Summary
פרוטוקול זה מתאר את הייצוב של רמת החמצן נפח קטן של מאגר ממוחזר, היבטים מתודולוגיים של הקלטה פלסטיות סינפטית תלויי-פעילות המשוקע פרוסות בהיפוקמפוס חריפה.
Abstract
אף-על-פי ניסויים על פרוסות המוח כבר בשימוש מאז 1951, בעיות להישאר זה לצמצם את ההסתברות להשגת ניתוח יציב וטוב של אפנון הסינאפסית בעת ביצוע הקלטות שדה פוטנציאלי או תאיים. כתב יד זה מתאר היבטים מתודולוגיים שיכול להועיל בשיפור תנאי ניסיוני עבור שמירה על פרוסות המוח חריפה, הקלטה שדה פוטנציאל postsynaptic סינאפסות בתוך תא צלילה זמינים מסחרית עם יחידת תזרים-carbogenation. יצוא-carbogenation מסייע לייצב את רמת החמצן בניסויים המסתמכים על מיחזור של מאגר מאגר קטן כדי לשפר את העלות-יעילות התרופה ניסויים. בנוסף, כתב היד מציג ניסויים נציג זה לבחון את ההשפעה של מצבים שונים carbogenation, גירויים פרדיגמות על הפלסטיות הסינפטית פעילות תלוית של ההעברה הסינאפסית.
Introduction
בשנת 1951, דיווח ראשון המוח חריפה פרוסה שהניסוי היה מתנהל1. ב-1971, לאחר מוצלחת במבחנה הקלטות מתוכנות piriform קליפת2,3 , הגילוי. נוירונים בהיפוקמפוס מחוברים באופן רוחבי לאורך ציר septotemporal של ההיפוקמפוס4, לאחד במבחנה הקלטות הראשונה של פעילות עצביים בהיפוקמפוס היתה מושגת5. הדמיון של הפרמטרים neurophysiological או neurostructural של נוירונים בתנאים בתוך vivo ו- in vitro לקשרי הם עדיין הנושא של הדיון מספר6, אבל בשנת 1975, Schwartzkroin7 עולה כי הבסיס מאפיינים של נוירונים נשמרים במבחנה ומשרה את גירוי בתדירות גבוהה (קרי: tetanization) של afferents במערך בהיפוקמפוס הקלה לטווח ארוך של סינאפטיים8. אלקטרופיזיולוגיות הקלטה של פעילות. עצבית במבחנה הרחיב את חקר המנגנונים הסלולר של פלסטיות סינפטית תלויי-פעילות9,10, אשר התגלה בשנת 1973 על ידי בליס et al. 11 in vivo ניסויים עם ארנבונים.
בחקר פעילות. עצבית או איתות המסלולים פרוסות המוח, ועל במיוחד-פרוסות בהיפוקמפוס חריפה, הוא עכשיו כלי סטנדרטי. עם זאת, באופן מפתיע, ניסויים במבחנה טרם להיות סטנדרטית, כפי שמעידים הגישות מרובים עדיין קיימים הכנה ותחזוקה של פרוסות בהיפוקמפוס חריפה. ריד. et al. (1988) 12 סקרו את אתגרים מתודולוגיים לשם קיום פרוסות המוח חריפה סוגים שונים של צ'יימברס פרוסה, הבחירות של רחצה ברמה בינונית, pH, טמפרטורה וחמצן. פרמטרים אלה הם עדיין קשה לשלוט בבית הבליעה הקלטה בשל היסודות במבחנה פרוסה-הקלטה setups בהזמנה אישית. הפרסומים ניתן למצוא כי עשוי לעזור להתגבר כמה אתגרים מתודולוגיים וכי לתאר סוגים חדשים של צ'יימברס פרוסה ועלייתו, כגון מערכת של interstitial 3D microperfusion13, תא עם זרימה שכבתית משופרת וחמצן אספקה14, מערכת עם בקרת טמפרטורה ממוחשבת15, מערכת הקלטה רב קאמרית16. מאז התאים האלו לא קל לבנות, רוב המדענים להסתמך על פרוסה זמינים מסחרית צ'יימברס. התאים האלה יכול להיות מותקן על מערכת מיקרוסקופ, ובכך מאפשר עבור שילוב אלקטרופיזיולוגיה עם פלורסצנטיות הדמיה17,18,19. מאז התאים האלה לשמור את פרוסות המוח שקוע בתוך נוזל מוחי שדרתי מלאכותי (כלנית חדד), קצב זרימה גבוהה של הפתרון המאגר צריך להיות מתוחזק, הגדלת ההוצאות של יישום סמים. לשם כך, אנו שילבו מערכת זלוף מיחזור עם תזרים-carbogenation המספק יציבות מספקת עבור הקלטה לטווח ארוך של שדה פוטנציאל בחדר ועלייתו פרוסה באמצעות אמצעי אחסון יצחק גרגיר קטן יחסית. בנוסף, נוכל לסכם כיצד השימוש של מערכת carbogenation ניסויית/זלוף זו משפיעה על התוצאה של פלסטיות סינפטית תלויי-פעילות10 , איך עיכוב של התארכות האיקריוטים פקטור-2 קינאז (eEF2K) ממיקרו סינפטית שידור20.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
החיות היו נשמרים על פי הוקמה בסטנדרטים של טיפול בבעלי חיים ונהלים של המכון למדעי המוח, מפתח מעבדה של הרפואה נוירוביולוגיה של פודאן סטייט, שנגחאי, סין.
1. פתרון הכנה
הערה: ראה טבלה של חומרים.
- הכנת המאגר עם פרוסות (פתרון של Gey ששונה): 92 מ מ NaCl, 2.5 מ מ אשלגן כלורי, 1.25 מ"מ NaH2PO4, 30 מ מ NaHCO3, גלוקוז 25 מ מ, 20 מ מ HEPES, 3 מ מ נה+-פירובט, 10 מ מ MgSO4ו- 0.5 מ מ CaCl2.
- להתאים את ה-pH ל 7.6 באמצעות NaOH M 1 ללא carbogenation.
- חנות המאגר ב 4 º C.
הערה: טיטרציה מבהיר את הנוזל מעונן. Osmolality הוא mOsm 305-310. Carbogen21 מכיל 5% פחמן דו-חמצני ו- 95% חמצן. - הכן את כלנית חדד על ידי דילול 10 x פתרון מניות של חנה המבר שאינו מכיל ביקרבונט, גלוקוז, נותן הרכב הסופי של: 124 מ"מ NaCl, 2.5 מ מ אשלגן כלורי, CaCl 2.5 מ מ2, 2 מ מ MgCl2ו- 1.25 מ מ ח'2PO4.
- הוסף ביקרבונט גלוקוז כדי להגיע 10 מ מ גלוקוז ו 26 מ מ NaHCO3.
- Carbogenate חנה המבר דרך צינור סיליקון מחורר עם קצה חסומות מיד לאחר הוספת את NaHCO3.
- למדוד את רמת החומציות תוך carbogenating (pH 7.3-7.4).
הערה: קיבולת המאגר ניתן לכוונן מעט על ידי שינוי כמות NaHCO3. מאז ה-pH המתקבלת היא תלוית טמפרטורה, יש צורך לבדוק את רמת ה-pH הנוצרת בעת carbogenating בטמפרטורת עבודה (למשל, 30 מעלות צלזיוס).
2. הכנת פרוסות בהיפוקמפוס חריפה
הערה: ראה טבלה של חומרים.
- במקום רשת החזקת פרוסה לתוך חדר הדגירה פרוסות המוח חריפה, למלא את החדר עם כלנית חדד, carbogenate (4-6 L/h) לפחות 30 דקות22 -28-30 מעלות צלזיוס.
- מגניב מכשירי הניתוח ל 2-4 מעלות צלזיוס.
- המקום גביע זכוכית מלא קר carbogenated חותך מאגר (2-4 מעלות צלזיוס), בהשתתפות תערובת קרח/מים, ליד vibratome.
- עזים ומתנגד חולדות או עכברים עד הקרנית הרפלקסים נעלמים (30-50 s) באמצעות איזופלוריין על ידי לקיחת 500 µL לתוך צנצנת זכוכית 2 ל' או µL 12.5 לתוך צינור 50 מ ל.
- לבודד את המוח בשיטה המתוארת, דמיינו בפירוט הפרסומים של מאטיס. et al. (2011) 23 ו. Yuanxiang et al. (2014) 24.
- מגניב המוח ל 2-4 ° C במאגר עם פרוסות כקרח (למשך לפחות 2 דקות) לפני לנתח את המוח הקטן ומפריד את ההמיספרות.
- להשתמש בלהב כירורגי קר לנתח פיסת קליפת המוח הגבי בזווית של 70° לאורך הקצה הגבי של כל חצי הכדור25 כדי לקבל פרוסות רוחבי הגחוני / את החלק ביניים של ההיפוקמפוס, כפי שמוצג באיור 1C Eו....
- עם מרית מלט שיניים קר, העברה של האונה מסנן נייר להתייבש בקצרה את המשטח שנוצר (s 1-2).
- לטעון את שתי ההמיספרות במשטחים טריים חתוכים על הרציף עם פרוסות כקרח באמצעות דבק דבק משחק מהיר; יש בסוף סימטרית הפנים ההמיספרות גילוח (איור 1D).
- למקם את הפלטפורמה עם פרוסות לתא הקירור של vibratome ולמלא את החדר עם המאגר עם פרוסות (2-4 מעלות צלזיוס). Carbogenate באמצעות צינור סיליקון מחורר.
- חותכים פרוסות מיקרומטר 350 באמצעות הגדרות vibratome נאותה (למשל, מהירות קדימה להב: 1.2 מ מ/s, משרעת להב: 1 מ מ).
- לבודד את היווצרות בהיפוקמפוס את subiculum, את cortices entorhinal באמצעות קנולות להזרקת שני (> 28 גרם) כמו מספריים.
- הסר את הבועות הרשת פרוסה החזקת החדר הדגירה מוכן קודם לכן באמצעות פיפטה של פסטר.
- להעביר את הפרוסות שיש קצת שקיפות-הרובד pyramidale מן הרציף עם פרוסות על רשת השינוי לשכת הדגירה. להימנע כל קיפול, מתיחות, חופפים, צף על-ידי כ רפה בעברית כלנית חדד, הפרוסה לתוך פיפטה פסטר פה-גדול.
הערה: כל התהליך (שלב 2.5-2.14) יכול לקחת 5-10 דקות; לכן חשוב לבדוק את הטמפרטורה של הפתרון מאגר לאורך זמן כדי לתחזק אותו ב 4 º C. - את הפרוסות ב 30 מעלות צלזיוס במשך לפחות 1.5-2 h בחדר דגירה דגירה, מספקים carbogen ב 4-6 L/h.
הערה: להתאים את קצב הזרימה של carbogen הפיצו את המאגר בחממה, אלא למנוע את הפרוסות צף.
3. שינויים Carbogenation עבור חנה המבר מיחזור של מאגרים קטנים
- להוסיף מחבר 3-דרך צינור זרימה יוצאת של מערכת מיחזור (איור 2B).
- לחבר את הזרוע האמצעי של המחבר 3-דרך צינור עם צינור אספקת carbogen, לווסת את קצב הזרימה עם מד זרימת אוויר (3-4 L/h, איור 2D ו- איור 4C).
- להוסיף מחבר 3-דרך הצינור השני מהזרימה של מערכת מיחזור. לחבר את הזרוע האמצעי ברכבת התחתית מול התנור מוטבעת הזרוע כדי צינור סיליקון דק (10 ס מ אורך), היד אל הצינור תזרים מן המאגר (מסנן נמוך לעבור; איור 4 C).
- במקום של מסחטת צינור על צינור סיליקון דק (OD: 2 מ מ) במיקום לאורך הצינור איפה pulsation של יצחק גרגיר בבית הבליעה פרוסה, שנוצר על ידי משאבת סחרור, לכל הפחות שלה.
הערה: יצוא-carbogenation (יצוא-פחמימות.) שינוי מפחית את הרגישות של רמת carbogenation לנפח של המאגר כלנית חדד, חנה המבר מיחזור קצב, וממקם צינור היחסי בתוך מאגרי יצחק גרגיר קטן (< 50 מ ל; איור 3). לגבי המסנן נמוך לעבור, כמות מסוימת של אוויר בצינור סיליקון דק מפחית את pulsation של הזרם כלנית חדד; לפיכך, הצינור צריך להיות מלא בעיקר אוויר.
4.הקלטה סינפטית תגובות בחדר פרוסה צלילה
הערה: ראה טבלה של חומרים.
- לחמם את הפתרון חנה המבר באמבט מים עד כ 28-30 ° C (זה ימנע היווצרות בועה בתא ההקלטה).
- מערכת מיחזור (4-5 mL/min) ולהפעיל החימום בתוך השורה כדי equilibrate את המערכת. של פחות שעה.
- Presoak חתיכה קטנה של העדשה ניקוי נייר, רשת ניילון קבוע על חוט הפלטינה בצורת U בבית הבליעה פרוסה ועלייתו לכמה דקות (איור 4).
- הסר את הכבל הפלטינה בצורת U.
- . תכבה את מיחזור ומניחים פרוסה על העדשה ניקוי נייר.
- מיד מקום החזקת פרוסה רשת השינוי על הפרוסה, לעבור על המשאבה, והנח את הפרוסה equilibrate למשך 30 דקות ללא חיטט המטרה כלנית חדד.
- למלא את בורוסיליקט micropipette (קרי, האלקטרודה הקלטה) עם כלנית חדד (עצה ההתנגדות: 1-2 MΩ, מלא 1/3 עם חנה המבר) ואת בעיא זה המחזיק פיפטה.
- . בדוק את הבידוד של האלקטרודה מתכת גירוי על-ידי הצבתו בתוך תמיסת3 NaHCO (> 40 מ מ). להתחבר האלקטרודה הקוטב השלילי של מחולל מתח DC (1-2 V, הקוטב החיובי: חוט כסף או פלטינה), ולבחון את היווצרות בועות בקצה תחת מיקרוסקופ לנתיחה (> 60 x הגדלה).
- למקם את האלקטרודה גירוי שנבדקו טונגסטן בידודי אפוקסי בעל מניפולטור, ההפניה חוטים בבית הבליעה פרוסה.
- להוסיף על אלקטרודה ההפניה השנייה לתא וחבר אותו שקע הפניה של headstage של האלקטרודה הקלטה (איור 4א).
- בתוכנת שליטה של מגבר, לחץ על התיבה "מצב אפס קלאמפ" והמשך בלחיצה פעמיים על תיבת "פלט ירוויח רשימה". לבחור רווח של "100", פעמיים "גבוהה עוברים סינון תיבת הרשימה (Bessel)," לבחור '0.1 הרץ', ולחץ פעמיים על "יעברו סינון תיבת הרשימה (AC)" לבחור "3 kHz."
- בתוכנת הצריבה, לחץ על "רכוש | פתח פרוטוקול". בחר פרוטוקול הגדרות המאפשרות stimulations אפיזודי ותפעיל דיגיטיזציה של פוטנציאל מוגבר ב- 10-20 קילוהרץ ב 50-100 ms וזה אוטומטית isolator גירוי של 10 ms לאחר תחילת הקלטת אפיזודי.
- מניחים את גירוי ואלקטרודות הקלטה בתור, במקביל pyramidale הרובד, למשל (איור 4B ואיור 5).
- לחץ על "לרכוש | עריכת פרוטוקול", בחר בכרטיסייה"טריגר"(בחלון המוקפץ). לחץ על תיבת "מקור על ההדק", בחרו "שטח בר" כמקור על ההדק. לחץ על הלחצן "אישור". לחץ על לחצן "שיא" כדי להתחיל את רכישת הערה החלון המוקפץ עם כפתור על ההדק.
- תוכנה isolator הגירוי, לחץ על התיבה "בקרת מתח" והזן "0". לחץ על לחצן 'הורד'. לחץ על חלון "רישום תוכנה", הקש על מקש הרווח. חזור על מחזור זה על-ידי ברצף הזנת ערכים בין 1 ל- 8, לדוגמה, ב 1 שלבים mV בתיבת "בקרת מתח".
- לתאם את עוצמת גירוי עם ערכי השיפוע-fEPSP, לקבוע את עוצמת גירוי הנדרש כדי להביא 40% של המדרון-fEPSP המרבי. לחץ על "תיבת בקרת מתח" והזן את הערך שנקבע. לחץ על לחצן 'הורד'.
הערה: isolator גירוי משמש להחלת מתח קצר או פולסים הנוכחי על רקמת המוח. הפולסים biphasic יכול להיות µs 100 לכל שלב. - תוכנת הצריבה, לחץ על הלחצן ' עצור ', ולאחר מכן בתפריט "רכוש". לחץ על "עריכת פרוטוקול", בחר בכרטיסייה "טריגר" בחלון המוקפץ. לחץ על תיבת מקור על ההדק, בחרה "טיימר פנימי" כמקור על ההדק. לחץ על הלחצן "אישור". לחץ על לחצן הרשומה שמתחיל הקלטה אוטומטית של שדה פוטנציאל בכל 30 s, לדוגמה. לחץ על כפתור "עצור" לאחר 30-60 דקות.
- לחץ על תפריט "לרכוש", לחץ על "פרוטוקול פתוח", בחר בפרוטוקול הרצוי אינדוקציה של פלסטיות סינפטית, ולחץ על הלחצן "אישור". לחץ על לחצן "הקלט" הפעלה אוטומטית להקלטה ולניתוח בתדירות גבוהה. לחץ על כפתור "עצור".
הערה: במקרה של מחקרים הנוגעים פלסטיות סינפטית, להחיל אחד של פרדיגמות אינדוקציה סטנדרטי הויסעגט או דיכאון לטווח ארוך לאחר הקלטה בסיסית ממושך. דוגמאות מייצגות של אפנון וכתוצאה מכך ההעברה הסינפטית מתוארים איור 7 , איור 8. - תוכנת הצריבה, לחץ על "רכוש | לפתוח את פרוטוקול"ובחרו באותו הפרוטוקול כמו שלב 4.12. לחץ על הלחצן "אישור" ולאחר מכן לחץ על "שיא". השאר באופן אוטומטי פועל ההקלטות שדה פוטנציאלי עבור h 2-4, לדוגמה. לחץ על לחצן "stop" כדי לסיים את ההקלטה.
- במקרה של לימודי רוקחות, להחיל את המתחם ישירות על כלנית חדד מאגר אם קבע המינהל מתחם הרצוי (איור 6).
5. ניקוי את ההתקנה ורמזים
הערה: ראה להלן עצות כלליות.
- לנקות המערכת שבועית על-ידי מיחזור 10% H2O2 עבור לא יותר מ- 20 דקות, ואחריו כביסה עם יונים H2O.
הערה: אתנול לא מומלץ לניקוי. כמו כן לא מומלץ לטבול את החוטים הפניה ואת המטרה H2O2. - הסר זירז מלח על פני העדשה המטרה או הסביבה קאמרית עם 0.1 N HCl ולאחר מכן מים.
- לשטוף את bubbler carbogen מים מזוקקים או 0.1 N HCl.
- לטבול תא הדגירה פרוסה ב 10% H2O2 עבור 5 דקות פעם בשבוע, ואז לשטוף ביסודיות את התא הדגירה עם יונים H2O.
- במקרה של גירוי מתכת אלקטרודות, לשטוף את הטיפ אלקטרודה מגרה עם מים יונים לאחר ניסוי, נגב בעדינות את קצה האלקטרודה מגרה עם כדור צמר גפן טבול עם אתנול הרקמה שיורית.
- להקטין את ההתנגדות של גירוי מתכת מסחרית אלקטרודות על-ידי הסרת הבידוד בקצה דרך לסחוב זהיר עם נייר זכוכית.
- להפחית את אובדן carbogen מ חנה המבר תוך מיחזור דרך הצינורות על-ידי החלפת צינורות סיליקון עם צינורות טפלון.
- שמור את החוטים כסף של הקלטה אלקטרודה, הפניה אלקטרודה אקונומיקה במשך מספר ימים לטופס AgCl על פני תיל.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
במקטע פרוטוקול, אנחנו תיאר את הכנת חריפה פרוסות בהיפוקמפוס מהחלק הבטני, ביניים של היווצרות בהיפוקמפוס (איור 1) זכר C57BL/6 עכברים וחולדות זכר Wistar (5-8 שבועות). המיקום של ההמיספרות על פלטפורמת מבצעה עוזר לשמור עליהם יציב, מסיר את הצורך של ייצוב עם אגר או agarose. זלוף עצמה מבוססת על משאבה סחרור המופעל על סיבוב גבוהה לתת קצב הזרימה הנדרש של הנוזל. לפיכך, הזדקנות מהירה של צינורות רגילים בתוך המשאבה יצר בעיה מהותית, כי התגברנו באמצעות צינורות שאינם צורן (ID: 1.02 מ מ). הלחץ השלילי עבור זרימה החוצה נוצר גם על ידי שני צינורות המחוברים במקביל בעלות של הקוטר הפנימי של 2.79 מ מ. אלה שני צינורות מחוברים בצינורית בתא ההקלטה כדי לאפשר השאיפה של הנוזל (איור 4א). קצב carbogenation חנה המבר במאגר המים חייב להיות יציב במשך שעות רבות, אשר יכול להיות קשה להשיג באמצעות אוורור אבנים או צינורות עם נקבוביות קטנות. מאז יצוא-carbogenation אין לסמוך על הנקבוביות קטן, carbogen קצב הזרימה לאורך זמן ישאר יציב (איור 2). אם מתבצעות עם מאגר יצחק גרגיר קטן, יצוא-carbogenation מסייעת להשגת איזון של החמצן המומס (איור 3). בנוסף, זה ממזער את ההשתנות של רמת החמצן בין הניסויים המבוסס על תפקיד צינור תזרים שינו/יצוא, מספר הנקבוביות פעיל ב carbogen בועה הצינורות ואת קצב מיחזור נוזלי.
הפרוסה מושם על העדשה נייר כדי לאפשר חילופי נוזלי קצת מתחת (איור 4א). מאז תא פרוסה שניתן יהיה רכוב על מיקרוסקופ זקוף, אשר מצויד עם יעד 40 X, מיקום האלקטרודות ניתן מבוקרים היטב (איור 4B ואיור 5). זה עוד יותר מפחית ההשתנות של הניסויים בעבודה היומיומית.
כדי לקבוע את עוצמת גירוי הנדרש עבור ההקלטה בסיסית של שדה פוטנציאל, שהתלות של גודל השדה פוטנציאליים על עוצמת גירוי חייב להיקבע על ידי הקלטה של fEPSPs-גירוי שונים החוזקות (איור 5 ). המדד של התכונה קלט-פלט יוצר כמה הלחץ על הפרוסה על החוזק גירוי גבוה יותר. לפיכך, גישה נוספת היא לחפש כוח גירוי מעורר רק רכיב ספייק האוכלוסייה חיובי ב- fEPSP-דעיכה (שחור החיצים באיור5)26.
לאחר הקלטת תוכנית בסיסית יציבה במשך לפחות 30 דקות, והתרופות האמריקני יכול להתחיל. . הנה, הצגנו דוגמה של השפעת מעכב eEF2K על העברה סינפטית. עיכוב של eEF2K מקדם העברה סינפטית (איור 6א), אפקט זה היה הקלוש על ידי עיכוב של p38 MAPK (איור 6B)20.
פלסטיות סינפטית תלויי-פעילות יכולה להיגרם על ידי מגוון רחב של גירויים פרדיגמות10. כאן, הצגנו ניסויים נציג של פלסטיות סינפטית, המבוססים על רצף מתמשך של גירויים-100 הרץ ועל stimulations חוזרות ב 1 הרץ מעל 15 דקות. אפנון וכתוצאה מכך ההעברה הסינפטית תואר איור 7 , איור 8. בנוסף, היא תוצג באיור 7 ו- 8 איור כי הייצוב של רמת החמצן קטן מאגר המאגרים על ידי יצוא-carbogenation (עיגולים לבנים, רמת החמצן יחסית ב- 24-40 דקות באיור3) שיפרה את LTP אינדוקציה בע מ בהשוואה ניסויים עם מאגר-carbogenation בלבד (עיגולים אפורים, רמת חמצן ב דקה 7-24). אנחנו לא מבחן השילוב של יצוא-carbogenation אגירה-carbogenation (7-24 דקות) כי היינו מעוניינים ביצירת מערכת ניסיוני עם carbogen נמוכים ופשוטים לשימוש. המאגר-carbogenation ללא מיחזור (עד 7 דקות) מייצג את הרמה הבסיסית של חמצן בתוך המאגר כלנית חדד.
איור 1: מיצוב את ההמיספרות במוח כדי לקבל פרוסות רוחבי של ההיפוקמפוס באמצעות vibratome. (א) היווצרות בהיפוקמפוס מותווה בתצוגה לרוחב של האונה הימנית, בצבע ירוק, בדגם מוח העכבר המשוחזרת. (B) A view הגחון של היווצרות בהיפוקמפוס. (ג) התצוגה rostral-כדי-סימטרית מדגים קטע של החלק הגחון, ביניים של היווצרות בהיפוקמפוס על האונה הימנית-במישור האופקי. מאז אזורים שונים לאורך ציר septotemporal של ההיפוקמפוס יש דרגות שונות של העצבוב ותפקוד31,32, זווית חיתוך שונים נדרש עבור פרוסות רוחבי של ההיפוקמפוס הגבי, עבור דוגמה. סרגל קנה מידה = 3 מ מ (קווים אופקיים לבן). (ד) התמונה מראה את האונות מוח עכברוש מודבק על פלטפורמה vibratome. סרגל קנה מידה = 6 מ מ. (E) השרטוט מתאר את הזווית לקיטום הקצה הגבי של קליפת המוח (סכימה עליון) של האונה הימנית מופרדים (קו שחור מנוקד) והסיבוב (חץ אדום) כדי להדביק את המוח על המשטח שנוצר על הרציף עם פרוסות. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2 : אלמנטים של מערכת carbogenation חנה המבר מאגרים מתחת 50 מ ל. מערכות carbogenation רגיל (A) באמצעות צינורות מחוררים (א) כהתקן בועה carbogen; צינור היה מחורר על ידי דקירות מרובות עם חוט נירוסטה קוטר מיקרומטר 250. יצוא (B)-carbogenation על ידי (b) 3-דרך צינור מחבר (הקוטר הפנימי: 2 מ מ) או (ג) פתח היחידה שמונעת זרימת הנוזל בחזרה עם מסנן הידרופובי.הזרוע האמצעי של המחבר 3-דרך הצינור מחובר טנק carbogen לאחר manometer (גז בלחץ: < 1 atm), מד זרימה. הזרועות הנותרים מחוברים בתוך הצינור יצוא כלנית חדד. (ד) carbogen קצב הזרימה נשלטת על ידי זרימה. במהלך הניסויים, המאגרים חנה המבר נשמרים ב 28-30 º C. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3: רמות החמצן ב- 40 מ של כלנית חדד-תנאים שונים. רמת החמצן במהלך אשמורת-carbogenation (במיל-פחמימות.), חנה המבר מיחזור ירד באופן קבוע (אפור מלא עיגולים, n = 3). עם זאת, יצוא-carbogenation (יצוא-פחמימות.) במהלך חנה המבר מיחזור מופחת על הירידה של רמת חמצן, אשר הגיעו שיווי משקל ברמות בסיסית (לבן מלא עיגולים, n = 3). רמות הבסיס נמדדו עם מיל-פחמימות. ללא חנה המבר מיחזור. הקווים אנכי אפור מנוקד מציינים את המתג על פרוטוקולים שונים carbogenation. ההשפעות של מיל-פחמימות עם מיחזור (7-24 דקות), יצוא-פחמימות. עם מיחזור (עיגולים לבנים, 24-40 דקות) על אינדוקציה של LTP, בע מ מתוארים איור 7 , איור 8. הנתונים מוצגים גם זאת אומרת ± ב- SEM אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 4 : רכיבים של יצוא-carbogenation לניסויים בחדר פרוסה ועלייתו. מצגת (A) של התא פרוסה צלילה. החוט הפלטינה בצורת U עם סיבי ניילון מחזיק פרוסה בהיפוקמפוס מתואר. החוטים כסף היו עטופות סביב בצינורית קטן, ליצירת סליל כדי להגדיל את השטח של הסוף חוט כסף. החוט הפניה גירוי הושם בבית הבליעה יצוא, ההפניה ההקלטה היה בחדר המרכזי. כדי לשמור את האלקטרודה הפניה פוטנציאליים שיציב ברמות שונות נוזלי, החוט הפניה הקלטה יכול להיות מבודדים על ידי צינור פלסטיק, להשאיר רק את החלק "מתחת למים" של חוט חשוף למאגר. (B) החיובי השדה התמונה מראה פרוסה בהיפוקמפוס חריפה נציג האלקטרודות. CA1, CA3: Cornu Ammonis 1, 3; די. ג'י: משוננת הפיתול; sub: subiculum; EC: entorhinal קליפת. (ג) התרשים מדגיש את הרכיבים העיקריים של יצוא-carbogenation, ללא אינדיקציה זרימה את carbogen, את משאבת סחרור. מסנן נמוך לעבור ניתן להציב מול החימום בתוך השורה כדי להפחית את pulsation תזרים המזומנים של כלנית חדד. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 5 : תלות צורת פוטנציאליים שדה כוח גירוי ועל מיקום האלקטרודות. (א) דוגמאות מייצגות של שדה פוטנציאל, עורר במרחקים שונים מפני הרובד pyramidale (רח' pyr..), גירוי נקודות החוזק מתוארים. החצים השחורים האופקי מציינים את הרכיב ממקור חיובי של ספייק האוכלוסייה ב שדה פוטנציאל הריקבון. הרכיב ממקור חיובי של ספייק האוכלוסיה נותרה בערך באמצע של שלב נבדק בכלל fEPSP הראשונית-עלייה "בשורה" אלקטרודה עמדות, חוץ מזה קרוב מאוד אל השכבה גוף התא (e). רכיב (B) המיקום של מקור חיובי של ספייק אוכלוסייה מגוונות מאוד עקב אי-התאמות של האלקטרודות להקלטה ולניתוח. לאק.: הרובד lacunosum moleculare; Rad.: הרובד radiatum; Pyr.: הרובד pyramidale; בקבלה: הקלטה אלקטרודה; סאונד.: אלקטרודה לגירוי. סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 6 : נציג דוגמה ההשפעות של מעכב eEF2K על בהיפוקמפוס הסינאפסית באמצעות מיחזור של מאגר יצחק גרגיר קטן20 יצוא-carbogenation, . לאחר הקלטת fEPSPs במרווחים 1 דקות למשך 20 דקות, החומר המדכא eEF2K A-484954 נוספה ישירות אל המאגר כלנית חדד (קו אופקי). עלייה מהירה של השידור סינפטית היה לזיהוי (לבן מלא עיגולים). אם התרופה לא הוחל, המדרון-fEPSP נשארה יציבה לאורך זמן ההקלטה (אפור מלא עיגולים). (B) יישום של החומר המדכא MAPK p38 (קו אופקי אפור) מנעו eEF2K inhibito-induced השיפור של שדה פוטנציאל. הנתונים מוצגים גם זאת אומרת ± ב- SEM אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 7: נציג הקלטות של פעילות תלוית potentiation של ההעברה הסינאפסית באמצעות יצוא-carbogenation (יצוא-פחמימות.; עיגולים לבנים), מאגר מים-carbogenation (במיל-פחמימות.; עיגולים שחורים), עם מיחזור של יצחק גרגיר קטן מאגר. Potentiation הושרה לאחר זמן בנקודה 0 על ידי שלוש פעמים 100 Hz/s רכבות (ט.: tetanization, המרצה בתדירות גבוהה). הנתונים מוצגים גם זאת אומרת ± סוגר ב- SEM: השוואה סטטיסטית של קבוצות לכל נקודת זמן; אינטראקצית T-test, לא מניחים סטיית תקן עקבי. * p < 0.05.אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 8 : תלות של פעילות תלוית דיכאון של ההעברה הסינאפסית על עוצמת גירוי, carbogenation. (א) באמצעות מאגר-carbogenation (במיל-פחמימות.) עם מיחזור של אמצעי אחסון גדול כלנית חדד, גירוי 1 הרץ למשך 15 דקות ב- 80% של fEPSP מקסימלי-שיפוע עורר גומה חזקה של ההעברה הסינאפסית (עיגולים לבנים). אולם, כפי fEPSP נציג עקבות לפני (שחור trace) ואחרי אינדוקציה בע מ (אדום trace-ה 110 דקות) מציינים, מטח סיבים presynaptic (חץ שחור אנכי) צומצם באופן משמעותי. זוהי דוגמה המציין כי תהליכים אלקטרוכימי על האלקטרודה גירוי יכול לפגוע afferents, גורם ייאוש לא להסתמך באופן חלקי על מנגנונים הקשורים בע מ. הפחתת עוצמת גירוי על 50% של fEPSP-השיפוע המרבי המושרה גומה של ההעברה הסינאפסית ברמה נמוכה יותר, אך ללא שינוי סיבים presynaptic מטח (אפור מלא עיגולים). אינדוקציה בע מ (B) לא לעורר גומה מתמשך של מדרונות-fEPSP בניסויים עם המאגר-carbogenation ומיחזור של מאגר יצחק גרגיר קטן (במיל-פחמימות.; אפור מלא ריבועים). (ג) תזרים-carbogenation עם מיחזור של מאגר יצחק גרגיר קטן שיפור התוצאה האינדוקציה בע מ. התוספות להציג fEPSPs נציג לפני (עקבות שחור) ואחרי (עקבות 110 דקות, אדוםth ) אינדוקציה בע מ. עבור fEPSPs נציג, קנה המידה האנכי מציינות 1 mV, והברים סולם אופקי שיתאימו גב' 2 הנתונים התקבלו פרוסות בהיפוקמפוס חריפה (350 מיקרומטר) של עכברים C57/BL 6 1 ל 2 חודש הזקן, מוצגות כחלק זאת אומרת ± מרובעים ב- SEM. : השוואה סטטיסטית של קבוצות לכל נקודת זמן; אינטראקצית T-test, לא מניחים סטיית תקן עקבי. * p < 0.05, ns: בלתי-משמעותיים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
למרות ממשק פרוסה צ'יימברס התערוכה עמידים יותר תגובות סינפטית25,26,27,28, ועלייתו צ'יימברס לספק נוחות נוסף עבור תיקון-קלאמפ הקלטה של קרינה פלואורסצנטית הדמיה. לפיכך, שתיארנו מספר היבטים של הקלטות שדה פוטנציאל בפרוסות בהיפוקמפוס חריפה באמצעות תא פרוסה ועלייתו מסחרי זה ניתן להרחיב בקלות ההדמיה של הגששים פלורסצנטיות נוירונים17,18, 19. מלבד הכנה פרוסה25, שמירה על רמה קבועה carbogen בתא ההקלטה לאחר שעות רבות מייצג את אחד המכשולים. מאז רמת carbogen היא רק לשליטה על ידי הרוויה הראשונית של המאגר כלנית חדד, ההבדלים בין רמת החמצן חנה המבר מתקבלים בקלות בניסויים היומיומית. לכן, מומלץ על מד חמצן כדי להאיץ את פתרון הבעיות ואת כדי להתאים את התנאים (למשל, טמפרטורה, קצב הזרימה carbogen, carbogenation ' כלים ' חנה המבר שיעור מיחזור) כדי להגיע לפחות 28 מ ג/ליטר חמצן בתוך המאגר כלנית חדד-אורווה רמות. בנוסף, מנהג נפוץ כדי לשנות את הגודל של המיכל חנה המבר ליישום סמים יכול לגרום השפעות על שדה פוטנציאל עקב הבדלים ברמות carbogen שלהם.
השימוש של יצוא-carbogenation של אמצעי אחסון מאגר מיחזור קטן שיפור התוצאה של הניסויים פלסטיות סינפטית. המסת משופרת של חמצן בנוזל מבוסס על יחס גדול יותר בין אזור מגע של הנוזל carbogen. בנוסף, יצוא-carbogenation מצמצמת את האספקה של חנה המבר מדולדל carbogen בתוך המאגר כלנית חדד. היציבות carbogenation אולי ניתן לשפר עוד יותר על ידי ונטורי מעוצב במיוחד על בסיס העיקרון של מוצרים מסחריים29.
אפילו עם הכנה פרוסה הטוב ביותר ואת תנאי ההתקנה, לעתים קרובות נמנע שדה פוטנציאל לא יכול להיגרם כאשר גירוי מתכת מבודד אלקטרודות משמשים. לעתים קרובות, הסיבה היא כי הבידוד ניזוק עקב כיפוף או ניקוי. כפי שציינו בשיטות, בגישה פשוטה היא לבדוק את היווצרות בועה-DC-מתח נמוך. בנוסף, שלב זה עוזר לנקות את הטיפ וכדי להקטין את אימפדנס של האלקטרודה גירוי. השימוש פיפטות זכוכית לגירוי נפוצה ויש לו היתרון של מתן שדה צר יותר של סיבים גירוי. לעתים קרובות, בלתי אפשרי למצוא מדרון fEPSP מקסימלי כאשר גירוי פיפטה מזכוכית. המראה של הרכיב ממקור חיובי של ספייק האוכלוסייה בשלב fEPSP-ריקבון עלול לשמש לאחר מכן כדי לכוונן את עוצמת גירוי23.
ייתכן הפרסום לגבי אינדוקציה של פלסטיות סינפטית תלויי-פעילות, המעורבות של איתות המסלולים שונה תלוי בפרוטוקול אינדוקציה יישומית זמין10. עם זאת, נקודת המבט מתודולוגי, הגירוי בתדירות גבוהה עלולה לגרום ממצאים ברורים שעלולים למנוע את אינדוקציה מוצלחת של פלסטיות סינפטית. חוזרות ונשנות 100 Hz/1 s גירוי עלול לגרום קיטוב של אלקטרודות גירוי או תגובות אלקטרוכימיות30, וכתוצאה מכך השפל של ההעברה הסינאפסית בשל נזק afferents (לקבלת דוגמה, ראה איור 8 ). כדי למזער את התהליכים אלקטרוכימי, מומלץ השימוש biphasic גירוי פולסים כוח גירוי לא יותר מ 2 V להקלטות בסיסית.
לסיכום, יצוא-carbogenation מסייע לייצב את רמת החמצן בניסויים המסתמכים על מיחזור של מאגר מאגר קטן, שיפור העלות-יעילות התרופה ניסויים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים מצהירים כי המחקר בוצע בהיעדר יחסים מסחריים או פיננסי שיכול להחשב בתור ניגוד אינטרסים פוטנציאליים.
Acknowledgments
וו. וו שנערך, ניתח, עיצב את הניסויים, כתב היד. D.X. סי בסיוע בהכנה איור, ערכו הניסויים. עבודה זו נתמכה על ידי NSFC (31320103906) ופרוייקט 111 (B16013) מתה משחפת
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents required | |||
| NaCl | Sinopharm Chemical Reagent, China | 10019318 | |
| KCl | Sinopharm Chemical Reagent, China | 10016318 | |
| KH2PO4 | Sinopharm Chemical Reagent, China | 10017618 | |
| MgCl2·6H2O | Sinopharm Chemical Reagent, China | 10012818 | |
| CaCl2 | Sinopharm Chemical Reagent, China | 10005861 | |
| NaHCO3 | Sinopharm Chemical Reagent, China | 10018960 | |
| Glucose | Sinopharm Chemical Reagent, China | 10010518 | |
| NaH2PO4 | Sinopharm Chemical Reagent, China | 20040718 | |
| HEPES | Sigma | H3375 | |
| Sodium pyruvate | Sigma | A4043 | |
| MgSO4 | Sinopharm Chemical Reagent, China | 20025118 | |
| NaOH | Sinopharm Chemical Reagent, China | 10019718 | |
| Tools and materials for dissection | |||
| Decapitators | Harvard apparatus | 55-0012 | for rat decapitation |
| Bandage Scissors | SCHREIBER | 12-4227 | for mouse decapitation |
| double-edge blade | Flying Eagle, China | 74-C | |
| IRIS Scissors | RWD, China | S12003-09 | |
| Bone Rongeurs | RWD, China | S22002-14 | |
| Spoon | Hammacher | HSN 152-13 | |
| dental cement spatula | Hammacher | HSN 016-15 | |
| dental double end excavator | Blacksmith Surgical, USA | BS-415-017 | |
| Vibrating Microtome | Leica, Germany | VT1200S | |
| surgical blade | RWD, China | S31023-02 | |
| surgical holder | RWD, China | S32007-14 | |
| Electrophysiology equipment and materials | |||
| Vertical Pipette Puller | Narishige, Japan | PC-10 | |
| Vibration isolation table | Meirits, Japan | ADZ-A0806 | |
| submerged type recording chamber | Warner Instruments | RC-26GLP | |
| 4 Axis Micromanipulator | Sutter, USA | MP-285, MP-225 | |
| Platinum Wire | World Precision Instruments | PTP406 | |
| Amplifier | Molecular Devices, USA | Multiclamp 700B | |
| Data Acquisition System | Molecular Devices, USA | Digidata 1440A | |
| Anaysis software | Molecular Devices, USA | Clampex 10.2 | |
| Fluorescence Microscope | Nikon, Japan | FN1 | |
| LED light source | Lumen Dynamics Group, Canada | X-cite 120LED | |
| micropipettes | Harvard apparatus | GC150TF | extracelluar recording |
| borosilicate micropipettes | Sutter, USA | BF150-86 | patch clamp |
| tungsten electrode | A-M Systems, USA | 575500 | |
| peristaltic pump | Longer, China | BT00-300T | |
| tubes for peristaltic pump | ISMATEC, Wertheim, Germany | SC0309 | 1x inflow, ID: 1.02 mm |
| tubes for peristaltic pump | ISMATEC, Wertheim, Germany | SC0319 | 2x tubes for outflow, ID: 2.79 mm |
| CCD camera | PCO, Germany | pco.edge sCMOS | |
| lens cleaning paper | Kodak | ||
| 50 mL conical centrifuge tube | Thermo scientific | 339652 | |
| Prechamber | Warner Instruments | BSC-PC | |
| Inline heater | Warner Instruments | SF-28 | |
| Temperature Controller | Warner Instruments | TC-324B |
References
- McIlwain, H. Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain. Biochem J. 48 (4), (1951).
- McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. Responses in vitro from the piriform cortex of the rat, and their susceptibility to centrally-acting drugs. J Neurochem. 14 (9), 937-938 (1967).
- Yamamoto, C., McIlwain, H. Electrical activities in thin sections from the mammalian brain maintained in chemically-defined media in vitro. J Neurochem. 13 (12), 1333-1343 (1966).
- Andersen, P., Bliss, T. V., Lomo, T., Olsen, L. I., Skrede, K. K. Lamellar organization of hippocampal excitatory pathways. Acta Physiol Scand. 76 (1), 4-5 (1969).
- Skrede, K. K., Westgaard, R. H. The transverse hippocampal slice: a well-defined cortical structure maintained in vitro. Brain Res. 35 (2), 589-593 (1971).
- Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. Slices have more synapses than perfusion-fixed hippocampus from both young and mature rats. J Neurosci. 19 (8), 2876-2886 (1999).
- Schwartzkroin, P. A. Characteristics of CA1 neurons recorded intracellularly in the hippocampal in vitro slice preparation. Brain Res. 85 (3), 423-436 (1975).
- Schwartzkroin, P. A., Wester, K. Long-lasting facilitation of a synaptic potential following tetanization in the in vitro hippocampal slice. Brain Res. 89 (1), 107-119 (1975).
- Reymann, K. G., Frey, J. U. The late maintenance of hippocampal LTP: requirements, phases, 'synaptic tagging', 'late-associativity' and implications. Neuropharm. 52 (1), 24-40 (2007).
- Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. Synaptic plasticity in health and disease: introduction and overview. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 369 (1633), 20130129 (2014).
- Bliss, T. V., Gardner-Medwin, A. R. Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the unanaestetized rabbit following stimulation of the perforant path. J Physiol. 232 (2), 357-374 (1973).
- Reid, K. H., Edmonds, H. L., Schurr, A., Tseng, M. T., West, C. A. Pitfalls in the Use of Brain-Slices. Prog Neurobiol. 31 (1), 1-18 (1988).
- Rambani, K., Vukasinovic, J., Glezer, A., Potter, S. M. Culturing thick brain slices: an interstitial 3D microperfusion system for enhanced viability. J Neurosci Methods. 180 (2), 243-254 (2009).
- Hajos, N., et al. Maintaining network activity in submerged hippocampal slices: importance of oxygen supply. Eur J Neurosci. 29 (2), 319-327 (2009).
- Redondo, R. L., et al. Synaptic tagging and capture: differential role of distinct calcium/calmodulin kinases in protein synthesis-dependent long-term potentiation. J Neurosci. 30 (14), 4981-4989 (2010).
- Stopps, M., et al. Design and application of a novel brain slice system that permits independent electrophysiological recordings from multiple slices. J Neurosci Methods. 132 (2), 137-148 (2004).
- Behnisch, T., Matsushita, S., Knopfel, T. Imaging of gene expression during long-term potentiation. Neuroreport. 15 (13), 2039-2043 (2004).
- Karpova, A., et al. Encoding and transducing the synaptic or extrasynaptic origin of NMDA receptor signals to the nucleus. Cell. 152 (5), 1119-1133 (2013).
- Karpova, A., Mikhaylova, M., Thomas, U., Knopfel, T., Behnisch, T. Involvement of protein synthesis and degradation in long-term potentiation of Schaffer collateral CA1 synapses. J Neurosci. 26 (18), 4949-4955 (2006).
- Weng, W., Chen, Y., Wang, M., Zhuang, Y., Behnisch, T. Potentiation of Schaffer-Collateral CA1 Synaptic Transmission by eEF2K and p38 MAPK Mediated Mechanisms. Front Cell Neurosci. 10 (247), (2016).
- Meduna, L. J., Jackman, A. I. Carbon dioxide inhalation therapy. Res Publ Assoc Res Nerv Ment Dis. 31, 280-286 (1953).
- Edwards, F. A., Konnerth, A., Sakmann, B., Takahashi, T. A thin slice preparation for patch clamp recordings from neurones of the mammalian central nervous system. Pflugers Arch. 414 (5), 600-612 (1989).
- Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology. J Vis Exp. (49), (2011).
- Yuanxiang, P., Bera, S., Karpova, A., Kreutz, M. R., Mikhaylova, M. Isolation of CA1 nuclear enriched fractions from hippocampal slices to study activity-dependent nuclear import of synapto-nuclear messenger proteins. J Vis Exp. (90), e51310 (2014).
- Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats. J Neurosci Meth. 130 (1), 19-32 (2003).
- Kloosterman, F., Peloquin, P., Leung, L. S. Apical and basal orthodromic population spikes in hippocampal CA1 in vivo show different origins and patterns of propagation. J Neurophysiol. 86 (5), 2435-2444 (2001).
- Thiemann, W., Malisch, R., Reymann, K. G. A new microcirculation chamber for inexpensive long-term investigations of nervous tissue in vitro. Brain Res Bull. 17 (1), 1-4 (1986).
- Shetty, M. S., et al. Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents. J Vis Exp. (103), (2015).
- Du, H., Lin, J., Zuercher, C. Higher efficiency of CO2 injection into seawater by a venturi than a conventional diffuser system. Bioresour Technol. 107, 131-134 (2012).
- Weinman, J., Mahler, J. An Analysis of Electrical Properties of Metal Electrodes. Med Electron Biol Eng. 2, 299-310 (1964).
- Fanselow, M. S., Dong, H. W. Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures. Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).
- Wang, M., et al. Translation of BDNF-gene transcripts with short 3' UTR in hippocampal CA1 neurons improves memory formation and enhances synaptic plasticity-relevant signaling pathways. Neurobiol Learn Mem. , (2016).
