Summary
मानव मिट्रल वाल्व की प्रोटीन संरचना अभी भी आंशिक रूप से अज्ञात है, क्योंकि इसका विश्लेषण कम सेल्युलैरिटी द्वारा जटिल है और इसलिए कम प्रोटीन बायोसिंथेसिस द्वारा। यह काम मित्राल वाल्व प्रोटीम के विश्लेषण के लिए प्रोटीन को कुशलतापूर्वक निकालने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करता है।
Abstract
सेलुलर प्रोटीम का विश्लेषण जटिल जैविक प्रणालियों में मौजूद प्रोटीनों की बड़े पैमाने पर पहचान और मात्रा का ठहराव की अनुमति देने वाले प्रौद्योगिकियों के विकास के कारण होने वाली बीमारियों के आणविक तंत्र को स्पष्ट करने में मदद कर सकता है। एक प्रोटिओमिक दृष्टिकोण से प्राप्त ज्ञान संभावित रूप से एक रोगों के अंतर्निहित रोगजनक तंत्रों की बेहतर समझ, उपन्यास नैदानिक और भविष्यवाणी रोग मार्करों की पहचान के लिए, और उम्मीद है कि, चिकित्सीय लक्ष्य। हालांकि, हृदयात्मक मिट्रल वाल्व प्रोटियोपॉलिकैन और कोलेजन-समृद्ध बाह्य मैट्रिक्स में कम सेल्युलैरिटी के कारण प्रोटिओमिक विश्लेषण के लिए एक बहुत चुनौतीपूर्ण नमूना का प्रतिनिधित्व करता है। यह एक वैश्विक प्रोटिओमिक विश्लेषण के लिए प्रोटीन निकालने के लिए चुनौतीपूर्ण बनाता है। यह काम एक प्रोटोकॉल का वर्णन करता है जो बाद के प्रोटीन विश्लेषण के साथ संगत है, जैसे मात्रात्मक प्रोटिओमिक्स और इम्यूनोब्लॉटिंग। यह डेटा चिंता के संबंध के लिए अनुमति दे सकता हैमात्रात्मक एमआरएनए अभिव्यक्ति और गैर-मात्रात्मक इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण पर डेटा के साथ जी प्रोटीन अभिव्यक्ति। दरअसल, इन तरीकों, जब एक साथ प्रदर्शन किया जाता है, तो एमआरएनए से पोस्ट-ट्रांसलेशन प्रोटीन संशोधनों से, आणविक तंत्रों के अंतर्निहित रोगों की एक अधिक व्यापक समझ प्राप्त करेगा। इस प्रकार, यह विधि कार्डियक वाल्व फिजियोपैथोलॉजी के अध्ययन में रुचि रखने वाले शोधकर्ताओं के लिए प्रासंगिक हो सकती है।
Introduction
हाल के सबूतों में एमआरएनए संश्लेषण के बाद होने वाली कई नियामक तंत्रों की भूमिका की समझ में बदलाव आया है। दरअसल, अनुवाद, पोस्ट ट्रांसक्रिप्शनल, और प्रोटीयोलायटिक प्रोसेस प्रोटीन बहुतायत और कार्य को विनियमित कर सकते हैं। हठधर्मिता - जो कहती है कि एमआरएनए सांद्रता संबंधित प्रोटीनों के लिए प्रॉक्सी हैं, यह मानते हुए कि ट्रांस्क्रिप्ट स्तर प्रोटीन बहुतायत का मुख्य निर्धारक हैं - आंशिक रूप से संशोधित किया गया है। वास्तव में, प्रतिलेख स्तर केवल प्रोटीन की प्रचुरता का आंशिक रूप से अनुमान लगाता है, जो कि पोस्ट ट्रांसक्रिप्शनल इवेंट्स कोशिकाओं 1 , 2 के भीतर प्रोटीन को विनियमित करने के लिए होते हैं
इसके अलावा, प्रोटीन अंततः सेल के कार्य को नियंत्रित करता है और इसलिए अपने फ़िनोटाइप को नियंत्रित करता है, जो ऑटोक्राइन, पैराकाइन और अंतःस्रावी कारकों के जवाब में गतिशील परिवर्तन कर सकता है; रक्तजनित मध्यस्थों; तापमान; दवा से इलाज; और रोग का विकासजाहिर। इस प्रकार, प्रोटीन स्तर पर केंद्रित एक अभिव्यक्ति विश्लेषण प्रोटीम को चिह्नित करने और बीमारी रोगजनन 3 के भाग के रूप में होने वाले महत्वपूर्ण बदलावों को उजागर करने के लिए उपयोगी है।
इसलिए, मौजूदा तकनीकी चुनौतियों के बावजूद स्वास्थ्य और रोग की स्थितियों को स्पष्ट करने के लिए मौजूद प्रोटीओमिक्स मौजूद हैं। अनुसंधान के विशेष रूप से होनहार क्षेत्रों, जिनके लिए प्रोटिओमिक्स योगदान कर सकते हैं: किसी भी स्तर पर बदलकर प्रोटीन अभिव्यक्ति की पहचान ( यानी पूरे कोशिकाओं या ऊतक, subcellular डिब्बों, और जैविक तरल पदार्थ); रोग के निदान और रोग का निदान के लिए उपयोगी उपन्यास बायोमार्कर की पहचान, सत्यापन, और सत्यापन; और, उम्मीद है, नए प्रोटीन लक्ष्य की पहचान जो चिकित्सीय प्रयोजनों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, साथ ही साथ दवा प्रभावकारिता और विषाक्तता के मूल्यांकन के लिए 4 ।
की जटिलता पर कब्जाप्रोटीम एक तकनीकी चुनौती का प्रतिनिधित्व करता है वर्तमान प्रोटिओमिक टूल, प्रोटीन के स्तरों की पहचान, मात्रा का ठहराव और सत्यापन के लिए बड़े पैमाने पर, उच्च-थ्रुपुट विश्लेषण का प्रदर्शन करने का अवसर प्रदान करते हैं। इसके अलावा, फॉक्साशन और संवर्धन तकनीकों का परिचय, जो कि प्रचुर मात्रा में प्रोटीनों की वजह से हस्तक्षेप से बचने के उद्देश्य से कम से कम प्रचुर मात्रा में प्रोटीनों को शामिल करके प्रोटीन की पहचान में सुधार लाया है। अंत में, प्रोटिओमिक्स को पोस्ट-ट्रांसलेशन संबंधी संशोधनों के विश्लेषण द्वारा पूरित किया गया है, जो प्रोटीन फ़ंक्शन के उत्तरोत्तर महत्वपूर्ण modulators के रूप में उभरते हैं।
हालांकि, विश्लेषण के तहत जैविक नमूनों में नमूना तैयार करने और प्रोटीन की वसूली अभी भी प्रोटिओमिक वर्कफ़्लो में सीमित कदम बनी रहती है और संभावित नुकसान 5 की संभावना बढ़ाती है। वास्तव में, अधिकांश आणविक जीव विज्ञान तकनीकों में जो अनुकूलित किया जाना चाहिए, पहले चरण ऊतक होमोजीजिएट हैंआयन और सेल विश्लेषण, विशेष रूप से कम प्रचलीता प्रोटीन के विश्लेषण के दौरान, जिसके लिए प्रवर्धन विधि मौजूद नहीं हैं। इसके अलावा, प्रोटीन की रासायनिक प्रकृति अपने स्वयं के वसूली को प्रभावित कर सकती है। उदाहरण के लिए, अत्यधिक हाइड्रोफोबिक प्रोटीन का विश्लेषण बहुत ही चुनौतीपूर्ण है, क्योंकि वे आसानी से आइसोइक्ट्रिक के दौरान ध्यान केंद्रित करते हैं, जबकि ट्रांस-झिल्ली प्रोटीन लगभग अघुलनशील हैं (संदर्भ 5 में समीक्षा की गई)। इसके अलावा, ऊतक रचना परिवर्तनशीलता सार्वभौमिक निकासी विधि को विकसित करने के लिए एक महत्वपूर्ण बाधा पैदा करती है। अंत में, क्योंकि लगभग सभी नैदानिक नमूने सीमित मात्रा के हैं, कम से कम नमूना मात्रा 6 से अधिकतम वसूली और प्रजनन क्षमता के साथ प्रोटीन की तैयारी को सक्षम करना आवश्यक है।
यह काम सामान्य मानव कार्डियक मिट्रल वाल्व से प्रोटीन निष्कर्षण के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल का वर्णन करता है, जो प्रोटिओमिक विश्लेषण के लिए एक बहुत चुनौतीपूर्ण नमूना का प्रतिनिधित्व करता है। सामान्य मैट्रल वाल्व एक COMP हैबाएं आलिंद और दिल के बाएं वेंट्रिकल के बीच झूठ बोलने वाला लेक्स संरचना ( चित्रा 1 )। यह एट्रियम से रक्त प्रवाह के नियंत्रण में वेंट्रिकल के लिए एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, बैकफ्लो को रोकने और पूरे शरीर को ऑक्सीजन की आपूर्ति का उचित स्तर सुनिश्चित करता है, इस प्रकार एक पर्याप्त कार्डियक आउटपुट बनाए रखता है हालांकि, यह आमतौर पर बाह्य मैट्रिक्स में कम सेल्युलैरिटी और कुछ घटकों के साथ "निष्क्रिय" ऊतक माना जाता है। इसका कारण यह है, सामान्य परिस्थितियों में, निवासी वाल्व्युलर इन्स्ट्रिसियल सेल (वीआईसी) कम प्रोटीन बायोसिंथेसिस दर 7 के साथ एक मौनसंपादित करें।
हालांकि, यह दिखाया गया है कि, एक रोगशास्त्रीय स्थिति में, स्पन्गॉआसा में वीआईसी की संख्या बढ़ जाती है और उनके प्रोटीन संश्लेषण सक्रिय होते हैं, साथ में अन्य कार्यात्मक और फेनोटिकल बदलाव 8 । इसलिए, यह आश्चर्यजनक नहीं है कि न्यूनतम डेटा उपलब्ध हैसाहित्यिक रोगी वाल्व 9 , 10 के विश्लेषण पर साहित्य का ध्यान केंद्रित किया गया है , जिसमें सक्रिय वीआईसी की संख्या बढ़ी हुई प्रोटीनों की अपेक्षाकृत उच्च संख्या की व्याख्या कर सकती है।
निष्कर्ष में, वर्तमान प्रोटोकॉल मिथ्रल वाल्व प्रोटीन घटकों के अध्ययन के माध्यम से विकृति रोगों के लिए जिम्मेदार रोगजनक तंत्र की समझ विकसित करने के लिए काम कर सकता है। दरअसल, अंतर्निहित रोग प्रक्रियाओं की एक बड़ी समझ से वाल्व रोगों के नैदानिक प्रबंधन में सुधार करने में मदद मिल सकती है, जिनके मौजूदा हस्तक्षेप के संकेतों को मोटे तौर पर हेमोडायनामिक विचारों पर माना जाता है।
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Protocol
इस प्रोटोकॉल में, सामान्य एकोकार्डियोग्राफिक मापदंडों के बावजूद, बहु-आयुर्विज्ञान explantation (4/12 एच, 6 ± 2 ज के ठंड इस्किमिया समय के दौरान तकनीकी या कार्यात्मक कारणों के लिए अंग प्रत्यारोपण से बाहर रखा गया) वे महाधमनी और फुफ्फुसीय वाल्वों के बैंकिंग के लिए कार्डियोवस्कुलर टिशू बैंक ऑफ मिलान, मोनजिनो कार्डियोलोगिक सेंटर (मिलान, इटली) को भेजे जाते हैं। मिट्राल पोस्टर लीफलेट का उपयोग नैदानिक उद्देश्यों के लिए नहीं किया जाता है, इसलिए उन्हें महाधमनी और फुफ्फुसीय वाल्व अलगाव के दौरान एकत्रित किया जाता है, के बाद सूचित सहमति दांतों के रिश्तेदारों से प्राप्त की जाती है। प्रत्यारोपण और शोध के ऊतक को माता-पिता की सहमति के बाद ही एकत्र किया जाता है; सहमति पत्र पर, वे केवल अनुसंधान के लिए कार्डियाक टिशू के उपयोग को अधिकृत करते हैं (या नहीं) यदि यह मानवीय नैदानिक उपयोग ( यानी, सूक्ष्मजीवविज्ञानी, कार्यात्मक और सीरॉलॉजिकल समस्याएं) के लिए उपयुक्त नहीं है, तो नैतिक समिति के दिशानिर्देशों के अनुसारमोनजिनो कार्डियोलॉजिक सेंटर
1. मैट्रल वाल्व तैयारी
- अंग विस्फोट के बाद जितनी जल्दी हो सके मानव मित्राल वाल्व का उत्पादन करें (4-12 घंटे का ठंडा इस्किमिया समय)।
- एक साफ कमरे में, ठंडा (4 डिग्री सेल्सियस) समाधान ( यानी, खारा समाधान या संतुलित मध्यम यूरोकोलिन या विस्कॉन्सिन) वाले परिवहन बैग से दिल को हटा दें। इसे एक बाल्टी में रखकर वाल्व की तैयारी के साथ आगे बढ़ने के लिए इसे जैव सुरक्षा कैबिनेट (बायोहेज़र्ड ऊर्ध्वाधर वायु प्रवाह, कक्षा ए, गुड मैनफैक्चरिंग प्रैक्टिस (जीएमपी) वर्गीकरण) में रखें।
- कैबिनेट में एक बाँझ डिस्पोजेबल कपड़ा पर दिल रखें। बाँझ डिस्पोजेबल स्केलपेल का इस्तेमाल करके, बाएं और दाएं निलय के स्तर पर, सिर के पूरी तरह से, अपने मुख्य अक्ष को लंबवत रूप से कट कर, शीर्ष से 4 सेमी दूर।
- बाईं आलिंद छत को प्रदर्शित करने के लिए आरोही महाधमनी और फुफ्फुसीय धमनी को स्थानांतरित करें।
- बाँझ autoclavable संदंश और चुनने के साथ, पर छोड़ दिया अण्डाकार के आसपास कटौतीबाएं आलिंद छत, मिट्राल वाल्व को दिखाई देता है और महान मिट्राल लेफलेट (पूर्वकाल) और छोटे मीट्रिक पत्रक (पोस्टर) को पहचानने के लिए अनुमति देता है।
नोट: एंटरो-पार्श्व और बाद के माध्यमिक कमांडर पूर्वकाल पुस्तिका और पिछड़े क्षेत्र की सीमा को परिभाषित करते हैं। - बाँझ autoclavable कैंची और गैर-दर्दनाक संदंश का उपयोग, बाएं आलिंद काटना और पूरे mitral वाल्व के परिधि के आसपास वेंट्रिकल दीवार मोटाई ।
- मिट्रो-महाधमनी वाल्व निरंतरता को पहचानें
नोट: बाएं वेंट्रिकल में पूरे मित्राल वाल्व और chords शामिल हैं। - पीछे के विक्रय वाल्व पत्रक से पूर्वकाल मिश्रित वाल्व पत्रक अलग करें, वेंट्रिकल (संचयन) के साथ सम्मिलन के साथ पीछे के पत्रक काटने।
- खारा समाधान में पीछे की पुस्तिका को धो लें पुस्तिका को छोटे टुकड़ों (<1 सेमी 2 ) में काटें और व्यक्तिगत रूप से उन्हें एल्यूमीनियम पन्नी में लपेटें। तरल नाइट्रोजन के साथ स्नैप-फ्रीज करें।
सावधानी: तरल नाइट्रोजन का उपयोग करते समय संगठनात्मक सुरक्षा प्रक्रियाओं का पालन करें।- कैबिनेट की तालिका में 70% आइसोप्रोपील अल्कोहल समाधान और 6% हाइड्रोजन पेरोक्साइड समाधान प्रक्रिया के अंत में समाहित करें।
2. प्रोटीन निष्कर्षण
- तरल नाइट्रोजन में संग्रहीत नमूना लेने के लिए संदंश का उपयोग करें और इसे अभी भी सूखा बर्फ पर रखें, जबकि एल्यूमीनियम पन्नी में लपेटा हुआ है। किसी भी स्थानान्तरण के दौरान नमूने को पिघलना छोड़ दें।
- पीसने से पहले, द्रव नाइट्रोजन (~ 500 एमएल) वाले देवर के फ्लास्क में डालकर, चीनी मिट्टी के बरतन / जिरकोनाइम मोर्टार और एक पेल्स्टर सिस्टम की मस्तूल ( उदाहरण के लिए, क्रायो ग्रिंडर) को नमूना के साथ ठंडा कर दें।
सावधानी: तरल नाइट्रोजन का उपयोग करते समय संगठनात्मक सुरक्षा प्रक्रियाओं का पालन करें। - सूखे बर्फ युक्त एक पॉलीस्टाइन बॉक्स में मोर्टार और मसाले रखो। एल्यूमीनियम पन्नी से नमूना निकालें और इसे मोर्टार में डाल दें।
- पीस लेंपेस्टल को घुमाने के लिए पेचकश का उपयोग करके, वह मोर्टार के 15-20 गुना के खिलाफ बड़े मूसल के साथ नमूना पीसने की प्रक्रिया के दौरान एक पूर्व ठंडा रंग की नोक के साथ नमूना मिलाएं।
- छोटे मूसल के साथ दोहराएं।
- पहले नमूना ट्यूब के लिए पहले से तौला ट्यूब ( उदाहरण के लिए, 15 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब) को ट्यूब में घुसने, मोर्टार पर रखकर, और ट्यूब में नमूना को स्थानांतरित करने के लिए उन्हें एक साथ घुमाकर स्थानांतरित करें। मोर्टार से सभी सामग्री को ठीक करने के लिए पूर्व-ठंडा रंग का प्रयोग करें।
- स्थानांतरण के दौरान नमूना पिघलना से बचने के लिए सूखी बर्फ पर नमूना के साथ ट्यूब रखें।
- नमूना के शुद्ध वजन की गणना करें।
- हर नमूना के बाद मोर्टार और पेस्टल्स को साफ करें और उन्हें 2 घंटे के लिए 200 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेविंग या हीटिंग के द्वारा डिज़ाइन करें।
- उलटा द्वारा एक homogenizer के ग्लास ट्यूब के लिए अपकेंद्रित्र ट्यूब से पाउडर नमूना स्थानांतरित करें।
- फ़िल्टर्ड यूरिया बफ़ी जोड़ेंगिलास ट्यूब के लिए आर (8 एम यूरिया, 2 एम थियोरिया, 4% वाइ-वी सीएपीएस, 20 एमएम ट्राइस और 55 मिमी डीथॉयट्रेटीइटॉल), प्रत्येक 10 मिलीग्राम पाउडर टिशू के लिए 200 μएल यूरिया बफर।
नोट: यूरिया बफर की गणना की मात्रा के हिस्से का उपयोग करके अपकेंद्रित्र ट्यूब में शेष अवशिष्ट पाउडर नमूना पुनर्प्राप्त किया जा सकता है। - एक borosilicate ग्लास मोर्टार और एक polytetrafluoroethylene (पीटीएफई) मूसल से सुसज्जित एक हलचल का उपयोग कर नमूना homogenize धीरे-धीरे मूसल को एक घुमाव गति (1,500 आरपीएम) के साथ नमूना पर 10 बार दबाएं
- सतह पर तैरनेवाला को पुनर्प्राप्त करें और उसे साफ 1.7 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें। फिर से ताजा यूरिया बफर के साथ शेष नमूना निकालें, पहले निष्कर्षण के दौरान इस्तेमाल किए गए मात्रा का आधा हिस्सा जोड़कर।
- दोहराएं चरण 2.10
- सतह पर तैरनेवाला को ठीक करें और चरण 2.11 से सतह पर तैरने वाले के साथ इसे गठबंधन करें। 30 मिनट के लिए एक ट्यूब रोटेटर पर संयुक्त सतह पर तैरनेवाला रखें
- ट्यूब 30 मिनट 13,000 xg और 4 डिग्री सेल्सियस के लिए अपकेंद्रित्र
- सतह पर तैरनेवाला एक को पुनर्प्राप्त करेंडी निर्माता के निर्देशों के अनुसार, ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख का उपयोग करते हुए प्रोटीन एकाग्रता को मापने। उपयोग होने तक -80 डिग्री सेल्सियस पर नमूना स्टोर करें।
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Representative Results
यूरिया बफर में प्रोटीन का निष्कर्षण और विघटन सीधे आइसोएक्ट्रोफोकसिंग (दो-आयामी वैद्युतकणसंचलन (2-डीई) 11 और तरल चरण आइसोइलेक्ट्रिक फोकसिंग (आईईएफ) 12 ) पर आधारित प्रोटिमीक विधियों के साथ संगत है और लामेल्ली बफर 13 में कमजोर पड़ने के बाद इम्यूनोब्लॉटिंग के साथ एक प्रोटीज अवरोधक कॉकटेल युक्त 14
जेल से मुक्त जन स्पेक्ट्रोमेट्री-आधारित विधियों ( अर्थात्, डेटा-स्वतंत्र जन स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण (एलसी / एमएस ई ) और दो-आयामी एलसी / एमएस ई (2 डी-एलसी / एमएस ई ) के लिए तरल क्रोमैटोग्राफी 15 , नमूने निकाले गए वर्णित यूरिया बफर में यूरिया और थियोरिया को खत्म करने के लिए और इलाज किया जाना चाहिए, जो बाद में प्रोटीन पाचन और तरल क्रोमैटोग्राफी अलग होने में हस्तक्षेप कर सकता है। थीप्रोटीन को कम करने के लिए निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए वाणिज्यिक प्रोटीन वर्षा किट का उपयोग करके पूरा किया जा सकता है। नमूना तो 25 एमएम एनएच 4 एचसीओ 3 में भंग किया जा सकता है जिसमें प्रोटीन पाचन 16 के लिए 0.1% क्लेविएबल डिटर्जेंट होते हैं। प्रोटीन का वर्षा बफर घटकों को समाप्त कर सकता है, कम से कम प्रोटीन सामग्री (प्रोटीन वसूली:> 85%) को प्रभावित कर सकता है, इस प्रकार प्रत्येक प्रकार के विश्लेषण के लिए उपयुक्त नमूना प्रदान करता है।
मानव मिश्रित वाल्व से प्रोटीन निष्कर्षण के लिए कुल 422 प्रोटीन की पहचान के लिए इस प्रोटोकॉल का उपयोग, चार अलग-अलग प्रोटिओमिक्स दृष्टिकोणों के संयोजन से पहले 11 , 15 के विवरण में वर्णित है। विशेष रूप से, 16 9 प्रोटीन की पहचान 2-डी, 330 प्रोटीन तरल चरण आईईएफ, एलसी / एमएस ई द्वारा 96 प्रोटीन और 148 प्रोटीन2 डी-एलसी / एमएस ई (तालिका 1) द्वारा
Subcellular स्थानीयकरण के मामले में 422 पहचाने गए प्रोटीन को वर्गीकृत करने के लिए, एक सॉफ्टवेयर जीन ओण्टोलॉजी (जीओ) विश्लेषण ( जैसे, साइटोस्केप) के लिए इस्तेमाल किया गया था। सॉफ्टवेयर और इसके संबंधित प्लग-इन के साथ बनाया गया नेटवर्क दिखाता है कि बाहरी क्षेत्र में स्थानीयकृत प्रोटीनों के अलावा ( चित्रा 2 के ऊपरी दाएं भाग को देखें), प्रोटिओमिक दृष्टिकोणों द्वारा पहचाने जानेवाले अधिकांश प्रोटीन इंट्रासेल्यूलर क्षेत्र से होते थे ( यानी, साइटलोप्लाज्म, ऑर्गेनेल, फेशियल और साइटोस्केलेटन)। सेल-सतह प्रोटीन की पहचान की गई ( चित्रा 2 )।
परिणामों को तीन स्वतंत्र मेट्रल वाल्व नमूनों में और पुष्टि की गई थी। इम्यूनोबलॉटिंग का उपयोग चार प्रोटीन के समूह ( यानी, सेप्टिन -11, चार और एक आधा लिम डोमेन प्रोटीन 1 (एफएचएल-1) के विश्लेषण के लिए किया गया था, डेरमैटॉपॉन्टीन, और अल्फा-क्रिस्टलीन बी (क्रैएब)) जिन्हें कभी सामान्य मेट्रल वाल्व ( चित्रा 3 ) में नहीं पहचाना गया है।
चित्रा 1: मैट्रल वाल्व संरचना। बंद ( ए ) या खुली ( बी ) मानव मिट्रल वाल्व दिखा मानव दिल के शीर्ष दृश्य मानव हृदय के बाएं वेंट्रिकल के सामने का दृश्य ( सी ) इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
चित्रा 2 चित्रा 2: सेलुलर वितरण की अवधि में पहचान mitral वाल्व प्रोटीन का विश्लेषण। साइटोस्केप और प्लगइन बीएनजीओ का उपयोग करने के लिए किया गया थासेलुलर घटक श्रेणियों से जीन ओण्टोलॉजी (जीओ) के नियमों का वितरण। सर्कल का आकार चयनित गो शर्तों से जुड़े प्रोटीन घटकों की संख्या के अनुपात में है, और ओवर-प्रस्तुतीकरण के पी-मान के लिए रंग पैमाने की सूचना दी जाती है। इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
चित्रा 3: सेप्टीन -11, एफएचएल-1, डर्माटोपोंटिन और क्रायैब के तीन मानव सामान्य मिट्रल वाल्व पत्रक से पूरे निकालने में Immunoblotting विश्लेषण। इम्यूनोबलॉटिंग को क्रायएब और खरगोश पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी के खिलाफ सेप्टीन -11, एफएचएल-1, और डर्माटोपोन्टिन एंटीबॉडी के खिलाफ माउस मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग किया गया था। कृप्याइस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें
| परिग्रहण | विवरण | 2-डे | 2 डी-नियंत्रण रेखा | एलसी-एमएस ई | तरल चरण आईईएफ |
| A6NMZ7 | कोलेजन अल्फा VI | एक्स | |||
| O00151 | पीडीजी और एलआईएम डोमेन प्रोटीन 1 | एक्स | |||
| O00299 | क्लोराइड इंट्राससेल्यूलर चैनल प्रोटीन 1 | एक्स | |||
| O00764 | पायरेडॉक्सल किनाज | एक्स | |||
| O14558 | हीट शॉक प्रोटीन बीटा 6 | एक्स | |||
| O43399 | ट्यूमर प्रोटीन डी 54 | एक्स | |||
| O43488 | अफलेटोक्सिन बी 1 एल्डिहाइड रिडक्टेस सदस्य 2 | एक्स | |||
| O43707 | अल्फा एक्टिनिन 4 | एक्स | एक्स | ||
| O43866 | अग्रिम की तरह सीडी 5 एंटीजन | एक्स | |||
| O60493 | नेक्सिन 3 छंटनी | एक्स | |||
| O60701 | यूडीपी ग्लूकोज 6 डिहाइड्रोजनेज | एक्स | |||
| O75223 | अप्रभावित प्रोटीन | एक्स | |||
| O75368 | एसएच 3 डोमेन बाध्यकारी ग्लूटामिक एसिड प्रोटीन की तरह समृद्ध है | एक्स | |||
| O75390 | साइट्रेट सिंथेज़ मिटोकोंड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| O75489 | एनएडीएच डिहाइड्रोजनेज ubiquinone लोहा सल्फर प्रोटीन 3 मिटोकोंड्रल अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| O75608 | एसील प्रोटीन thioesterase 1 | एक्स | |||
| O75828 | कार्बोनिल रिडक्टेज एनएडीएफ़एच 3 | एक्स | |||
| O75874 | आइसोकिटेट डिहाइड्रोजनेज एनएडीपी साइटोप्लाजिकिक | एक्स | |||
| O75955 | Flotillin | एक्स | |||
| O94760 | एनजी एनजी डायमिथॉलैगिनिन डाइमेथिलमाइनहाइड्रॉलेस 1 | एक्स | |||
| O94788 | रेटिनल डिहाइड्रोजनेज 2 | एक्स | |||
| O95865 | एनजी एनजी डायमिथाइलैगिनिन डाइमेथिलमाइनहाइड्रॉलेस 2 | एक्स | एक्स | ||
| P00325 | शराब डिहाइड्रोजनेज 1 बी | एक्स | एक्स | ||
| P00338 | एल लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज ए चेन | एक्स | |||
| P00352 | रेटिनल डिहाइड्रोजनेज 1 | एक्स | |||
| P00441 | सुपरऑक्साइड डिसूटाटेज क्यू जेएन | एक्स | एक्स | ||
| P00450 | सेरूलोप्लास्मीन अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P00488 | जमावट का कारक XIII एक चेन अग्रदूत | एक्स | |||
| P00491 | प्यूरिन न्यूक्लॉसाइड फॉस्फोराइलैस | एक्स | |||
| P00492 | हाइपॉक्सीथाइन गैनिन फॉस्फोर्बिस्सिलट्रांसफेरेज | एक्स | |||
| P00558 | फॉस्फोग्लाइर्टेट किनाज 1 | <td> एक्सएक्स | एक्स | ||
| P00568 | एडेनीलेट कानेज एकोनजीम 1 | एक्स | |||
| P00734 | prothrombin | एक्स | एक्स | ||
| P00738 | haptoglobin | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P00739 | हप्टोग्लोबिन संबंधित प्रोटीन अग्रदूत | एक्स | |||
| P00751 | पूरक कारक बी | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P00915 | कार्बोनिक एनहाइड्राज़ 1 | एक्स | |||
| P00918 | कार्बोनिक एनहाइड्रेस 2 | एक्स | |||
| P01008 | एंटीथ्रॉम्बिन III अग्रदूत साबित | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P01009 | अल्फा 1 एंटीट्रिप्सिन | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P01011 | अल्फा 1 एंटीकाइमोट्रिप्सिन | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P01019 | एंजियोटेनसिनोजन अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P01023 | अल्फा 2 मैक्रोग्लोबुलिन | एक्स | एक्स | ||
| P01024 | पूरक C3 | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P01033 | मेटलॉप्रोटीनस अवरोधक 1 अग्रदूत | एक्स | |||
| P01042 | Kininogen 1 अग्रदूत साबित | एक्स | |||
| P01593 | आईजी कपा चेन VI क्षेत्र एजी | एक्स | |||
| P01598 | आईजी कप चैन VI क्षेत्र ईयू | एक्स | |||
| P01600 | आईजी कप चैन विजन क्षेत्र हा | एक्स | एक्स | ||
| P01611 | आईजी कप चेन VI क्षेत्र वेस | एक्स | |||
| P01620 | आईजी कप चैन वी III क्षेत्र एसआईई | एक्स | |||
| P01625 | आईजी कप चेन वी 4 क्षेत्र लेन | एक्स | |||
| P01766 | आईजी भारी श्रृंखला वी III क्षेत्र बीआरओ | एक्स | एक्स | ||
| P01781 | आईजी भारी श्रृंखला वी III क्षेत्र लड़की | एक्स | |||
| P01834 | आईजी कप चेन सी क्षेत्र | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P01842 | आईजी लैम्ब्डा श्रृंखला सी क्षेत्र | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P01857 | आईजी गामा 1 श्रृंखला सी क्षेत्र | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P01859 | आईजी गामा 2 श्रृंखला सी क्षेत्र | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P01860 | आईजी गामा 3 श्रृंखला सी क्षेत्र | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P01861 | आईजी गामा 4 श्रृंखला सी क्षेत्र | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P01871 | आईजीएम चेन सी क्षेत्र | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P01876 | आईजी अल्फा 1 श्रृंखला सी क्षेत्र | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P01877 | आईजी अल्फा 2 श्रृंखला सी क्षेत्र | एक्स | |||
| P02144 | Myoglobin | एक्स | एक्स | ||
| P02452 | कोलेजन अल्फा 1 आई श्रृंखला | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02511 | अल्फा क्रिस्टलीन बी श्रृंखला | एक्स | |||
| P02545 | लैमिन एसी 70 केडीए लेमीन | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02647 | अपोलिपोप्रोटीन एआई | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02649 | अपोलिपोप्रोटीन ई | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02671 | फाइब्रिनोज़ अल्फा श्रृंखला | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02675 | फाइब्रिनोज बीटा श्रृंखला | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02679 | फाइब्रिनोज गामा श्रृंखला | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02689 | मायीलिन पी 2 प्रोटीन | एक्स | |||
| P02735 | सीरम अमाइलाइड एक प्रोटीन अग्रदूत | एक्स | |||
| P02741 | सी प्रतिक्रियाशील प्रोटीन अग्रदूत | एक्स | |||
| P02743 | सीरम अमाइलॉइड पी घटक | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02746 | कॉम्प्लिटर C1q सबकम्पनेट सबयूनिट बी | एक्स | एक्स | ||
| P02747 | C1q उपघटक उप-भाग सी अग्रदूत के पूरक | एक्स | |||
| P02748 | कम्प्लिमेंट घटक सी 9 | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P02749 | बीटा 2 ग्लाइकोप्रोटीन 1 | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02750 | लाइकोइन अमीर अल्फा 2 ग्लाइकोप्रोटीन अग्रदूत | एक्स | |||
| P02751 | फ़ाइब्रोनेक्टिन | एक्स | एक्स | ||
| P02760 | एएमबीपी प्रोटीन अग्रदूत | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02763 | अल्फा 1 एसिड ग्लाइकोप्रोटीन 1 | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P02765 | अल्फा 2 एचएस ग्लाइकोप्रोटीन अग्रदूत | एक्स | |||
| P02766 | ट्रांस्टिथ्रिन अग्रदूत | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P02768 | सीरम एल्ब्युमिन | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02774 | विटामिन डी बाइंडिंग प्रोटीन अग्रदूत | एक्स | |||
| P02787 | Serotransferrin | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02788 | लैक्टोट्रांसफ़्रिन अग्रदूत | एक्स | |||
| P02790 | Hemopexin | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P02792 | फेरिटीन लाइट चेन | एक्स | |||
| P04004 | vitronectin | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P04075 | फर्कटोज बिस्फोस्फेट एल्डोलेज़ ए | एक्स | |||
| P04083 | एनेक्सिन ए 1 | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P04179 | सुपरऑक्साइड डिसूटासेज एमएन मिटोचोनड्रल अग्रदूत | एक्स | |||
| P04196 | हिस्टीडीन समृद्ध ग्लाइकोप्रोटीन अग्रदूत | एक्स | |||
| P04217 | अल्फा 1 बी ग्लाइकोप्रोटीन अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P04350 | टूबुलीन बीटा 4 श्रृंखला | एक्स | |||
| P04406 | ग्लिसराइडहाइड 3 फॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P04792 | हीट शॉक प्रोटीन बीटा 1 | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P05091 | एल्डिहाइड डिहाइड्रोजनेज मिटोकॉन्ड्रियल अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| प्लाज्मा प्रोटीज सी 1 अवरोधक अग्रदूत | एक्स | ||||
| P05156 | पूरक कारक मैं पूर्ववर्ती | एक्स | |||
| P05413 | फैटी एसिड बाइंडिंग प्रोटीन दिल | एक्स | |||
| P05452 | टेट्रानैक्टिन अग्रदूत टीएन | एक्स | एक्स | ||
| P05787 | केराटिन प्रकार II साइटोस्केलेटल 8 | एक्स | |||
| P06396 | Gelsolin | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P06576 | एटीपी सिंथेस सबयूनेट बीटा मिटोकॉन्ड्रियल अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P06732 | क्रिएटिन कीनेस एम टाइप | एक्स | एक्स | ||
| P06733 | अल्फा एनोलेज़ | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P06753 | ट्रोपोमायसिन अल्फा 3 श्रृंखला | एक्स | एक्स | ||
| P07108 | एसीएल कोए बाइंडिंग प्रोटीन | एक्स | |||
| P07195 | एल लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज बी चेन | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P07196 | न्यूरोफ़िलामेंट लाइट पॉलीपेप्टाइड | एक्स | |||
| P07197 | न्यूरोफिल्मेट मध्यम पॉलीप्प्टाइड | एक्स | एक्स | ||
| P07237 | प्रोटीन डाइसल्फ़ाइड isomerase अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P07339 | कैथेशसिन डी अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P07355 | एनेक्सिन ए 2 | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P07360 | पूरक C8 गामा श्रृंखला अग्रदूत साबित | एक्स | |||
| P07437 | टूबुलीन बीटा श्रृंखला | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P07585 | Decorin | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P07737 | प्रोफाइल 1 | एक्स | |||
| P07858 | कैथेशसिन बी अग्रदूत | एक्स | |||
| P07900 | हीट सदमे प्रोटीन एचएसपी 90 अल्फा | एक्स | एक्स | ||
| P07951 | ट्रोपोमायसिन बीटा श्रृंखला | एक्स | |||
| P07954 | फ्यूमरेट हाइड्रेट्स मिटोकॉन्ड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| P07996 | थ्रोम्बोस्पोंडिन 1 | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P08107 | गर्मी झटका 70 केडीए प्रोटीन 1 ए 1 बी | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P08123 | कोलेजन अल्फा 2 आई श्रृंखला | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P08133 | एनेक्सिन ए 6 | एक्स | एक्स | ||
| P08238 | हीट सदमे प्रोटीन एचएसपी 90 बीटा | एक्स | एक्स | ||
| P08253 | 72 केडीए प्रकार IV collagenase अग्रदूत | एक्स | |||
| P08294 | एक्स्ट्रासेल्युलर सुपरऑक्साइड डिमुटाईज़ क्यू जेएन प्रीursor | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P08590 | मायोसिन प्रकाश पॉलीपेप्टाइड 3 | एक्स | एक्स | ||
| P08603 | पूरक कारक एच | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P08670 | vimentin | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P08729 | केराटिन प्रकार II साइटोकैक्टल 7 | एक्स | |||
| P08758 | एनेक्सिन ए 5 | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P09211 | ग्लुटाथियोन एस ट्रांसफर पी | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P09382 | गैलेक्टिन 1 | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P09417 | डायहाइड्रोप्राइडिन रिडक्टेस | <td> | एक्स | ||
| P09493 | ट्रोपोमायसिन 1 अल्फा श्रृंखला | एक्स | एक्स | ||
| P09525 | एनेक्सिन ए 4 | एक्स | एक्स | ||
| P09651 | विषम परमाणु रिबन्यूक्लोप्रोटीन ए 1 | एक्स | |||
| P09871 | कॉम्प्लेमर सी 1 एस उपकंपनीेंट अग्रदूत | एक्स | |||
| P09936 | यूबीक्विटीन कार्बोक्ज़िल टर्मिनल हाइड्रोलेस आइसोज़ाइम एल 1 | एक्स | |||
| P09972 | फर्कटोज बिस्फोस्फेट एल्डोलेज़ सी | एक्स | |||
| P0C0L4 | कॉम्प्लिटर सी 4 ए अग्रदूत | एक्स | |||
| P0CG05 | पुलिस महानिरीक्षकलैम्ब्डा 2 श्रृंखला सी क्षेत्र | एक्स | |||
| P0CG38 | पोट आकीरिन डोमेन परिवार के सदस्य I | एक्स | |||
| P10515 | डाइहाइड्रॉलीफ़ोलीस्सिन अवशेषों एइकेलाट्रांसफेरेज घटक पाइरूवेट डिहाइड्रोजनेज कॉम्प्लेक्स | एक्स | |||
| P10768 | एस फार्मिलग्लैटाथिऑन हाइड्रोलाज़ | एक्स | |||
| P10809 | 60 केडीए गर्मी आघात प्रोटीन मिटोचोनड्रल अग्रदूत | एक्स | |||
| P10909 | Clusterin | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P10915 | Hyaluronan और proteoglycan लिंक प्रोटीन 1 अग्रदूत साबित | एक्स | एक्स | ||
| P11021 | 78 केडीए जील्यूकोस विनियमित प्रोटीन | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P11047 | लैमिनिन सबिनिट गामा 1 अग्रदूत | एक्स | |||
| P11142 | हीट शॉक 71 केडीए प्रोटीन का संकलन | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P11177 | पिरुवेट डिहाइड्रोजनेज ई 1 के घटक सबयूनेट बीटा मिटोकॉन्ड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| P11217 | ग्लाइकोजन फॉस्फोरेलेस मांसपेशियों का रूप | एक्स | |||
| P11310 | मध्यम श्रृंखला विशिष्ट एसीएल कोए डिहाइड्रोजनेज मिटोकोंड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| P11413 | ग्लूकोज़ 6 फॉस्फेट 1 डिहाइड्रोजनेज | एक्स | |||
| P11766 | शराब डिहाइड्रोजनेज वर्ग 3 ची श्रृंखला | एक्स | |||
| P12036 | न्यूरोफिलामेंट भारी पॉलीप्प्टाइड | एक्स | |||
| P12109 | कोलेजन अल्फा 1 छठी श्रृंखला | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P12110 | कोलेजन अल्फा 2 छठी श्रृंखला | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P12111 | कोलेजन अल्फा 3 छठी श्रृंखला | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P12277 | क्रिएटिन कीनेस बी प्रकार | एक्स | |||
| P12429 | एनेक्सिन ए 3 | एक्स | एक्स | ||
| P12814 | अल्फा एक्टिनिन 1 | एक्स | एक्स | ||
| P12829 | मायोसिन प्रकाश पॉलीपेप्टाइड 4 | एक्स | |||
| P12882 | मायोसिन 1 | एक्स | |||
| P12883 | मायोसिन 7 | एक्स | एक्स | ||
| P12955 | ज़ा प्रो डायपेप्टीडाबेस | एक्स | |||
| P13489 | रिबन्यूकेस अवरोधक | एक्स | |||
| P13533 | मायोसिन 6 | एक्स | एक्स | ||
| P13611 | वर्कीय कोर प्रोटीन अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P13639 | बढ़ाव कारक 2 | एक्स | |||
| P13716 | डेल्टा एमिनोलेवुलिनिक एसिड डीहाइड्रेटस | एक्स | |||
| P13796 | प्लास्टिन 2 | एक्स | |||
| P13804 | इलेक्ट्रॉन हस्तांतरण फ्लैवोप्रोटीन सबयूनेट अल्फा मिटोचोन्द्रीयल अग्रदूत | एक्स | |||
| P13929 | बीटा एनोलस | एक्स | एक्स | ||
| P14136 | ग्लिअल फेब्र्रेरीयस अम्लीय प्रोटीन एस्ट्रोसाइट | एक्स | |||
| P14314 | ग्लूकोजिडस 2 उपनिट बीटा अग्रदूत | एक्स | |||
| P14550 | शराब डिहाइड्रोजनेज एनएडीपी | एक्स | |||
| P14618 | पिरुवेट कीनाज़ आइसोजिम्स एम 1 एम 2 | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P14625 </ Td> | एंडोप्लासिन अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P15121 | एल्डोस रिडक्टेज | एक्स | |||
| P15259 | फॉस्फोग्लाइर्टेट उत्परिवर्तन 2 | एक्स | |||
| P16152 | कार्बीनल रिडक्टेस एनएडीएफ़एच 1 | एक्स | |||
| P17066 | गर्मी झटका 70 केडीए प्रोटीन 6 | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P17174 | Aspartate aminotransferase cytoplasmic | एक्स | |||
| P17540 | क्रिएटिन कीनेस सरकोमेरिक मिटोकोंड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| P17661 | Desmin | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P17980 | 26 एस प्रोटीज नियामक सबयूनेट 6 ए | एक्स | |||
| P17987 | टी जटिल प्रोटीन 1 सबयूनेट अल्फा | एक्स | |||
| P18206 | Vinculin | एक्स | एक्स | ||
| P18428 | लाइपोपॉलासेकेराइड बाइंडिंग प्रोटीन अग्रदूत | एक्स | |||
| P18669 | फॉस्फोग्लाइर्टेट उत्परिवर्तित 1 | एक्स | |||
| P19105 | मायोसिन नियामक प्रकाश श्रृंखला 2 | एक्स | एक्स | ||
| P19623 | स्पर्मिडाइन सिंथेस | एक्स | |||
| P19652 | अल्फा 1 एसिड ग्लाइकोप्रोटीन 2 अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P19823 | इंटर अल्फा ट्रिप्सिन इनहिबिटर भारी श्रृंखला एच 2 | एक्स | |||
| P19827 | इंटर अल्फा ट्रिप्सिन अवरोधक भारी श्रृंखला एच 1 | एक्स | एक्स | ||
| P20073 | एनेक्सिन ए 7 | एक्स | |||
| P20618 | प्रोटेसाम सबयूनेट बीटा टाइप 1 अग्रदूत | एक्स | |||
| P20774 | Mimecan | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P21266 | ग्लुटाथियोन एस ट्रांसफर म्यू 3 | एक्स | |||
| P21333 | फिलामिन ए | एक्स | एक्स | ||
| P21796 | वोल्ट आश्रित आयनों का चयनात्मक चैनल प्रोटीन1 | एक्स | |||
| P21810 | Biglycan | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P21980 | प्रोटीन ग्लूटामाइन गामा ग्लूटामिल ट्रान्सफरेज़ 2 | एक्स | एक्स | ||
| P22105 | टेनास्किन एक्स | एक्स | एक्स | ||
| P22314 | Ubiquitin सक्रिय एंजाइम E1 | एक्स | |||
| P22352 | ग्लुटाथियोन पेरोक्सीडेस 3 अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P22626 | विषम परमाणु रिबोन्यूक्लॉप्टरेटिन ए 2 बी 1 | एक्स | |||
| P22695 | Ubiquinol cytochrome c reductase जटिल कोर प्रोटीन 2 mitochondrial अग्रदूत | एक्स | |||
| P23141 | लीवर कार्बोक्ज़ेलेस्टेस 1 अग्रदूत | एक्स | |||
| P23142 | फिबुलिन 1 | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P23284 | पेप्टिडाइल प्रोलिल सीआईएस ट्रांस isomerase बी अग्रदूत | एक्स | |||
| P23381 | ट्रिप्टोफैनल टीआरएनए सिंथेसेटिस साइटोप्लाजिकिक | एक्स | |||
| P23526 | Adenosylhomocysteinase | एक्स | एक्स | ||
| P23528 | कॉफ़ीलीन 1 | एक्स | |||
| P24752 | एसिटाइल कोए एसिटाइलट्रांसफेरेज मिटोकॉन्ड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| P25311 | जस्ता अल्फा 2 ग्लाइकोप्रोटीएन अग्रदूत | एक्स | |||
| P25705 | एटीपी सिंथेस सबयुनिट अल्फा मिटोचोनड्रल | एक्स | |||
| P25788 | प्रोटेसाम सबिनिट अल्फा टाइप 3 | एक्स | एक्स | ||
| P25789 | प्रोटेसाओम सबिनिट अल्फा टाइप 4 | एक्स | |||
| P26447 | प्रोटीन एस 100 ए 4 | एक्स | |||
| P27348 | 14 3 3 प्रोटीन थीटा | एक्स | एक्स | ||
| P27797 | Calreticulin अग्रदूत | एक्स | |||
| P28066 | प्रोटेसाम सबिनिट अल्फा टाइप 5 | एक्स | |||
| P28070 | <टीडी> प्रोटीसॉम सबयूनेट बीटा टाइप 4 अग्रदूतएक्स | एक्स | |||
| P28072 | प्रोटेसाम सबयूनेट बीटा टाइप 6 अग्रदूत | एक्स | |||
| P28074 | प्रोटेसाम सबयूनेट बीटा टाइप 5 अग्रदूत | एक्स | |||
| P28331 | एनएडीएच ubiquinone oxidoreductase 75 केडीए सबुनाइट मिटोकोंड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| P28838 | साइटोसोल एमिनोपैप्टिडेस | एक्स | |||
| P29218 | इनॉसिटॉल मोनोफोस्फेटस | एक्स | |||
| P29401 | Transketolase | एक्स | |||
| P29692 | बढ़ाव कारक 1 डेल्टा | <td> | एक्स | ||
| P29966 | माइक्रोसॉइलेटेड अलानाइन अमीर सी किनेज सब्सट्रेट | एक्स | |||
| P30040 | एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम प्रोटीन ईआरपी 2 9 अग्रदूत | एक्स | |||
| P30041 | पेरोक्साइडऑक्सीन 6 | एक्स | एक्स | ||
| P30043 | फ़्लाविन रिडक्टेस | एक्स | |||
| P30044 | पेरोक्साइडऑक्सीन 5 मिटोकोंड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| P30085 | यूएमपी सीएमपी किनेज | एक्स | |||
| P30086 | फॉस्फेटिडेलेथिनोलामाइन बाइंडिंग प्रोटीन 1 | एक्स | |||
| P30101 | proteiएन डिल्फाइड isomerase ए 3 अग्रदूत साबित | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P30613 | पाइरूवेट कीनाज आइसोजिम्स आरएल | एक्स | |||
| P30740 | ल्यूकोसैट इलास्टेज अवरोधक | एक्स | |||
| P31025 | लिपोकलिन 1 अग्रदूत | एक्स | |||
| P31937 | 3 हाइड्रॉक्सियिसोब्युटेट डिहाइड्रोजनेज मिटोचोन्डाय्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| P31942 | विषम परमाणु रिबन्यूक्लोप्रोटीन एच 3 | एक्स | |||
| P31943 | विषम परमाणु रिबन्यूक्लोप्रोटीन एच | एक्स | |||
| P31946 | 14 3 3 प्रोटीन बीटा अल्फा | एक्स | एक्स | ||
| P31948 | तनाव प्रेरित फॉस्फोप्रोटीन 1 | एक्स | |||
| P31949 | प्रोटीन एस 100 ए 11 | एक्स | |||
| P32119 | पेरोक्साइडऑक्सीन 2 | एक्स | एक्स | ||
| P34931 | हीट सदमे 70 केडीए प्रोटीन 1 की तरह | एक्स | एक्स | ||
| P34932 | गर्मी झटका 70 केडीए प्रोटीन 4 | एक्स | |||
| P35232 | Prohibitin | एक्स | |||
| P35237 | सर्पिन बी 6 | एक्स | |||
| P35443 | थ्रोम्बोस्पोंडिन 4 | एक्स | </ Tr> | ||
| P35555 | फाइब्रिलिन 1 | एक्स | एक्स | ||
| P35579 | मायोसिन 9 | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P35580 | मायोसिन 10 | एक्स | एक्स | ||
| P35609 | अल्फा एक्टिनिन 2 | एक्स | |||
| P35625 | मेटालोपोटिनेज अवरोधक 3 | एक्स | एक्स | ||
| P35998 | 26 एस प्रोटीज नियामक सब्यूनिट 7 | एक्स | |||
| P36871 | फास्फोग्लुमुटस 1 | एक्स | एक्स | ||
| P36955 | वर्णक एपिथेलियम व्युत्पन्न कारक | एक्स | एक्स | ||
| P37802 | <टीडी> ट्रांसगेलिन 2एक्स | एक्स | |||
| P37837 | Transaldolase | एक्स | |||
| P38117 | इलेक्ट्रॉन ट्रांसफर फ्लैवोप्रोटीन सबयूनेट बीटा | एक्स | |||
| P38646 | तनाव 70 प्रोटीन मिटोकोंड्रियल अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P39687 | एसिडिक ल्यूसिन समृद्ध परमाणु फॉस्फोप्रोटीन 32 परिवार के सदस्य ए | एक्स | |||
| P40121 | मैक्रोफेज कैपिंग प्रोटीन | एक्स | |||
| P40925 | मालेट डिहाइड्रोजनेस साइोपलास्मिइक | एक्स | |||
| P40926 | मालटे डिहाइड्रोजनेज मिटोचोन्डाय्रियल अग्रदूत | <td> | एक्स | ||
| P41219 | Peripherin | एक्स | |||
| P42330 | एल्डो केटो रिडक्टेज परिवार 1 सदस्य सी 3 | एक्स | |||
| P45880 | वोल्टेज निर्भर एंजीन चयनात्मक चैनल प्रोटीन 2 | एक्स | |||
| P47755 | एफ एक्टिन कैपिंग प्रोटीन सबयूनेट अल्फा 2 | एक्स | एक्स | ||
| P47756 | एफ एक्टिन कैपिंग प्रोटीन सबयूनेट बीटा | एक्स | एक्स | ||
| P47985 | Ubiquinol cytochrome c reductase लोहा सल्फर सबुनाइट मिटोकोंड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| P48047 | एटीपी सिंथेस हे सब्युनिट मिटोकोंड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| P48637 | ग्लुटाथियोन सिंथेटेस | एक्स | |||
| P48741 | गर्मी झटका 70 केडीए प्रोटीन 7 | एक्स | एक्स | ||
| P49189 | 4 ट्राइमिथिलमिनब्युट्रैलिहाइड डेहाइड्रोजनेज | एक्स | |||
| P49368 | टी जटिल प्रोटीन 1 सबयूनिट गामा | एक्स | |||
| P49747 | कार्टिलेज ऑलिगॉमरिक मैट्रिक्स प्रोटीन | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P49748 | बहुत लंबी श्रृंखला विशिष्ट एसीएल कोए डिहाइड्रोजनेज मिटोकोंड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| P50395 | रब जीडीपी पृथक्करण अवरोधक बीटा | एक्स | x </ Td> | ||
| P50454 | सर्पिन एच 1 अग्रदूत | एक्स | |||
| P50995 | एनेक्सिन ए 11 | एक्स | |||
| P51452 | दोहरी विशिष्टता प्रोटीन फॉस्फेट 3 | एक्स | |||
| P51884 | Lumican | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P51888 | प्रोलागिन अग्रदूत | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P52565 | रो जीडीपी पृथक्करण अवरोध 1 | एक्स | |||
| P52566 | रो जीडीपी पृथक्करण अवरोध 2 | एक्स | |||
| P54652 | गर्मी झटका से संबंधित 70 केडीए प्रोटीन 2 | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P55072 | संक्रमणकालीन एंडोप्लास्मिक रेटिकुलम एटपैस | एक्स | |||
| P55083 | माइक्रोप्रििलिल जुड़े ग्लाइकोप्रोटीन 4 अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| P57053 | हिस्टोन एच 2 बी टाइप एफ | एक्स | |||
| P60174 | त्रिओसोफॉस्फेट isomerase | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P60660 | मायोसिन प्रकाश पॉलीपेप्टाइड 6 | एक्स | एक्स | ||
| P60709 | एटिन साइटोप्लाजिकिक 1 | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P60981 | Destrin | एक्स | |||
| P61086 | Ubiquitin संयुग्मित एंजाइम E2 25 केडीए | एक्स | |||
| P61088 | Ubiquitin संयुग्मित एंजाइम E2 | एक्स | |||
| P61224 | रास से संबंधित प्रोटीन रैप 1 बी अग्रदूत | एक्स | |||
| P61978 | विषम परमाणु रिबन्यूक्लोप्रोटीन कश्मीर | एक्स | एक्स | ||
| P61981 | 14 3 3 प्रोटीन गामा | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P62258 | 14 3 3 प्रोटीन एप्सिलॉन 14 3 3 ई | एक्स | |||
| P62491 | रास संबंधित प्रोटीन | एक्स | |||
| P62714 | सेरीन थ्रेऑनिन प्रोटीन फॉस्फेट 2 ए कैलेटिक सबयूनेट बीटा आईसोफॉर्म | एक्स | |||
| P62736 | एक्टिन महाधमनी चिकनी पेशी | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P62805 | हिस्टोन एच 4 | एक्स | |||
| P62826 | जीटीपी बंधनकारी परमाणु प्रोटीन भाग गया | एक्स | |||
| P62873 | ग्वानिन न्यूक्लियोटाइड बाइंडिंग प्रोटीन जीआईजीएसजीटी सबयूनेट बीटा 1 | एक्स | |||
| P62879 | गुनाइन न्यूक्लियोटाइड बाइंडिंग प्रोटीन जीआईजीएसजीटी सबयूनेट बीटा 2 | एक्स | |||
| P62937 | पेप्टाइडल प्रोलिल सीआईएस ट्रांस isomerase ए | एक्स | एक्स | ||
| P62987 | Ubiquitin 60S रिबोसोमल प्रोटीन L40 | एक्स | |||
| P63104 | 14 3 3 समर्थकटीन जिटा डेल्टा | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| P63241 | यूकेरियोटिक अनुवाद दीक्षा कारक 5 ए 1 | एक्स | |||
| P63244 | गुनाइन न्यूक्लियोटाइड बाइंडिंग प्रोटीन सबयूनेट बीटा 2 की तरह 1 | एक्स | |||
| P63267 | एक्टिन गामा एंटरिक चिकनी पेशी | एक्स | एक्स | ||
| P67936 | ट्रोपोमायसिन अल्फा 4 श्रृंखला | एक्स | |||
| P68032 | एक्टिन अल्फा कार्डियक स्नायु 1 | एक्स | |||
| P68104 | बढ़ाव कारक 1 अल्फा 1 | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P68133 | एक्टिन अल्फा कंकाल की मांसपेशी | ||||
| P68363 | टूबुलिन अल्फा 1 बी चेन | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P68371 | टूबुलिन बीटा 2 सी चेन | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P68402 | प्लेटलेट सक्रियण कारक एसीटिहाइड्रॉलीज आईबी सबयूनेट बीटा | एक्स | |||
| P68871 | हीमोग्लोबिन उपनिट बीटा | एक्स | एक्स | एक्स | |
| P69905 | हीमोग्लोबिन सबिनिट अल्फा | एक्स | एक्स | ||
| P78371 | टी जटिल प्रोटीन 1 सबयूनिट बीटा | एक्स | |||
| P78417 | ग्लूटाथिने ट्रांसनेशेस ओमेगा 1 | एक्स | एक्स | ||
| P80748 | आईजी लैम्ब्डा चेन VIद्वितीय क्षेत्र LOI | एक्स | |||
| P98095 | फिबुलिन 2 | एक्स | एक्स | ||
| Q01082 | स्पेक्ट्रिन बीटा चेन मस्तिष्क 1 | एक्स | |||
| Q01449 | मायोसिन नियामक लाइट चेन 2 एडीअल आईसोफॉर्म | एक्स | |||
| Q01518 | एडेंनेली cyclase संबद्ध प्रोटीन 1 | एक्स | |||
| Q01995 | ट्रांसगेलिन चिकना पेशी प्रोटीन 22 अल्फा | एक्स | |||
| Q03252 | लैमिन बी 2 | एक्स | एक्स | ||
| Q03591 | पूरक कारक एच संबंधित प्रोटीन 1 अग्रदूत साबित | एक्स | Q04917 | 14 3 3 प्रोटीन एटा | एक्स | एक्स |
| Q06323 | प्रोटेसाओम उत्प्रेरक जटिल उप-भाग 1 | एक्स | |||
| Q06828 | Fibromodulin | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| Q06830 | पेरोक्साइडऑक्सीन 1 | एक्स | एक्स | ||
| Q07507 | Dermatopontin | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| Q07960 | आरओ जीटीपीएज़ सक्रिय प्रोटीन 1 | एक्स | |||
| Q08257 | क्विनोन ऑक्सीडॉर्डेटस | एक्स | |||
| Q08431 | Lactadherin | एक्स | एक्स | ||
| Q12765 | एसईकार्निन 1 | एक्स | |||
| Q13011 | डेल्टा 3 5 डेल्टा 2 4 डिनोयएल कोए आइसोमेरेस मिटोकोंड्रियल अग्रदूत | एक्स | एक्स | ||
| Q13228 | सेलेनियम बाइंडिंग प्रोटीन 1 | एक्स | एक्स | ||
| Q13404 | Ubiquitin conjugating एंजाइम E2 संस्करण 1 | एक्स | |||
| Q13409 | साइोप्लास्मेनिक डाइनिन 1 इंटरमीडिएट श्रृंखला 2 | एक्स | |||
| Q13509 | टूबुलीन बीटा 3 श्रृंखला | एक्स | एक्स | एक्स | |
| Q13642 | चार और एक आधा लिम डोमेन प्रोटीन 1 | एक्स | |||
| Q13765 | नवजात पॉलीपेप्टाइड जुड़े जटिल उप-भाग अल्फा | एक्स | |||
| Q13885 | एन टूबुलिन बीटा 2 ए चेन | एक्स | एक्स | ||
| Q14194 | डायहाइड्रॉपीरिडीनस संबंधित प्रोटीन 1 | एक्स | |||
| Q14195 | डायहाइड्रॉपीरिडीनस संबंधित प्रोटीन 3 | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| Q14624 | इंटर अल्फा ट्रिप्सिन अवरोधक भारी चेन एच 4 अग्रदूत | एक्स | |||
| Q14697 | तटस्थ अल्फा ग्लूकोसिडेस एबी पूर्ववर्ती | एक्स | |||
| Q14764 | मेजर वॉल्ट प्रोटीन | एक्स | |||
| Q14767 | अव्यवस्थित परिवर्तन कारक बीटा बाइंडिंग प्रोटीन 2 | एक्स | <td>एक्स | ||
| Q14894 | म्यू क्रिस्टलीन होमोल एनएडीपी थायराइड हार्मोन बंधनकारी प्रोटीन को नियंत्रित करता है | एक्स | |||
| Q15063 | पेरियोस्टिन अग्रदूत | एक्स | एक्स | एक्स | एक्स |
| Q15084 | प्रोटीन डाइसल्फ़ाइड isomerase ए 6 अग्रदूत | एक्स | |||
| Q15113 | प्रोकोलाजेन सी एंडोपेप्टाइडेस बढ़ाने वाले 1 अग्रदूत | एक्स | |||
| Q15181 | अकार्बनिक पाइरोफॉस्फेटस | एक्स | |||
| Q15365 | पाली आरसी बाध्यकारी प्रोटीन 1 | एक्स | |||
| Q15366 | पाली आरसी बाध्यकारी प्रोटीन 2 | एक्स | |||
| Q15582 | ट्रांसफ़ॉर्मिंग ग्रोथ फैक्टर बीटा प्रेरित प्रोटीन | एक्स | एक्स | एक्स | |
| Q15819 | Ubiquitin conjugating एंजाइम E2 संस्करण 2 | एक्स | |||
| Q16352 | अल्फा इंटरएक्सिन | एक्स | |||
| Q16473 | पुटेटिक टेनास्किन एक्सए | एक्स | |||
| Q16555 | डायहाइड्रॉपीरिडीनस संबंधित प्रोटीन 2 | एक्स | एक्स | एक्स | |
| Q16698 | 2 4 डिनोयएल कोए रीक्टाज़ मिटोकोंड्रियल अग्रदूत | एक्स | |||
| Q16891 | मिटोकॉन्ड्रियल आंतरिक झिल्ली | एक्स | |||
| Q562R1 | बीटा एक्टिन प्रोटीन 2 की तरह | एक्स | |||
| Q6S8J3 | पोट आकीरिन डोमेन परिवार के सदस्य ई | एक्स | |||
| Q6UWY5 | Olfactomedin प्रोटीन 1 अग्रदूत की तरह | एक्स | एक्स | ||
| Q71U36 | टूबुलिन अल्फा 1 ए चेन | एक्स | एक्स | एक्स | |
| Q7Z7G0 | एसएच 3 अग्रदूत के लक्ष्य | एक्स | एक्स | एक्स | |
| Q8WUM4 | प्रोग्रामेड कोशिका मृत्यु 6 इंटरैक्टिंग प्रोटीन | एक्स | |||
| Q8WWX9 | थियरेडॉक्सिन जैसे सेलेनोप्रोटीन एम अग्रदूत | एक्स | |||
| Q92597 | प्रोटीन एनडीआरजी 1 | एक्स | |||
| Q92945 सुदूर अपस्ट्रीम तत्व बाइंडिंग प्रोटीन 2 | एक्स | ||||
| Q96CN7 | Isochorismatase डोमेन युक्त प्रोटीन 1 | एक्स | |||
| Q96CX2 | प्रोटीन वाली बीटीबी पॉज़ डोमेन | एक्स | |||
| Q96KK5 | हिस्टोन एच 2 ए टाइप 1 एच | एक्स | एक्स | ||
| Q96KP4 | साइटोसॉलिक नॉनपेसिफिक डायपेप्टीडिज़ | एक्स | |||
| Q99426 | टुबुलीन विशिष्ट संरक्षक बी | एक्स | |||
| Q99497 | प्रोटीन डीजे 1 | एक्स | एक्स | ||
| Q99536 | सिनैप्टिक फेंके झिल्ली प्रोटीन | एक्स | एक्स | एक्स | |
| Q99714 | 3 हाइड्रोक्साइसीएल सीओए डिहाइड्रोजनेज टाइप 2 | एक्स | |||
| Q99715 | कोलेजन अल्फा 1 XII श्रृंखला | एक्स | एक्स | ||
| Q99798 | हाइड्रेट मिटोकॉन्ड्रियल अग्रदूत बनना | एक्स | |||
| Q9BQE3 | टूबुलिन अल्फा 6 श्रृंखला | एक्स | |||
| Q9BUF5 | टूबुलीन बीटा 6 श्रृंखला | एक्स | एक्स | ||
| Q9BUT1 | 3 हाइड्रोक्सीबायट्रेट डिहाइड्रोजनेज टाइप 2 | एक्स | |||
| Q9BVA1 | टूबुलिन बीटा 2 बी चेन | एक्स | एक्स | एक्स | |
| Q9BXN1 | Asporin | एक्स | x </ Td> | एक्स | एक्स |
| Q9H0W9 | एस्टर हाइड्रोलाज़ C11orf54 | एक्स | |||
| Q9H4B7 | टूबुलीन बीटा 1 श्रृंखला | एक्स | |||
| Q9NRN5 | प्रोटीन 3 अग्रदूत की तरह ओल्फ़ैक्टोमेडिन | एक्स | एक्स | ||
| Q9NRV9 | हेम बाइंडिंग प्रोटीन 1 | एक्स | |||
| Q9NSB2 | केराटिन प्रकार II कटिक्यूलर एचबी 4 | एक्स | एक्स | ||
| Q9NVA2 | सेप्टीन 11 | एक्स | |||
| Q9UBR2 | कैथेशसिन जेड अग्रदूत | एक्स | |||
| Q9UBX5 | फाइबुलिन 5 | एक्स | एक्स | ||
| Q9UK22 | एफ बॉक्स केवल प्रोटीन 2 | एक्स | |||
| Q9Y277 | वोल्टेज निर्भर एंजीन चयनात्मक चैनल प्रोटीन 3 | एक्स | |||
| Q9Y281 | कोफिलिन 2 | एक्स | |||
| Q9Y490 | तालिन 1 | एक्स | |||
| Q9Y696 | क्लोराइड इंट्रासेल्यूलर चैनल प्रोटीन 4 | एक्स | |||
| Q9Y6C2 | इमिलिन 1 | एक्स | एक्स |
तालिका 1: चार अलग-अलग प्रोटिओमिक दृष्टिकोण लागू किए गए थे जब mitral वाल्व ऊतक निकालने में पहचान की प्रोटीन की सूची: दो आयामी वैद्युतकणसंचलन (2-डीई), दो-आयामी एलसी-एमएस ई (2 डी-एलसी / एमएस ई ), एलसी / एमएस ई और तरल-चरण आईईएफ। जिस पद्धति द्वारा प्रत्येक प्रोटीन की पहचान की गई है, उसकी रिपोर्ट की जाती है।
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Discussion
इस प्रोटोकॉल का एक महत्वपूर्ण कदम नमूना फ्रीज करने के लिए तरल नाइट्रोजन का उपयोग और चक्की प्रणाली को ठंडा करने के लिए है। तरल नाइट्रोजन का उपयोग जैविक गिरावट को रोकता है और कुशल पाउडरिंग के लिए अनुमति देता है, लेकिन यह सुरक्षित हैंडलिंग के लिए विशिष्ट प्रशिक्षण की आवश्यकता है।
इस प्रोटोकॉल में नमूना पीसने के लिए एक चक्की प्रणाली है क्योंकि छोटे नमूनों को मानक मोर्टार और पेस्टल से ठीक करना मुश्किल है। इस मामले में, छोटे नमूनों मोर्टार की सतह पर एक अच्छा पाउडर के रूप में फैला हुआ है, संग्रह कठिन प्रदान एक अन्य लाभ यह है कि चक्की मोटर चालित होती है, जो प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके से संसाधित करने के लिए अधिक से अधिक नमूनों की अनुमति देती है और बिना थकावट के। एक चक्की के उपयोग पर एक सीमा यह है कि नमूने के आकार को छोटा करने के लिए (100 मिलीग्राम या उससे कम) मस्तूल के खिलाफ प्रभावी रूप से दबाया जा सकता है इसके अलावा, चक्की के घटकों को क्लीनिन के उपयोग के बीच कमरे के तापमान पर गर्म होना चाहिए जी। नतीजतन, प्रक्रिया समय लगता है और, अगर कई नमूने दैनिक संसाधित होते हैं, तो कई सेटों की ज़रूरत होती है
एक अतिरिक्त महत्वपूर्ण कदम निष्कर्षण बफर की तैयारी है। विशेष रूप से यूरिया (8 एम) और थियोरिया (2 एम) के लिए नमक सांद्रता काफी अधिक है; इस प्रकार, नमक की मात्रा समाधान का कुल मात्रा लगभग आधा है। इसके अलावा, विघटन आसान नहीं है क्योंकि गर्मी को बचा जाना चाहिए क्योंकि 37 डिग्री सेल्सियस से अधिक यूरिया प्रोटीन / पेप्टाइड्स के एन टर्मिनिनी पर प्रोटीन कारबैमिलेशन और लीसेन और आर्जिनेन अवशेषों के साइड-चेन एमिनो समूह पर ले जा सकते हैं। । भंग होने के बाद, यूरिया बफर को 0.22-माइक्रोन फिल्टर से फ़िल्टर्ड किया जाना चाहिए और इसकी निकासी प्रभावकारिता को प्रभावित किए बिना 4 हफ्तों के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है, लेकिन इसे पूर्ण विघटन के लिए अनुमति देने से पहले 15 डिग्री सेल्सियस से अधिक गर्म होना चाहिए ।
संशोधन और समस्या निवारण
Ent "> इस प्रोटोकॉल में, वर्णित यूरिया बफर का उपयोग करके प्रोटीन निष्कर्षण किया जाता है क्योंकि यह प्रोटिओमिक अध्ययनों के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला प्रोटीन निकासी समाधानों में से एक है जिसे आइसोएक्लेक्ट्रोफोकसिंग और संयत रूप से घुलनशील प्रोटीन को सुलझाने में इसकी दक्षता 18 । यह बफर प्रोटीन एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए ब्रैडफ़ोर्ड परख के साथ पूरी तरह से संगत है, और यह बुलर 18 के रूप में एकत्रीकरण के लिए अत्यधिक प्रवण है जैसे अभिन्न झिल्ली प्रोटीन, 19 , या अभिन्न झिल्ली प्रोटीन के रूप में बहुत ही कुशलता से घुलनशील प्रोटीन, solubilize कर सकते हैं कि प्रदर्शन किया। इसे 2-डीई और तरल-चरण आईईएफ विश्लेषण में सीधे इस्तेमाल किया जा सकता है।हालांकि, यह बफर एक नमूना में उपस्थित सभी प्रोटीन के solubilization के लिए आदर्श नहीं है। यह संभव है कि विभिन्न निष्कर्षण बफ़र्स इस प्रोटोकॉल द्वारा पता लगाए जाने वाले प्रोटीनों को प्रकट कर सकते हैं। उदाहरण के लिए, यह अच्छी तरह से kno हैडब्ल्यूएन कि राइबोसोमल और परमाणु प्रोटीन एसिड निष्कर्षण या ट्राइक्लोरोएटेसिटिक एसिड / एसीटोन वर्षा 20 के साथ बेहतर निकाले जा सकते हैं, जबकि क्षारीय पीएच स्तर झिल्ली प्रोटीन 21 , 22 के लिए अधिक उपयुक्त हैं। इसलिए, वैकल्पिक बफ़र्स के उपयोग में 2-डीई या तरल-चरण आईईएफ के साथ हस्तक्षेप वाले नमक को समाप्त करने के लिए प्रोटीन के लिए अतिरिक्त कदम हो सकते हैं।
तकनीक की सीमाएं
इस प्रोटोकॉल द्वारा पहचाने जानेवाले प्रोटीन की संख्या अपेक्षाकृत कम है, लेकिन प्रोटिओमिक विश्लेषण की पहचान और कवरेज की संख्या को और अधिक आधुनिक उपकरणों के उपयोग से बढ़ाया जा सकता है, जिनके द्रव्यमान सटीकता और अनुक्रमण गति पिछले कुछ वर्षों में नाटकीय रूप से बढ़ी है 23। तरल चक्र के लिए लंबे समय तक ढाल को नियोजित करके, प्रोटीम का एक बड़ा हिस्सा, किसी भी प्रीफेक्शनेशन स्टेप्स के बिना कवर करना संभव हैरैमेटोग्राफी अलग-अलग उच्च-रिज़ॉल्यूशन वाले एमएस इंस्ट्रूमेंट के साथ युग्मित है जिसमें तेजी से क्रमिक गति 24 है
मौजूदा / वैकल्पिक तरीकों के संबंध में तकनीक का महत्व
मानव हृदय वाल्वों जैसे कि विकार वाल्व में प्रोटीन की पहचान करने और मात्रा निर्धारित करने की क्षमता एक महत्वपूर्ण और चुनौतीपूर्ण कार्य है जो वाल्व रोगों में शारीरिक / रोग प्रक्रियाओं के तंत्र को स्पष्ट करने में मदद करेगा। मिट्रल वाल्व प्रोटीम के परिवर्तन को परिभाषित करने से ऊतक की बीमारी राज्य से जुड़े जैविक प्रक्रियाओं की प्रकृति की समझ में बहुत वृद्धि होगी।
मैट्रल वाल्व के फिजियोपाथोलॉजी पर वर्तमान ज्ञान सीमित है और आम तौर पर विशिष्ट प्रक्रियाओं में शामिल व्यक्तिगत प्रोटीनों के विश्लेषण के माध्यम से प्राप्त होता है, जैसे बाह्य मैट्रिक्स रीमोडलिंग, हेमोस्टेसिस, सूजन, या ऑक्सीडेटिव तनाव 25 9 , 10 के विश्लेषण पर केंद्रित है।
व्यापक प्रोटिओमिक अध्ययनों की कमी इस कम सेल्युलैटी ऊतक की जटिलता के रूप में हो सकती है जो कि बाह्य मैट्रिक्स प्रोटीन ( यानी, प्रोटीओग्लिचेंस, कोलेजन, और एलिस्टिन) में बहुत अधिक समृद्ध है। ये प्रोटीन कुल राशि का लगभग 80% है, कम-बहुतायत वाले प्रोटीन 26 के विश्लेषण में बाधा डालती है।
इस प्रकार, इस ऊतक के प्रोटीम का वर्णन करने के लिए प्रोटीन solubilization को अधिकतम करने के लिए एक कुशल निष्कर्षण प्रोटोकॉल स्थापित करने के लिए आवश्यक था। इस प्रोटोकॉल को 1 मिलीग्राम ऊतक से ~ 50 ग्राम प्रोटीन निकालने के लिए अनुमति दी गई। यह "नरम" ऊतक से तुलना में अपेक्षाकृत कम उपज है, जैसेजिगर के रूप में (~ 1 मिलीग्राम ऊतक से 135 μg), लेकिन यह व्यक्तिगत नमूनों पर प्रोटीन विश्लेषण करने के लिए पर्याप्त है। यह विशेष रूप से प्रासंगिक है जब एक घटना के अंतर-व्यक्ति परिवर्तनशीलता को परिभाषित करते हैं।
इसके अलावा, इस विधि के कई विश्लेषणात्मक अनुप्रयोगों के साथ संगत होने का लाभ है। प्रस्तावित निकासी बफर में मिश्रित वाल्व प्रोटीन का उपयोग सीधे दो-आयामी वैद्युतकणसंचलन और तरल चरण आइसोइलेक्ट्रोफोरोसिस 11 , 12 या पर आधारित इम्यूनोबलॉटिंग और प्रोटियोमिक विश्लेषण के लिए किया जा सकता है, जैसे अन्य एशेज के लिए बफर घटक के हस्तक्षेप को समाप्त करने के लिए प्रोटीन वर्षा से, जैसे जेल मुक्त जन स्पेक्ट्रोमेट्री 15
इस निष्कर्षण प्रोटोकॉल के आवेदन के साथ, सामान्य मेट्रल वाल्व ऊतक के प्रोटीन घटकों का अधिक विस्तृत लक्षण वर्णन कई इंट्रेलिक्स की पहचान के माध्यम से प्राप्त किया गया हैलुलर प्रोटीन ये प्रोटीन कोशिका कोशिका या ऑर्गेनेल में स्थानीयकृत होते हैं, न केवल बाह्य मैट्रिक्स में, और विभिन्न आणविक और जैविक कार्य हैं। अन्य रोचक प्रोटीन ( यानी, क्रैयाब , सेप्टिन -11 , एफएचएल-1, और डर्माटोपोंतिन) की पहचान भी की गई थी। इन प्रोटीनों के पास मैट्रल वाल्व में अज्ञात कार्य हैं, लेकिन उनके जैविक गुण वाल्व रोगों में एक संभावित भूमिका का सुझाव देते हैं।
इस तकनीक को माहिर होने के बाद भविष्य के अनुप्रयोग या निर्देश
इस प्रोटोकॉल के साथ, मात्रात्मक एमआरएनए अभिव्यक्ति और गैर-मात्रात्मक इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण पर डेटा के साथ प्रोटीन अभिव्यक्ति के संबंध में डेटा को सहसंबंधित करना संभव है। दरअसल, जब एक साथ उपयोग किया जाता है, इन तरीकों से बीमारियों के आणविक तंत्र की अधिक व्यापक समझ मिलेगी, एमआरएनए से पोस्ट-ट्रांसजेशन प्रोटीन संशोधन। इस प्रकार, इस विधि को हृदय वाल्व फिजियोपैथोलॉजी पर केंद्रित शोधकर्ताओं के लिए ब्याज की हो सकती है। पंखसहयोगी, इस प्रोटोकॉल को पोर्किअन मेट्रल वाल्व पर भी लागू किया जा सकता है, जो वाल्व फंक्शन मूल्यांकन के लिए एक प्रयोगात्मक मॉडल के रूप में प्रयोग किया जाता है।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
इतालवी स्वास्थ्य मंत्रालय ने इस अध्ययन का समर्थन किया (आर सी 2013-जैव 15)। हम उत्कृष्ट उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए बारबरा मिशेली का धन्यवाद करते हैं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Saline solution | 0.9 % NaCl | ||
| Eurocollins A | SALF | 30874046 | Balanced organ's transport medium. Combine 400 mL of Eurocollins A with 100 mL Eurocollins B to obtain balanced medium Eurocollins |
| Eurocollins B | SALF | 30874022 | Balanced organ's transport medium. Combine 400 mL of Eurocollins A with 100 mL Eurocollins B to obtain balanced medium Eurocollins |
| Wisconsin | Bridge life | RM/N 4081 | Balanced organ's transport medium |
| Biohazard vertical flow air | Burdinola | Class A GMP classification | |
| Dewar Flask | Thermo Scientific | Nalgene 4150-1000 | |
| Cryogrinder system | OPS diagnostics | CG 08-01 | Grinder system containing mortars, pestles and screwdriver |
| Stainless steel forceps | |||
| Stainless steel spatula | |||
| Disposable sterile scalpel | Medisafe | MS-10 | |
| Stainless steel scissors | Autoclavable | ||
| Stainless steel picks | Autoclavable | ||
| Disposable sterile drap | Mon&Tex | 3.307.08 | |
| Sterilizing solution with isopropyl alcohol | 70% isopropyl alcohol | ||
| Sterilizing solution with hydrogen peroxide | 6% hydrogen peroxide | ||
| Micropipette, 1 mL, with tips | |||
| 15 mL centrifuge tubes | VWR international | 9278 | |
| 1.7 mL centrifuge tubes | VWR international | PIER90410 | |
| Urea buffer | 8 M urea, 2 M thiourea, 4 % w/v CHAPS, 20 mM Trizma, 55 mM Dithiotreitol | ||
| Urea | Sigma aldrich | U6504-1KG | To be used for Urea buffer |
| Thiourea | Sigma aldrich | T8656 | To be used for Urea buffer |
| CHAPS | Sigma aldrich | C3023-5GR | To be used for Urea buffer |
| Dithiotreitol | Sigma aldrich | D0632-5G | To be used for Urea buffer |
| Syringe 50 mL | PIC | To be used to filter Urea buffer | |
| 0.22 µm filter | Millipore | SLGP033RB | To be used to filter Urea buffer |
| PFTE Pestle, 2 mL | Kartell | 6302 | Part of Potter-Elvehjem homogenizer |
| Borosilicate glass mortar | Kartell | 6102 | Part of Potter-Elvehjem homogenizer |
| Stirrer | VELP scientifica | Stirrer DLH | To be used for homogenization by Potter-Elvehjem |
| Bradford Protein assay | Bio-Rad laboratories | 5000006 | |
| Tube rotator | Pbi International | F205 | |
| Liquid nitrogen | |||
| Aluminum foil | |||
| Ice | |||
| Polystyrene box | |||
| Dry ice | |||
| Centrifuge | For centrifugation of 1.7 mL centrifuge tubes at 13,000 x g | ||
| Freezer -80°C | |||
| Precision balance | |||
| Autoclave | For sterilization | ||
| Cryogenic gloves for liquid nitrogen | |||
| Gloves | |||
| Professional forced ventilation and natural air convection oven | For sterilization | ||
| Protease inhibitor cocktail | Sigma aldrich | P8340-5ML | 100X solution |
| ProteoExtract Protein Precipitation Kit | Calbiochem | 539180 | |
| RapiGest | Waters | 186001861 | |
| Cytoscape | www.cytoscape.org | version 2.7 | Software platform for Gene Ontology analysis |
| BiNGO | http://apps.cytoscape.org/apps/bingo | version 3.0.3 | Plugin for Gene ontology analysis |
| AlphaB Crystallin/CRYAB Antibody | Novus Biologicals | NBP1-97494 | Mouse monoclonal antibody against CryAB |
| Septin-11 Antibody | Novus Biologicals | NBP1-83824 | Rabbit polyclonal antibody against septin-11 |
| FHL1 Antibody | Novus Biologicals | NBP-188745 | Rabbit polyclonal antibody against FHL-1 |
| Dermatopontin Antibody | Novus Biologicals | NB110-68135 | Rabbit polyclonal antibody against dermatopontin |
| Goat Anti mouse IgG HRP | Sigma aldrich | A4416-0.5ML | Secondary antibody for immunoblotting |
| Goat Anti rabbit IgG HRP | Bio-Rad laboratories | 170-5046 | Secondary antibody for immunoblotting |
References
- Vogel, C., Marcotte, E. M. Insights into the regulation of protein abundance from proteomic and transcriptomic analyses. Nat Rev Genet. 13 (4), 227-232 (2012).
- de Sousa Abreu, R., Penalva, L. O., Marcotte, E. M., Vogel, C. Global signatures of protein and mRNA expression levels. Mol Biosyst. 5 (12), 1512-1526 (2009).
- Hanash, S. Disease proteomics. Nature. 422 (6928), 226-232 (2003).
- Ahram, M., Petricoin, E. F. Proteomics Discovery of Disease Biomarkers. Biomark Insights. 3, 325-333 (2008).
- Chandramouli, K., Qian, P. Y. Proteomics: challenges, techniques and possibilities to overcome biological sample complexity. Hum Genomics Proteomics. 2009, (2009).
- Singleton, C. Recent advances in bioanalytical sample preparation for LC-MS analysis. Bioanalysis. 4 (9), 1123-1140 (2012).
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