Summary
Mantle celle lymfom (MCL) er en vanskelig at behandle B-celle sygdom og det er lige så vanskeligt at etablere en xenograft musemodel af primære MCL at studere og udvikle therapeutics. Her beskriver vi vellykket etablering af MCL xenografts i mus til at hjælpe med at forstå dens underliggende biologi.
Abstract
B-lymfocytter er centrale aktører i immun celle omsætning og de primært hjem til og opholde sig i lymfoide organer. Mens normale B celler formere kun når stimuleret af T-lymfocytter, muterede B celler overleve og udvide selvstændigt i udefineret orgel nicher. Mantle celle lymfom (MCL) er en sådan lidelse, B-celle, hvor den mediane overlevelse af patienter er 4-5 år. Dette kræver brug af effektive mekanismer, som målsøgende og engraftment af disse celler er blokeret for at øge overlevelse og levetiden af patienter. Derfor, indsatsen for at udvikle en xenograft musemodel for at studere effekten af MCL therapeutics ved at blokere den homing mekanisme i vivo er af allerstørste betydning. Udvikling af animalske modtagere for humane celle xenotransplantation at teste tidlige fase narkotika har længe været forfulgt, som relevante prækliniske musemodeller er afgørende for skærmen nye terapeutiske agenter. Dette dyr model er udviklet til at undgå menneskelig graft afvisning og at etablere en model for menneskelige sygdomme, og det kan være et yderst nyttigt værktøj at studere sygdomsprogression af forskellige lymfom typer og udføre præklinisk afprøvning af kandidat narkotika for maligne hæmatologiske sygdomme som MCL. Vi etablerede en xenograft musemodel, der vil tjene som en fremragende ressource for at studere og udvikle nye terapeutiske tilgange til MCL.
Introduction
Lymfocytter af natur spiller en stor rolle i immunforsvaret overvågning, og lymfocyt handel er et kritisk skridt i montering antigen specifikke immunitet1,2. Denne proces omfatter overførsel af naive T-lymfocytter fra thymus at blodet, og derfra til sekundære lymfoide organer, herunder lymfeknuder, Peyerske plaques eller milten, hvor de mødes beslægtet antigener. B-lymfocytter differentiere i knoglemarven og overflytte som naiv celler i follikler af sekundære lymfoide organer3. Nogle af disse B-celler binder antigen med deres receptor og aktiveres ved specifikke T-celler. Spredning og differentiering af disse B-celler skubber de ikke-aktiveret, naive B-celler i zonen kappe af hårsækken. Aktiverede celler kan derefter differentiere i hukommelse B-celler, som patruljerer kroppen, eller modnes til immunoglobulin secernerende plasmaceller, der vandrer til knoglemarven4.
MCL opstår når naive B-lymfocytter i zonen kappe forvandle sig til en tumor. Disse lymfom celler er placeret i mikromiljø lymfoide organer og formere sig uafhængigt af specifikke T-lymfocytter kontrol. Men på et bestemt tidspunkt af tæthed de flygte fra dette niche og recirkulere i blodbanen i søgen efter nicher i andre organer. I betragtning af kompleksiteten af adhæsionsmolekyler og promiskuitet kemokiner og deres receptorer, mekanismen af dette cellulære menneskehandel i vivo er dårligt forstået og derfor hæmmer terapi. Nye metoder er nødvendige for effektivt blokere denne migration processen for at forhindre lymfom B celler fra at nå nye microenvironments.
MCL er en af de mest vanskelige at behandle B celle maligniteter. Udviklingen af en neoplastiske Fænotypen af MCL er resultatet af en omstændelig kaskade, karakteriseret ved erhvervelse af unikke biologiske egenskaber. På tidspunktet for diagnosen, de fleste patienter (70%) allerede er til stede med en dissemineret sygdom, med et flertal af tilfælde udstiller extranodal inddragelse i milt, knoglemarv og/eller mavetarmkanalen5,6. I behandlede patienter er tilbagefald af resistente tumorer inden for et par år fælles, selvom konventionel kemoterapi inducerer høje remission priser på kort sigt7,8. Her præsenterer vi en ny sygdom model, der kan hjælpe med at forstå MCL formidling og dets underliggende Biologi: vi etableret en menneskelig MCL xenograft musemodel, der stammer fra primær tumorceller af patienter. Vi håber, at denne model vil hjælpe med at udvikle terapeutiske strategier mod MCL formidling, og muligvis give nye kliniske perspektiver for optimal diagnose og behandling af recidiverende patienter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De menneskelige blodprøver blev brugt efter procedurer, der er godkendt af de lokale etiske og menneskelige eksperimenter udvalg af Genève University Hospital.
Animalske procedurer blev udført i overensstemmelse med den institutionelle etiske udvalg af Animal Care i Genève, Schweiz og den kantonale Veterinærkontoret (nummer for tilladelsen: 26-GE-15).
1. forberedelse af primære perifert blod mononukleære celler (PBMC) af tæthed Gradient adskillelse
Bemærk: 3-5 mL af perifert blod blev indhentet fra patienter med MCL i leukemic fase. Diagnosen var udarbejdet i overensstemmelse med standard diagnostiske kriterier for flowcytometri (CD5 +, CD23−, CD200 +, monoklonale B-celle population) og senere bekræftet af tilstedeværelsen af kromosom translokation t(11;14) og overekspression af cyclin D1. I alle tilfælde udgjorde monoklonale B celler til > 90% af befolkningens samlede B celle. Hovedsagelig var de resterende celler monocytter og nogle T celler.
- Fortyndet (1:1) 5 mL af MCL blodprøve med 5 mL af Roswell Park Memorial Institute medium 1640 (RPMI) (figur 1A).
- Invertere tæthed gradient medier (Table of Materials) flere gange før brug for grundig blanding.
- Der tilsættes 5 mL af tæthed gradient medier i en 15 mL-centrifugerør, ved hjælp af en pipette indsugningsventil.
- Forsigtigt lag fortyndet blodprøven over tæthed gradient medier i 15 mL centrifugeglas ved hjælp af en betjent sug (blod til tæthed gradient media forhold bør være 2:1, f.eks., 10 mL af blod til 5 mL af tæthed gradient media). Pleje bør tages til ikke blandes de to lag (figur 1B, C).
- Der centrifugeres prøve ved 400 x g i 40 min ved stuetemperatur med centrifuge bremserne slukket.
- Ved hjælp af en steril Pasteur pipette, forsigtigt Opsug den midterste lag (hvidligt, tynd ring er markeret med en pil (figur 1 d, E)) af mononukleære celler, overføre dem til en ren rør.
- Vask af mononukleære celler
- Vurdere omfanget af de overdragne cellesuspension og tilføje til det 3 bind af sterile 1 x fosfatbufferet saltopløsning (PBS) med 1% bovint serumalbumin (BSA).
- Bland suspensionen af pipettering op og ned flere gange.
- Der centrifugeres suspension på 400-500 x g i 10-15 min. ved stuetemperatur.
- Supernatanten for at opnå celle pellet og Gentag trinnet vask igen.
- Fjern supernatanten og resuspend celler i den ønskede mængde, f.eks., 1 eller 2 mL PBS.
- Tæl antallet af celler ved en automatiseret celle counter eller manuelt ved hjælp af en hemocytometer (Neubauer afdeling).
2. berigelse af B-celler af B-celle Negative valg
- Fortynd celler i PBS til en slutkoncentration på 50 x 106 celler/mL.
- Overfør celler til et 5 mL rund bund polystyren tube. Tilsættes 100 µL antistof cocktail fra B-celle berigelse kit 2 mL cellesuspension, og bland forsigtigt af pipettering op og ned (figur 2-1).
- Inkuber cellerne ved stuetemperatur i 10 min.
- Kort vortex de magnetiske partikler findes i B-celle berigelse kit for 30 s (figur 2-2). Tilføj 150 µL af de magnetiske partikler til 2 mL af prøven.
- Inkuber prøve til en anden 5 min ved stuetemperatur.
- Bringe sample volumen til 2,5 mL med 1 x PBS indeholdende 2% føtalt kalveserum (FCS) og 1 mM ethylendiamintetra syre (EDTA). Glasset anbringes i magneten og inkuberes rør til en anden 3-5 min (figur 2-3).
- Afhente magnet med rør på plads, og i en kontinuerlig bevægelse, dekanteres røret, så at beriget cellesuspension er indsamlet i en frisk røret (figur 2-4). Tælle celler af en automatiseret celle counter eller manuelt ved hjælp af en hemocytometer for at få det samlede udbytte af B-celler.
Bemærk: Udbyttet er typisk ~ 105 B celler/mL for normale B-celler og 5-50 x 106 celler/mL for MCL. - Bekræfter renheden af B-celle berigelse
- Tage ~ 50.000 celler og inkuberes celler med anti-CD19/CD20 antistoffer (1:20 fortynding) og anti-CD45 antistof koblet til forskellige fluorokromer (1:10 fortynding) ved stuetemperatur i 15-30 min.
- Vaske med 1 mL af 1 x PBS + 1% BSA, centrifugeres celler på 400-500 x g i 5 min, og pelleten celler i ~ 200 µL af PBS.
- Erhverve celle prøver ved flowcytometri og analysere for renhed af B-celler. Renhed er for det meste > 90% af denne metode (figur 3).
3. udvikling af Xenograft musen Model
- Suspendere ~ 40-60 x 106 celler i 150-200 µL 1 x PBS (volumen kræves for at injicere pr. mus).
- Injicér 150 µL af cellesuspension intravenøst (i.v.) i hver hale vene af 6-7 uge gamle immundefekte NOD scid gamma (NSG) mus uanset køn (figur 4A).
- Tillad mus at udvikle menneskelige lymfom ~ 10 uger.
Bemærk: Primære menneskelige lymfom celler tage meget længere tid at udvikle tumor i forhold til menneskets lymfom cellelinjer (~ 3 uger). - Når dyrene begynder at vise symptomer på dødelig sygdom som vægttab, ofrer pjusket hår, nedsat aktivitet, hind lemmer lammelse, etc., mus af CO2 kvælning efterfulgt af hjerte hjerte punktering at få blod.
- Indsamle forskellige organer som knoglemarven, milten og leveren ved at dissekere mus og indsamle perifert blod ved at trække blod fra hjertet på tidspunktet for ofre for tumor engraftment analyse (figur 4B -F).
4. kimærisme analyse af Tumor celle aflægger i forskellige organer
- Efter at indsamle de forskellige organer, behandle dem ved mekanisk afbrydelse at generere enkelt celle suspensioner efter røde blodlegemer (RBC) lysis bruger 200 µL 1 x ammoniumklorid kalium buffer for blod og knoglemarv, 500 µL til milten, og 2 mL til leveren .
- Tælle og plette celler ved hjælp af humane B-celle specifikke antistoffer, dvs, anti-CD19, anti-CD20 og anti-CD45.
Bemærk: NSG mus mangler B-celler og dermed for analyse, celler farves med menneskelige specifikke B-celle markører. - Analysere de celler, der stammer fra hver orgel ved flowcytometri ved gating på B-celler (CD19 +, CD20 + og CD45 +).
- Kvantificere aflægger tumorcellerne i forskellige organer afledt af MCL injiceres mus baseret på de indhegnede celler som angivet i trin 4.3 (figur 4 g).
Bemærk: Se Tabel af materialer for detaljer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Håndskriftet beskriver en optimeret protokol for en vellykket udvikling af en xenograft musemodel for engraftment MCL celler. Forberedelse af en ren celle population (i dette tilfælde MCL celler), er meget kritisk at udvikle vellykkede MCL xenografts. Figur 1 repræsenterer de forberedende skridt for mononukleære celler isolation fra MCL patientens blod af tæthed gradient adskillelse. Mononukleære celler behandles yderligere for at få rene B-celler ved hjælp af en negativ B celle berigelse kit til at få en ren celle population for xenograft indsprøjtning ind i musene. Bør sikres at opnå maksimal renhed for at have succes MCL engraftment. Renhed opnået med denne metode er normalt > 90%. Hovedsagelig var de resterende celler monocytter og nogle T celler (data ikke vist).
Figur 2 repræsenterer de forskellige trin i B-celle rensning protokol som beskrevet i afsnittet metoder. Beriget cellerne analyseres yderligere til deres renhed af flow Flowcytometret ved hjælp af forskellige markører (CD45 CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, kappa og lambda). Sekventiel gating som vist i figur 3 giver mulighed for karakterisering af MCL celler: CD45 + CD19 +, CD20 +, CD5 +, CD23− og CD200− er valgt. Kompensation for multicolor farvning blev udført ved hjælp af enkelt farvede kontrol for hver af fluorokromer anvendes ifølge standard flowcytometri set-up.
Figur 3E G repræsenterer den typiske dot plot af B-celler, før og efter berigelse. I dette tilfælde > 95% af beriget celler ved hjælp af dette kit er B-celler. Cellerne er suspenderet i PBS ved en koncentration på 40-60 × 106 celler i 150-200 µL PBS som nævnt i protokollen. De blev straks injiceres i.v. at NSG mus. Efter 10 uger, > 90% af den injicerede dyr udviklet lymfom viser tegn på terminal sygdom (vægttab, pjusket hår, nedsat aktivitet, osv.). Efter ofringen, er milten og leveren fjernet og gryn til enkelt celle suspensioner af mekanisk afbrydelse (figur 4D, F); blodet trækkes forsigtigt af cardiac hjerte punktering og knoglemarven behandles ved at skære begge enderne af lårben og rødmen det bruger en 2 mL sprøjte fyldt med RPMI medium eller PBS (figur 4 c). Cellerne behandles yderligere ved flowcytometri ved hjælp af humane B-celle specifikke markører som CD19/CD20 og CD45. Vi brugte humane B-celle specifikke markører her fordi recipient mus stamme (NSG) mangler B-celler. Figur 4B - F repræsenterer samlingen af organer efter offer og trin af videreforarbejdning. Graden af engraftment af MCL celler, der stammer fra to patienter er repræsenteret i figur 4 g. Engraftment mønster i forskellige organer og mellem patienter kan sammenlignes efter denne teknik.
Figur 1: isolering af PBMC fra fuldblod. Blod fra en MCL patient er fortyndet 1:1 i RPMI medium (A), og placeret omhyggeligt på toppen af tæthed gradient media lag (B) uden at blande blod i denne tæthed gradient medier (C). Centrifugering ved 400 x g for 45 min adskiller de mononukleære celler, der vises som hvidlig ring (pil angiver det mononukleære cellelag) (D). Dette lag er pipetted forsigtigt uden at blande med andre lag i en ren rør til yderligere forarbejdning (E). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: berigelse af B-celler fra PBMC. PBMC isoleret ved tæthed gradient centrifugering vaskes to gange med PBS. Ved hjælp af negativt B celle berigelse kit og ved at følge producentens protokol, opnås en ren population af B-celler (1-4). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: FACS analyse af MCL celler og renhed af B celler før og efter berigelse. Mononukleære MCL cellerne er karakteriseret ved FACS analyse ved hjælp af forskellige markører som CD45, CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, kappa og lambda. Celler, der er positive for CD45, CD19, CD20, CD5 og negative for CD23 og CD200 er markeret (A-F). G repræsenterer befolkningens celle efter berigelse ved hjælp af negative valg kit i forhold til E, som er før berigelse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: NSG mus som xenograft model for engraftment MCL celler. B-celler, der stammer fra MCL patienter var injiceres i.v. via den laterale hale vene af NSG mus (A). Efter at tillade flere dage for tumor til at indpode, musene blev ofret, og dissekeret (B) for at indsamle forskellige organer som knoglemarv (C), milt (D), perifert blod (E) (tegnet af cardiac hjerte punktering), og leveren (F). Disse organer blev behandlet yderligere og analyseret ved flowcytometri for tilstedeværelsen af B-celler. G repræsenterer engraftment mønster af MCL celler i forskellige organer afledt af MCL injiceres NSG mus. Resultater fra to patienter er vist. Tallene vises som betyder ± SEM, n = 3. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Kliniske forsøg er muligt for lægemidler, der er på et avanceret udviklingstrin, men kan ikke anvendes for drug discovery. Bestræbelser på at udvikle animalske modtagere for humane celle xenotransplantation for at teste tidlige fase medicin har længe været forfulgt. Her præsenterer vi en dyremodel, der undgår menneskelige graft afvisning og kan etablere en model for menneskelige sygdomme, såsom MCL. Dette er i øjeblikket en topmoderne xenograft model til at studere mekanismerne af menneskelige tumor engraftment og tumorvækst. Her bruger vi NSG mus, en af de mest immune mangelfuld musemodeller til dato for at opnå større succes af lymfom engraftment. NSG mus mangler modne T-celler, B-celler og NK-celler. De også har nedsat cytokin signalering og har defekter i medfødte immun respons.
Lymfocyt forberedelse fra den primære MCL prøve af tæthed gradient er et vigtigt skridt til at fjerne andre celletyper som røde blodlegemer og blodplader. Traditionelt har giver en massefylde gradient centrifugering vellykket isolation af lymfocytter. Videreforarbejdning af disse lymfocytter til at berige B-celle population er opnået ved brug af en B-celle berigelse kit efter protokollen, som beskrevet i dette håndskrift. Bør sikres at nå en høj renhed af B-lymfocytter befolkninger at nå optimale engraftment lymfom celler. MCL celler injiceres intravenøst (mindst 40-60 x 106 celler/mus) gennem den laterale hale vene, og mus fik lov til at udvikle lymfom i op til 10 uger. Musene blev nøje undersøgt hver dag for symptomer på sygdom herunder, vægttab, pjusket hår, nedsat aktivitet, hind lemmer lammelse, etc. analyse af forskellige organer som milt, leveren, knoglemarven og blodet ved flowcytometri afslørede MCL engraftment. For nylig, har det vist at primære MCL celler indpode i knoglemarven og milten af bestrålede NSG mus på 20 uger af injektion9. Uafhængig af denne konstatering, vi har med succes udviklet vores egen xenograft model af primære MCL med hurtigere tumordannelse.
Denne xenograft musen model kan blive et ekstremt nyttigt værktøj til studiet af sygdomsprogression af forskellige lymfom typer. Xenograft modeller giver også kraftfulde værktøjer til at udføre præklinisk afprøvning af kandidat narkotika til maligne hæmatologiske sygdomme som MCL, dog med visse begrænsninger for eksempel, den dominerende klon stede ved tilbagefald hos en patient er ikke nødvendigvis klon Emerging xenotransplantation10. Dette kan skyldes de forskellige selektive pres, som xenograft gennemgår i forskellige værtssystemer. Hæmatopoietisk sammensætning i denne stamme sammenfatte ikke fuldt menneskelige bloddannelsen, dermed, begrænsning af den langsigtede vedligeholdelse af menneskelige celler. Fordele ved at bruge menneskelige tumor xenografts tilsidesætter begrænsningerne som resultaterne foreligger i et par uger fra en menneskelig tumor biopsi vedrørende svar på terapi. Drug svar ofte ikke korrelerer med kliniske aktiviteter i patienter11 , når menneskelige cellelinjer i stedet for primær tumorceller bruges som xenografts, men de hjælpe med at danne fundamentet for mulige terapeutiske svar. Brug af primære tumorer som en KelbyTraining xenograft har en stærkere Prædiktion af behandlingsrespons værdi, især når en klinisk relevante lægemiddeldosering er brugte11,12,13. Homing af lymfom celler til deres nicher er en vigtig forudsætning for at overleve og til at etablere tumor engraftment. Denne proces er majorly reguleret via lymfesystemet, og posten af cirkulerende lymfocytter gennem de høje endothelial venules fastholder lymfocyt homøostase i lymfeknuder.
Omsætning af B-lymfocytter gennem lymfeknuder kræver passage endotel barrierer og chemoattractant-udløst celle migration af koordineret interaktion med forskellige adhæsionsmolekyler. Derfor, målretning af molekyler, der styrer homing af lymfocytter til deres overlevelse nicher kunne udgøre en ny behandlingsstrategi for B-celle lymfomer, som de opfører sig svarer til normale lymfocytter. Vores mål var at målrette molekyle JAM-C, en junctional vedhæftning molekyle, som er til stede på MCL. Denne xenograft model vil blive brugt til at studere de terapeutiske virkninger af JAM-C antistof på målsøgende og engraftment primære lymfom celler til deres overlevelse nicher. Vi har for nylig vist en effekt af JAM-C antistof i mus, der fik en MCL cellelinie, Jeko-114. Dette antistof havde en blokerende virkning på homing Jeko-1 celler og også når det administreres i regelmæssige intervaller, det effektivt forhindrede engraftment Jeko-1 celler. Ud over sin virkning på homing udryddet antistof behandling lymfom aflægger i de fleste af de organer, der er testet i denne mus14.
I lyset af den videnskabelige og kliniske spørgsmål behandles, udgør disse xenografted tumorer i øjeblikket en interessant model til at studere det terapeutiske resultat af MCL.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de har ingen konkurrerende finansielle interesser.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af Ligue Genevoise contre le Cancer, Fondation Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008-2914-02-2012, og Swiss National Science Foundation Grant 31003A_156760 og 310030-153456.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
References
- Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. Human chemokines: an update. Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).
- Baggiolini, M. Chemokines and leukocyte traffic. Nature. 392, 565-568 (1998).
- Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , 5th edition, (2001).
- De Silva, N. S., Klein, U. Dynamics of B cells in germinal centres. Nat Rev Immunol. 15 (3), 137-148 (2015).
- Cohen, P. L., Kurtin, P. J., Donovan, K. A., Hanson, C. A. Bone marrow and peripheral blood involvement in mantle cell lymphoma. Br. J. Haematol. 101, 302-310 (1998).
- Meusers, P., Hense, J., Brittinger, G. Mantle cell lymphoma: diagnostic criteria, clinical aspects and therapeutic problems. Leukemia (Baltimore). 11 (Suppl 2), S60-S64 (1997).
- Herrmann, A., et al. Improvement of overall survival in advanced stage mantle cell lymphoma. J Clin Oncol. 27 (4), 511-518 (2008).
- Martin, P., et al. Intensive treatment strategies may not provide superior outcomes in mantle cell lymphoma: overall survival exceeding 7 years with standard therapies. Ann Oncol. 19 (7), 1327-1330 (2008).
- Iyengar, S., et al. Characteristics of human primary mantle cell lymphoma engraftment in NSG mice. Br J Haematol. 173 (1), 165-169 (2016).
- Klco, J. M., et al. Functional heterogeneity of genetically defined subclones in acute myeloid leukemia. Cancer cell. 25 (3), 379-392 (2014).
- Kerbel, R. S. Human tumor xenografts as predictive preclinical models for anticancer drug activity in humans: better than commonly perceived-but they can be improved. Cancer Biol Ther. 2 (4 Suppl 1), S134-S139 (2003).
- Johnson, J. I., et al. Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials. Br. J. Cancer. 84, 1424-1431 (2001).
- Scholz, C. C., Berger, D. P., Winterhalter, B. R., Henss, H., Fiebig, H. H. Correlation of drug response in patients and in the clonogenic assay with solid human tumour xenografts. Eur. J. Cancer. 26, 901-905 (1990).
- Doñate, C., Vijaya Kumar, A., Imhof, B. A., Matthes, T. Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma. J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).
