Summary
अनियंत्रित रक्तस्राव, आघात के मरीजों के बीच मृत्यु का एक महत्वपूर्ण कारण, एक मूरीन मॉडल में एक मानक यकृत मुंह का उपयोग करके मॉडल किया जा सकता है। यह मॉडल परिणामस्वरूप रक्त की हानि, अस्तित्व में है, और हेमोस्टैटिक एजेंटों का परीक्षण करने की अनुमति देता है। यह लेख इस मूल्यवान मॉडल को करने के लिए चरण-दर-चरण प्रक्रिया प्रदान करता है।
Abstract
अनियंत्रित रक्तस्राव ट्रोमा मरीजों के बीच रोके जाने वाली मौतों का एक महत्वपूर्ण कारण है। हमने लीवर लीकेशन के जरिए अनियंत्रित रक्तस्राव के एक मूरीन मॉडल का विकास किया है जिसके परिणामस्वरूप लगातार रक्त हानि, हेमोडायनामिक परिवर्तन और अस्तित्व में परिणाम होता है।
चूहे जिगर के बाएं-मध्य लोब के एक मानकीकृत ढीले से गुज़रते हैं। उन्हें यांत्रिक हस्तक्षेप के बिना खून बहने की अनुमति है। हेमोस्टेटिक एजेंटों को पूर्व उपचार या बचाव चिकित्सा के रूप में प्रशासित किया जा सकता है, जो जांचकर्ता के हित के आधार पर होता है रक्तस्रावी के समय के दौरान, बायीं ओरियल धमनी रेखा के माध्यम से वास्तविक समय में हेमोडायनायमिक निगरानी की जाती है। चूहे को बलिदान किया जाता है, रक्त की मात्रा मात्रा होती है, आगे के विश्लेषण के लिए रक्त एकत्र किया जाता है, और चोटों के विश्लेषण के लिए अंगों का काटा जाता है। प्रायोगिक डिजाइन को कई जानवरों के साथ-साथ परीक्षण के लिए अनुमति देने के लिए वर्णित किया गया है।
अनियंत्रित रक्तस्राव के एक मॉडल के रूप में यकृत रक्तस्राव मौजूद है IN साहित्य, मुख्यतः चूहे और पोर्क मॉडल में। इनमें से कुछ मॉडल हेमोडायनामिक मॉनिटरिंग का इस्तेमाल करते हैं या रक्त के नुकसान का अनुमान करते हैं, लेकिन स्थिरता की कमी है। वर्तमान मॉडल में रक्त के नुकसान की मात्रा का ठहराव शामिल है, एक म्यूरीन मॉडल में रीयल-टाइम हेमोडायनामिक मॉनिटरिंग जो कि अनियंत्रित रक्तस्राव में पैथोफिज़ियोलोगिक तंत्र की आगे जांच करने के लिए ट्रांसजेनिक लाइनों और एक उच्च-थ्रिप्ट यंत्र का उपयोग करने का लाभ प्रदान करता है।
Introduction
विश्व भर में युवा लोगों के बीच ट्रामा मौत और विकलांगता का प्रमुख कारण है 1 अनियंत्रित रक्तस्राव गंभीर रूप से घायल तमाम रोगियों के बीच मृत्यु का एक प्रमुख कारण बनी हुई है। 2 हेमरार्जिंग ट्रॉमा रोगी का प्रबंधन दो गुना है: शल्यचिकित्सा के रक्तस्राव का नियंत्रण, और पुनर्जीवन और खोया रक्त के प्रतिस्थापन।
रक्तस्रावी शॉक के पशु मॉडल आघात अनुसंधान में आधारशिला रहे हैं और पैथोफिसियोलॉजी और दर्दनाक / रक्तस्रावी शॉक के उपचार के मूल्यांकन में उपयोग किया जा सकता है। 3 , 4 पशु मॉडल में सदमे दो तरीकों से मोटे तौर पर प्राप्त किया जा सकता है: नियंत्रण-रक्तस्राव और अनियंत्रित-रक्तस्राव। 5 , 6 नियंत्रित-रक्तस्राव रक्त के एक निश्चित मात्रा को हटाने या एक निश्चित रक्तचाप (निश्चित दबाव) को प्राप्त करने के लिए रक्त निकालने द्वारा किया जाता है। जबकिसे मॉडल तंत्र में मूल्यांकन के लिए उपयोगी हैं और रक्तस्रावी आवेश में प्रतिरक्षा परिवर्तन, वे हेमोस्टैटिक एजेंटों के परीक्षण पर लागू नहीं होते हैं और इस तरह के आघात के बाद रक्तस्राव के नैदानिक परिदृश्य की नकल नहीं करते हैं। इस डिग्री के लिए, हमने अनियंत्रित रक्तस्राव के एक मॉडल को विकसित करने की मांग की जो हमें मुर्इन मॉडल में हेमोस्टैटिक परिवर्तन और प्रो-कौयुलंट एजेंटों का परीक्षण करने की इजाजत दे। जिगर यकृत में दोहरी रक्त की आपूर्ति के कारण भाग में अनियंत्रित रक्तस्राव के लिए एक आकर्षक विकल्प है और यह दोनों कुंद और मर्मज्ञ आघात दोनों में सबसे अधिक घायल पेटी अंगों में से एक है। उच्च नैदानिक प्रासंगिकता को देखते हुए, यकृत का उपयोग अनियंत्रित रक्तस्रावी के एक मॉडल के रूप में किया जाता है, जो आमतौर पर चूहे और पोर्किड मॉडल में होता है लेकिन हाल ही में प्राइमेट में भी। 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 13 , 14
अनियंत्रित यकृत रक्तस्राव के चूहे और सुअर मॉडल, जबकि रिसासटेशन प्रैक्टिस और हेमोडायनामिक मॉनिटरिंग की तलाश में मूल्यवान हैं, लागत के रूप में विभिन्न कारणों के लिए मुरीइन मॉडल की तुलना में कम लाभप्रद हैं, जिनका उपयोग जानवरों की संख्या, और महत्वपूर्ण रूप से रिचार्ज विश्लेषण के लिए उपलब्ध ट्रांसजेनिक लाइनों की कमी है विशिष्ट सेलुलर और आणविक संकेत का वर्तमान म्यूरीन मॉडल में मौजूदा लिवर रक्तस्रावी मॉडल के लिए महत्वपूर्ण समानताएं शामिल हैं जिनमें मानकीकृत जिगर स्राव, रक्त की मात्रा में कमी, हेमोडायनामिक निगरानी, और अस्तित्व विश्लेषण करने की क्षमता शामिल है। कई मौजूदा मॉडल केवल इन पहलुओं में से कुछ को शामिल करते हैं जबकि हमारे मॉडल को कई शारीरिक विकृतियों को मापने के लिए विकसित किया गया थाएक साथ और कई चूहों में bles। साथ ही, एक मूरीन मॉडल का विकास अन्तर्ग्रथित रक्तस्राव में पुनर्जीवन से परे और जांच के द्वार को अनियंत्रित रक्तस्राव में अधिक मात्रा में, उन्नत आणविक तकनीकों का उपयोग करके एक लागत कुशल, उच्च-थ्रुपुट मॉडल की क्षमता के साथ खोल देता है।
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Protocol
चूहों को पिट्सबर्ग विश्वविद्यालय (पिट्सबर्ग, पीए, यूएसए) और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ (एनआईएच, बेथेस्डा, एमडी, यूएसए) के अनुसार जानवरों की देखभाल संबंधी दिशानिर्देशों के अनुसार विशिष्ट रोगजन-मुक्त परिस्थितियों में 12 घंटे प्रकाश-अंधेरे चक्र और मुफ्त पहुंच के अनुसार रखे गए थे मानक फीड और पानी पिट्सबर्ग विश्वविद्यालय में पशु अनुसंधान और देखभाल समिति द्वारा निर्धारित दिशानिर्देशों के अनुसार सभी पशु प्रयोगों को मंजूरी दी गई और आयोजित किया गया।
1. सर्जिकल फ़ील्ड और उपकरण सेटअप
- प्रक्रिया से पहले सभी सर्जिकल उपकरणों, सीवन, धुंध, कपास की टिप applicators, टयूबिंग, और टयूबिंग कनेक्टर्स जीवाणुरहित करें।
- एक आटोक्लेव में सर्जिकल उपकरणों, सीवन, धुंध, और कपास की टिप applicators जीवाणुरहित। एथिलीन ऑक्साइड युक्त टयूबिंग और टयूबिंग कनेक्टर को निर्वहन करना।
- सर्जिकल फ़ील्ड
- जल संचलन हीटिंग पैड चालू करें और 37 डिग्री सेल्सियस पर सेट करें एक सर्जरी रखेंइसके शीर्ष पर कैल नीला पैड और फिर सर्जिकल ब्लू पैड के शीर्ष पर एक बाँझ ड्रैप।
- सभी निष्फल यंत्रों को बाँझ रेस्त्राँ पर खोलें। इस चरण के दौरान बांझपन को तोड़ने से बचने के लिए बाँझ दस्ताने का प्रयोग करें।
- 70% इथेनॉल के साथ एक स्टेनलेस स्टील का कटोरा भरें और एक तरफ सेट करें। यह जानवरों के बीच के उपकरणों को साफ करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा।
- माइक्रोबिड स्टीरलाइज़र चालू करें और 150 डिग्री सेल्सियस तक गर्मी की अनुमति दें यह जानवरों के बीच के उपकरणों को साफ करने के लिए भी इस्तेमाल किया जाएगा। यदि 5 से अधिक चूहों पर सर्जरी कर रही है, तो सुनिश्चित करें कि उपकरणों को एक नए बाँझ सेट में बदल दें।
- ट्रांसड्यूसर सेट-अप
- एक बाँझ ट्रांसड्यूसर, पीई -50 टयूबिंग, दो 23 जी सुइयों और नर-पुरुष ल्यूयर, और तीन तरह से स्टॉपकॉक से कनेक्ट करें। 6
- निर्माता निर्देशों के अनुसार ट्रांसड्यूसर को कैलिब्रेट करें और शून्य करें।
2. जिगर मुक्ति सर्जिकल प्रक्रिया
- संज्ञाहरण प्रेरण और स्थिति निर्धारण
- 70 मिलीग्राम / किग्रा की खुराक पर सोडियम पैंटोबारबिटल इंट्राप्टरोनियल रूप से इंजेक्शन संज्ञाहरण को 5-10 मिनट के बीच प्रभावी होना चाहिए; एक पैर की अंगुली चुटकी के साथ संज्ञाहरण की गहराई का आकलन करें यदि माउस को पैर की चुटकी का जवाब होता है, तो अतिरिक्त समय या संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है। यदि प्रक्रिया के दौरान अतिरिक्त संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है, तो सोडियम पेंटोबारबिटल पूरक। ओवरडोज को रोकने के लिए 0.05 एमएल की तुलना में बड़ी मात्रा में खुराक न दें।
- चूंकि माउस पूरी तरह से संज्ञाहरण के तहत है, एक शल्य मंडल पर माउस लापरवाह स्थिति। टेप के साथ बोर्ड के सभी चार अंग माउस को सुरक्षित करें।
- उदर और द्विपक्षीय ग्रिंस को रेज़र से दाएं।
- बीटाडिन के साथ बाँझ धुंध लेना और सर्जरी के लिए पेट और द्विपक्षीय जीरो पर लागू होते हैं। जीवित रहने के प्रयोगों के लिए, पेटी और पेटी के साथ पेटी तैयार करें, जिसमें तीन प्रैक्ट चक्रों के लिए इथेनॉल के बाद रखा गया है।
- प्रक्रिया के दौरान कोर तापमान पर नजर रखने के लिए एक गुदा तापमान जांच डालें। सी रखेंअयस्क 35-37 डिग्री सेल्सियस के बीच तापमान
- शिरापरक कैथेटर सेट-अप के लिए: पीई -10 टयूबिंग, 30 जी सुई भरें, और एक चौथाई बैग से लैक्टेट किए गए घंटी के समाधान के साथ तीन तरह की स्टॉपकॉक।
- धमनी कैथेटर सेट-अप के लिए: पीई -10 टयूबिंग और 30 जी सुई को हेपरिनाइज्ड खारा (1000 यू हेपरिन के 1:10 कमजोर पड़ने) के साथ भरें। क्लॉटिंग को रोकने के लिए हेपरिन-खारा आवश्यक है।
- एक विदारक माइक्रोस्कोप के तहत माउस रखें।
- शल्य आइरिस कैंची का उपयोग करके कमर की मांसपेशियों पर 4-5 मिमी अनुदैर्ध्य चीरा बनाएं। ड्यूमॉन्ट संदंश का उपयोग एडिटर पेशी से जुड़ी वसा ऊतक को पकड़ लेता है और बाद में ऊरु बंडल के साफ प्रदर्शन के लिए खींचता है। वसा ऊतकों के माध्यम से टुकड़े टुकड़े करना न करें क्योंकि इससे संवहनी चोट लग जाती है।
- सावधानी से धमनियों से दूर तंत्रिका को दूर करना और ड्यूमॉन्ट संदंश के साथ शिरा काटना। तंत्रिका के आस-पास एक मोटी पैड है इसे एक ड्यूमॉन्ट सिक्रेट के साथ पकड़ोडी पुल laterally; यह तंत्रिका को विच्छेदन के लिए एक विमान बनाने वाली धमनी से दूर खींचती है अन्य ड्यूमॉन्ट सांसप के साथ स्पष्ट रूप से तंत्रिका और धमनी के बीच संयोजी ऊतक काटना।
- विच्छेदन के इस भाग के दौरान तंत्रिका को न पकड़ें।
- धमनियों के चारों ओर लूप 3-6-0 रेशम के सुपुर्द और प्राफंड मादक पदार्थों के समीप की नसों को दूर करना।
- सीवन 1 सबसे निकटता रखें और ढीले छोड़ दें।
- सिवनी 2 सबसे अधिक जगह और तुरंत टाई रखें
- सीवन 1 और 2 के बीच सीवन रखें और ढीली छोड़ दें।
- पोत के ऊतक सतह पर एक धमनीशोथ बनाएं। पोत के त्रिभुज से बचने के लिए धमनीविज्ञानी बनाने के लिए माइक्रोवेस्कुलुलर कैंची का उपयोग करने की सलाह दी जाती है।
- धमनी में तीन तरह से कैथेटर डालें जगह में कैथेटर सुरक्षित करने के लिए तुरंत सीवन 1 और 2 को टाई।
- ट्रांसड्यूसर के लिए तीन तरह से कैथेटर कनेक्ट करें और बेसलाइन रक्तचाप डेटा एकत्र करें।
- दोहराएं 2.2.4 - 2.2.6 विपरीत गले में। धमनी के समान रूप से ऊरु-नसों को व्यवस्थित करें। कैथेटर सम्मिलन के बाद पोत की ऊतक सतह पर एक विष-विच्छेदन करें। यह कैथेटर द्रव या नशीली दवाओं के प्रशासन के लिए उपयोग किया जा सकता है।
- पीबीएस में 0.5 एमएल, तीन अवशोषण त्रिभुज युक्त एक ट्यूब का तौलना, और एक माउस के प्रति नाव तौलना
- लिफ़ाइड प्रक्रिया से शुरू होने वाली एक उदर मिडलाइन लैपरोटॉमी चीरा करें और जिगर के पूर्ण रूप से एक्सपोजर की अनुमति देने के लिए कलाई में बढ़ोतरी करें।
- सही पेट की दीवार के खिलाफ पेट में एक अवशोषण त्रिकोण डालें बाईं तरफ दोहराएं।
- सुनिश्चित करें कि यकृत को लीक होने के बाद अवशोषण त्रिकोण यकृत से दूर होकर पैकिंग हेमोस्टैटिक प्रभाव से बचें।
- सावधानी से बाएं-मधुमक्खी यकृत के लोब को पकड़ो और सर्जिकल आईरिस कैंची के साथ लोब का 75% बढ़ाएं। चंचल रखेंडीबीएस पीबीएस वाले ट्यूब में
- स्टेपल एडाप्टर के माध्यम से स्टेपल के साथ पेट की दीवार को बंद करें त्वचा और मांसपेशियों को एक साथ पकड़ो और प्रधान को आग लगाओ। पेट के बाहर खून की कमी से बचने के लिए जिगर मुंह के बाद जितनी जल्दी हो सके इसे करें। जीवित रहने के प्रयोगों में, दो परतों में पेट बंद हो गया है त्वचा के लिए गैर-अवशोषित सिवनी की चलती परत के बाद मांसपेशियों के लिए एक चलने वाला अवशोषित सिवनी पर्याप्त रूप से बंद कर देता है।
- चूहों के लिए जो जीवित रहने के समय के लिए 30 मिनट से अधिक समय तक ऊपरी कैथेटर निकाले जाते हैं, धमनी और शिरा 3 से चरण 2.2.6 से सिवनी के साथ बांध दिया जाना चाहिए। द्विपक्षीय ग्रिन्स फिर दो चरणों में बंद कर दिए गए हैं जैसा कि पिछले चरण में वर्णित है।
- रक्तस्राव के लिए ब्याज का एक निर्दिष्ट समय (30 मिनट से 72 घंटे तक) के बाद, स्टेपल को हटा दें। अवशोषण त्रिभुज को निकालें और संबंधित पूर्व तराजू वाली नौकाओं में तब्दील करें। किसी भी अनबॉस्ड रक्त के लिए अतिरिक्त अवशोषण त्रिकोण का उपयोग करें।
- चूहों को छोड़ दें, जिन्हें सर्जिकल बोर्ड पर 30 मिनट और लगातार निगरानी के दौरान और बलिदान के समय तक पूरी संज्ञाहीनता के तहत बलिदान किया जाता है। चूहों को कार्डियक पंचर के संयोजन के साथ और साँस आइसोफ्लुरेन की एक अत्यधिक मात्रा के साथ euthanized हैं।
- प्लेस चूहों, जो पानी के घूमने वाले हीटिंग पैड के शीर्ष पर रिकवरी पिंजरे में जीवित रहने के समय के लिए मौजूद हैं। वसूली के दौरान लगातार चूहों की निगरानी करें और जब तक वे सचेतक पुनरावर्तन को बनाए रखने के लिए चेतना हासिल नहीं करते तब तक पहुंच से बाहर न जाएं। माउस को अन्य चूहों के साथ स्थान को पिंजरे पर लौटा दो, जब वह संज्ञाहरण से ठीक हो जाए।
- उत्परिवर्तक एनाल्जेसिया को 0.1 एमजी / किग्रा ब्यूपेनएक्स के साथ चमड़े के नीचे इंजेक्शन के माध्यम से व्यवस्थित करें, बेशक बेशक के समय तक हर 12 घंटे बाद एनेस्थेसिया से खुल जाता है।
- उनके पास लौट जाने के बाद चूहों को भोजन और पानी की मुफ़्त पहुंच की अनुमति देंसामान्य पिंजरों के बाद ऑपरेटिव।
- अस्तित्व चूहों के लिए बलिदान के समय, संज्ञाहरण साँस आइसोफ्लुरेन के साथ पूरा किया जाता है। एक बार अन्तःस्थत्व रक्त के तहत सही हृदय कार्डियाक पंचर के माध्यम से एकत्र किया जाता है, ऊपर वर्णित के रूप में रक्त की हानि दर्ज की जाती है और अंत में ईसुटेंनेस का आइसोफ्लुरेन की अधिक मात्रा के साथ बीमा होता है।
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Representative Results
लीवर लेंस मॉडल का परिणाम चूहे में प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और लगातार रक्त के नुकसान में होता है। चित्रा 1 ए लिक्टेड लीवर के लगातार वजन को दर्शाता है जो केवल 0.02 ग्राम के मानक विचलन से प्राप्त किया जा सकता है। लीवर वाले लीटर वज़न में यह स्थिरता चूहों और अलग-अलग प्रयोगात्मक सेट-अप जैसे विभिन्न रिज्यूसिटिव प्रोटोकॉल के बीच मॉडल को पुन: उत्पन्न करने की क्षमता देता है। साथ ही, लीटर लीवर की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य वजन, केवल 0.01 ग्राम की एक मानक त्रुटि के साथ अनियंत्रित रक्तस्राव के लिए एक और मानक मॉडल प्रदान करता है जो अक्सर पशु मॉडल में प्राप्त करना मुश्किल होता है।
मॉडल में विभिन्न उपचार प्रोटोकॉल के खून बह रहा प्रभाव की पुष्टि चित्रा 1 बी में प्रदर्शित की जाती है। चूहे के हेपरिन (66 इकाइयों, जो रक्त की हानि के लिए सकारात्मक नियंत्रण के रूप में), या एंटी-फाइब्रिनोलिटिक, ट्रेनेक्सैमिक एसिड (TXA) के साथ पूर्व-इलाज किया गया था (एकनकारात्मक नियंत्रण), और एक मान्य प्रो-हेमोस्टैटिक नैनोपेचरल जो पहले मूत्रान पूंछ नस में खून बह रहा था। 15 ये परिणाम रक्तस्राव की सेटिंग में हेमोस्टैटिक या एंटीकोअगुलंट प्रभाव का आकलन करने के लिए उपयोग किए जाने वाले इस मॉडल की क्षमता का प्रदर्शन करते हैं।
अनियंत्रित रक्तस्रावी को अक्सर हेमोडायनामिक अपमानों के साथ होता है जो मॉनिटर करने के लिए महत्वपूर्ण हैं। चित्रा 2 में यकृत लीकेशन के बाद व्यक्तिगत चूहों के औसत धमनी रक्तचाप (एमएपी) दर्शाता है कि लापरवाह होने के बाद एमएपी में लापरवाही और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बूंद के परिणामस्वरूप एक रक्तस्रावी आवेश वाले राज्य का परिणाम होता है। यह महत्वपूर्ण है क्योंकि यह विभिन्न पुनर्योजी या हस्तक्षेप के उपायों के हेमोडीयमिक प्रभावों की अनुमति देता है और विभिन्न प्रयोगात्मक स्थितियों के आस-पास के शरीर विज्ञान में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान करता है। यद्यपि यकृत लापरवाही के बाद महत्वपूर्ण हेमोडायनामिक प्रभाव होते हैं जबकि हमें टी मिल गया हैटोपी मॉडल का उपयोग उत्तरजीविता प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है क्योंकि मॉडल का मूल्यांकन 72 घंटे के लिए किया गया है, इस समय 56% के अस्तित्व के साथ ( चित्रा 3 )।
चित्रा 1: जिगर मुक्ति मान्यता। ( ए ) त्रिकोणीय जिगर के प्रतिनिधि वजन। मतलब यकृत का वजन 0.02 ग्रा के मानक विचलन के साथ 0.26 ग्राम था और 0.01 ग्राम के एक मानक त्रुटि थी। इन परिणामों में निरंतरता का प्रदर्शन होता है, जिसे हमारे 75% सांस की दृश्यता के साथ प्राप्त किया जा सकता है। ( बी ) हेपरिन, ट्रेनेक्सैमिक एसिड और पूर्व में सत्यापित हेमोस्टैटिक नैनोपैर्टल के साथ पूर्व उपचार के बाद ग्राम में खून का नुकसान क्रमशः 1.6, 0.60 और 0.65 ग्राम रक्त का मतलब होता है। ये परिणाम दवा के hemostatic या anticoagulant प्रभावों का परीक्षण करने के लिए इस मॉडल की उपयोगिता को मान्य करते हैं।
चित्रा 2: लिवर स्तनपान के बाद धमनी रक्तचाप का मतलब। व्यक्तिगत चूहों के ग्राफ़िकल ट्रेसिंग का मतलब 20 मिनट से अधिक धमनियों का रक्त ट्रेसिंग होता है जो या तो एक फैंसी या ऑपरेशन या यकृत लसेशन होता है। यकृत संवहन चूहों के मध्य धमनी रक्तचाप (एमएपी) में एक विशेषता और उपजी ड्रॉप होता है जो शाम संचालित चूहों में अनुपस्थित होता है।
चित्रा 3: कैप्लन-मीयर जीवन रक्षा वक्र, यकृत स्राव के बाद। किसी भी इलाज के बिना जिगर सिकुड़ने वाले चूहों में 72 ज जीवित रहने का अनुमान 56% था।
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Discussion
यहाँ वर्णित मुरुण जिगर लंगोथ मॉडल अनियंत्रित रक्तस्राव के एक विश्वसनीय, सुसंगत मॉडल प्रदान करता है। यह मॉडल निष्पादन के लिए सीधा है लेकिन महत्वपूर्ण कदम हैं जिनके लिए सावधानीपूर्वक विचार की आवश्यकता होती है। मॉडल का सबसे तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण हिस्सा हेमोडायनामिक निगरानी और द्रव / नशीली दवाओं के प्रशासन के लिए उदर का पात्रों का खंडण है। तंत्रिका के विच्छेदन और धमनीविज्ञान / विष-विच्छेद के दौरान देखभाल की जानी चाहिए। तंत्रिका क्षति और संभव पक्षाघात से बचने के लिए जहाजों के विच्छेदन के दौरान तंत्रिका को स्पर्श नहीं करना महत्वपूर्ण है, खासकर अस्तित्व के मॉडल के लिए। धमनियों और विष-विषाणु को पोत के नाजुक संचालन की आवश्यकता होती है। हम पोत के आकस्मिक ट्रॅनसेक्शन को रोकने के लिए माइक्रोवेस्कुलुलर कैंची का उपयोग करने का सुझाव देते हैं।
यद्यपि यकृत का सहानुभूति कम तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है, मॉडल के हिस्से में लगातार प्रतिलिपि बनाने योग्य और सुसंगत रक्तस्राव सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण हैचूहा। हमारे मॉडल को पुनर्जीवित करने में समर्थक हेमोस्टैटिक एजेंटों के परीक्षण के इरादे से विकसित किया गया था और इसलिए एक महत्वपूर्ण प्लेसमेंट पर विचार करना शामिल है जिसमें अवशोषण त्रिकोण को सुनिश्चित करना शामिल है कि पैनिंग या मैकेनिकल हेमोस्टैटिक प्रभाव से बचने के लिए लेंस साइट से दूर रखा गया है। शल्य चिकित्सा के इस भाग के दौरान अनजाने में चोट या रक्तस्राव को रोकने के लिए अन्य अंगों और यकृत के अन्य भागों के अनावश्यक हेरफेर से बचें। पेट के बाहर रक्त के नुकसान से बचने के लिए पेट के बाद पेट को तुरंत बंद करना चाहिए।
चूहों को पूरी प्रक्रिया में बारीकी से नजर रखी जानी चाहिए, लेकिन सबसे महत्वपूर्ण बात यह कि चूंकि हम चित्रा 2 में दिखाए गए हैं, उनके द्वारा अनुभव किए गए महत्वपूर्ण मेमोडायनामिक बदलावों को पूरा किया जाता है। इन महत्वपूर्ण हेमोडाइनैमिक बदलावों के साथ हमारा अनुभव यह है कि यदि माउस को 30 एम के लिए 10 एमएमएचजी से नीचे चला जाता है और हम माउस की बलिदान की सलाह देते हैं तो यह जीवित रहने की संभावना नहीं है।उर्स। यदि एक तरल पदार्थ या नशीली दवाओं को अपने hemostatic प्रभावों के लिए परीक्षण किया जाता है, तो हम लापरवाही के तुरंत बाद प्रशासन की सलाह देते हैं, चूंकि चूहों को लचकने वाले इलाके को जल्दी से थक्का पड़ता है यहां वर्णित की तुलना में लंबे समय तक अवलोकन समय-बिंदुओं को करने में रुचि रखने के लिए दर्द प्रबंधन का उपयोग करना आवश्यक है। साथ ही, ऊर्ध्वनिक जहाजों के बंधन के बाद आइस्केमिया के लक्षणों के लिए हिंद अंगों की निगरानी की जानी चाहिए। इन सर्जिकल प्रक्रियाओं के साथ व्यापक अनुभव के कारण, हमारी प्रयोगशाला में इस जटिलता की घटनाओं में 1% से कम जानवरों का परीक्षण किया गया है। 4 , 6
इस मॉडल में कई महत्वपूर्ण सीमाएं हैं, जिसमें अनियंत्रित रक्तस्रावी के पहलू भी शामिल हैं। जबकि हम चूहे के मामले में चूहों में निरंतर रक्तस्राव देखते हैं, कुछ चूहों को अलग तरह से प्रतिक्रिया मिलती है और झड़ने के तुरंत बाद मर जाते हैं। मॉडल में एक और सीमा यकृत लहराव का आकार है। जबकि हमारे डेटा एक संकीर्ण मानक एर्रो दर्शाता हैResected जिगर के वजन में आर, जब विभिन्न व्यक्तियों द्वारा प्रदर्शन आकार में अधिक परिवर्तनशीलता के लिए संभावना है और इसलिए रक्तस्राव निश्चित रूप से मौजूद है। इसके अतिरिक्त, microvascular विच्छेदन और cannulation के लिए सीखने की अवस्था तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण हो सकता है, और वर्णित के रूप में जिगर मुक्ति के reproducibility के लिए 10 चूहों की अनुमानित सीखने की अवस्था के साथ, हम हमारे अनुभव से 50 जानवरों की एक सीखने की अवस्था का अनुमान है हमारे अनुभव से 56% की 72% उत्तरजीविता की उम्मीद की जा सकती है। अस्तित्व के विश्लेषण के लिए मॉडल को निष्पादित करते समय संज्ञाहरण और उचित दर्द प्रबंधन से वसूली महत्वपूर्ण है। हमारे वर्तमान मॉडल में, हमने चूहों को जिगर मुक्ति से पहले जितना प्राप्त किया है, उससे अधिक पूरक द्रव या नशीली दवाओं के पुनर्जीवन का प्रदर्शन नहीं किया है। यह ध्यान रखना जरूरी है कि मॉडल के अस्तित्व के भाग में संकट के लक्षणों के लिए जानवरों की बारीकी से निगरानी की जानी चाहिए और दर्द के लिए उचित तरीके से इलाज किया जाना चाहिए। पेंटोबारबिटल हमारे एनेथेथे हैसमय के लिए चुनाव की पसंद, हम रुचि रखते थे लेकिन संज्ञाहरण के अन्य विकल्प संभव हैं और परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं। मॉनिटर करने के लिए दर्द नियंत्रण महत्वपूर्ण है ताकि चूहों को स्वतंत्र रूप से खा और पी सकते हैं, जो कि नियंत्रित नहीं होता तो रक्तस्राव और ब्याज के उपचार के बाहर परिवर्तनशीलता हो सकती है। यह मॉडल खुद को अन्य मॉडलों जैसे कि मुलायम ऊतक की चोट, स्यूडोफोरेचर या पॉलीट्रामा मॉडल के साथ जोड़ा जाता है। साथ ही, यह मॉडल अंतःशिरा की तुलना में सामयिक हेमोस्टैटिक एजेंटों के प्रभावों का अध्ययन करने के लिए आसानी से अनुकूलित किया जा सकता है। इस मॉडल के कई वैकल्पिक संशोधनों को संभव है लेकिन बिना परीक्षण किए गए रहें। हालांकि इस मॉडल में जानवरों की उम्र और वजन के लिए मिलान किया गया था, यह संभव है कि विभिन्न वज़न के जानवरों का उपयोग किया जा सकता है और वजन के आधार पर चुना गया जिगर वज़न का आकार। इसी तरह के परिणामों की जांच उन जांचकर्ताओं के लिए हो सकती है जो हड्डियों के समापन बिंदु पर निर्भर करते हुए जिगर को घायल नहीं करना चाहते हैं। समान uncontrolवर्तमान मॉडल को संभावित वैकल्पिक संशोधनों प्रदान करने वाले अन्य जानवरों 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 में हेमोरेज मॉडल का उपयोग किया गया है। अंत में, रक्तस्राव को अधिकतम करने के लिए स्तनपान के आकार को बढ़ाया जा सकता है, हालांकि, हमने पाया है कि यह पर्याप्त रूप से मृत्यु दर को बढ़ाता है और विस्तारित मॉडलों के साथ मुख्य हिपेटिक शिराओं को नुकसान उच्चतर चर परिवर्तनशीलता है।
पूर्व अनियंत्रित मॉडल में जिगर का उपयोग किया गया है; हालांकि, इनमें से अधिकांश मॉडलों को चूहा मॉडल में किया गया था। चूहों में एक अनियंत्रित जिगर विरंजन मॉडल का विकास, जांचकर्ताओं को आनुवंशिक रूप से संशोधित नस्लों के धन का लाभ लेने के लिए अनुमति देता है। मूरीन मॉडल के अन्य फायदे में उच्च-थ्रुपुट परीक्षण, लागत-प्रभावशीलता और हैंडलिंग में आसानी करने की क्षमता शामिल है।हमारे मॉडल में हेमोडायनामिक निगरानी, रक्त हानि की मात्रा का ठहराव और मृत्यु दर के मूल्यांकन की अनुमति है, जो पहले की पढ़ाई अक्सर केवल मूल्यांकन के इन पहलुओं में से एक होते हैं हम इस मॉडल को कई चूहों पर एक साथ करने में सक्षम हैं, साथ ही साथ न केवल उच्च-थ्रुपुट की अनुमति देते हैं बल्कि मॉडल में परिवर्तनशीलता में कमी आई है।
निष्कर्ष में, हम यहाँ उपस्थित एक अनियंत्रित रक्तस्रावी मॉडल का एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल है जो मूरीन मॉडल में एक मानक जिगर मुंह का उपयोग करता है। हमारा मॉडल रक्तस्राव या मानसिक आघात की स्थिति में नए हेमोस्टैटिक दवाओं के मूल्यांकन के लिए आदर्श है और इसका इस्तेमाल रक्तचाप के अल्पकालिक मूल्यांकन या उत्तरजीविता प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है।
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Disclosures
घोषित करने के लिए लेखकों के पास कोई वित्तीय प्रतिस्पर्धी हित नहीं है।
Acknowledgments
इस पांडुलिपि का काम हेमोस्तैसिस और वास्कुलर बायोलॉजी (पी 3 एचवीबी) और एएएसटी रिसर्च फैलोशिप में वैस्कुलर मेडिसिन इंस्टीट्यूट पायलट प्रोजेक्ट प्रोग्राम द्वारा डॉ। नील को धन सहायता द्वारा समर्थित था। यह काम अमेरिकी राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान अनुदान 1 R35 GM119526-01 और UM1HL120877-01 द्वारा समर्थित है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 | |
| surgical scissors | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 | |
| microscissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| 0.8 mm curved forceps | Fine Science Tools | 11009-13 | |
| suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 | |
| suture 4-0 silk w/ needle | Owens Minor | K188H | |
| gauze 4 x 4 | can be purchased through any global vendor | ||
| cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | ||
| 30 G needle | can be purchased through any global vendor | ||
| 23 G needle | can be purchased through any global vendor | ||
| 10 cc syringe | can be purchased through any global vendor | ||
| 50 cc conical tube | can be purchased through any global vendor | ||
| 1 cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Polyethylene 10 tubing 100`(PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P | |
| Polyethylene 50 tubing 100`(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | |
| 3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 | |
| surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 | |
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 | |
| tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 | |
| straight side wide mouth jars | VWR | 159000-058 | |
| stainless steel tray 8" x 11" | VWR | 62687-049 | |
| male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 | |
| sterilization pouch 3" x 8" | VWR | 24008 | |
| sterilization pouch 5" x 10" | VWR | 24010 | |
| absorption triangles | Fine Science Tools | 18105-03 | |
| 7 mm wound clip applier | Fisher Scientific | E0522687 | |
| 1,000 7 mm wound clips | Fisher Scientific | E0522687 | |
| betadine (4 oz) | can be purchased through any global vendor | ||
| sterile gloves | can be purchased through any global vendor | ||
| eppendorfs | can be purchased through any global vendor | ||
| 1/2 cc Lo-Dose insulin syringe | Fisher Scientific | 12-826-79 | |
| small weigh boat | can be purchased through any global vendor | ||
| lactated ringers | can be purchased through any global vendor | ||
| hepranized saline solution (.1 µL; hep + 9.9 µL; NaCl) | can be purchased through any global vendor | ||
| phosphate buffered saline | can be purchased through any global vendor | ||
| pentobarbital | can be purchased through any global vendor | ||
| Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | ||
| Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 | |
| TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 | |
| Computer | Dell | ||
| microbead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 | |
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 | |
| circulating heating pad 18 x 26 | Harvard | py872-5272 | |
| rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |
References
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