Summary
אנו מציגים שיטה מפורטת ללמוד פיזיולוגיה שליה אנושית ב vivo בטווח. השיטה משלבת דגימת דם מן הכלים הנכנסים והיוצאים על צדדי האם והעובר של השליה עם מדידות אולטראסאונד של זרימת הדם בנפח ודגימת רקמת השליה.
Abstract
השליה האנושית אינה נגישה במיוחד למחקר, בעוד שעדיין נמצא ברחם . ההבנה הנוכחית של הפיזיולוגיה השליה של האדם in vivo מבוססת אפוא במידה רבה על מחקרים בבעלי חיים, למרות המגוון הגבוה בין המינים באנטומיה שליה, המודינמיקה ומשך ההיריון. הרוב המכריע של מחקרים אנושיים השליה הם מחקרים vivo זלוף לשעבר או במבחנה מחקרים trophoblast. למרות במבחנה ומודלים של בעלי חיים חיוניים, אקסטרפולציה של תוצאות ממחקרים כאלה אל השליה האנושית in vivo אינו ברור. מטרתנו הייתה לחקור את הפיסיולוגיה של השליה האנושית ב- vivo , ולהציג פרוטוקול מפורט של השיטה. ניצול הגישה תוך intraabinal כדי הווריד הרחם ממש לפני החתך הרחם במהלך ניתוח קיסרי מתוכנן, אנו אוספים דגימות דם מן הכלים נכנסות ויוצאות על הצדדים האימהית והעובר של השליה. בעת שילוב conמידות מדידה מ דגימות דם עם נפח מדידות זרימת הדם, אנו יכולים לכמת שליה שליה ועובר ושחרור של כל המתחם. יתר על כן, דגימות רקמות שליה מן אותם זוגות העובר אותו יכול לספק מדידות של צפיפות טרנספורטר ופעילות היבטים אחרים של פונקציות השליה in vivo . באמצעות שימוש אינטגרטיבי זה בשיטת הדגימה של 4 כלי הדם אנו יכולים לבחון חלק מהמושגים הנוכחיים של העברת חומרים מזינים ושל חילוף החומרים ב vivo , הן בהריונות נורמליים ופתולוגיים. יתר על כן, שיטה זו מאפשרת זיהוי של חומרים מופרשים על ידי השליה כדי במחזור האם, אשר יכול להיות תרומה חשובה לחיפוש עבור סמנים ביולוגיים של תפקוד לקוי של השליה.
Introduction
על פי המכונים הלאומיים לבריאות, ארה"ב, השליה היא האיבר הכי פחות מובן בגוף האדם 1 , 2 , 3 . קשה לגשת וללמוד את השליה האנושית in vivo ללא הטלת סיכונים לא מוסריים על ההריון המתמשך. מחקרים על תפקוד שליה אצל האדם מבוססים אפוא במידה רבה על מודלים במבחנה ובבדיקות ex vivo . רוב מחקרים קודמים vivo של תחבורה השליה ומטבוליזם בוצעו בבעלי חיים 4 , 5 , 6 . עם זאת, כמו מבנה השליה פונקציות להשתנות במידה ניכרת בין המינים, אקסטרפולציה של תוצאות מבעלי חיים לבני אדם חייב להיעשות בזהירות. רק מספר קטן יותר של בני אדם במחקרי vivo חקר ספיגת שליה ועובר ותחבורה תחת פיזיולוגיה נורמליתאל, ואף אחד מהם לא חקר את ההעברה המשולבת של מספר תרכובות 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 . מחקרים בסיסיים אלה מראים כי במחקרים של vivo של השליה האנושית הם ריאליים, וכי הם עשויים לשרת מטרות אחדות. ראשית, מושגים עכשוויים של פונקציות השליה הנובעים בעיקר ממחקרים במבחנה , בחיות לשעבר ובבעלי חיים עשויים להיות נבדקים בסביבה אנושית ובכך לספק תובנה חדשה וספציפית יותר לשיליה האנושית. שנית, המאפיינים של השליה התפקודית הקשורה לצמיחה עוברית חריגה, רעלת הריון, סוכרת אימהית, תסמונת מטבולית והפרעות מטבוליות אימהיות אחרות יכולות להיות מאופיינות יותר. שלישית, האדם במחקרים vivo לספק הזדמנות לפתח אבחוניםטיק כלי ניבוי של תפקוד השליה.
על רקע זה התכוונו להקים אוסף מקיף של נתונים פיזיולוגיים כדי לחקור את תפקוד השליה האנושית in vivo. במהלך ניתוח קיסרי מתוכנן, אנו מנצלים את הגישה intraabdominal לוריד הרחם כדי לאסוף דגימות דם מן הכלים הנכנסים והיוצאים על צדדי האם והעובר של השליה (שיטת דגימת 4 כלי). דגימות אלה משמשים לחישוב ההפרשים ריכוז arteriovenous זוגיות של חומרים מזינים וחומרים אחרים 14 . בנוסף, אנו מודדים את זרימת הדם על שני צידי השליה על ידי אולטרסאונד. כתוצאה מכך, ספיגה שליה ועובר של כל מתחם ניתן לכמת. יתר על כן, ניתן לקבוע חומרים משוחררים על ידי השליה כדי מחזורי האם והעובר 15 , 16 , 17 . כאשר משלביםד עם פרמטרים קליניים של האם והילד, וכן ניתוחים של שליה ורקמות רלוונטיות אחרות, שיטה זו יש פוטנציאל מלהיב לשלב היבטים רבים של פונקציות השליה in vivo באותם זוגות העובר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
המחקר אושר על ידי אנשי הגנת הנתונים בבית החולים האוניברסיטאי של אוסלו והוועדה האזורית לאתיקה למחקר רפואי ובריאותי, דרום נורבגיה 2419/2011. כל המשתתפים חתמו על הסכמה מדעת בכתב להכללה.
1. הכנות
הערה: ציר זמן עבור ההליכים מתואר באיור 1 .
איור 1 : תרשים זרימה המתאר את התזמון ואת כוח האדם המעורב בהליך הדגימה של 4 כלי הדם.
צבע אחד מייצג אדם אחד. תיאור מפורט של השיטה ניתן בפרוטוקול. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
- צוות
- הכן את הציוד, 50 מ"ל של קרח קר 1 ז פוספט שנאגרו מלוחים (PBS), 25 מ"ל של פתרון ייצוב קר RNA ו 5 x 0.5 מ"ל של מתחם טמפרטורת חיתוך אופטימלי (אוקטובר). תווית את vacutainers וצינורות. ראה רשימה של ציוד זמני.
2. מאפיינים אימהיים
- רשום את המאפיינים הקליניים והאי-קליניים האימהיים בהכללה וחזור על השאלות הרלוונטיותלרבות משקל, בעת המשלוח. רשום את משך תקופת הצום לפני הניתוח קיסרי, וכל epotodes hypotensive המתרחשים במהלך הניתוח.
הערה: כלול את הנתונים הקליניים האימהיים המינימליים שדווחו בפרסום שפורסם לאחרונה מ- Global Pregnancy CoLaboratory (COLAB). מאמר זה כולל גם כמה היבטים חשובים מאוד בבחירת אוכלוסיות מחקר וצריך להתייחס בעת תכנון המחקר 18. - שקול להקליט מאפיינים אבהי, כולל אתני, גיל מדד מסת הגוף (BMI).
3. אולטרסאונד
- בצע את בדיקת אולטרסאונד דופלר ביום המסירה, עם הנשים במצב צום. בצע את הבדיקה במהלך תקופה של שלווה העובר, עם האשה במצב חצי שכיבה, מוטה מעט בכיוון רוחבי מול האזור של עניין על מנת למנוע דחיסה של אבי העורקים ו cava הווריד. צג את הפלט בעל ידי המדדים המכניים והתרמיים שבתצוגה.
- וריד טבורי
- דמיינו את הווריד הטבורי ב טרשת נפוצה סגיטלית או אלכסונית של הבטן העובר. למדוד את קוטר כלי פנימי בחלק ישר של הבטן הטבור תוך בטן, לפני כל הענפים נראים לעין. השתמש רגיל B- מצב לדמיין את כלי זווית זווית אנכית עבור מדידות בקוטר ולשמור כמה מסגרות אופטימלי עבור מדידות מאוחר יותר כדי למזער את ההשפעה של שינויים בקוטר pulsatile.
- חזור על המדידות חמש עד עשר פעמים 19 .
- באותו אתר, השתמשו באולטרסאונד של דופלר והתאימו את החללית כדי לקבל זווית חדירה נמוכה ככל האפשר (תמיד <30 °) כדי למדוד את המהירות המקסימלית בזמן (TAMX). השג את המהירות על פני תקופה של 3 - 5 שניות (זרימה לא פולטת).
- דמיינו את הווריד הטבורי ב טרשת נפוצה סגיטלית או אלכסונית של הבטן העובר. למדוד את קוטר כלי פנימי בחלק ישר של הבטן הטבור תוך בטן, לפני כל הענפים נראים לעין. השתמש רגיל B- מצב לדמיין את כלי זווית זווית אנכית עבור מדידות בקוטר ולשמור כמה מסגרות אופטימלי עבור מדידות מאוחר יותר כדי למזער את ההשפעה של שינויים בקוטר pulsatile.
- עורק הרחם
- השתמש דופלראולטרסאונד כדי להמחיש את עורק הרחם כפי שהוא חוצה את עורק השלפוחית החיצונית, מיד לאחר ענפים מן העורק iliac הפנימי. התאם את החללית באתר זה כדי לקבל זווית החדרה נמוכה (תמיד <30 °) ולמדוד TAMX. השג את מהירות המהירות הממוצעת של שלושה מחזורי לב.
- כפי שזה לא סביר לקבל זווית אנכית באותו אתר כמו TAMX נמדד, בצע את כלי דיסטלי כדי לקבל זווית נכונה למדידות קוטר קרוב ככל האתרים של מדידות קוטר כמו בר השגה. לא לכלול את מדידות קוטר אם כל כלי הנראה לעין מחוץ לאתר זה כפי שהוערך על ידי אולטרסאונד צבע דופלר.
- השתמש רגיל B- מצב לדמיין את כלי זווית זווית אנכית עבור מדידות בקוטר ולשמור כמה מסגרות אופטימלי עבור מדידות מאוחר יותר כדי למזער את ההשפעה של שינויים בקוטר pulsatile.
- חזור על המדידות חמש עד עשר פעמים 19 .
- הערה המיקום של השליה.
4. 4 כלי דם דגימה דם
הערה: ציר הזמן עבור ההליכים מתואר באיור 1 סקירה כללית של דגימות מתואר באיור 2 .
איור 2 : איור סכמטי של כלי הדם של השלד ואתרי הדגימה.
בשיטת הדגימה של 4 כלי הדם נלקחים דגימות דם מווריד הרחם, העורק הרדיאלי (כציר פרוקסי לעורק הרחם) ועורקי הטבור והווריד. זרימת הדם בעורק הרחם ואת הווריד הטבורי נמדדת על ידי אולטרסאונד. דגימות רקמות מן השליה נאספים. איור: Øystein H. Horgmo, אוניברסיטת אוסלו.5847fig2large.jpg "target =" _ blank "> אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
- נהלי בטיחות
- לספק את כל אנשי המבצע תיאטרון עם כפפות, חליפות שפשוף כירורגי, מסכות ו headwear.
- לספק את המנתחים ואנשי מחקר במגע עם שדה הפעולה עם חליפות שיחים כירורגי, מסכות, headwear, שמלות כפפות כפולות. משקפיים הם אופציונליים.
- לספק כוח אדם טיפול בדגימות דם עם כפפות.
- לספק אנשי טיפול דגימות שליה עם כפפות מסכה כירורגית. ההומוגניזציה דורשת שימוש ברדסים.
- הכנה בחדר הניתוח
- לתת תדרוך ולספק את הציוד לכל אנשי כי יסייע הדגימה לפני תחילת הניתוח.
- פנה אל רופא המרדים ואחות ההרדמה שיעזור עם הגישה העורקיית והפרידית היקפית, ולוודא כיאין נוזלים ניתנים תוך ורידי לפני הדגימה.
- תן שלושה מזרקים (10 מ"ל) ללא מחטים לאדם המסייע עם מדגם וריד antecubital ושני מזרקים (אחד 20 מ"ל ואחד 10 מ"ל) ו מזרק גז אחד (עם הפרין) לאדם המסייע עם העורק הרדיאלי.
- הכן שני מזרקים סטריליים (20 מ"ל), חמישה מזרקים סטריליים (10 מ"ל), שלושה "מחטים פרפר" ושני גז מזרקים עבור שדה הפעולה.
- גישה לכלי הדם.
- בצע את ההליך הסטנדרטי לפני הניתוח קיסרי כדי להבטיח גישה תוך ורידי תוך ורידי (iv).
הערה: וריד אנטיקוביטל עדיף כי קל יותר לצייר דוגמאות מאתר זה. - למקם את העורק הרדיאלי על פרק היד על ידי אולטרסאונד או על ידי מישוש. לאחר 0.5 מ"ל של שיכוך לידוקאין תת עורית, במקום קו עורק לתוך העורק הרדיאלי. ננטוש את הדגימה מאתר זה במקרה של שלוש כניסות כושלות, אואם האישה חווה כאב במהלך ההכנסה.
הערה: בצע את הניתוח של ניתוח קיסרי על פי הנוהל הסטנדרטי. רק ההתאמות הדרושות להליך הדגימה מפורטות להלן.
- בצע את ההליך הסטנדרטי לפני הניתוח קיסרי כדי להבטיח גישה תוך ורידי תוך ורידי (iv).
- דגימות דם אימהיות
הערה: השג את כל שלוש דגימות הדם האימהיות (וריד הרחם, העורק הרדיאלי והוריד האנטי-ווביטאלי) בו זמנית לפני חתך הרחם.- עבור הווריד הרחם, לאחר פתיחת חלל הבטן, להשתמש מפשק להרים את דופן הבטן לחשוף את הענפים העיקריים של הוורידים הרחם על הצדדים anterolateral של הרחם. השג דם בענפי וריד הרחם באותו צד כמו שליה ככל האפשר או להשתמש במקלדת הווריד הבולטת ביותר אם השיליה ממוקמת קו האמצע הרחם.
- הכנס מחט פרפר על מזרק גז דם בווריד הרחם בזווית של כ 30 מעלות ולאסוף דם באמצעות שאיפה עדינה, כדי להימנעהמוליזה. בעוד בזהירות לאבטח את המיקום הרביעי של מחט פרפר, להחליף את מזרק גז מלא דם על ידי 20 מ"ל ו מזרק 10 מ"ל ברציפות.
הערה: גישה אופטימלית מובטחת בצורה הטובה ביותר כאשר עומדים בצד הנגדי של הווריד הרחם הנבחר.
- הכנס מחט פרפר על מזרק גז דם בווריד הרחם בזווית של כ 30 מעלות ולאסוף דם באמצעות שאיפה עדינה, כדי להימנעהמוליזה. בעוד בזהירות לאבטח את המיקום הרביעי של מחט פרפר, להחליף את מזרק גז מלא דם על ידי 20 מ"ל ו מזרק 10 מ"ל ברציפות.
- עבור עורק הרדיאלי, לשאוב מן הקו הפנימי עורק. מחק את 5 מ"ל הראשון, ולאחר מכן לשאוב 3 מ"ל מזרק הפרין עבור ניתוחי גז, ואחריו 3 מ"ל בשני מזרקים (20 + 10 מ"ל).
- עבור הווריד האנטי-ווביטאלי, שואפים בעדינות מן הקטטר תוך ורידי. מחק את 5 מ"ל הראשון, ולאחר מכן לשאוב 30 מ"ל בשלושה מזרקים (10 מ"ל).
- בצע בדיקה סופית של אתר הדגימה על הווריד הרחם לפני שתתחיל לסגור את הבטן.
- עבור הווריד הרחם, לאחר פתיחת חלל הבטן, להשתמש מפשק להרים את דופן הבטן לחשוף את הענפים העיקריים של הוורידים הרחם על הצדדים anterolateral של הרחם. השג דם בענפי וריד הרחם באותו צד כמו שליה ככל האפשר או להשתמש במקלדת הווריד הבולטת ביותר אם השיליה ממוקמת קו האמצע הרחם.
- דגימות דם עובריות
- כאשר הילד נולד, מיד לשאוב דם מן העורק הטבורי, ללא clamping חבל הטבור או מתן השליה. התחל שנינותH מזרק לניתוח גז, ופעל עם שלוש מזרקים 10 מ"ל אם אפשר.
- כאשר הדגימות עורק מאובטח, מהדק את החבל ואת היד הילד למיילדת לפני הדגימה של וריד הטבור (גז דם 20 + 10 מ"ל מזרקים).
הערה: השג את כל דגימות הטבור בתוך שניות של לידה ועם השליה באתרה, אלא אם כן היא מנותקת באופן ספונטני. - בצע את ההמלצות הנורבגית על הידוק כבל מאוחר. במקרה של ילד במצוקה, מהדק וחותך את הכבל מיד ואת היד את הילד המיילדת ו neonatologist.
- טיפול בדגימות דם
- שים את גז מזרקים על הקרח תוך הכנת שאר דגימות הדם, ולנתח אותם מנתח גז בדם בתוך 5 דקות.
- מעבירים את דגימות הדם מיד vacutainers ומקום צינורות פלזמה על נדנדה עבור 1 - 2 דקות לפני לשים אותם על הקרח. השאירו את צינורות הסרום על העבודהספסל אטורי להתיישב במשך 30 דקות.
הערה: זהו שלב קריטי בהליך זה צריך תשומת לב נוספת, כי דגימות מכל חמשת האתרים צריך להיות מוכן בו זמנית כדי להבטיח איכות טובה. - צנטריפוגה דגימות פלזמה בהקדם האפשרי, תוך 30 דקות, ב 6 מעלות צלזיוס, 2,500 xG במשך 20 דקות.
- לאחר 30 דקות, צנטריפוגה דגימות בסרום בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות ב 2,500 x גרם.
- Aliquot supernatants בזהירות 2 צינורות cryo מ"ל, משאיר 0.5 מ"ל של supernatant מעל גלולה כדי להבטיח טסיות פלסמה חינם.
- חנות דגימות ב -80 מעלות צלזיוס.
5. אוסף של רקמת השליה
- מניחים את השליה שטוח על מגש קרח לנתיחה צונן בהקדם האפשרי לאחר שהוא נמסר. צילום ולמדוד את הקוטר הארוך ביותר ואת הקוטר ב 90 מעלות.
- שקלו את השליה.
- רשום את המשקל, את שני הקטרים, כל gRoss פתולוגיה, מספר כלי החוט ואת מרווח הזמן בין משלוח כאשר השיליה הונחה על הקרח.
הערה: שלחו את השליה לבדיקה פתולוגית, אם צוין קלינית. - מניחים את השליה עם פני האם מול למעלה ולזהות 4 - 5 אתרי הדגימה ממוקמים באופן אקראי בכל רבע של השליה, הימנעות תחומים של הפתולוגיה כנה. הסר את decidua באמצעות מספריים לחתוך 3 - 5 מ"מ מן פני האם. איסוף 1 - 2 ס"מ 3 חתיכת רקמת וילות מכל אתר.
- לשטוף את הרקמה שנאספו בעדינות 50 מ"ל של 1M קר 1 PBS. מחלקים למספר חלקים מכל אתר דגימה ואליקוט.
הערה: גודל החלקים של השליה יהיה תלוי בניתוח המתוכנן. - הוסף aliquots של 0.1 - 0.5 ס"מ 3 דגימות רקמות 5 צינורות cryo ו הצמד להקפיא חנקן נוזלי.
- הוסף חתיכות קטנות של 0.1 - 0.2 ס"מ 3 לצינור עם 25 מ"ל של פתרון ייצוב RNA. חנות ב 46; C במשך 24 שעות, להשליך את הפתרון ייצוב ייצוב ולהחליף אותו. הַקפָּאָה.
- הוסף חתיכות של 0.5 ס"מ 3 כדי 5 cryo צינורות עם 0.5 מ"ל של אוקטובר, למעלה עם אוקטובר, לערבב להקפיא.
- חנות דגימות ב -80 מעלות צלזיוס עד הניתוח.
הערה: Burton et al. מספק סקירה מצוינת של היבטים מעשיים של דגימת השליה בהתאם לניתוחים מתוכננים. 20 שקול להכין את הרקמה הנותרת לבידוד של הממברנות microvillous והבזליים, וכדי לאסוף רקמה נשית על ידי טכניקה יניקה ואקום. 21 , 22
6. מאפיינים ילודים
- הקלט את המאפיינים הילודים, כולל אפגר-ניקוד (1, 5 ו -10 דקות), מין, משקל, אורך, גיל ההיריון וקבלה ליחידה לטיפול נמרץ בילודים (אורך ותוצאה של שהייה).
- שקול למדוד את הרכב הגוף הלידה על ידי מדידות אנתרופומטריות, האוויר לעקוףמנטלית או רנטגן כפול של רנטגן. 23 , 24
7. חישובים
- נניח הרכב דם דומה בעורק הרדיאלי והרחם ולחשב את ההבדל ריכוז arterilacental uteroplacental.
הפרשת ריכוז arteriovacental Uteroplacental = C A - C V
טבורי ורידי - ריכוז העורקים ההבדל = C V - C א
איפה C הוא ריכוז עם תחתי: א, עורק הרדיאלי; V, הווריד הרחם; V הווריד הטבורי ועורק הטבור. - חישוב נפח זרימת הדם, מ"ל / דקה (Q):
כאשר D הוא קוטר הספינה (ס"מ), TAMX היא מהירות הזמן המקסימלית בזמן ו - h הוא מקדם עבור פרופיל הדם המרחבי פרופיל. השתמש 0.5 כמו מקדם עבור וריד הטבור0.6 עבור עורק הרחם 25 , 26 . - חישוב ספיגת השלייה ושחרור על פי העיקרון של פיק:
ספיגה Uteroplacental = ( C A - C V ) x Qm
ספיגה העובר = (v C - C) X Q f
תחביבים: מ ', אמהית ו- f, עוברית.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
שיטת הדגימה של 4 כלי הדם מיושמת בקליניקה הקלינית וקיבלנו בהצלחה דגימות דם מ -209 זוגות אם / תינוקות. ב 128 של אלה השגנו גם למדוד את נפח הדם. דגימה מלאה של 4 כלי דם ומדידות זרימה באיכות טובה של כלי הדם האימהיים והעובריים התקבלו ב -70 זוגות של האם-עובר ( איור 3 ). בנוסף, עד כה אספנו דגימות דם ושליש מ -30 חולים טרום-דלקתיות. פרסמנו בעבר מאמרים על העברת השליה אנושית של חומרים מזינים, כמו גם שחרור שליה של גורמים vasoactive, הוכחת שני יישומים של השיטה 14 , 15 , 16 .
דוגמה כיצד שיטת 4-כלי משמש ללימוד העברת השליה
יש arteri משמעותיהבדלים גלוקוז של התנוחות משני צידי השליה המדגימים את ספיגת הגלוקוז ( טבלה 1 ) ב vivo uteroplacental ועובר. ההעברה השליה של גלוקוז תלויה בשיפוע הגלוקוז האימהי-עוברי, ובכך על רמות הגלוקוז האימהי. עם זאת, הוכחנו בעבר כי מעבר זה, ולכן העברת גלוקוז, מושפע באופן משמעותי גם על ידי רמות אינסולין העובר וצריכת גלוקוז. זוהי דוגמה לאופן שבו שיטה זו מדגימה אינטראקציה בין-אמהית-עירונית חשובה 14 .
| כְּלִי שַׁיִט | גלוקוז mmol / L | P-value * |
| העורק הרדיאלי | 4.49 [4.22, 4.84] | |
| ורידים ברחם | 4.23 [3.94, 4.53] | |
| וריד טבורי | 3.78 [3.52, 4.06] | |
| עורק טבורי | 3.24 [2.95, 3.56] | |
| הבדלים מותאמים | ||
| עורק רדיאלי - וריד הרחם | 0.29 [0.13, 0.41] | <0.001 |
| עורק טבורי - וריד טבורי | 0.54 [0.29, 0.76] | <0.001 |
| עורק רדיאלי - עורק טבורי | 1.25 [1.03, 1.51] | <0.001 |
טבלה 1: ריכוזי חציון (Q1, Q3) והפרעות ארטריובניות של גלוקוז
* Wilkoxon חתום מבחן דרגה
ספיגת גלוקוז העובר מ (שחרור השליה ל) מחזור הטבור הוא האמין להיות תלויים לא רק oN שיפוע אימהי-עוברית, אבל על זרימת דם שליה 5 . כמו כן, זה עשוי להיות רלוונטי לחקור את ספיגה גלוקוז העובר כפונקציה של משקל שליה או משקל הלידה. ב- n = 128 מצאנו חציון זרימה ורידי טבורי של 196.2 [158.3, 232.2] mL / min, וחישב חציון [Q1, Q3] ספיגת גלוקוז עוברי (שחרור שליה) את מחזור הטבור של 0.10 [0.05, 0.15] mmol / min. מנורמל במשקל הלידה הוא 0.03 [0.02, 0.04] (mmol / min) / kg. השליה משחררת 0.16 [0.10, 0.26] (mmol / min) לכל ק"ג שליה.
דוגמה כיצד השיטה 4-כלי משמש ללמוד ספיגה שליה
מחקרים בבעלי חיים מצביעים על כך שחומצת גלוטמית חשובה הן בחילופי גומלין בין חומצות אמינו בשיליה והן בכבד העובר, וכדלק חמצוני במסלולים מטבוליים אחרים 27 . באמצעות דגימה של 4-כלי דגימה שיטה למדנו את uהפרעות arteriovenous terroplacental ו טבורי של חומצה גלוטמית בבני אדם ( טבלה 2 ). מצאנו ספיגה שליה (ובכך שחרור עוברית) של חומצה גלוטמית מהמחזור הטבורי. כמו כן מצאנו ספיגה שליה של חומצה גלוטמית מהמחזור האימהי. זה ספיגה שליה משני מחזורי הוא דוגמה כיצד שיטת 4-כלי ניתן להשתמש כדי להדגים in vivo אצל האדם כי חילוף החומרים השליה של חומרים מזינים הוא חלק הרגולציה של transplacental ההעברה.
| כְּלִי שַׁיִט | חומצה גלוטמית μmol / L | P-value * |
| העורק הרדיאלי | 61.5 [51.0, 77.7] | |
| ורידים ברחם | 51.0 [36.3, 65.0] | |
| וריד טבורי | 39.3 [24.7, 52.8] | |
| עורק טבורי | 44.7 [33.1, 59.3] | |
| הבדלים מותאמים | ||
| עורק ראדיאלי - עורק הרחם | 10.4 [1.6, 21.2] | <0.001 |
| עורק טבורי - ווריד | -8.7 [-16.0, 0.2] | <0.001 |
טבלה 2: חציון [Q1, Q3] ריכוז והפרעות ארטריובנוס של חומצה גלוטמית
* Wilkoxon חתום מבחן דרגה
דוגמה כיצד שיטת 4-כלי משמש ללמוד לשחרר שליה
הוא קבע כי השליה מפריש פרוגסטרון ועל מנת לאמת את שיטת 4 כלי שלנו בצד האימהי של השליה, מדדנו את שחרור vivo של פרוגסטרון ב te 28 . מצאנו שליה משמעותית של פרוגסטרון למחזור האימהי ( טבלה 3 ). הבדל ארטריובנוס שנצפה ממחיש כיצד ניתן להשתמש בשיטת הדגימה של 4 כלי הדם כדי לזהות חומרים המשתחררים על ידי השליה, והיא רלוונטית מאוד כאשר לומדים הריונות פתולוגיים.
| כְּלִי שַׁיִט | פרוגסטרון nmol / L | P-value * |
| העורק הרדיאלי | 678 [514, 971] | |
| ורידים ברחם | 1852 [1059, 2786] | |
| הבדלים מותאמים | ||
| עורק ראדיאלי - עורק הרחם | -1187 [-1855, -404] | P <0.001 |
בתוך עמוד = "1"> טבלה 3: חציון ריכוזי חציון Q1, Q3 וריכוז פרוגסטרון uteroplacental של פרוגסטרון
* Wilkoxon חתום מבחן דרגה
איור 3 : תרשימי זרימה ואיור של משתתפים שנכללו ואיבדו.
א. מציג את ההכללה של המשתתפים, מדגימה כי המשתתפים אבדו בעיקר בשל תחילת העבודה לפני ניתוח קיסרי או חוסר מספיק כוח לביצוע המחקר. .ב 179 נשים עם הריונות תקינים (כחול) דגימות דם 4-כלי שלמים התקבלו 162 (91%) (דגימות דם עוברי שלמות: שחורה, דגימות דם אימהיות שלמות: אפור). חמישים ואחת (28%) מהמשתתפים לא נכללו במדידות אולטרה-סאונד בשל מגבלות לוגיסטיות. מתוך 128 משתתפים (72%) היו נתונים לאולטרסאונד, מדידות זרימת הדם בצד העובר של השליה התקבלו בכל המשתתפים (אור ירוק), בעוד שמדידות זרימת הדם המלאות הן בצד העובר והן מצד העובר התקבלו ב -77 (60%), (ירוק כהה). איור: Øystein H. Horgmo, אוניברסיטת אוסלו. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
שיטת הדגימה של 4 כלי השיט היא רלוונטית לשלוש מטרות עיקריות. ראשית, ניתן להשתמש בו כדי ללמוד כיצד חומרים ספציפיים נלקחים על ידי השליה בצד האימהי ואולי מועברים למחזור הטבור ולעובר, כפי שמוצג על ידי גלוקוז שלנו ומחקרים חומצות אמיניות. שנית, השיטה רלוונטית מאוד לחקר חומרים המיוצרים על ידי השליה ושוחררה להזרמת האם או העובר, כפי שמוכיחה תוצאות הפרוגסטרון. שלישית, זה עשוי להיות שימושי כדי ללמוד כיצד העובר in vivo מבטל פסולת מוצרים במהלך הצמיחה המהירה ואת שיפוץ רקמות.
צעדים קריטיים ונושאים לוגיסטיים של שיטת 4 כלי השיט
דגימה של 4 כלי שיט שימש בעבר כדי לקבוע את ההעברה השליה של macronutrients in vivo הריונות פיזיולוגיים נורמלי 8 , 10 ,Ss = "xref"> 12, אך עם מספר מוגבל של מקצועות לימוד. השימוש המוגבל בדגימת 4 כלי השיט הוא כנראה בגלל הלוגיסטיקה התובענית של התהליך. תיאום מוצלח בין החולה, החוקרים והאנשי במחלקות לעובר-רפואה, מיילדות והרדמה הוא חיוני לצורך שימוש בשיטה זו. אנו מאמינים כי זה היה יתרון גדול כי כמה מהחוקרים העיקריים הם מיילדים, לדעת רוטינות קלינית אנשי מפתח. בהתאם לכך, הליכי המחקר יושמו לצד הפרקטיקה הקלינית היומיומית. על ידי תיאום ואבטחת כל צעד של ההליך, השגנו דגימות של מעל 200 אמא / יילוד זוגות. יתר על כן, האסטרטגיה שלנו היא לשמור על הליך הדגימה על כמה ידיים כי יש אתגרים טכניים בהליך כי הם מכריע על התוצאה המוצלחת של הדגימה, וגם יותר מדי דוגמאות יכול להציג מקורות מיותרים של וריאציה של הנתונים. כתוצאה מכךאנו ממליצים שכל הבדיקות הסונוגרפיות יבוצעו על ידי אותו הבודק באמצעות אותה מכונת אולטרסאונד. הציוד צריך להיות נבחר עם טיפול, כמו ההחלטה של קיר כלי הוא חיוני. העורקים הרחם בשליש השלישי הם מאתגרים מבחינה טכנית במיוחד כדי למדוד כי גודל הרחם ותוכן מקשה להשיג הן זווית ההטיה אנכית המשמש למדידות קוטר, ואת זווית ההטיה נמוכה מדידות מהירות הזרימה באותו אתר. יתר על כן, דגימת דם מוצלחת דורשת זיהוי של אתר דגימה מתאים של וריד הרחם ושאיפה עדינה. בצד הטבורי השבריריות של אריתרוציטים עוברית דורשת תשומת לב מיוחדת לכוח השאיפה. זה הניסיון שלנו כי משלוח מאוחרת או מתח קטן לתינוק היה קשור עם התכווצות מוקדמת של עורק הטבור וכתוצאה מכך מופחתת נפח הדגימה עורק.
סוגיות מתודולוגיות / אנליטיות של שיטת 4 כלי השיט
חשוב להתייחס למספר נושאים מתודולוגיים בפרשנות התוצאות ממחקר של 4 כלי שיט. ראשית, אם המטרה היא לחשב את המסה של חומר נלקח, או שוחרר, על ידי השליה חשוב לשקול את נפח הדם חולף. יש לזכור כי הווריד הרחם לא רק מנקז את השליה, אלא גם מנקז את שריר הרחם, וכי כלי הדם הרחם בדרגות שונות anastomoses עם vasculature השחלות והנרתיק. לאחר מכן, חשוב לשקול כי חילופי מים על פני השליה עשוי להשפיע על הריכוזמנות נמדדות, ובכך משפיעות על הבדלי הריכוז arteriovenous מחושב. באופן אידיאלי זה מטופל בצורה הטובה ביותר על ידי התאמת הבדלים ריכוז עבור מים איבדו או שנרכשו בכל זוג העובר אמא. זה יכול להיות מושגת על ידי מדידת חומר אשר אינו נלקח או משוחרר על ידי השליה או הרחם. ריכוז המוגלובין או אחוזים מחושבים של אריתרוציטים (המטוקריט) עשויים לשמש כגורמי תיקון לחילופי מים. יתר על כן, כאשר מפרשים ספיגה או שחרור של תרכובות על הצד האימהי של השליה זה עשוי להיות עניין לקבל הבדלים arteriovenous ברקמות אחרות להשוואה. לפיכך, כללנו דגימת דם מהוריד האנטי-אביבי כדי לאפיין מאפיינים ספציפיים של השליה על ידי השוואת ההבדלים בין העורקים על השליה עם אלה של המיטה הנימית של האמה. מצאנו כי השוואה זו מעניינת במיוחד כאשר בדקנו שחרור שליה של sFlt-1 ו השליה הצמיחה faCtor כי תאים אנדותל מערכתית יכולה להיות מקור פוטנציאלי של תרכובות אלה 14 . בהתאם לשאלת המחקר זה עשוי להיות חשוב לקשר את ההבדלים arteriovenous למשקל של השליה כדי לחשב את יעילות השליה, כלומר במונחים של (mmol / L) / ק"ג או (mmol / min) / שליש ק"ג.
מגבלות וחוזקות של שיטת 4 כלי השיט
למרות פיזיולוגיה שליה מושפע פחות על ידי ניתוח קיסרי מאשר הלחץ של הלידה הנרתיק, יש מספר מגבלות על שיטה זו. מתן הנרתיק מומלץ ברוב המקרים של סיבוכים שכיחים בהריון (כמו רעלת הריון, סוכרת, השמנת יתר ו macrosomia עוברית מתונה), אשר עשוי להגביל את ההטיה ואת הגיוס. גם כאשר מיטוב כל צעד של השיטה קשה להשיג מדידות מלאה ודגימות בכל מטופל בגלל קשיים טכניים בהליך דגימת דם ו ultrasound volמדידות זרימת אום ( איור 3 ). בנוסף, למרות מדידות אולטרסאונד מתבצע קרוב ככל הניתן הניתוח ככל האפשר, הם נערכו מטבעם לפני ההרדמה בעמוד השדרה ואת דגימת הדם. מכאן נובע מכך שתפוקת הלב האימהית (CO) עשויה להשתנות ואולי אף להשפיע על זרימת הדם של הרחם (ואפילו הפטו-השליה). שינוי אפשרי CO נגרמת על ידי anesthesiacan השדרה להיות פיצוי על ידי phenylephrine אשר שימש במחקר הנוכחי. נתונים ראשוניים מתוך קבוצת משנה של המשתתפים שלנו (n = 23) לא מראים שום שינוי משמעותי CO לפני הרדמה בעמוד השדרה בזמן הדגימה (נתונים שלא פורסמו). שימוש בשיטת הדגימה של 4 כלי הדם בבני אדם, בניגוד לבעלי חיים, מגביל הן את האפשרות להכניס משתנה זמן והן לתפעל את תכולת הדם 5 , 29 , 30 . משיקולים אלה, זה נובע כי 4 כלי השיט שיטת הדגימה היא חתך רוחב ובעיקר תצפיתית מטבעו, ויש לנתח את הנתונים המתקבלים בהתאם. מצד שני, שיטת הדגימה של 4 כלי הדם מספקת אפשרות ייחודית ללמוד פיזיולוגיה של השליה האנושית ופאתופיזיולוגיה ב- vivo , עם כל הגורמים הפועלים באינטראקציה, מצב שלא ניתן לשכפל במבחנה . הוא מציע הזדמנות מצוינת לבחון היפותזות כי צמחו מן הניסויים בבעלי חיים או ניסויים אחרים. כמו כן, הוא יכול ליצור היפותזות חדשות כי צריך להיבדק מכניסטית במבחנה ובמחקרים בבעלי חיים.
יישומים פוטנציאליים של שיטת 4 כלי השיט
בהריונות פתולוגיים, ההבדלים בין הריון בין האם והעורב נחקרו עד כה, ואפשרו בדיקה של חלק מההשערות הקיימות ב- vivo 15 , 16 ,התחת = "xref"> 31. שיטת הדגימה של 4 כלי הדם מציעה הזדמנות מושכת לחקור את היחידה האימהית, השליה והעוברית, ולא כגורמים נפרדים בהריונות פתולוגיים, ועלולה לשפוך אור חדש על שאלות ישנות וחדשות, במסגרת האינטראקציה האימהית-עוברית. שיטת הדגימה של 4 כלי הדם עשויה להיות מיושמת על מגוון רחב של שאלות מחקר בהריונות נורמליים ופתולוגיים, בהתאם לניתוחים נוספים של הדגימות. הבחירה של vacutainers, נפח הדם, טווח של השליה דגימות רקמות אחרות צריך להיות החליט על פי שאלת המחקר. Burton et al. פרסמו לאחרונה נייר מעולה המתאר נהלים כדי להבטיח דגימות באיכות טובה של רקמת השליה, ולאפשר מיזוג של biobanks שונים על מנת לפתור פאזלים מסוימים שצריכים כמות גדולה של דגימות להיפתר 20 . הדגימות של 4 כלי הדם ניתנות לניתוח כדי לחקור את השחרור הספציפי של exosomes לאמהותאל מחזור, העברת תרופות, מטבוליטים ורעלים. בקנה מידה גדול omics (metabolomics, proteomics ו lipidomics) ניתוחים יש פוטנציאל לזהות חומרים metabolites ב פלזמה אימה כי הם מופרשים על ידי השליה. לפיכך הקמת שיטת דגימה של 4 כלי שיט עשויה לזהות גורמים נגזרים שלשולים במחזור האמהי ולהקניט ביומרקרים של תפקוד שליה. בשילוב עם טכניקות להפריד בין מולקולרית מול מולקולרית ועומדות מול קרום הפלזמה הבסיסית של syncytiotrophoblast, העברת החומר ניתן ללמוד יחד עם הפעילות והמיקום של חלבונים טרנספורטר רלוונטי 21 . יתר על כן, מנגנונים המסדירים העברת חומרים מזינים in vivo עשוי להיות מבהיר על ידי ניתוח רמות של חומרים מזינים micronutrients בארבעת כלי ולקשר את העברתם של חומרי הזנה למדידות של מערכת התזונה וחשמל האנרגיה של השליה 32 33 . גלוקוז עירוי לפני המסירה היא גישה נוספת האפשרית. העברת השליה יכולה להיות קשורה למשתנים מטבוליים אימהיים כמו BMI, גלוקוז ופרופילים של שומנים בדם פלסמה ותוצאות עוברית כמו משקל לידה וקומפוזיציה של הגוף 18 . שתי הגישות הללו יכולות אולי להאיר את התפקיד האינטגרטיבי של השליה, בהיותה ממוקמת במרכז יחסי הגומלין בין מצבים וצרכים אימהיים לעובר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
למחברים אין מה לחשוף.
Acknowledgments
בראש ובראשונה, אנו מודים בכנות לאמהות שהשתתפו בפרויקט זה. לאחר מכן, אנו מכירים בכל הצוות אשר סייע ו להקל על הליך הדגימה, מרדים, אחות הרדמה אחיות כירורגית. הפרויקט לא היה אפשרי ללא מימון של דרום מזרח נורבגיה אזור הבריאות האזורי ואת היחידה המייעצת הנורבגית על בריאות האישה, אוניברסיטת אוסלו מימון מקומי המסופק על ידי בית החולים של אוניברסיטת אוסלו.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Maternal body composition | |||
| Impedance scale | Tanita | or similar | |
| Ultrasound measurements | |||
| Sequoia 512 ultrasound machine | Acuson | equipped with a curved transducer with colour and pulsewave Doppler (frequency bandwidth 2 - 6 MHz) | |
| Blood samples | |||
| Arerial cannula | BD Medical | 682245 | or similar |
| 20 cc Eccentric Luer Tip Syringe without Needle | Termo | SS-20ES | or similar. 3 needed. |
| 10 cc Eccentric Luer Tip Syringe without Needle | Termo | SS-10ES | or similar. 9 needed. |
| 5 cc 6% Luer Syringe without Needle | Termo | SS-05S1 | or similar. 2 needed. |
| Arterial blood gas syringe | Radiometer Medical | or similar. 4 needed. | |
| Sterile winged needle connected to flexible tubing, 21 gauge | Greiner Bio-One | 450081 | (intended for single use).3 needed. |
| Vacutainer tube 6 mL EDTA | Greiner Bio-One | 456043 | or similar. Label with sample site. 10 needed. |
| Vacutainer tube 5 mL LH Lithium Heparin Separator | Greiner Bio-One | 456305 | or similar. Label with sample site. 5 needed. |
| Vacutainer tube 6 mL Serum Clot Activator | Greiner Bio-One | 456089 | or similar. Label with sample site. 5 needed. |
| Vacutainer tube 3 mL 9NC Coagulation sodium citrate 3.2% | Greiner Bio-One | 454334 | or similar. Label with sample site. 5 needed. |
| Cryogenic vials, 2.0 mL | Corning | 430488 | or similar. Label with sample site, serum/type of plasma and ID. 90 needed. |
| Marked trays to transport the syringes | to transport the blood samples in the operation theatre | ||
| Rocker | for gentle mixing of the samples | ||
| Ice | in styrofoam box | ||
| Liquid nitrogen | in appropriate container | ||
| Placenta samples | |||
| Metal tray | |||
| Ice | in styrofoam box | ||
| Calibrated scale | |||
| Metal ruler | |||
| 1 M Phosphate buffered saline | Sigma | D1408 | or similar. Dilute 10 M to 1 M before use |
| RNA stabilization solution | Sigma | R0901-500ML | or similar |
| Optimal Cutting Temperature (O.C.T.) compound | vwr | 361603E | or similar |
| Cryogenic vials, 2.0 mL | Corning | 430488 | or similar. Label with sample site. content and ID. 10 needed. |
| Centrifuge tubes, conical bottom 50 mL | Greiner Bio-One | 227,285 | or similar. Label with "RNA later", sample site and ID. 2 needed. |
| Liquid nitrogen | in appropriate container | ||
| Fetal body composition | |||
| Calibrated scale | |||
| Measuring tape |
References
- Jansson, T., Powell, T. L. Role of the placenta in fetal programming: underlying mechanisms and potential interventional approaches. Clin Sci (Lond). 113 (1), 1-13 (2007).
- Hanson, M. A., Gluckman, P. D. Early developmental conditioning of later health and disease: physiology or pathophysiology. Physiol Rev. 94 (4), 1027-1076 (2014).
- Guttmacher, A. E., Spong, C. Y. The human placenta project: it's time for real time. Am J Obstet Gynecol. 213, 4 Suppl 3-5 (2015).
- Battaglia, F. C., Regnault, T. R. Placental transport and metabolism of amino acids. Placenta. 22 (2-3), 145-161 (2001).
- Hay, W. W. Placental-fetal glucose exchange and fetal glucose metabolism. Trans Am Clin Climatol Assoc. 117, 321-339 (2006).
- Woollett, L. A. Review: Transport of maternal cholesterol to the fetal circulation. Placenta. 32, Suppl 2 218-221 (2011).
- Prenton, M. A., Young, M. Umbilical vein-artery and uterine arterio-venous plasma amino acid differences (in the human subject). J Obstet Gynaecol Br Commonw. 76 (5), 404-411 (1969).
- Cetin, I., et al. Plasma and erythrocyte amino acids in mother and fetus. Biol Neonate. 60 (2), 83-91 (1991).
- Filshie, G. M., Anstey, M. D. The distribution of arachidonic acid in plasma and tissues of patients near term undergoing elective or emergency Caesarean section. Br J Obstet Gynaecol. 85 (2), 119-123 (1978).
- Haberey, P. P., Schaefer, A., Nisand, I., Dellenbach, P. The fate and importance of fetal lactate in the human placenta -a new hypothesis. J Perinat Med. 10 (2), 127-129 (1982).
- Prendergast, C. H., et al. Glucose production by the human placenta in vivo. Placenta. 20 (7), 591-598 (1999).
- Metzger, B. E., Rodeck, C., Freinkel, N., Price, J., Young, M. Transplacental arteriovenous gradients for glucose, insulin, glucagon and placental lactogen during normoglycaemia in human pregnancy at term. Placenta. 6 (4), 347-354 (1985).
- Zamudio, S., et al. Hypoglycemia and the origin of hypoxia-induced reduction in human fetal growth. PLoS One. 5 (1), 8551 (2010).
- Holme, A. M., Roland, M. C., Lorentzen, B., Michelsen, T. M., Henriksen, T. Placental glucose transfer: a human in vivo study. PLoS One. 10 (2), 0117084 (2015).
- Holme, A. M., Roland, M. C., Henriksen, T., Michelsen, T. M. In vivo uteroplacental release of placental growth factor and soluble Fms-like tyrosine kinase-1 in normal and preeclamptic pregnancies. Am J Obstet Gynecol. 215 (6), 781-782 (2016).
- Paasche Roland, M. C., Lorentzen, B., Godang, K., Henriksen, T. Uteroplacental arterio-venous difference in soluble VEGFR-1 (sFlt-1), but not in soluble endoglin concentrations in preeclampsia. Placenta. 33 (3), 224-226 (2012).
- Brar, H. S., et al. Uteroplacental unit as a source of elevated circulating prorenin levels in normal pregnancy. Am J Obstet Gynecol. 155 (6), 1223-1226 (1986).
- Myatt, L., et al. Strategy for standardization of preeclampsia research study design. Hypertension. 63 (6), 1293-1301 (2014).
- Kiserud, T., Rasmussen, S. How repeat measurements affect the mean diameter of the umbilical vein and the ductus venosus. Ultrasound Obstet Gynecol. 11 (6), 419-425 (1998).
- Burton, G. J., et al. Optimising sample collection for placental research. Placenta. 35 (1), 9-22 (2014).
- Illsley, N. P., Wang, Z. Q., Gray, A., Sellers, M. C., Jacobs, M. M. Simultaneous preparation of paired, syncytial, microvillous and basal membranes from human placenta. Biochim Biophys Acta. 1029 (2), 218-226 (1990).
- Staff, A. C., Ranheim, T., Khoury, J., Henriksen, T. Increased contents of phospholipids, cholesterol, and lipid peroxides in decidua basalis in women with preeclampsia. Am J Obstet Gynecol. 180 (3), Pt 1 587-592 (1999).
- Catalano, P. M., Thomas, A. J., Avallone, D. A., Amini, S. B. Anthropometric estimation of neonatal body composition. Am J Obstet Gynecol. 173 (4), 1176-1181 (1995).
- Ellis, K. J., et al. Body-composition assessment in infancy: air-displacement plethysmography compared with a reference 4-compartment model. Am J Clin Nutr. 85 (1), 90-95 (2007).
- Haugen, G., Kiserud, T., Godfrey, K., Crozier, S., Hanson, M. Portal and umbilical venous blood supply to the liver in the human fetus near term. Ultrasound Obstet Gynecol. 24 (6), 599-605 (2004).
- Acharya, G., et al. Experimental validation of uterine artery volume blood flow measurement by Doppler ultrasonography in pregnant sheep. Ultrasound Obstet Gynecol. 29 (4), 401-406 (2007).
- Wu, X., et al. Glutamate-glutamine cycle and exchange in the placenta-fetus unit during late pregnancy. Amino Acids. 47 (1), 45-53 (2015).
- Tuckey, R. C. Progesterone synthesis by the human placenta. Placenta. 26 (4), 273-281 (2005).
- Simmons, M. A., Meschia, G., Makowski, E. L., Battaglia, F. C. Fetal metabolic response to maternal starvation. Pediatr Res. 8 (10), 830-836 (1974).
- Simmons, M. A., Jones, M. D., Battaglia, F. C., Meschia, G. Insulin effect on fetal glucose utilization. Pediatr Res. 12 (2), 90-92 (1978).
- Bujold, E., et al. Evidence supporting that the excess of the sVEGFR-1 concentration in maternal plasma in preeclampsia has a uterine origin. J Matern Fetal Neonatal Med. 18 (1), 9-16 (2005).
- Jansson, T., Aye, I. L., Goberdhan, D. C. The emerging role of mTORC1 signaling in placental nutrient-sensing. Placenta. 33, Suppl 2 23-29 (2012).
- Cetin, I. Placental transport of amino acids in normal and growth-restricted pregnancies. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 110, Suppl 1 50-54 (2003).
