Summary
在这里, 我们描述了一个新的糖尿病小鼠模型利用无毛 real-time, 无创, 监测生物膜伤口感染生物发光的铜绿假单胞菌。该方法可用于评价其他细菌种类和转基因微生物的感染, 包括多生物膜, 并对 antibiofilm 策略的有效性进行测试。
Abstract
在慢性创伤中, 特别是在糖尿病患者中, 细菌的存在是一种结构化的生物膜, 被认为可以防止伤口的愈合和解决。慢性小鼠伤口模型已经被用来理解微生物和宿主之间的潜在相互作用。该模型的发展至今依赖于头发动物的使用和伤口组织的终端收集, 以确定可行的细菌。虽然这些模型已经获得了很大的洞察力, 但这个实验过程需要大量的动物, 取样是费时的。我们开发了一种新的小鼠模型, 它结合了几种最佳的创新方法来评估慢性伤口中生物膜的进展: a) 它利用无毛老鼠, 消除了脱毛的需要;b) 将预先生物膜应用于伤口, 以便立即评估这些社区对宿主的持久性和影响;c) 监测生物膜的进展, 通过量化由基因工程生物荧光菌株的铜绿假单胞菌的光生产, 使 real-time 监测的感染, 从而减少了每项研究所需的动物数量。在该模型中, 在脲佐菌素诱导的糖尿病无毛小鼠的背上产生单全创面, 并在其上接种了铜绿绿脓杆菌生物发光菌株41的生物膜。从伤口的光输出每天记录在一个体内成像系统, 允许在体内和原位快速生物膜可视化和局部化生物膜细菌在伤口。这种新的方法是灵活的, 因为它可以用来研究其他微生物, 包括基因工程物种和多生物膜, 并可能具有特殊价值的测试 anti-biofilm 战略, 包括抗菌闭塞敷料。
Introduction
生物膜是嵌在高分子物质基质中的复杂的微生物群落, 被强调为导致慢性伤口的不良解决的一个因素1。对这些高度有组织的, 持久性微生物种群的研究对于糖尿病患者来说尤为重要, 因为在肢体上的循环不良和周围感觉机制的改变会导致未被察觉的病变2。在美国, 据估计, 15% 的糖尿病患者在生命过程中至少会产生一种溃疡。这转化为经济支出约280亿美元的治疗3,4, 更不用说 immensurable 的情感和社会负担。了解允许微生物群落在创面中持续存在的因素, 以及这些生物膜在愈合过程中所产生的影响, 对于更好地照顾受影响的患者和推动新的治疗方法的发展是势在必行的。因此, 建立可重复和可翻译的在体内模型, 以探索细菌与宿主的相互作用是最重要的。
小鼠模型已经成功地研究了生物膜对慢性伤口的影响。然而, 这些模型经常利用头发的物种, 并通过平板计数来评估生物膜清除量, 为被牺牲的动物切除组织的活细菌细胞, 使它们耗费大量时间和成本。
Contag et al首次提出了一种 biophotonic 的动物在评估感染时的终点取样的替代方法。(1995)5,谁开发了一种方法来捕获发光从组成生物发光的沙门氏菌沙门菌测量抗生素治疗的功效。其它利用生物发光细菌的研究也随之而来。例如, Rochetta et al。(2001)6通过使用增强的电荷耦合装置和后来的 Kadurugamuwa et al来验证感染模型, 以研究大肠杆菌小鼠的大腿感染。(2003)7利用了一株被工程化的金黄色葡萄球菌的光子发射特性, 研究了几种抗生素在小鼠导管伤口模型中的有效性。
该方法的特点是在无毛小鼠中诱导糖尿病的直接协议, 预先生物荧光生物膜产生和接种伤口, 并对感染的铜绿假单胞菌进行 biophotonic 监测。使用在体内成像系统。它提供了一个直接, 快速,原位, 非侵入性和定量的过程, 以评估慢性伤口的生物膜, 此外, 允许额外的分析, 如显微成像愈合伤口, 间歇血液收集细胞因子的测量, 和组织学的晚期组织收集。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
动物实验由密歇根州立大学动物保育和使用委员会批准.
1. 咬合敷料和硅胶垫片的制备
- 剪切透明的咬合敷料, 使正方形约 1 cm x 1 厘米与剪刀.
- 在0.5 毫米厚的硅胶片上用10毫米的活检拳切割10毫米圆圈. 和 #160; 中心5毫米活检冲床在 10 mm 圈的中间, 并按坚定地创建一个孔, 形成一个和 #34;d onut 和 #34;-像圆盘, 将被用作夹板. 和 #160;
2. 实验动物
- 使用8周老 (22-26 克) 雄性 SKH-1 小鼠。保持21和 #176 的标准条件下的小鼠; C 和12小时暗循环, 免费获得食物和水.
- 为了诱发糖尿病, 在5连续的天内, 用13毫克/毫升链脲佐菌素 (intraperitonially) solutionand 25% 葡萄糖 (250 和 #181; l/鼠标) 注射小鼠.
- 通过稀释65和 #181; 5 和 #181 中的脲佐菌素 g; 100 mM 柠檬酸, pH 4.5.
- 调整每只老鼠的注射量为每1公斤的老鼠体重65毫克的最终质量。100毫米柠檬酸溶液注射控制小鼠的 pH 值4.5 在同一天.
- 在最后一次注射血糖后14天内通过血糖监测确认高血糖。糖尿病小鼠可能有尿, 所以他们的床上用品可能需要更频繁地改变, 以消除湿度和他们的体重应监测每周3次.
3。生物膜
- 生物膜制备
- 生长菌落生物膜 8 以给伤口接种。手术前两天开始一夜的生物发光的文化 铜绿假单胞菌 Xen 41 在胰的大豆肉汤中孵育在37和 #176; C 和震动 200 rpm 和消毒的聚碳酸酯膜过滤器与0.2 和 #181; m 孔径通过暴露在紫外光在一个生物安全罩15分钟每边.
- 一天前的手术离心机过夜培养 2万 x g 2 分钟和洗涤3次与1毫升的 Dulbelcco 和 #39; 磷酸缓冲盐水 (DPBS) 由移上下.
- 稀释悬浮在 DPBS 到0.05 在 600 nm 的吸光度.
- 吸管10和 #181; 在胰大豆琼脂 (TSA) 板上的每个膜上的稀释培养基的 L。在允许干燥后, 在35和 #176 孵育膜; C 为72小时生长生物膜, 每24小时向新的 TSA 板转移. 在实验开始之前,
- 标准曲线
- 将发光和细菌计数关联起来的标准曲线.
- 准备3.1 中描述的生物膜.
- 使生物膜的系列稀释从 #189; 到1/24 通过混合生物膜与 DPBS 和涡流, 直到产生一个视觉均匀的解决方案。吸管200和 #181; 在一个黑色96井板和图像的稀释溶液的 L 的 在体内 成像系统.
- 将板稀释到 TSA 板上并在35和 #176 上孵育; C 为 24 h.
- 在板上计数菌落形成单元 (CFU), 并创建标准曲线以关联生物发光和细菌计数.
4。伤口手术
- 在 95% oxygen/5%co 中使用异氟醚诱导全身麻醉 (以防止酮症酸中毒死亡), 流速为1升/分和 #160; 使用1-3% 异氟醚维持麻醉。在手术中保持动物的热垫.
- 确保通过用镊子捏住脚并将鼠标置于俯卧位置来抑制鼠标的深层踏板反射.
- 昔 (0.2 毫克/千克) 通过 sub-cutaneous 注射 (30 和 #956; l) 进行疼痛管理.
- 用10% 聚维酮碘三次和一个异丙醇垫擦拭背部的皮肤.
- 使用无菌 4 mm 活检穿孔, 为鼠标和 #39 的一侧的伤口勾勒一个圆形图案。用永久性标记勾勒图案.
- 使用锯齿钳在轮廓和虹膜剪刀的中部提起皮肤, 以创建一个全的伤口, 延伸到皮下组织, 包括 panniculus carnosus 和切除圆形的组织.
- 将医用防水皮肤粘合剂粘附在小鼠的皮肤上, 并将硅胶夹板施加轻度压力。用透明的咬合敷料盖住伤口。手术后, 将动物单独关在笼子里.
5。术后管理
- 每日通过 sub-cutaneous 注射昔 (0.2 毫克/千克), 用于术后2天内疼痛缓解.
- 每天监测动物的疼痛和体重减轻的表现。糖尿病动物需要胰岛素注射时, 他们已经失去了15% 或更多的体重.
6。生物膜接种的制备和感染
- 在手术后接种48小时的小鼠, 如以下步骤所述.
- 用无菌刮刀从膜上刮 72 h 生物膜, 将其放在离心管中, 并在 DPBS 中稀释1:2。混合通过短暂的移上下.
- 将板接种到 TSA 板上, 以计算总 CFU。为了确保计数是准确的, 打破了生物膜接种进一步由一系列的两个1分钟的涡流步骤插2分钟超声步骤在40赫在一个超声波清洗器.
- 删除敷料覆盖伤口和硅胶夹板, 并采取显微镜下的伤口与相机的摄像头使用的标尺, 以供参考.
- 切割200和 #181 的提示; l 吸管提示和吸管10和 #181; 生物膜的 l 接种在每个伤口上.
- 图像鼠标使用 在体内 成像系统使用自动设置: 曝光时间5-300 秒, 与中等分, 1 f/停止和开放过滤器, 和视野 C (12.9 cm x 12.9 cm).
- 用新敷料覆盖伤口.
7。伤口测量和成像
- 每日评估动物临床症状 9 。
- 根据需要提供食物、水和更换笼子.
- 每天检查敷料的完整性。当敷料是存在的, 只有生物发光可以测量, 由于闭塞的伤口。在8天, 敷料被删除, 并没有取代, 允许测量伤口闭合.
- 每隔一天称一次动物.
- 所有天数, 将小鼠单独放置在隔离室中使用 活体 成像系统每天或每隔一天都配备一个高效的过滤器和图像, 直到发光值降到背景水平以下.
- 8 天后, 在伤口愈合前, 用一把尺子, 用一把相机, 用一把显微, 用显微镜将伤口全身麻醉.
8。组织学分析
- 在安乐死室和 #160 中安乐2升/分钟的 CO 2 的小鼠; 发光后降到背景水平以下, 伤口完全愈合。确认宫颈脱位死亡是第二种安乐死方法.
- 使用虹膜剪刀创建一个宽, 完整的切除周围和伤口面积 (约1厘米直径), 并保存在4% 甲醛组织病理分析.
- 其他分析: 细胞因子检测
- 使用毛细管玻璃管从动物体内收集血液轨道, 并将其转移到 EDTA 处理过的管中。
- 离心机的血液在 2000 rpm 20 分钟, 在4和 #176; C 和冷冻血浆细胞因子检测.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
在这个新模型的开发中, 我们观察到了利用无毛 SKH-1 C57BL/6J 小鼠的许多优点, 这是我们过去使用过的。在糖尿病的发病过程中, 受注射脲佐菌素的动物通常会逐渐减轻体重;然而, 在先前由我们的实验室进行的伤口愈合实验中, 复制了邓恩. et al提出的模型。(2012)9使用 C57BL/6J, 观察到了剧烈的失重 (图 1)。与此相反, 当使用 SKH-1 小鼠的伤口模型时, 观察到了统计学上显著的低体重下降 (P 和 #60; 0.0001, 曼-惠特尼 U 检验)。此外, 没有发生死亡的糖尿病 SKH-1 小鼠队列感染铜绿假单胞菌Xen 41 生物膜, 而40% 的死亡率被观察到 C57BL/6J 感染小鼠在先前的实验 (图 2)。
该模型的另一个优点是, C57BL/6J 小鼠的脱毛步骤的实验程序是不必要的 SKH-1 小鼠。虽然在我们以前的实验与头发小鼠特别注意减少对皮肤的刺激, 一些损害不可避免地发生 (图 3)。然而, 值得注意的是, 在这个模型中利用无毛小鼠最大的优点是消除了在长期伤口愈合研究中观察到的毛发再生问题。在我们的经验与 C57BL/6J 小鼠, 头发再生变化从动物到动物, 但考虑到长期性质的研究, 它总是发生和干扰伤口面积测量或错位伤口夹板和/或敷料用于覆盖感染伤口, 可能导致伤口干燥 (图 4)。
在 SKH-1 伤口愈合模型中, 糖尿病确诊后, 手术可以很容易地被执行, 以创建一个循环全伤口的动物背部。硅胶夹板由医用防水皮肤粘合剂固定, 避免与新创的伤口床 (图 5) 的咬合敷料直接接触。
铜绿假单胞菌Xen 41 在聚碳酸酯膜上生长的生物发光生物膜 (图 6) 很容易和菌转移到注射器, 准备交付给伤口和接种的小鼠每天监测临床感染的迹象 (图 7)。对于这个模型, 我们实现了两个不同的阶段。在第一阶段, 在接种生物膜后, 伤口被一个覆盖着透明咬合敷料的夹板包围着。这导致脓液积聚, 阻塞了伤口。生物膜的伤口每天与体内成像系统, 以监测感染的发展和评估生物膜的演变 (图 8和图 9)。生物发光, 记录为总通量 (p/秒), 可与细菌密度相关, 使用标准曲线 (图 10)。
在8天, 夹板和敷料被删除, 使伤口愈合可视化。由于伤口周围的脓液丢失, 生物发光随后下降;然而, 细菌仍然与伤口相关, 由组织学决定。这种去除敷料, 以测量伤口愈合的方法已被用于其他慢性伤口愈合研究 (裁判)。伤口愈合进展可以通过采取显微与相机连接到显微镜 (图 11)。
图 1: SKH-1 和 C57BL/6J 糖尿病小鼠体重的比较百分比.天零对应于在最后一天 (5th) 脲佐菌素注射液的重量。n = 10 只老鼠为 SKH-1 和 n = 12 只老鼠为 C57BL/6J。请单击此处查看此图的较大版本.
图 2: SKH-1 和 C57BL/6J 糖尿病小鼠的存活率% 铜绿假单胞菌Xen 41 生物膜应用 (1 天).n = 5 只老鼠为 SKH-1 和 n = 10 只老鼠为 C57BL/6J。请单击此处查看此图的较大版本.
图 3:剃须后, 在未来受伤地区的皮肤撕裂伤和使用脱毛霜 C57BL/6J 小鼠.(A): 程序日;(B): 程序后4天。请单击此处查看此图的较大版本.
图 4:(a) C57BL/6J 小鼠与部分切除的伤口夹板。(B) 抬起夹板后发现愈合的伤口周围全 re-grown 的头发。请单击此处查看此图的较大版本.
图 5: 伤 SKH-1 小鼠的手术方法.(A) 与活检穿孔的分界;(B) 划界提纲;(C) 伤人完成;(D) 医用防水皮肤胶粘剂的应用;(E) 胶合夹板;(F) 伤口被咬合敷料覆盖。请单击此处查看此图的较大版本.
图 6: 生物膜接种的制备.(A) 72 h 菌落生物膜的铜绿假单胞菌 Xen 41 在聚碳酸酯膜上生长;(B) 用 syrin 测量生物膜ge.请单击此处查看此图的较大版本.
图 7: SKH-1 糖尿病小鼠伤口后6天接种了铜绿假单胞菌Xen 41 生物膜.请单击此处查看此图的较大版本.
图 8: 跟踪生物荧光在糖尿病 SKH-1 小鼠体内的变化, 监测生物膜感染.(A) 生物膜应用日;(B) 5 天 post-biofilm;(C) 8 天 post-biofilm;(D) 12 天 post-biofilm;(E) 16 天 post-biofilm;(F) 20 天 post-biofilm。请单击此处查看此图的较大版本.
图 9: 在实验过程中, 感染了 SKH-1 的糖尿病小鼠的伤口总通量为铜绿假单胞菌Xen 41 生物膜.请单击此处查看此图的较大版本.
图 10: 每条伤口的估计 CFU, 使用每 CFU 产生的生物发光标准曲线, 以铜绿假单胞菌Xen 41 生物膜.请单击此处查看此图的较大版本.
图 11: 感染了铜绿假单胞菌的伤口的显微照片时间线 Xen 41 生物膜在糖尿病 SKH-1 小鼠显示愈合的进展.生物膜感染后的天数显示在每张图片的左下角。请单击此处查看此图的较大版本.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
在这里, 我们描述了一个新的老鼠模型的研究糖尿病慢性伤口的生物膜有很多优势, 创造一个可复制的, 可翻译的, 灵活的模型。
第一项创新是使用无毛小鼠。其他的小鼠模型已经开发, 以研究糖尿病慢性伤口愈合10,11, 但所有这些都依赖于头发小鼠的使用, 需要脱毛的过程, 包括打蜡或头发修剪结合脱毛霜这一步不仅费时和凌乱, 但可能伤害的皮肤, 在该地区的伤口将被放置的动物。虽然无毛小鼠已被用于一系列癌变研究12,13, 但这些小鼠并没有被用于评估慢性伤口中生物膜的持久性。另一个常见的问题解决的使用无毛动物, 特别是在长期的研究, 是头发再生在伤口区域, 这可能危及评估伤口愈合和扰乱包扎。
SKH-1 的动物也被证明是适合于脲佐菌素诱导型糖尿病, 与 C57BL/6J 小鼠相比, 在实验过程中, 在统计学上显著降低了体重下降, 使剂量与胰岛素不必要。这是一个特别有趣的特点, 因为胰岛素治疗可能会影响感染的结果, 如沃特斯 et al. (2014)14谁描述的细菌计数增加的胰岛素治疗糖尿病动物感染的铜绿假单胞菌生物膜与无胰岛素对照。此外, 在我们的模型中, 无毛队列中的死亡率急剧下降, 表明动物在处理感染方面有可能更有弹性。
该模型的第二个特点是测量预先生物膜接种浆的应用, 以感染与浮游生长的细胞形成对比的伤口。通过提供一个已经新陈代谢复杂和结构化的细菌群落的伤口, 细菌细胞能够逃避免疫系统和直接影响的生物膜对病变可以确定。
这一新的伤口模型的第三个优点是使用能够产生生物发光的微生物菌株, 可以用一个在体内成像系统来测量, 以空间地定位和量化细菌。这允许 real-time 跟踪生物膜的演变随着时间的推移。铜绿假单胞菌Xen 41 菌株在细菌染色体上拥有一个稳定的p. luminescences luxCDABE子, 从而导致发光的本构发射, 它可以被敏感相机捕获。在成像系统中。这种 real-time, 非侵入性的,原位功能允许测量生物膜的生物发光, 即使在夹板和覆盖到位。这一特性大大减少了每项研究所需的动物数量, 因为没有必要在某些时间点为生物膜监测牺牲动物。然而, 存在的生物膜和脓闭塞测量伤口愈合。在这项研究中, 我们删除了敷料在8天, 以允许可视化的伤口愈合, 但这个参数可以修改, 取决于问题正在解决。
最后, 由于成像系统能够探测到2.5 厘米深的生物荧光, 新提出的模型可用于检测抗菌疗法, 无论是溶液或凝胶的形式, 还是将其纳入咬合敷料。real-time 感染监测模型允许更大的灵活性, 以衡量不同剂量浓度和时间的影响, 而不是静态 end-point 化验。这个模型可以帮助验证潜在的新的治疗方法, 以消除慢性伤口生物膜。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
作者声明他们没有竞争的金融利益。
Acknowledgments
作者想感谢美国糖尿病协会支持这项工作 (赠款 # #7-13-BS-180), 密歇根州立大学研究技术支持设施, 提供培训和访问的在体内成像系统和密歇根州立大学调查组织病理学实验室为组织病理学检查进行小鼠活检。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Opsite | Smith & Nephew | Model 66000041 | Smith & Nephew Flexfix Opsite Transparent Adhesive Film Roll 4" x 11yards |
| SKH-1 mice Crl:SKH1-Hrhr | Charles River Breeding Laboratories | SKH1 | Hairless mice, 8 weeks old |
| Streptozotocin (STZ) | Sigma Aldrich | S0130-1G | Streptozocin powder, 1g |
| AccuChek glucometer | Accu-Chek Roche | Art No. 05046025001 | ACCU-CHEK CompactPlus Diabetes Monitoring Care Kit |
| Pseudomonas aeruginosa Xen 41 | Perkin Elmer | 119229 | Bioluminescent Pseudomonas aeruginosa |
| Polycarbonate membrane filters | Sigma Aldrich | P9199 | Millipore polycarbonate membrane filters with 0.2 μm pore size |
| Dulbelcco phosphate buffer saline (DPBS) | Sigma Aldrich | D8537 | PBS |
| Tryptic soy agar | Sigma Aldrich | 22091 | Culture agar |
| Meloxicam | Henry Schein Animal Health | 49755 | Eloxiject (Meloxicam) 5mg/mL, solution for injection |
| 10% povidone-iodine (Betadine) | Purdue Products LP | 301879-OA | Swabstick, Betadine Solution. Antiseptic. Individ. Wrapped, 200/case |
| 4% paraformaldehyde | Fisher Scientific | AAJ61899AK | Alfa Aesar Paraformaldehyde, 4% in PBS |
| Capillary glass tube | Fisher Scientific | 22-362-566 | Heparinized Micro-Hematocrit Capillary Tubes |
| Silicone to make splints | Invitrogen Life Technologies Corp | P-18178 | Press-to-Seal Silicone Sheet, 13cm x 18cm, 0.5mm thick, set of 5 sheets |
| Tryptic soy broth | Sigma Aldrich | 22092 | Culture broth |
| IVIS Spectrum | Perkin Elmer | 124262 | In vivo imaging system |
| IVIS Spectrum Isolation chamber | Perkin Elmer | 123997 | XIC-3 animal isolation chamber |
| HEPA filter | Teleflex | 28022 | Gibeck ISO-Gard HEPA Light number 28022 |
| Biopsy punches | VWR International Inc | 21909-142 | Disposable Biopsy Punch, 5mm, Sterile, pack of 50. |
| Biopsy punches | VWR International Inc | 21909-140 | Disposable Biopsy Punch, 4mm, Sterile, pack of 50. |
| Glucose | J.T.Baker | 1916-01 | Dextrose, Anhydrous, Powder |
| Citric acid | Sigma Aldrich | C2404-100G | Citric Acid |
| Mastisol | Eloquest Healthcare | HRI 0496-0523-48 | Mastisol Medical Liquid Adhesive 2/3 mL vial, box of 48 |
| Corning 96-well black plates | Fisher Scientific | 07-200-567 | 96-well clear bottom black polysterene microplates |
| 25 gauge 5/8 inch needle | BD | 305122 | Regular bevel needle |
| Bransonic M Ultrasonic Cleaning Bath | Branson Ultrasonics | N/A | Ultrasonic Cleaner |
References
- James, G. A., et al. Biofilms in chronic wounds. Wound Repair Regen. 16 (1), 37-44 (2008).
- Gordois, A., Scuffham, P., Shearer, A., Oglesby, A., Tobian, J. A. The health care costs of diabetic peripheral neuropathy in the US. Diabetes Care. 26 (6), 1790-1795 (2003).
- Reiber, G. E., McDonell, M. B., Schleyer, A. M., Fihn, S. D., Reda, D. J. A comprehensive system for quality improvement in ambulatory care: assessing the quality of diabetes care. Patient Educ Couns. 26 (1-3), 337-341 (1995).
- Driver, V. R., Fabbi, M., Lavery, L. A., Gibbons, G. The costs of diabetic foot: The economic case for the limb salvage team. J Vasc Surg. 52 (Suppl 3), 17S-22S (2010).
- Contag, C. H., et al. Photonic detection of bacterial pathogens in living hosts. Mol Microbiol. 18 (4), 593-603 (1995).
- Rocchetta, H. L., et al. Validation of a noninvasive, real-time imaging technology using bioluminescent Escherichia coli in the neutropenic mouse thigh model of infection. Antimicrob Agents Chemother. 45 (1), 129-137 (2001).
- Kadurugamuwa, J. L., et al. Rapid direct method for monitoring antibiotics in a mouse model of bacterial biofilm infection. Antimicrob Agents Chemother. 47 (0066-4804), 3130-3137 (2003).
- Anderl, J. N., Franklin, M. J., Stewart, P. S. Role of antibiotic penetration limitation in Klebsiella pneumoniae biofilm resistance to ampicillin and ciprofloxacin. Antimicrob Agents Chemother. 44 (7), 1818-1824 (2000).
- Morton, D. B. A systematic approach for establishing humane endpoints. ILAR J. 41 (2), 80-86 (2000).
- Dunn, L., et al. Murine model of wound healing. J Vis Exp. (75), e50265 (2013).
- Zhao, G., et al. Delayed wound healing in diabetic (db/db) mice with Pseudomonas aeruginosa biofilm challenge - a model for the study of chronic wounds. Wound Repair Regen. 18 (5), 467-477 (2010).
- Holley, A. K., Xu, Y., Noel, T., Bakthavatchalu, V., Batinic-Haberle, I., St. Clair, D. K. Manganese superoxide dismutase-mediated inside-out signaling in HaCaT human keratinocytes and SKH-1 mouse skin. Antioxid Redox Signal. 20 (15), 2347-2360 (2014).
- Abbas, S., Alam, S., Pal, A., Kumar, M., Singh, D., Ansari, K. M. UVB exposure enhanced benzanthrone-induced inflammatory responses in SKH-1 mouse skin by activating the expression of COX-2 and iNOS through MAP kinases/NF-ĸB/AP-1 signalling pathways. Food Chem Toxicol. 96, 183-190 (2016).
- Watters, C., Everett, J. A., Haley, C., Clinton, A., Rumbaugh, K. P. Insulin treatment modulates the host immune system to enhance Pseudomonas aeruginosa wound biofilms. Infect Immun. 82 (1), 92-100 (2014).
