Summary
Det er like vanskelig å etablere en xenograft musemodell primære MCL å studere og utvikle therapeutics mantelen celle lymfomer (MCL) er en vanskelig å behandle B celle uorden. Her beskriver vi vellykket etablering av MCL xenografts i mus til å forstå sin underliggende biologi.
Abstract
B-lymfocytter er sentrale aktører i immunforsvaret celle sirkulasjon og de hovedsakelig hjem til og bor i lymfoide organer. Mens normale B celler sprer bare når stimulert av T-lymfocytter, kreftfremkallende B celler overleve og utvide selvstendig i udefinert orgel nisjer. Mantelen celle lymfomer (MCL) er en slik B celle lidelse, der median overlevelse av pasienter er 4-5 år. Dette krever behov for effektive mekanismer som homing og engraftment av disse cellene er blokkert for å øke overlevelse og lang levetid på pasienter. Derfor er arbeidet med å utvikle en xenograft musemodell for å studere effekten av MCL therapeutics blokkerer den homing mekanisme i vivo av største betydning. Utviklingen av dyr mottakere for human celle xenotransplantation å teste tidlig stadium narkotika har lenge vært forfulgt, relevante prekliniske musen modeller er avgjørende for skjermen nye terapeutiske agenter. Denne dyr modellen er utviklet til å unngå menneskelig pode avvisning og en modell for menneskelige sykdommer, og det kan være et svært nyttig verktøy å studere sykdomsprogresjon typer forskjellige lymfom og utføre prekliniske testing av kandidaten narkotika for Hematologic malignitet, som MCL. Vi etablert en xenograft musemodell som skal fungere som et utmerket ressurs å studere og utvikle romanen terapeutiske metoder for MCL.
Introduction
Lymfocytter av naturen spiller en viktig rolle i immun overvåking og lymfocytt menneskehandel er en avgjørende skritt i montering antigen bestemt immunitet1,2. Denne prosessen omfatter overføring av naiv T-lymfocytter fra thymus i blodet, og derfra til sekundære lymfoide organer, inkludert lymfeknuter, Peyers oppdateringer og milt, hvor de møter beslektet antigener. B-lymfocytter skille i benmargen og overføre som naiv celler til follicles av sekundære lymfoide organer3. Noen av disse B-cellene binder antigen med deres reseptoren og aktiveres av bestemte T-celler. Spredning og differensiering av disse B-cellene presser ingen-aktivert, naiv B celler i sonen mantelen av hårsekken. Aktivert celler kan deretter skille i minnet B celler som patruljerer kroppen eller modne i immunglobulin sekresjon plasma celler overføre til benmargen4.
MCL oppstår når naiv B-lymfocytter i sonen mantelen forvandle en svulst. Disse lymfom cellene ligge i microenvironment av lymfoide organer og sprer uavhengig av spesifikke T lymfocytt kontroll. Men på et visst stadium av de flykte fra denne nisje og recirculate i blodet i Søk etter nisjer i andre organer. Vurderer kompleksiteten i vedheft molekyler og promiskuitet chemokines og deres reseptorer, mekanismen av denne mobilnettet menneskehandel i vivo er dårlig forstått, og derfor hemmer terapi. Nye metoder for å effektivt blokkerer overføringsprosessen for å hindre lymfom B celler fra å nå nye microenvironments.
MCL er en av de vanskeligste å behandle B-cell malignancies. Utviklingen av en neoplastic fenotypen av MCL er et resultat av en må cascade, preget av oppkjøpet av unike biologiske egenskaper. På tiden av diagnose finnes de fleste pasienter (70%) allerede med en disseminert sykdom, med et flertall av tilfellene viser extranodal engasjement i milten, benmarg eller fordøyelsessystemet5,6. I behandlede pasienter er tilbakefall av resistente svulster innen få år vanlig, selv om konvensjonell kjemoterapi induserer høy remisjon priser på kort sikt7,8. Her presenterer vi en ny sykdom modell som kan hjelpe forstå MCL formidling og dens underliggende biologi: vi etablert en menneskelig MCL xenograft musemodell som stammer fra primære kreftceller av pasienter. Vi håper at denne modellen vil hjelpe utvikle strategier mot MCL formidling og muligens gi nye kliniske perspektiver for optimal diagnose og behandling av tilbakefall pasienter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De menneskelige blodprøvene ble brukt i henhold til prosedyrer godkjent av lokale etikk og menneskelig eksperimentering komiteer i Genève Universitetssykehuset.
Animal prosedyrer ble utført i samsvar med den institusjonelle etiske komiteen av Animal Care i Geneve, Sveits og Cantonal veterinær kontor (Autorisasjonsnummer: GE/26/15).
1. utarbeidelse av primære perifert blod mononukleære celler (PBMCs) av tetthet gradert separasjon
Merk: 3-5 mL perifert blod er Hentet fra pasienter med MCL i leukemic fase. Diagnosen ble etablert etter standard diagnostiske kriterier for flowcytometri (CD5 +, CD23−, CD200 +, monoklonale B-celle befolkningen), og senere bekreftet av tilstedeværelsen av chromosomal translokasjon t(11;14) og overuttrykte cyclin D1. I alle tilfeller monoklonale B celler utgjorde til > 90% av befolkningen totale B-cellen. De gjenværende cellene var hovedsakelig monocytter og noen T-celler.
- Fortynne (1:1) 5 mL MCL blodprøve med 5 mL Roswell Park Memorial Institute medium 1640 (RPMI) (figur 1A).
- Invertere tetthet gradert media (Tabell for materiale) flere ganger før bruk for å sikre grundig blande.
- Legge til 5 mL tetthet gradert medier i et 15 mL sentrifuge rør med en pipette-aspirator.
- Forsiktig laget av utvannet blodprøve over tetthet gradert media i 15 mL sentrifuge røret ved hjelp av en aspirator (blod tetthet gradert media forhold bør være 2:1, f.eks, 10 mL blod til 5 mL av tetthet gradert media). Forsiktighet bør utvises å ikke blande de to lagene (figur 1B, C).
- Sentrifuge prøven på 400 x g for 40 min ved romtemperatur med sentrifuge bremsene deaktivert.
- Bruk en steril Pasteur pipette, forsiktig Sug opp det midterste laget (hvitaktig, tynn ring med en pil (figur 1 d, E)) som inneholder de mononukleære cellene og overføre dem til en ren rør.
- Vask av mononukleære celler
- Anslå Antall overførte celle suspensjon og legge 3 bind av sterile 1 x fosfat bufret saltvann (PBS) med 1% bovin serum albumin (BSA).
- Bland suspensjon av pipettering opp og ned flere ganger.
- Sentrifuge suspensjon på 400-500 x g i 10-15 min ved romtemperatur.
- Kast nedbryting å få celle pellets og gjenta trinnet vask igjen.
- Fjern nedbryting og resuspend cellene i ønsket volum, f.eks, 1 eller 2 mL PBS.
- Tell antall celler med en automatisert celle teller eller manuelt ved hjelp av en hemocytometer (Neubauer chamber).
2. anriking av B-celler av B celle Negative utvalg
- Fortynne cellene i PBS til en siste konsentrasjon av 50 x 106 celler/mL.
- Overføre cellene til en 5 mL rundt bunnen polystyren rør. Legg 100 µL antistoff cocktail i B-celle berikelse Kit til 2 mL av cellen suspensjon, og bland forsiktig av pipettering opp og ned (figur 2-1).
- Inkuber cellene ved romtemperatur for 10 min.
- Kort vortex magnetiske partikler gitt i B-celle berikelse kit for 30 s (figur 2-2). Legge til 150 µL av magnetiske partikler 2 mL av utvalget.
- Inkuber utvalget for en annen 5 min ved romtemperatur.
- Ta prøven volumet til 2,5 mL med 1 x PBS som inneholder 2% fosterets kalv serum (FCS) og 1 mM ethylenediaminetetraacetic syre (EDTA). Sett røret i magneten og ruge røret for en annen 3-5 min (figur 2-3).
- Plukke opp magneten med røret på plass, og i en kontinuerlig bevegelse, Dekanter røret slik at beriket celle suspensjon samles i en fersk tube (figur 2-4). Telle celler ved en automatisert celle teller eller manuelt ved hjelp av en hemocytometer for å få den totale avkastningen av B-celler.
Merk: Avkastningen er vanligvis ~ 105 B celler/mL for normal B celler og 5-50 x 106 celler/mL for MCL. - Bekrefter renheten av B celle anriking
- Ta ~ 50 000 celler og Inkuber cellene med anti-CD19/CD20 antistoffer (1:20 fortynning) og anti-CD45 antistoff koblet til forskjellige fluorochromes (1:10 fortynning) i romtemperatur i 15-30 min.
- Vask med 1 mL 1 x PBS + 1% BSA sentrifuge cellene på 400-500 x g i 5 min og resuspend cellene i ~ 200 µL av PBS.
- Erverve celle utvalgene av flowcytometri og analysere renheten av B-celler. Renhet er mest > 90% av denne metoden (Figur 3).
3. utvikling av Xenograft musemodell
- Suspendere ~ 40-60 x 106 celler i 150-200 µL av 1 x PBS (volum må injisere per musen).
- Injisere 150 µL av cellen suspensjon intravenøst (IV) i hver hale venen 6-7 uke gamle immunodeficient hilsen scid gamma (NSG) mus uansett kjønn (figur 4A).
- Tillate at mus til å utvikle menneske lymfom ~ 10 uker.
Merk: Primære menneskelige lymfom celler ta mye lengre tid å utvikle svulst sammenlignet med menneskelige lymfom cellelinjer (~ 3 uker). - Når dyrene begynner å vise symptomer på alvorlig sykdom som vekttap, ofre ruffled hår, redusert aktivitet, hind lem lammelse, etc., mus for CO2 kvelning etterfulgt av cardiac hjertet punktering å få blodet.
- Samle ulike organer som beinmarg, milt og lever av dissecting mus og innhente perifert blod ved tegning blod fra hjertet ved offer for svulst engraftment analyse (figur 4B -F).
4. chimerism analyse av svulst celle Engrafted i ulike organer
- Etter samle de ulike organene, behandle dem av mekanisk forstyrrelse å generere enkeltcelle suspensjoner etter røde blodlegemer (RBC) lysis bruker 200 µL av 1 x salmiakk kalium buffer for blod og benmarg, 500 µL for milten og 2 mL for leveren .
- Telle og flekken cellene human B celle spesifikke antistoffer, dvs, anti-CD19, anti-CD20 og anti-CD45.
Merk: NSG mus mangler B celler, og dermed for analyse, celler er farget med menneskelige bestemt B celle markører. - Analysere cellene stammer fra hvert organ av flowcytometri av gating på B celler (CD19 + CD20 +, CD45 +).
- Kvantifisere engrafted kreftceller i ulike organer fra MCL injisert mus basert på gated cellene som angitt i trinn 4.3 (figur 4G).
Merk: Se Tabell for materiale for detaljer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Manuskriptet beskriver en optimalisert protokoll for den vellykkede utviklingen av en xenograft musemodell for engraftment MCL celler. Utarbeidelse av en ren celle befolkningen (i dette tilfellet MCL celler), er svært kritisk til å utvikle vellykket MCL xenografts. Figur 1 representerer preparative trinnene for mononukleære cellen aisolering fra MCL pasientens blod av tetthet gradert separasjon. De mononukleære cellene behandles videre for å få ren B celler ved hjelp av en negativ B celle berikelse kit for å få en ren celle befolkningen i xenograft injeksjon i mus. Forsiktighet bør utvises å få maksimal renhet for å ha vellykket MCL engraftment. Renhet Hentet ved hjelp av denne metoden er vanligvis > 90%. De gjenværende cellene var hovedsakelig monocytter og noen T-celler (data ikke vist).
Figur 2 representerer de ulike trinnene av B celle rensing protokollen som beskrevet i avsnittet metoder. Beriket cellene analyseres videre for sin renhet av flyt cytometer med forskjellige indikatorer (CD45 CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, kappa og lambda). Sekvensiell gating som vist på Figur 3 lar karakteriserer MCL celler: CD45 + CD19 +, CD20 +, CD5 +, CD23− og CD200− er valgt. Kompensasjon for multicolor flekker ble gjennomført ved hjelp enkelt farget kontroller for hver av fluorochromes brukt, ifølge standard cytometri oppsett.
Figur 3E G representerer typisk dot plottet av B-celler før og etter berikelse. I dette tilfellet > 95% av anriket cellene bruker denne prosjektpakken er B-celler. Cellene er suspendert i PBS i en konsentrasjon av 40-60 × 106 celler i 150-200 µL PBS som nevnt i protokollen. De ble umiddelbart injisert IV til NSG mus. Etter 10 uker, > 90% av det injiserte dyr utviklet lymfekreft viser tegn til dødelig sykdom (vekttap, ruffled hår, redusert aktivitet, etc.). Når offer, milt og lever fjernes og behandles for å få enkeltcelle suspensjoner av mekanisk avbrudd (Figur 4 d, F); blod er trukket nøye av cardiac hjertet punktering og beinmargen behandles ved å kutte begge ender av femur og skylle den med en 2 mL sprøyte fylt med RPMI middels eller PBS (figur 4C). Cellene behandles videre av flowcytometri bruker human B celle spesifikke indikatorer som CD19/CD20 og CD45. Vi brukte human B celle spesifikke indikatorer her fordi mottakeren musen belastningen (NSG) mangler B-celler. Figur 4B - F representerer innsamling av organer etter offer og trinnene for videre behandling. Graden av engraftment MCL celler avledet fra to pasienter er representert i figuren 4G. Det engraftment mønsteret i ulike organer og mellom pasienter kan sammenlignes etter denne teknikken.
Figur 1: isolering av PBMCs fra fullblod. Blod fra en MCL pasient fortynnes 1:1 i RPMI medium (A) og plasseres nøye over tetthet gradert media laget (B) uten blanding blod i denne tetthet gradert media (C). Sentrifugering 400 x g for 45 min skiller mononukleære celler som vises som hvitaktig ring (pilen viser mononukleære celle laget) (D). Dette laget er pipetted forsiktig uten å blande med andre lag i en ren rør for ytterligere behandling (E). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: anriking av B celler fra PBMCs. PBMCs isolert av tetthet gradert sentrifugering er vasket to ganger med PBS. Bruke negative B celle berikelse kit og ved å følge produsentens protokollen, hentes en ren befolkning på B celler (1-4). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: FACS analyse av MCL celler og renhet av B celler før og etter berikelse. De mononukleære MCL cellene er preget av FACS analyse ved hjelp av ulike merker som CD45, CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, kappa og lambda. Celler som er positivt for CD45, CD19, CD20, CD5 og negative CD23 og CD200 valgt (A-F). G representerer befolkningen cellen etter berikelse bruke negative utvalg kit sammenlignet E, som er før berikelse. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: NSG mus som xenograft modell for engraftment celleområde MCL. B celler avledet fra MCL pasienter ble injisert IV via lateral hale åre NSG mus (A). Etter at flere dager før svulsten til engraft, mus ble ofret, og dissekert (B) for å samle ulike organer som benmargen (C), milt (D), perifert blod (E) (tegnet av cardiac hjertet punktering), og leveren (F). Disse organene var behandlet videre og analysert av flowcytometri for tilstedeværelsen av B-celler. G representerer engraftment mønster av MCL celler i forskjellige organer fra MCL injisert NSG mus. Resultatene fra to pasienter vises. Dataene vises som betyr ± SEM, n = 3. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Kliniske studier er mulig for legemidler som er i et avansert stadium av utviklingen, men kan ikke brukes for medisiner. Innsatsen for å utvikle dyr mottakere for human celle xenotransplantation for å teste tidlig stadium narkotika har lenge vært forfulgt. Her presenterer vi en dyremodell som unngår menneskelige pode avvisning og kan etablere en modell for menneskelige sykdommer, for eksempel MCL. Dette er i dag en toppmoderne xenograft modell å studere mekanismer for menneskelig svulst engraftment og tumor vekst. Her bruker vi NSG mus, en av de mest immun mangelfull musen modellene til dato for å oppnå større suksess med lymphoma engraftment. NSG mus mangler modne T-celler og B-celler NK celler. De har svekket cytokin signalering og har defekter i medfødte immunforsvaret.
Lymfocytt forberedelse fra primære MCL prøven ved tetthet gradert er et viktig skritt å fjerne andre celletyper som røde blodlegemer og blodplater. Tradisjonelt lar en tetthet gradert sentrifugering vellykket isolering av lymfocytter. Videre behandling av disse lymfocytter å berike B-celle befolkningen er oppnådd ved bruk av en B-cellen berikelse kit følger protokollen som beskrevet i dette manuskriptet. Forsiktighet bør utvises å oppnå høy renhet av B-lymfocytt befolkningen nå optimale engraftment lymfom cellene. MCL cellene som injiseres intravenøst (minst 40-60 x 106 celler/mus) gjennom lateral halen blodåre, og mus ble tillatt å utvikle lymfom 10 uker. Mus ble nøye undersøkt hver dag for symptomer på sykdom inkludert, vekttap, ruffled hår, redusert aktivitet, hind lem lammelse, etc. analyse av ulike organer som milt, lever, bone margtransplantasjon og blod av flowcytometri avslørt MCL engraftment. Nylig har det vært vist at primære MCL celler engraft i benmargen og milten bestrålt NSG mus for 20 ukens av injeksjon9. Uavhengig av dette funnet, har vi utviklet vår egen xenograft modell av primære MCL med rask tumor dannelse.
Denne xenograft musemodell kan bli et svært nyttig verktøy for studier av sykdomsprogresjon typer forskjellige lymfom. Xenograft modeller gir også kraftige verktøy prekliniske teste kandidat narkotika for hematologic malignitet som MCL, men med visse begrensninger for eksempel dominerende klone stede på tilbakefall i en pasient er ikke nødvendigvis klone nye på xenotransplantation10. Dette kan skyldes ulike selektive presset som xenograft gjennomgår i andre systemer. Blodkreft sammensetningen i denne belastningen recapitulate ikke fullt menneskelige hematopoiesis, dermed begrense langsiktig vedlikehold av menneskelige celler. Fordelene ved menneskelig svulst xenografts overstyrer begrensningene som resultater er oppnådd i et par uker fra en menneskelig svulst biopsi om respons på behandling. Stoffet svar ikke korrelerer ofte med klinisk aktiviteter i pasienter11 når humane cellelinjer i stedet for primære kreftceller brukes som xenografts, men de hjelpe danner grunnlaget for mulig terapeutiske svar. Bruk av primære svulster som en orthotropic xenograft har en sterkere intelligent svar verdi, spesielt når et klinisk relevante narkotika dosering er brukt11,12,13. Homing lymfom celleområdet til deres nisjene er en viktig forutsetning for å overleve og svulst engraftment. Denne prosessen er majorly regulert via lymfesystemet, og oppføringen av sirkulerende lymfocytter gjennom de høye endothelial venules opprettholder lymfocytt homeostase i lymfeknuter.
Sirkulasjon av B-lymfocytter gjennom lymfeknuter krever krysset endothelial barrierer og chemoattractant utløser celle migrasjon av koordinerte interaksjon med forskjellige vedheft molekyler. Derfor kan målretting molekylene som kontrollerer homing av lymfocytter til deres overlevelse nisjer utgjøre en ny behandling strategi for B-celle lymfomer de oppfører seg likt normal lymfocytter. Vårt mål var å målrette molekylet JAM-C, en junctional vedheft molekyl, som finnes på MCL. Denne xenograft modellen brukes terapeutiske effekter av JAM-C antistoff på homing og engraftment primære lymfom celleområdet til deres overlevelse nisjene. Vi har nylig vist en effekt av anti-JAM-C antistoff i mus som mottok en MCL celle linje, Jeko-1-14. Denne antistoff hadde en blokkering effekt på homing Jeko-1 celler og også når det gis i regelmessige intervaller, det effektivt hindret av engraftment av Jeko-1 celler. I tillegg til sin effekt på homing utryddet antistoff behandling lymfom engrafted i de fleste av organene testet i dette mus14.
I lys av det vitenskapelige og kliniske spørsmålet blir adressert, representerer disse xenografted svulster i dag, en interessant modell for å studere terapeutiske utfallet av MCL.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer at de har ingen konkurrerende økonomiske interesser.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av Ligue Genevoise contre le kreft, Fondation Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 og 2914-02-2012, og sveitsiske National Science Foundation Grant 31003A_156760 og 310030-153456.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
References
- Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. Human chemokines: an update. Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).
- Baggiolini, M. Chemokines and leukocyte traffic. Nature. 392, 565-568 (1998).
- Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , 5th edition, (2001).
- De Silva, N. S., Klein, U. Dynamics of B cells in germinal centres. Nat Rev Immunol. 15 (3), 137-148 (2015).
- Cohen, P. L., Kurtin, P. J., Donovan, K. A., Hanson, C. A. Bone marrow and peripheral blood involvement in mantle cell lymphoma. Br. J. Haematol. 101, 302-310 (1998).
- Meusers, P., Hense, J., Brittinger, G. Mantle cell lymphoma: diagnostic criteria, clinical aspects and therapeutic problems. Leukemia (Baltimore). 11 (Suppl 2), S60-S64 (1997).
- Herrmann, A., et al. Improvement of overall survival in advanced stage mantle cell lymphoma. J Clin Oncol. 27 (4), 511-518 (2008).
- Martin, P., et al. Intensive treatment strategies may not provide superior outcomes in mantle cell lymphoma: overall survival exceeding 7 years with standard therapies. Ann Oncol. 19 (7), 1327-1330 (2008).
- Iyengar, S., et al. Characteristics of human primary mantle cell lymphoma engraftment in NSG mice. Br J Haematol. 173 (1), 165-169 (2016).
- Klco, J. M., et al. Functional heterogeneity of genetically defined subclones in acute myeloid leukemia. Cancer cell. 25 (3), 379-392 (2014).
- Kerbel, R. S. Human tumor xenografts as predictive preclinical models for anticancer drug activity in humans: better than commonly perceived-but they can be improved. Cancer Biol Ther. 2 (4 Suppl 1), S134-S139 (2003).
- Johnson, J. I., et al. Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials. Br. J. Cancer. 84, 1424-1431 (2001).
- Scholz, C. C., Berger, D. P., Winterhalter, B. R., Henss, H., Fiebig, H. H. Correlation of drug response in patients and in the clonogenic assay with solid human tumour xenografts. Eur. J. Cancer. 26, 901-905 (1990).
- Doñate, C., Vijaya Kumar, A., Imhof, B. A., Matthes, T. Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma. J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).
