במודל Murine אשר מציע את היתרון של שימוש בקווים מהונדסים מנגנון תפוקה גבוהה כדי להמשיך לחקור את המנגנונים הפתופיזיולוגיים בדימום בלתי מבוקרת.
Introduction
טראומה היא הגורם המוביל למוות ולמוגבלות בקרב צעירים בעולם. דימום בלתי מבוקר נותר גורם מוביל לתמותה בקרב חולי טראומה קשים. 2 הטיפול בחולה הטראומה לדימום הוא פי שניים: שליטה בדימומים כירורגיים, החייאה והחלפת דם אבוד.
מודלים בבעלי חיים של הלם דימומי היו אבן הפינה במחקר הטראומה וניתן להשתמש בהם בהערכת הפתופיזיולוגיה וטיפול בהלם טראומטי / דימומי. 3 , 4 הלם במודלים של בעלי חיים ניתן להשיג באופן רחב על ידי שתי שיטות: דימום מבוקר ודימום בלתי מבוקרת. 5 , 6 מבוקר דימום מבוצע על ידי הסרת נפח קבוע של דם או על ידי הסרת דם כדי להשיג לחץ דם מסוים (לחץ קבוע). בזמן שמודלים SE שימושיים בהערכה של מנגנונים ושינויים החיסונית בהלם hemorrhagic, הם אינם ישימים לבדיקת סוכני המוסטטי ולא לחקות את התרחיש הקליני של דימום בעקבות טראומה. במובן זה, ביקשנו לפתח מודל של דימום בלתי מבוקר שיאפשר לנו לבדוק שינויים המוסטטיים וסוכני פרו-קרישה במודל מורין. הכבד הוא אופציה אטרקטיבית עבור דימום בלתי נשלט בחלקו בגלל אספקת הדם הכבד לכבד והוא אחד האיברים intrabdominal נפוץ הנפוץ ביותר הן טראומה בוטה וחודרת. לאור הרלוונטיות הקלינית הגבוהה, נעשה שימוש בכבד כמודל של דימום בלתי מבוקר, הנפוץ ביותר במודלים של חולדות וחזירים, אך לאחרונה גם בפרימטים. 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 13 , 14
מודלים עכברוש וחזירי של דימום כבד בלתי מבוקרת, בעוד ערך להסתכל על שיטות החייאה ניטור ההמודינמיקה, הם פחות יתרון מאשר מודל Murine מסיבות שונות כגון עלות, מספר בעלי חיים מנוצל, וחשוב יחסית חסרים קווי מהונדס זמין לניתוח של איתותים תאיים ומולקולריים ספציפיים. המודל הנוכחי Murine מניות הדמיון חשוב מודלים קיימים של דימום כבד כולל סטנדרטי כבד laceration, כימות דם לכמת, ניטור hemodynamic, ואת היכולת לבצע ניתוח הישרדות. מודלים קיימים רבים משלבים רק חלק מהיבטים אלה בעוד המודל שלנו פותח כדי למדוד רבים של varia physiologicBles בו זמנית ובעכברים מרובים. כמו כן, פיתוח של מודל Murine פותח את הדלת לחקירות מעבר החייאה לתוך מנגנוני פתופיזיולוגיה יותר בדימום בלתי מבוקרת עם פוטנציאל של עלות, יעיל תפוקה גבוהה מודל באמצעות טכניקות מולקולריות מתקדמות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
עכברים שוכנו בהתאם לאוניברסיטת פיטסבורג (פיטסבורג, פנסילבניה, ארה"ב) ומכונים לאומיים לבריאות (NIH, Bethesda, MD, USA) בקווים מנחים לטיפול בבעלי חיים בתנאים ללא פתוגן ללא תשלום עם מחזורי 12 שעות כהה ובהירים וגישה חופשית ל הזנה רגילה ומים. כל הניסויים בבעלי חיים אושרו ונערכו בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי ועדת המחקר והטיפול בבעלי חיים באוניברסיטת פיטסבורג.
1. שדה כירורגי ואת הגדרת מכשיר
- לעקר את כל כלי ניתוח, תפר, גזה, applicators קצה כותנה, צינורות, ומחברים צינורות לפני ההליך.
- לעקר כלי ניתוח, תפר, גזה, ו כותנה קצה applicators ב החיטוי. מעקרים צינורות וצינורות מחברים עם תחמוצת אתילן.
- שדה כירורגי
- הפעל את מחזור מים במחזור חימום להגדיר 37 מעלות צלזיוס. מקום כירורגיהפנקס כחול כסוף על גבי זה ולאחר מכן וילון סטרילי על גבי כרית כרית כירורגית.
- פתח את כל המכשירים מעוקרים על העטיפה סטרילית. השתמש כפפות סטריליות כדי למנוע שבירת סטריליות במהלך שלב זה.
- ממלאים קערה נירוסטה עם אתנול 70% ולהניח בצד. זה ישמש לניקוי מכשירים בין בעלי חיים.
- הפעל את מעכב microbead ולאפשר לחום עד 150 מעלות צלזיוס. זה ישמש גם כדי לנקות מכשירים בין בעלי חיים. אם ביצוע ניתוח על יותר מ 5 עכברים, הקפד לשנות מכשירים סט סטרילי חדש.
- הגדרת מתמר
- חבר מתמר סטרילי, PE-50 צינורות, שתי מחטים 23G, ו זכר זכר luer, ו שסתום תלת כיווני. 6
- כייל ואפס את המתמר לפי הוראות היצרן.
2. נוגד הכבד נוהל כירורגי
- הרדמה השראה ומיצוב
- להזריק pentobarbital נתרן intraperitoneally במינון של 70 מ"ג / ק"ג. הרדמה צריכה להיכנס לתוקף בין 5-10 דקות; להעריך את עומק ההרדמה עם קמצוץ הבוהן. אם העכבר יש תגובה על קמצוץ הבוהן, זמן נוסף או הרדמה נדרשת. אם יש צורך בהרדמה נוספת במהלך ההליך, סודיום pentobarbital נתרן. אין לתת תוספי בכמויות גדולות יותר מ 0.05 מ"ל כדי למנוע מנת יתר.
- לאחר העכבר הוא לגמרי תחת הרדמה, מיקום השכיבה העכבר על לוח כירורגי. לאבטח את כל ארבעת הגפיים של העכבר על הלוח עם קלטת.
- לגלח את הבטן ואת מפרקים דו צדדיים עם סכין גילוח.
- משרים גזה סטרילית עם betadine ולהחיל על הבטן במפשעה דו צדדית לניתוח. עבור ניסויים הישרדות, הכנה את הבטן והמפשעים עם betadine ואחריו אתנול עבור סך של שלושה מחזורי הכנה.
- הכנס בדיקה טמפרטורה רקטלית לפקח על טמפרטורת הליבה לאורך כל התהליך. שמור את cטמפרטורת עפרות בין 35-37 ° C.
- עבור קטטר ורידי הגדרת: מילוי צינורות PE-10, מחט 30 G, ו שסתום תלת כיווני עם פתרון רינגר של הנקה משקית IV.
- עבור קטטר עורקי הגדרת: מילוי צינורות PE-10 ו 30G מחט עם מלוחים heparinized (דילול 1:10 של 1000 הפרין U). Heparin- מלוחים נדרש כדי למנוע קרישה.
- מניחים את העכבר תחת מיקרוסקופ לנתח.
- בצע חתך אורך 4-5 מ"מ מעל שריר המפשעה באמצעות מספריים איריס כירורגית. באמצעות מלקחיים דומון לתפוס את רקמת השומן מחובר השריר אדוקטור ולמשוך רוחבית לחשיפה נקייה של צרור הירך. אין לנתח דרך רקמת השומן כמו זה יוביל נזק וסקולרי.
- בזהירות לנתח את העצב הרחק עורק וריד עם מלקחיים דומון. יש משטח שומן צמוד העצב. תפוס את זה עם אחד דומון forcepד למשוך בצדדי; זה מושך את העצב הרחק עורק יצירת מטוס לנתיחה. עם אחרים דומון forcep בוטה לנתח את רקמת החיבור בין העצב לבין העורק.
- לא לתפוס את העצב במהלך חלק זה של דיסקציה.
- לולאה שלושה 6-0 תפרים משי סביב העורק והוריד הפרוקסימלי כדי femoris profunda להמריא.
- מקום תפר 1 הפרוקסימלי ביותר ולהשאיר חופשיים.
- מקום תפר 2 ביותר distally ולקשור מיד.
- מקום תפר 3 בין תפר 1 ו 2 ולהשאיר רופף.
- הפוך arteriotomy על פני הגחון של כלי השיט. שימוש במספריים כלי הדם מומלץ לעשות את arteriotomy כדי למנוע transection של כלי השיט.
- הכנס את צנתר משולשת לתוך העורק. מיד לקשור תפר 1 ו -2 כדי לאבטח את הקטטר במקום.
- חבר את הקטטר משולשת אל המתמר ולאסוף נתונים לחץ דם בסיסית.
- חזור על שלבים 2.2.4 - 2.2.6 על המפשעה ההפוכה. קנוט את הווריד הירך באופן דומה לעורק. ביצוע venotomy על פני הגחון של כלי ואחריו הכנסת catheter. קטטר זה יכול להיות מנוצל עבור נוזל או סמים הממשל.
- שקול מראש צינור המכיל 0.5 מ"ל של PBS, שלושה משולשים הקליטה, ואחד שוקל סירה לכל עכבר.
- הפוך חתך הגחון laparotomy קו האמצע מתחיל ב xiphoid תהליך הארכת caudally כדי לאפשר חשיפה של הכבד לחלוטין.
- הכנס משולש קליטה אחד בבטן כנגד דופן הבטן הימנית. חזור על הצד השמאלי.
- ודא משולש הקליטה הוא הרחק מהכבד, כדי למנוע אפקט האריזה האריזה לאחר הכבד הוא lacerated.
- בזהירות לתפוס את האונה השמאלית האמצעית של הכבד ו lacerate 75% של האונה עם מספריים איריס כירורגית. מניחים את הלסתD בתוך צינור המכיל PBS.
- סגור את דופן הבטן עם סיכות באמצעות המוליך מצרך. לתפוס את העור והשריר יחד ולירות את מצרך. לעשות את זה מהר ככל האפשר לאחר laceration הכבד, כדי למנוע אובדן דם מחוץ הבטן. בניסויי הישרדות, הבטן סגורה בשתי שכבות. תפר absorbable לרוץ על השריר ואחריו שכבת ריצה של תפר שאינו absorbable לעור מספק סגירה נאותה.
- עבור עכברים כי הם timePoints הישרדות יותר מ -30 דקות את צנתרים הירך יש להסיר, עורק ווריד קשור עם תפר 3 משלב 2.2.6. מפשעים דו-צדדיים סגורים בשתי שכבות כמתואר בשלב הקודם.
- לאחר זמן מסוים של עניין עבור דימום (30 דקות עד 72 שעות), להסיר את מצרך. הסר את משולשי הקליטה והכניסו מראש שקילה לשקול סירות. השתמש משולשים קליטה נוספת כדי לספוג את כל הדם לא נספג.
- השאירו עכברים שיש להקריב ב 30 דקות על הלוח כירורגית תחת ניטור מתמיד תחת הרדמה מלאה עד מועד ההקרבה. עכברים מורדמים עם שילוב של לנקב לב ומנת יתר של isoflurane בשאיפה.
- עכברים מקום כי הם זמן הישרדות זמן בכלוב התאוששות על גבי משטח חימום מים במחזור. כל הזמן לפקח על העכברים במהלך ההתאוששות ולא לעזוב ללא השגחה עד שהם להחזיר את ההכרה כדי לשמור על שכיבה השכיבה. החזירו את העכבר לכלוב כלוב עם עכברים אחרים רק פעם אחת יש התאושש מהרדמה.
- ניהול שלאחר ניתוח ניתוחי עם 0.1 מ"ג / ק"ג buprenex באמצעות הזרקה תת עורית פעם להתעורר מן הרדמה כל 12 שעות לאחר זמן ההקרבה.
- אפשר עכברים גישה חופשית למזון ומים לאחר שהם חזרו שלהםכלובים רגילים שלאחר הניתוח.
- בזמן ההקרבה לעכברים הישרדות, הרדמה מושגת עם isoflurane בשאיפה. לאחר הדם תחת הרדמה נאסף באמצעות לנקב לב לב ימין, אובדן דם נרשם כמתואר לעיל ולבסוף המתת חסד הוא מבוטח עם מנת יתר של isoflurane.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
מודל laceration הכבד גורם לאיבוד דם לשחזור ועקבית בעכברים. איור 1 א מדגים את המשקל העקב של הכבד lacerated כי ניתן להשיג עם סטיית תקן של 0.02 גרם בלבד. עקביות זו במשקל הכבד lacerated מאפשר את היכולת לשכפל את המודל בין עכברים ב שונים ניסיוני הגדרת קופצים כגון פרוטוקולים resuscitative שונים. כמו כן, המשקל לשחזור של הכבד lacerated, עם שגיאת תקן של 0.01 גרם מספק מודל סטנדרטי יותר עבור דימום בלתי מבוקרת כי הוא לעתים קרובות קשה להשיג במודלים של בעלי חיים.
אימות של ההשפעות המדממות של פרוטוקולי טיפול שונים במודל מתבטאים בתרשים 1B . עכברים טופלו מראש בהפרין (66 יחידות, כאיזון חיובי לאיבוד דם), או לחומצה הטרנסקסמית (אנטי-פיברינוליטית) (TXA)שליטה שלילית), ו nanoparticle Pro- מאומתת הוכיחו בעבר נבדק מבחני דימום מוריד זנב וריד. 15 תוצאות אלו מדגימות את היכולת של מודל זה לשמש כדי להעריך את ההשפעות המוסטטיות או נוגדות הקרישה בהגדרת הדימום.
דימום בלתי מבוקר מלווה לעיתים קרובות בהפרעות המודינמיות שחשובות לניטור. בתרשים 2 לחץ הדם הממוצע של העורקים (MAP) של עכברים בודדים בעקבות הלסת הכבד ממחיש כי ירידה תלולה ו לשחזור במפה לאחר ביצוע הלצרות וכתוצאה מכך מצב ההלם hemorrhagic. זה חשוב שכן הוא מאפשר את ההשפעות ההמודינמיות של אמצעים החייאה שונים או interventional ומאפשר תובנה חשובה הפיזיולוגיה סביב תנאים ניסיוניים שונים. אמנם יש השפעות hemodynamic משמעותי בעקבות laceration הכבד מצאנו t כובע המודל ניתן להשתמש כדי להעריך את ההשפעות הישרדות כמו המודל הוערך ל 72 שעות עם הישרדות של 56% בשלב זה זמן ( איור 3 ).
איור 1: אימות איבוד כבד. ( א ) משקולות נציג של הכבד transected. משקל הכבד הממוצע היה 0.26 גרם עם סטיית תקן של 0.02 גרם ו טעות תקן של הממוצע של 0.01 גרם. תוצאות אלה מדגימות את העקביות שניתן לקבל עם הערכה חזותית של 75% שלנו laceration. ( B ) איבוד דם בגראם לאחר טיפול מקדם עם הפרין, חומצה tranexamic, ו ננופרטיקל מורשת בעבר אבדן דם ממוצע היה 1.6, 0.60, ו 0.65 גרם בהתאמה. תוצאות אלו מאמתות את התועלת של מודל זה כדי לבדוק את ההשפעות המוסטטיות או נוגדות הקרישה של התרופה.
Gether.within-page = "1"> 
איור 2: ממוצע לחץ דם עורקי לאחר כריתת הכבד. Tracings גרפיים של עכברים בודדים מתכוון עקבות דם עורקיים מעל 20 דקות אשר עברו גם פעולת דמה או laceration הכבד. את laceration הכבד הוא ואחריו ירידה אופיינית ירידה תלולה של לחץ הדם העורקי הממוצע (MAP) של העכברים כי נעדר עכברים המופעלים דמה.
איור 3: קפלן מאייר עקומת הישרדות בעקבות הכבד Laceration. ההישרדות של 72 שעות בעכברים שעברו את קריעת הכבד ללא כל טיפול נמצאה 56%.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
מודל lureration הכבד Murine המתואר כאן מספק מודל אמין, עקבית של דימום בלתי מבוקרת. מודל זה הוא פשוט לביצוע אבל יש צעדים חשובים הדורשים שיקול דעת קפדני. החלק הכי מאתגר מבחינה טכנית של המודל הוא cannulation של כלי הירך עבור ניטור המודינמי ו נוזל / סמים הממשל. יש להקפיד במהלך דיסקציה של העצב ואת arteriotomy / venotomy. חשוב לא לגעת בעצב במהלך דיסקציה של כלי כדי למנוע נזק עצבי וכתוצאה מכך שיתוק אפשרי, במיוחד עבור מודלים הישרדות. Arteriotomy ו venotomy דורשים טיפול עדין של כלי השיט. אנו מציעים להשתמש במספריים כלי הדם כדי למנוע transection של כלי השיט.
בעוד laceration הכבד פחות מאתגר מבחינה טכנית חשוב להיות עקבי בחלק של המודל כדי להבטיח לשחזור דימום לשחזורהעכבר. המודל שלנו פותח מתוך כוונה של בדיקת סוכני המוסטומטי בחייאה ולפיכך שיקול מיקום חשוב כולל הבטחת המשולשים הקליטה ממוקמים הרחק מהאתר, כדי למנוע אפקט או אפקט המוסטטי מכני. הימנע מניפולציה מיותרת של איברים אחרים ואונות אחרות של הכבד כדי למנוע פגיעה מכוונת או דימום במהלך חלק זה של הניתוח. הבטן צריכה להיות סגורה במהירות לאחר laceration כדי למנוע אובדן דם מחוץ הבטן.
את העכברים יש לעקוב מקרוב לאורך כל התהליך אבל הכי חשוב אחרי הלצרות מתבצעת בהתחשב שינויים המודינמיים משמעותיים שהם חווים כפי שהראינו באיור 2 . הניסיון שלנו עם שינויים אלה hemodynamic משמעותיים היא כי העכבר לא סביר לשרוד אם המפה שלהם טיפות מתחת 10mmHg במשך 30 שניות ואנחנו ממליצים להקריב את העכבר שבו זה occUrs. אם נוזל או תרופה היא להיבדק על ההשפעות ההמוסטטיות שלה אנו ממליצים מינהל זמן קצר לאחר laceration, כמו עכברים נוטים לקריש את האזור lacerated במהירות. שימוש בניהול הכאב הוא חיוני אם מעוניינים לבצע יותר זמן תצפית נקודות מאשר המתואר כאן. כמו כן, הגפיים האחוריות יש לעקוב אחר סימנים של איסכמיה בעקבות קשירת כלי עצם הירך. בשל הניסיון הרב עם הליכים כירורגיים אלה, שכיחות סיבוך זה במעבדה שלנו הוא פחות מ 1% מכלל בעלי החיים נבדק. 4 , 6
מודל זה כולל מספר מגבלות חשובות, כולל היבט של דימום בלתי מבוקר. בעוד אנו רואים דימום עקבי בעכברים במונחים של איבוד דם כמה עכברים מגיבים אחרת ימותו במהירות בעקבות הלצרות. מגבלה נוספת במודל היא בגודל של laceration הכבד. בעוד הנתונים שלנו מדגים erro תקן צרR במשקל של הכבד resected, כאשר מבוצעת על ידי אנשים שונים את האפשרות של השתנות גדולה יותר של גודל כריתה ולכן דימום בהחלט קיים. בנוסף, עקומת הלמידה עבור דיסקציה כלי הדם cannulation יכול להיות מאתגר מבחינה טכנית, ואנו מעריכים עקומת למידה של 50 בעלי חיים מניסיוננו, עם עקומת למידה משוער של 10 עכברים לשחזור של laceration הכבד כמתואר. מניסיוננו הישרדות של 56% ב 72 שעות ניתן לצפות. כאשר מבצעים את המודל של ניתוח הישרדות קרוב תשומת לב ההתאוששות מן הרדמה וניהול הכאב הנכון הם קריטיים. במודל הנוכחי שלנו, לא ביצענו שום נוזל משלים או החייאה תרופה לעכברים מעבר למה שהם מקבלים לפני laceration הכבד. חשוב לציין כי יש לעקוב אחר בעלי חיים מקרוב אחר סימני מצוקה בחלק הישרדותי של המודל וטיפול הולם בכאב. Pentobarbital הוא anesthe שלנוטיק הבחירה של נקודות הזמן היינו מעוניינים אבל אפשרויות אחרות של הרדמה אפשריים ועלול להשפיע על התוצאות. בקרת כאב חשוב לפקח כך העכברים מסוגלים לאכול ולשתות באופן חופשי, אשר אם לא נשלט יכול להוביל השתנות מחוץ לדימום וטיפול של עניין. מודל זה גם משאיל את עצמו להיות משולב עם מודלים אחרים כגון פגיעה רקמות רכות, pseudofracture, או מודל polytrauma. כמו כן, מודל זה יכול בקלות להיות מותאם כדי ללמוד את ההשפעות של סוכני המוסטטי מקומי לעומת הווריד. שינויים חלופיים מרובים של מודל זה הם אפשריים אבל להישאר נבדק. למרות שבעלי חיים במודל זה הותאמו לגיל ולמשקל, יתכן כי בעלי חיים בעלי משקולות שונות יכולים להיות מנוצלים וגודל הכריכה בכבד נבחר על בסיס משקל. תוצאות דומות ניתן לצפות מ laceration splenic עבור חוקרים אשר לא מומלץ לפגוע בכבד תלוי בנקודת הקצה של האינטרסים. דומה uncontrolמודלים דימום הוביל נעשה שימוש בבעלי חיים אחרים 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 מתן שינויים חלופיים פוטנציאליים למודל הנוכחי. לבסוף, ניתן להגדיל את גודל הלסת כדי למקסם את איבוד הדם, אולם מצאנו כי זה מגדיל במידה ניכרת את התמותה, וכי נזק לורידים בכבד עם מודלים מורחבים יש רמה גבוהה יותר של השתנות.
הכבד נעשה שימוש במודלים בלתי מבוקרים קודמים; עם זאת, רוב הדגמים הללו בוצעו במודל חולדה. ההתפתחות שלנו של מודל בלם כבד בלתי מבוקרת בעכברים מאפשרת לחוקרים לנצל את עושרם של גזעים מהונדסים גנטית. יתרונות נוספים של מודלים Murine כוללים את היכולת לבצע בדיקות תפוקה גבוהה, עלות יעילות, וקלות הטיפול.המודל שלנו מאפשר ניטור hemodynamic, כימות של אובדן דם, והערכת תמותה אשר מחקרים קודמים לעתים קרובות רק לכלול אחד ההיבטים האלה של הערכה. אנו מסוגלים לבצע את המודל הזה על עכברים מרובים בו זמנית ומאפשר לא רק תפוקה גבוהה, אלא השתנות השתנות במודל.
לסיכום, אנו מציגים כאן מודל לשחזור של דימום לא מבוקר ניצול חתך כבד רגיל במודל Murine. המודל שלנו הוא אידיאלי להערכת סמים המוסטטיים חדשים בהגדרת דימום או טראומה והוא יכול להיות מנוצל בהערכה לטווח קצר של אובדן דם או בוצע כדי להעריך את ההשפעות הישרדות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
למחברים אין אינטרסים פיננסיים מתחרים להצהיר.
Acknowledgments
עבודתו של כתב היד הזה נתמכה על ידי מימון ד"ר ניל על ידי המכון לרפואה כלי דם תוכנית פיילוט בהמוסטאזיס וביולוגיה של כלי הדם (P3HVB) ואת מלגת מחקר AAST. עבודה זו נתמכת על ידי מכוני הבריאות הלאומיים של ארה"ב 1 R35 GM119526-01 ו- UM1HL120877-01.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 | |
| surgical scissors | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 | |
| microscissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| 0.8 mm curved forceps | Fine Science Tools | 11009-13 | |
| suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 | |
| suture 4-0 silk w/ needle | Owens Minor | K188H | |
| gauze 4 x 4 | can be purchased through any global vendor | ||
| cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | ||
| 30 G needle | can be purchased through any global vendor | ||
| 23 G needle | can be purchased through any global vendor | ||
| 10 cc syringe | can be purchased through any global vendor | ||
| 50 cc conical tube | can be purchased through any global vendor | ||
| 1 cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Polyethylene 10 tubing 100`(PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P | |
| Polyethylene 50 tubing 100`(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | |
| 3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 | |
| surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 | |
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 | |
| tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 | |
| straight side wide mouth jars | VWR | 159000-058 | |
| stainless steel tray 8" x 11" | VWR | 62687-049 | |
| male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 | |
| sterilization pouch 3" x 8" | VWR | 24008 | |
| sterilization pouch 5" x 10" | VWR | 24010 | |
| absorption triangles | Fine Science Tools | 18105-03 | |
| 7 mm wound clip applier | Fisher Scientific | E0522687 | |
| 1,000 7 mm wound clips | Fisher Scientific | E0522687 | |
| betadine (4 oz) | can be purchased through any global vendor | ||
| sterile gloves | can be purchased through any global vendor | ||
| eppendorfs | can be purchased through any global vendor | ||
| 1/2 cc Lo-Dose insulin syringe | Fisher Scientific | 12-826-79 | |
| small weigh boat | can be purchased through any global vendor | ||
| lactated ringers | can be purchased through any global vendor | ||
| hepranized saline solution (.1 µL; hep + 9.9 µL; NaCl) | can be purchased through any global vendor | ||
| phosphate buffered saline | can be purchased through any global vendor | ||
| pentobarbital | can be purchased through any global vendor | ||
| Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | ||
| Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 | |
| TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 | |
| Computer | Dell | ||
| microbead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 | |
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 | |
| circulating heating pad 18 x 26 | Harvard | py872-5272 | |
| rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |
References
- Chang, R., Cardenas, J. C., Wade, C. E., Holcomb, J. B. Advances in the understanding of trauma-induced coagulopathy. Blood. 128 (8), 1043-1049 (2016).
- Kutcher, M. E., et al. A paradigm shift in trauma resuscitation: evaluation of evolving massive transfusion practices. JAMA surgery. 148 (9), 834-840 (2013).
- Tsukamoto, T., Pape, H. C. Animal Models for Trauma Research. Shock. 31 (1), 3-10 (2009).
- Darwiche, S. S., et al. Pseudofracture: an acute peripheral tissue trauma model. J Vis Exp. (50), (2011).
- Lomas-Niera, J. L., Perl, M., Chung, C. -S., Ayala, A. Shock and Hemorrhage: an Overview of Animal Models. Shock. 24, Suppl 1. 33-39 (2005).
- Kohut, L. K., Darwiche, S. S., Brumfield, J. M., Frank, A. M., Billiar, T. R. Fixed volume or fixed pressure: a murine model of hemorrhagic shock. J Vis Exp. (52), (2011).
- Matsuoka, T., Hildreth, J., Wisner, D. H. Liver injury as a model of uncontrolled hemorrhagic shock: resuscitation with different hypertonic regimens. J Trauma. 39 (4), 674-680 (1995).
- Komachi, T., et al. Adhesive and Robust Multilayered Poly(lactic acid) Nanosheets for Hemostatic Dressing in Liver Injury Model. J. Biomed. Mater. Res. Part B Appl. Biomater. , (2016).
- Orfanos, N. F., et al. The effects of antioxidants on a porcine model of liver hemorrhage. J Trauma Acute Care Surg. 80 (6), 964-971 (2016).
- Morgan, C. E., Prakash, V. S., Vercammen, J. M., Pritts, T., Kibbe, M. R. Development and validation of 4 different rat models of uncontrolled hemorrhage. JAMA Surgery. 150 (4), 316-324 (2015).
- Rosselli, D. D., Brainard, B. M., Schmiedt, C. W. Efficacy of a topical bovine-derived thrombin solution as a hemostatic agent in a rodent model of hepatic injury. Can J Vet Res. 14 (14), 303-308 (2015).
- Sheppard, F. R., et al. Development of a Nonhuman Primate (Rhesus Macaque) Model of Uncontrolled Traumatic Liver Hemorrhage. Shock. 44, 114-122 (2015).
- Nemzek-Hamlin, J. A., Hwang, H., Hampel, J. A., Yu, B., Raghavendran, K. Development of a murine model of blunt hepatic trauma. Comp Med. 63 (5), 398-408 (2013).
- Vogel, S., et al. Platelet-derived HMGB1 is a critical mediator of thrombosis. J Clin Invest. 125 (12), (2015).
- Modery-Pawlowski, C. L., Tian, L. L., Ravikumar, M., Wong, T. L., Sen Gupta, A. In vitro and in vivo hemostatic capabilities of a functionally integrated platelet-mimetic liposomal nanoconstruct. Biomaterials. 34 (12), 3031-3041 (2013).
