Summary
맨 틀 세포 림프 종 (MCL) B 세포 장애 치료 하기 어려운 이며, 그것은 동등 하 게 연구 하 고 치료제를 개발 기본 MCL의이 종이 식 마우스 모델을 설정 하기가 어렵습니다. 여기, 우리 생물학의 기본을 이해할 수 있도록 마우스에 MCL xenografts의 성공적인 설립을 설명 합니다.
Abstract
B 세포는 주로 집에 면역 세포 순환에 그들은 핵심 선수 하 고 림프 기관에. 반면 정상 B 세포는 T 세포에 의해 자극 될 때만 증식, 종양 B 세포 생존과 정의 되지 않은 장기 틈새에서 자율적으로 확장. 맨 틀 세포 림프 종 (MCL)은 하나의 같은 B 세포 장애, 환자의 평균 생존 율은 4-5 년. 이는 유도 및 이러한 셀의 engraftment는 생존을 증가 하기 위하여 차단 하는 효과적인 메커니즘의 필요와 환자 들의 장 수에 대 한 호출 합니다. 따라서, 유도 장치에는 vivo에서 차단 하 여 MCL 치료제의 효능을 연구 하는 종이 식 마우스 모델을 개발 하기 위해 노력 최대 중요성 이다. 관련 전 임상 마우스 모델은 화면 새로운 치료제에 중요 한, 개발 초기 단계 약물 테스트를 인간 세포 xenotransplantation 받는 동물의 긴 추구 되어 있다. 이 동물 모델 인간의 이식 거부를 방지 하 고 인간의 질병에 대 한 모델 설정 개발 되 고 그것은 다른 림프 종 종류의 질병의 진행을 공부 하 고 전 임상 후보 약물에 대 한 테스트를 수행 하는 매우 유용한 도구 될 수 있습니다. 혈액 악성 종양, MCL 같은. 우리는 종이 식 마우스 모델을 연구 하 고 MCL에 대 한 새로운 치료 접근을 개발 하는 우수한 자원으로 될 것입니다 설립.
Introduction
자연으로 세포는 면역 감시에 중요 역할 그리고 림프 구 매매 항 원 특정 면역1,2설치에서 중요 한 단계. 이 프로세스는 naïve T 세포 혈 류를 thymus에서 그리고 동족 항 원을 만나는 2 차 림프 기관, 림프절, Peyer의 패치, 또는 비장를 포함 하 여 거기에서의 마이그레이션 포함 됩니다. B 세포 골 수에서 분화 하 고 2 차 림프 기관3의 낭으로 순진한 셀으로 마이그레이션할. 이 B 세포 중 일부는 그들의 수용 체와 항 원 바인딩 하 고 특정 T 세포에 의해 활성화 됩니다. 확산 및 B 세포의 뿌리의 맨 틀 영역으로 비-활성화, 순진한 B 셀을 푸시합니다. 활성화 된 세포 차별화할 수 있습니다 다음 메모리 B 세포, 몸, 순찰 또는 골4마이그레이션하는 플라스마 세포를 은닉 하는 면역 글로불린으로 성숙.
MCL 맨 틀 영역에서 순진한 B 림프 톨 종양으로 변환 될 때 발생 합니다. 이 림프 종 세포 림프 기관의 microenvironment에 있으며 특정 T 림프 구 제어 독립적으로 격 증. 그러나, 밀도의 특정 단계에서 그들은이 틈새에서 탈출 하 고 다른 장기에 틈새에 대 한 검색에서 혈 류에서 recirculate. 접착 분자의 복잡성과 발산 및 그들의 수용 체의 성행위, 고려이 셀룰러 밀매 vivo에서 의 메커니즘은 제대로 이해 하 고 따라서 치료를 저해. 림프 종 B 세포 새로운 microenvironments에 도달 하지 않도록 하려면이 마이그레이션 프로세스를 효과적으로 차단 하 새로운 방법 필요 합니다.
MCL B 세포 악성 종양을 치료 하는 가장 어려운 중 하나입니다. MCL의 종양 약 형의 개발 다단계 폭포, 독특한 생물 학적 속성의 취득에 의해 특징의 결과 이다. 진단의 시간, 대부분의 환자 (70%) 이미 현재 전파 질병, 비장, 골 수, 또는 위장5,6extranodal 참여 전시 하는 경우의 대다수와. 치료 환자에서 몇 년 이내에 저항 하는 종양에 의해 재발 하더라도 기존의 화학요법 유도 단기7,8에서 높은 면제 율 일반적입니다. 여기에 우리가 현재 MCL 보급의 기본 생물학을 이해 하는 것을 도울 수 있는 새로운 질병 모델: 우리는 환자의 기본 종양 세포에서 유래 하는 인간의 MCL이 종이 식 마우스 모델을 설립. 우리는이 모델 MCL 보급에 대 한 치료 전략을 개발 하 고 가능 하 게 최적의 진단 및 재발 환자의 치료에 대 한 새로운 임상 원근법을 제공 도움이 될 것입니다 바랍니다.
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Protocol
인간의 혈액 샘플은 로컬 윤리 제네바 대학 병원의 인간 실험 위원회에 의해 승인 절차에 따라 사용 되었다.
동물 절차는 기관 윤리 위원회의 동물 관리 제네바, 스위스 및 Cantonal 수의 사무실에 따라 수행 했다 (승인 번호: GE/26/15).
1. 밀도 그라데이션 분리 하 여 기본 주변 혈액 단 세포 (PBMCs)의 준비
참고: 말 초 혈액의 3-5 mL MCL leukemic 단계에서 제시 하는 환자에서 얻은 했다. 진단 그리고 염색체 전 좌 t(11;14)의 존재와 D1의 overexpression에 의해 확인 이후에 cytometry (CD5 +, CD23−, CD200 +, 단일 클로 널 B 세포 인구)에 대 한 표준 진단 기준에 따라 설립 되었다. 모든 경우에 단일 클론 B 세포를 구성 > 총 B 세포 인구의 90%. 나머지는 monocytes 그리고 몇몇 T 세포 주로 했다.
- 로스웰 파크 기념 연구소 매체 1640 (RPMI) (그림 1A)의 5 mL로 MCL 혈액 샘플의 (1:1) 5 mL를 희석.
- 철저 하 게 혼합 되도록 사용 하기 전에 여러 번 밀도 그라데이션 미디어 (자료 테이블) 반전.
- 피 펫 흡 인기를 사용 하 여 15 mL 원심 분리기 튜브에 밀도 그라데이션 미디어의 5 mL를 추가 합니다.
- 부드럽게 밀도 그라데이션 미디어는 흡 인기 (혈액 밀도 그라데이션 미디어 비율을 2:1, 예를 들어, 밀도 그라데이션 미디어의 5 ml는 혈액 10 mL 이어야 한다)를 사용 하 여 15 mL 원심 분리기 튜브를 통해 희석된 혈액 샘플 레이어. 한다 주의 하지 믹스 (그림 1B, C) 두 개의 레이어.
- 원심 브레이크 해제와 함께 실 온에서 40 분에 대 한 400 x g에서 샘플을 원심.
- 중간 계층 (약간 흰, 얇은 반지 화살표 (그림 1D, E)으로 표시)을 발음 부드럽게 살 균 파스퇴르 피 펫을 사용 하 여 단 세포를 포함 하 고 깨끗 한 관으로 그들을 전송.
- 단 셀의 세척
- 전송 된 셀 서 스 펜 션의 볼륨을 예측 하 고 그것에 추가 1% 소 혈 청 알 부 민 (BSA)와 버퍼링 하는 인산 염 (PBS) x 살 균 1의 3 볼륨.
- 여러 번 왔다 갔다 pipetting으로 현 탁 액을 혼합.
- 실 온에서 10-15 분 400-500 x g에서 정지 원심
- 셀 공 세척 단계를 다시 반복 하는 상쾌한을 삭제 합니다.
- 상쾌한을 제거 하 고 원하는 볼륨, 예를 들어, 1 또는 2 mL PBS의 셀 resuspend.
- 자동된 셀 카운터 또는 수동으로 hemocytometer (Neubauer 챔버)을 사용 하 여 셀의 개수를 계산 합니다.
2. B 세포 부정적인 선택에 의해 B 세포의 농축
- 50 x 106 셀/mL의 최종 농도에 셀 PBS에 희석.
- 하단 폴리스 티 렌 튜브 라운드 5 mL에 셀을 전송. 세포 현 탁 액 2 mL를 B 세포 농축 키트에서 항 체 칵테일의 100 µ L을 추가 하 고 (그림 2-1) 위아래로 pipetting으로 부드럽게 혼합.
- 10 분 동안 실내 온도에 세포를 품 어.
- 짧게 소용돌이 자석 입자 키트에 제공 된는 B 세포 농축 30 s (그림 2-2). 샘플의 2 mL에 자석 입자의 150 µ L를 추가 합니다.
- 실 온에서 또 다른 5 분에 대 한 샘플을 품 어.
- 1 x PBS 2% 태아 종 아리 혈 청 (FCS) 및 1 mM ethylenediaminetetraacetic 산 (EDTA)와 2.5 mL를 샘플 볼륨을 가져와. 자석에 튜브를 놓고 또 다른 3-5 분 (그림 2-3)에 대 한 튜브를 품 어.
- 장소, 그리고 하나의 연속 모션 튜브와 자석까지, 풍부한 세포 현 탁 액을 신선한 튜브 (그림 2-4) 수집할 튜브를 가만히 따르다. 자동된 셀 카운터 또는 B 세포의 총 수익률을 얻을 수 있는 hemocytometer를 사용 하 여 수동으로 셀을 계산 합니다.
참고: 일반적으로 수익률은 ~ 105 B 셀/mL 정상 B 세포와 106 셀/MCL l x 5-50. - B 세포 농축의 순도 확인
- 받아 ~ 50000 셀 안티-CD19/CD20 항 체와 세포를 품 어 고 (1시 20분 희석)와 안티 CD45 항 체 결합 다른 형광 (1시 10분 희석) 15-30 분 동안 실내 온도에.
- PBS + 1% BSA x 1의 1 mL로 세척 하 고 400-500 x g 5 분 동안에 세포를 원심 resuspend ~ 200 µ L의 PBS에 셀.
- Cytometry에 의해 셀 샘플을 확보 하 고 B 세포의 순도 대 한 분석. 순도 대부분 > 90%가이 방법 (그림 3).
3입니다.이 종이 식 마우스 모델의 개발
- 1 x PBS (마우스 당 주사 하는 데 필요한 볼륨)의 150-200 µ L에 106 셀 x 40-60을 일시 중단 합니다.
- 세포 현 탁 액의 150 µ L를 정 맥 주사 (i.v.) (그림 4A) 성별에 관계 없이 오래 된 6-7 주 immunodeficient 끄 덕 scid 감마 (NSG) 쥐의 꼬리 정 맥 각에.
- 쥐 인간 림프 종 ~ 10 주에 대 한 개발을 허용 합니다.
참고: 기본 인간 림프 종 세포 인간 림프 종 세포 라인 (3 주)에 비해 종양 개발에 훨씬 더 오래 걸릴. - 동물 체중 감소 같은 치명적인 질병의 증상을 보여 시작, 뻗 치고 머리, 감소 활동, 뒷 다리 마비, 등, 희생 쥐 CO2 질 피를 심장 심장 찔린 다음에 의해.
- 수집 다른 쥐를 해 부하 여 골 수, 비장, 그리고 간 같은 기관과 종양 engraftment 분석에 대 한 희생의 때에는 심장에서 혈액을 그리기에 의해 말 초 혈액을 수집 (그림 4B -F).
4. chimerism 분석 Engrafted 다른 장기에 종양 세포의
- 다른 장기를 수집한 후 기계적 장애 적혈구 (RBC) 세포 혈액 및 골 수, 비장, 대 500 µ L 간 2 mL에 대 한 염화 염화 칼륨 버퍼 x 1의 200 µ L를 사용 하 여 다음 단일 셀 정지를 생성 하 여 처리 .
- 계산 하 고 인간 B 세포 특정 항 체, 즉, 안티-CD19, 안티-CD20, 및 안티-CD45를 사용 하 여 셀을 얼룩.
참고: NSG 마우스 부족 B 세포 그리고 그러므로 분석에 대 한 셀은 스테인드 인간의 특정 B 세포 마커. - Cytometry에 의해 게이팅 (CD19 + CD20 +, CD45 +) B 세포에 의해 각 기관에서 파생 된 세포를 분석 합니다.
- 4.3 (그림 4G) 단계에서 표시 된 대로 문이 셀에 따라 MCL 주입 마우스에서 파생 하는 다른 장기에 engrafted 종양 세포를 계량.
주: 자세한 내용은 테이블의 자료 를 참조 하십시오.
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Representative Results
원고는 engraftment MCL 셀의이 종이 식 마우스 모델의 성공적인 개발을 위한 최적화 된 프로토콜을 설명합니다. (이 경우 MCL 셀에), 순수한 셀 인구의 준비는 매우 성공적인 MCL xenografts 개발에 중요 한 이다. 그림 1 밀도 그라데이션 분리에 의해 MCL 환자 혈액에서 단 세포 격리에 대 한 대리점 단계를 나타냅니다. 단 세포 쥐에이 종이 식 주입에 대 한 순수한 세포 인구를 부정적인 B 세포 농축 키트를 사용 하 여 순수 B 세포를 더 처리 됩니다. 위해서는 성공적인 MCL engraftment 최대 순도를 주의 한다. 이 메서드를 사용 하 여 얻은 순도 보통 > 90%. 나머지는 주로 monocytes 그리고 몇몇 T 세포 (데이터 표시 되지 않음) 했다.
그림 2 방법 절에서 설명한 대로 B 세포 정화 프로토콜의 다른 단계를 나타냅니다. 풍부한 세포 교류 cytometer (CD45, CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, 카파, 및 람다) 다른 마커를 사용 하 여 그들의 순수성에 대 한 추가 분석 된다. MCL 셀 특성화 수 있습니다 그림 3 에서 같이 순차 게이팅: CD45 +, CD19 +, CD20 +, CD5 +, CD23−, 및 CD200− 선택. 다 색 얼룩에 대 한 보상은 표준 cytometry 설정에 따라 사용 하는 형광의 각 단일 스테인드 컨트롤을 사용 하 여 실행 되었다.
그림 3E G 농축 전후 B 세포의 일반적인 도트 줄거리를 나타냅니다. 이 경우에, >이 키트를 사용 하 여 풍부한 셀의 95%는 B 세포. 세포는 PBS에 150-200 µ L PBS 프로토콜에서 설명 했 듯이에 40-60 × 106 세포의 농도에 일시 중단 됩니다. 그들은 즉시 NSG 마우스 i.v.를 주입 했다. 10 주 후 > 개발 주입 된 동물 림프의 90% (체중 감소, 뻗 치고 머리, 활동을 감소, 등) 터미널 질병의 흔적을 보여줍니다. 희생, 비장 및 간 제거 되 고 기계적 장애 (그림 4D, F); 단일 세포 정지를 처리 한 후 혈액 심장 심장 펑크에 의해 신중 하 게 그려집니다 및 골 대 퇴 골의 양쪽 끝을 절단 하 여 처리 되 고 RPMI 매체 또는 PBS (그림 4C)으로 가득 2 mL 주사기를 사용 하 여 그것을 홍 조. 셀 추가 cytometry CD19/CD20, CD45 같은 인간 B 세포 특정 마커를 사용 하 여 처리 됩니다. 받는 사람 마우스 스트레인 (NSG) B 세포 부족 하기 때문에 우리는 여기 인간 B 세포 특정 마커 사용. 그림 4B - F 희생 후 장기의 수집 및 처리의 단계를 나타냅니다. 두 환자에서 파생 된 MCL 셀 engraftment 정도의 그림 4G에 표시 됩니다. 이 기술은 다음과 같은 다른 장기와 환자 사이 engraftment 패턴을 비교할 수 있습니다.
그림 1: 전 혈에서 PBMCs의 격리. MCL 환자에서 그려 혈액 RPMI 매체 (A), 희석된 1:1 이며,이 밀도 그라데이션 미디어 (C)에 피를 혼합 하지 않고 밀도 그라데이션 미디어 레이어 (B) 위에 신중 하 게 배치. 45 분에 대 한 400 x g에서 원심 분리 약간 흰 링으로 표시 되는 단 세포 (단 세포 레이어를 나타내는 화살표) (D). 이 레이어는 추가 처리 (E)에 대 한 깨끗 한 관으로 다른 레이어와 혼합 하지 않고 부드럽게 pipetted입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: PBMCs에서 셀 B의 농축. PBMCs 조밀도 기온 변화도 원심 분리 하 여 고립 된 PBS로 두번 씻어 있습니다. 네거티브를 사용 하 여 B 세포 농축 장비 그리고 제조 업체의 프로토콜에 따라, B 세포의 순수한 인구는 (1--4). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3: MCL 셀의 FACS 분석 및 순도의 B 세포 농축 전후. 단 MCL 셀 FACS 분석 CD45, CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, 카파, 람다 같은 다른 마커를 사용 하 여 특징입니다. CD23 및 CD200를 위한 CD45, CD19, CD20, CD5, 및 부정에 대 한 긍정적인 셀 선택 (A-F). G E, 농축 하기 전에에 비해 부정적인 선택 키트를 사용 하 여 농축 한 후 세포 인구를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4: engraftment MCL 셀의이 종이 식 모델로 NSG 쥐. MCL 환자에서 파생 된 B 세포는 NSG 쥐 (A)의 측면 꼬리 정 맥을 통해 i.v.를 주입 했다. 허용한 후에 engraft에 종양에 대 한 일, 쥐, 희생 했다 고 해 부 (B) (심장 심장 펑크에 의해 그려진), 골 (C), 비장 (D), 말 초 혈액 (E) 같은 다른 장기를 수집 하 고 간 (F)입니다. 이러한 장기 계속 처리 되었고 cytometry B 세포의 존재에 대 한 분석. G 다른 기관 MCL에서 파생 된 MCL 셀 engraftment 패턴을 나타냅니다 NSG 쥐를 주입. 결과 두 환자에서 표시 됩니다. 데이터는 ± sem의 의미 표시 됩니다 n = 3. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
임상 약물 개발의 고급 단계에 있지만 약물 발견에 사용할 수 없습니다 수 있습니다. 인간 세포 xenotransplantation 동물 받는 초기 단계 약물을 테스트 하기 위해 개발 하는 노력 추구 오래 있다. 여기 우리가 제시 하는 동물 모델을 인간의 이식 거부를 방지 하 고 인간의 질병, MCL 같은 모델을 설정할 수 있습니다. 현재 인간의 종양 engraftment 및 종양의 성장 메커니즘 연구의 종이 식 모델입니다. 여기 우리는 NSG 마우스 림프 종 engraftment의 더 중대 한 성공을 달성 하기 위하여 날짜를 가장 면역 결핍 마우스 모델 중 하나를 사용 합니다. NSG 마우스 부족 성숙한 T 세포, B 세포, NK 세포. 그들은 또한 cytokine 신호 장애 있다 하 고 타고 난 면역 반응에 있는 결함.
밀도 기울기에 의해 기본 MCL 샘플에서 림프 구 준비는 적혈구 및 혈소판 같은 다른 셀 형식을 제거 하는 중요 한 단계 이다. 전통적으로, 조밀도 기온 변화도 원심 분리 세포의 성공적인 격리 수 있습니다. 이러한 세포 B 세포 인구를 풍부 하 게의 처리는이 원고에서 설명 된 대로 프로토콜을 다음 B 세포 농축 키트의 사용에 의해 달성 했다. B 림프 구 인구의 림프 종 세포의 최적의 engraftment를 도달 하 고 순도 달성 하기 위해 주의 해야 합니다. MCL 셀 정 맥 주입 (적어도 40-60 x 106 셀/마우스) 측면 꼬리를 통해 정 맥, 그리고 마우스 림프 종 최대 10 주 동안 개발을 허용 되었다. 쥐 밀접 하 게 시험 되었다 매일 포함 하 여, 체중 감소, 질병의 증상, 머리 쓸 대 감소 활동, 뒷 다리 마비, 등 비장, 간, 골, cytometry 피 같은 다른 기관의 분석 공개 MCL engraftment입니다. 최근에, 그것은 기본 MCL 세포 주입9의 20 주에 골 수에 비친된 NSG 생쥐의 비장 engraft 표시 되었습니다. 독립이 찾는 우리 성공적으로 더 빠른 종양 형성 기본 MCL의 우리의 자신의 종이 식 모델을 개발 했습니다.
이 종이 식 마우스 모델 다른 림프 종 종류의 질병 진행의 연구에 대 한 매우 유용한 도구가 될 수 있습니다. 그러나이 종이 식 모델도 MCL 같은 혈액 악성 종양에 대 한 후보 약물의 임상 테스트를 수행 하는 강력한 도구를 제공,, 특정 제한 예를 들어 환자가 재발에 있는 지배적인 클론은 반드시 복제 xenotransplantation10에 나오고 있다. 이이 종이 식 거쳐 다른 호스트 시스템에 다른 선택적인 압력 때문에 수 있습니다. 조 혈 성분이이 긴장에 인간 세포의 장기 유지 보수 제한 따라서, 인간의 조를 완전히 정리 하지 않습니다. 인간의 종양 xenografts를 사용 하 여 장점으로 결과 치료에 대 한 응답에 관한 인간의 종양 생 검에서 몇 주에 한계를 재정의 합니다. 기본 종양 세포 대신 인간의 세포 라인 xenografts로 사용 됩니다 하지만 그들은 가능한 치료 응답에 대 한 기초를 형성 하는 데 도움이 마약 응답 환자11 에서 임상 활동 자주 상관 하지 할. Orthotropic이 종이 식으로 기본 종양의 사용 임상 관련 약물 복용량 사용된11,,1213때에 특히 강한 예측 응답 값을 있다. 종양 engraftment를 구축 하 고 살아남기 위해 그들의 틈새를 림프 종 세포의 유도 중요 한 필수입니다. 이 과정은 majorly 림프 시스템을 통해 통제 되 고 림프절에서 림프 구 항상성 유지 하는 높은 내 피 venules 통해 림프 순환의 항목.
림프절을 통해 림프 톨 B의 교차점 내 피 장벽과 chemoattractant 트리거 셀 마이그레이션 다른 접착 분자와 상호 작용을 조정된 해야합니다. 따라서, 그들의 생존 틈새에 림프 톨의 추적을 제어 하는 분자를 대상으로 수 구성 B 세포 림프 종에 대 한 새로운 치료 전략은 정상 세포와 비슷한 동작으로. 우리의 목표는 분자 잼-C, MCL에 접합 하는 접착 분자를 대상으로 했다. 이 종이 식 모델 유도에 잼-C 항 체의 치료 효과 및 그들의 생존 틈새를 기본 림프 종 세포의 engraftment 공부 사용 됩니다. 우리 최근 MCL 셀 라인, Jeko-114받은 쥐에서 안티 JAM C 항 체의 효과가 나타났습니다. 이 항 체 했다 Jeko-1 세포의 유도 대 한 차단 효과 또한 정기적으로에 관리 될 때 그것은 효율적으로 Jeko-1 셀 engraftment 막을. 유도에 미치는 영향 뿐만 아니라 항 체 치료 박멸이 마우스14테스트 기관의 대부분에 engrafted 림프 종.
과학 및 임상 질문 해결 되 고, 빛이 xenografted 종양 현재 MCL의 치료 결과 공부 하는 재미 있는 모델을 나타냅니다.
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Disclosures
저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.
Acknowledgments
이 작품은 리그 Genevoise 죄수 르 암에 의해 지원 되었다 Fondation 박사 뒤부아 Ferriere Dinu Lipatti, Oncosuisse KPS OCS, OCS-02260-08-2008, 2914-02-2012, 스위스 국립 과학 재단 그랜트 31003A_156760 및 310030 153456.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
References
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