Summary
Mantelcellslymfom (MCL) är en svårbehandlad B cell sjukdom och det är lika svårt att upprätta en xenograft musmodell av primära MCL att studera och utveckla therapeutics. Här beskriver vi en framgångsrik etablering av MCL xenograft hos möss för att förstå dess underliggande biologi.
Abstract
B-lymfocyter är nyckelaktörer i immunceller omlopp och de främst hem till och uppehålla sig i lymfoida organ. Medan normala B-celler föröka endast när stimuleras av T-lymfocyter, onkogena B-celler överleva och expandera självständigt i odefinierad orgel nischer. Mantelcellslymfom (MCL) är en sådan B cell störning, där median överlevnaden av patienter är 4-5 år. Detta kräver behovet av effektiva mekanismer genom vilka den homing och engraftment av dessa celler är blockerade för att öka överlevnaden och livslängden hos patienter. Arbetet med att utveckla en xenograft musmodell för att studera effekten av MCL therapeutics genom att blockera den målsökande mekanism i vivo är därför av yttersta vikt. Utvecklingen av djur mottagare för mänsklig cell xenotransplantation att testa tidigt skede läkemedel har länge bedrivits, som relevanta prekliniska musmodeller är avgörande för skärmen nya terapeutiska medel. Denna djurmodell är utvecklat att undvika mänskliga transplantatavstötning och att upprätta en modell för mänskliga sjukdomar och det kan vara ett mycket användbart verktyg att studera sjukdomsutveckling av olika lymfom typer och att utföra prekliniska tester av läkemedelskandidater för hematologiska maligniteter, som MCL. Vi etablerade en xenograft musmodell som ska fungera som en utmärkt resurs för att studera och utveckla nya behandlingsmetoder för MCL.
Introduction
Lymfocyter av naturen spelar en viktig roll i immun övervakning och lymfocyter människohandel är ett kritiskt steg i montering antigen specifik immunitet1,2. Processen omfattar migrering av naiva T-lymfocyter brässen till blodet och därifrån till sekundära lymfoida organ, inklusive lymfkörtlar, Peyers plack eller mjälte, där de möter cognate antigener. B-lymfocyter skilja i benmärgen och migrera som naiva celler i folliklar av sekundära lymfoida organ3. Några av dessa B-celler binder antigen med sin receptor och aktiveras av specifika T-celler. Proliferation och differentiering av dessa B-celler skjuter de icke-aktiverade, naiva B-cellerna i zonen mantel av follikeln. Aktiverade celler kan sedan differentieras till minne B celler, som patrullerar kroppen eller mogna till immunglobulin utsöndrar plasma celler som migrerar till benmärgen4.
MCL uppstår när naiva B-lymfocyter i zonen manteln förvandlas till en tumör. Dessa lymfomceller bosatt i närmiljön lymfoida organ och föröka oberoende av specifika T-lymfocyter kontroll. Dock i ett visst skede av täthet de fly från denna nisch och återcirkulera i blodomloppet i sökandet efter nischer i andra organ. Med tanke på komplexiteten av adhesionsmolekyler och promiskuitet chemokiner och deras receptorer, mekanismen av denna cellulära människohandel i vivo är dåligt känd och därför hindrar terapi. Nya metoder behövs för att effektivt blockera denna migreringsprocessen för att förhindra lymfom B cellerna från att nå nya mikromiljö.
MCL är en av de svåraste att behandla B cell maligniteter. Utvecklingen av en neoplastisk fenotyp för MCL är resultatet av en utgångsämnet cascade, kännetecknas av förvärvet av unika biologiska egenskaper. Vid tidpunkten för diagnos finns de flesta patienter (70%) redan med en disseminerad sjukdom, med en majoritet av fallen uppvisar extranodal inblandning i mjälte, benmärg eller mag-tarmkanalen5,6. Hos behandlade patienter är återfall av resistenta tumörer inom några år vanligt, även om konventionell kemoterapi framkallar hög remission priser på kort sikt7,8. Här presenterar vi en ny sjukdom modell som kan hjälpa till att förstå MCL spridning och dess underliggande biologi: vi etablerade en mänsklig MCL xenograft musmodell som härstammar från primär tumörceller av patienter. Vi hoppas att denna modell hjälper utveckla terapeutiska strategier mot MCL spridning, och möjligen ge nya kliniska perspektiv för optimal diagnostik och behandling av recidiverande patienter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Humant blodproverna användes enligt förfaranden som godkänts av den lokala etiska och mänskliga experiment kommittéer av Universitetssjukhuset i Genève.
Djur förfaranden utfördes i enlighet med den institutionella etiska kommittén av Animal Care i Genève, Schweiz och de kantonala veterinärfrågor (tillståndsnummer: GE/26/15).
1. beredning av primära perifera mononukleära blodceller (PBMC) av täthet lutning Separation
Obs: 3-5 mL av perifert blod erhölls från patienter med MCL i leukemic fas. Diagnosen var etablerad enligt standard diagnostiska kriterier för flödescytometri (CD5 +, CD23−, CD200 +, monoklonal B cell befolkningen), och därefter bekräftas av förekomst av de kromosomala translokationen t(11;14) och överuttryck av cyklin D1. I samtliga fall utgjorde monoklonal B-celler till > 90% av totalt B-cell befolkningen. Återstående cellerna var främst monocyter och vissa T-celler.
- Späd (1:1) 5 mL MCL blodprov med 5 mL av Roswell Park Memorial Institute medium 1640 (RPMI) (figur 1A).
- Invertera täthet lutning media (Tabell för material) flera gånger innan användning för att säkerställa noggrann blandning.
- Tillsätt 5 mL av täthet lutning media i en 15 mL centrifugrör med hjälp av en pipett insugningsventil.
- Försiktigt lager utspätt blodprovet över täthet lutning media i de 15 mL centrifugrör med en insugningsventil (blodet täthet lutning media förhållandet bör vara 2:1, t.ex., 10 mL blod till 5 mL täthet lutning media). Vara bör försiktig att inte blanda de två lagrarna (figur 1B, C).
- Centrifugera provet vid 400 x g för 40 min i rumstemperatur med centrifug bromsarna avstängd.
- Med hjälp av en steril Pasteur-pipett, försiktigt aspirera mellanlagret (vitaktig, tunn ring märkt med en pil (figur 1 d, E)) som innehåller mononukleära celler och överföra dem till en ren röret.
- Tvättning av mononukleära celler
- Beräkna volymen av överförda cellsuspensionen och lägga till det 3 volymdelar sterila 1 x fosfatbuffrad saltlösning (PBS) med 1% bovint serumalbumin (BSA).
- Blanda suspensionen genom pipettering upp och ner flera gånger.
- Centrifugera suspensionen vid 400-500 x g i 10-15 min i rumstemperatur.
- Kassera supernatanten för att få cellpelleten och upprepa tvättningen igen.
- Avlägsna supernatanten och återsuspendera cellerna i önskad volym, t.ex., 1 eller 2 mL PBS.
- Räkna antalet celler med en automatisk cell räknare eller manuellt med hjälp av en hemocytometer (Neubauer avdelningen).
2. berikning av B-celler B-celler negativt urval
- Späd cellerna i PBS till en slutlig koncentration på 50 x 106 celler/mL.
- Överföra cellerna till en 5 mL rund botten polystyren tube. Tillsätt 100 µL av antikroppar cocktail från B-cell anrikning kit till 2 mL cellsuspension, och blanda försiktigt genom pipettering upp och ner (figur 2-1).
- Inkubera cellerna i rumstemperatur i 10 min.
- Kort vortex magnetiska partiklar som avses i B cell anrikning kit 30 s (figur 2-2). Tillsätt 150 µL av de magnetiska partiklarna till 2 mL av provet.
- Inkubera provet för en annan 5 min i rumstemperatur.
- Ta provvolymen till 2,5 mL med 1 x PBS som innehåller 2% fetalt kalvserum (FCS) och 1 mM etylendiamintetraättiksyrans dinatriumsalt (EDTA). Placera röret i magneten och Inkubera röret för en annan 3-5 min (figur 2-3).
- Plocka upp magneten med röret på plats, och i en kontinuerlig rörelse, Dekantera röret så att anrikat cellsuspensionen samlas i en färsk tube (figur 2-4). Räkna cellerna genom en automatiserad cell räknare eller manuellt med en hemocytometer för att erhålla den totala avkastningen av B-celler.
Obs: Avkastningen är vanligtvis ~ 105 B celler/mL för normala B-celler och 5-50 x 106 celler/mL för MCL. - Bekräftar renheten av B-cell berikning
- Ta ~ 50.000 celler och inkubera cellerna med anti-CD19/CD20-antikroppar (1:20 utspädning) och anti-CD45 antikropp kopplat till olika fluorokromer (1:10 utspädning) i rumstemperatur i 15-30 min.
- Tvätta med 1 mL 1 x PBS + 1% BSA, Centrifugera cellerna vid 400-500 x g i 5 min och resuspendera cellerna i ~ 200 µL av PBS.
- Förvärva cellprover av flödescytometri och analysera för renhet av B-celler. Renhet är mestadels > 90% av denna metod (figur 3).
3. utveckling av Xenograft musmodell
- Avbryta ~ 40-60 x 106 celler i 150-200 µL 1 x PBS (volym krävs att injicera per mus).
- Injicera 150 µL cellsuspension intravenöst (IV) i varje svans ven av 6-7 vecka gammal nedsatt immunförsvar nicka scid gamma (NSG) möss oavsett kön (figur 4A).
- Låta mössen att utveckla mänskliga lymfom för ~ 10 veckor.
Obs: Primära mänskliga lymfomceller ta mycket längre tid att utveckla tumör jämfört med mänsklig lymfom cellinjer (~ 3 veckor). - När djuren börjar visa symtom av dödlig sjukdom som viktminskning, offra uppburrad hår, minskad aktivitet, bakbenen förlamning, etc., möss av CO2 kvävning följt av hjärt hjärtat punktering få blod.
- Samla olika organ som benmärg, mjälte och lever genom att dissekera möss och samla perifert blod genom att rita blod från hjärtat vid tidpunkten för offer för tumör engraftment analys (figur 4B -F).
4. chimärism analys av tumör Cell rekonstituerades i olika organ
- Efter att samla de olika organ, bearbeta dem genom mekaniska störningar att generera enda cellsuspensioner efter röda blodkroppar (RBC) lysis med 200 µL 1 x ammoniumklorid kalium buffert för blod och benmärg, 500 µL för mjälte, och 2 mL för levern .
- Räkna och färga cellerna använder mänskliga B-celler specifika antikroppar, dvs, anti-CD19, anti-CD20 och anti-CD45.
Obs: NSG möss saknar B-celler och därmed för analys, cellerna färgas med mänskliga specifika B-celler markörer. - Analysera de celler som härrör från varje organ av flödescytometri av gating på B-celler (CD19 +, CD20 +, CD45 +).
- Kvantifiera rekonstituerades tumörceller i olika organ härrör från MCL injiceras möss baserat på gated cellerna som anges i steg 4,3 (figur 4 g).
Obs: Se Tabell av material för detaljer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Manuskriptet beskriver en optimerad protokollet för en framgångsrik utveckling av en xenograft musmodell för engraftment av MCL celler. Utarbetandet av en ren cell befolkningen (i detta fall MCL celler), är mycket kritisk till utveckla framgångsrika MCL xenograft. Figur 1 representerar de förberedande steg för mononukleära cell isolering från MCL patientens blod genom täthet lutning separation. Mononukleära celler bearbetas ytterligare för att få ren B-celler med en negativ B cell anrikning kit för att erhålla en ren cell befolkningen injektionsvätska xenografts i möss. Försiktighet bör iakttas att inneha maximal renhet har framgångsrik MCL engraftment. Den renhet som erhålls med denna metod är oftast > 90%. Återstående cellerna var främst monocyter och vissa T-celler (inga data anges).
Figur 2 representerar de olika stegen i protokollet B cell rening som beskrivs i avsnittet metoder. Berikad cellerna analyseras ytterligare för sin renhet av flödescytometer med hjälp av olika markörer (CD45, CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, kappa och lambda). Sekventiell gating som visas i figur 3 kan karaktärisera MCL celler: CD45 +, CD19 +, CD20 +, CD5 +, CD23− och CD200− är markerade. Ersättning för multicolor färgning genomfördes med hjälp av enkel färgade kontroller för varje de fluorokromer som används, enligt standard flödescytometri set-up.
Figur 3E G representerar typiska dot tomten av B-celler före och efter anrikning. I detta fall > 95% av berikade cellerna använder det här kitet är B-celler. Blodkropparna är suspenderade i PBS med en koncentration på 40-60 × 106 celler i 150-200 µL PBS som nämns i protokollet. De skulle omedelbart injiceras i.v. till NSG möss. Efter 10 veckor, > 90% av det injicerade djur utvecklat lymfomet visar tecken på terminal sjukdom (viktminskning, uppburrad hår, minskad aktivitet, etc.). Efter uppoffringar, är mjälten och levern bort och behandlas för att få enskild cellsuspensioner av mekaniska störningar (figur 4 d, F); blod dras försiktigt av hjärt hjärtat punktering och benmärgen behandlas genom att klippa ändarna på lårbenet och spola det med en 2 mL spruta fylld med RPMI medium eller PBS (figur 4 c). Cellerna behandlas ytterligare av flödescytometri med mänsklig B cell särskilda märkpennor som CD19/CD20 och CD45. Vi använde mänskliga B-celler specifika markörer här eftersom mottagarens mus stammen (NSG) saknar B-celler. Figur 4B - F representerar insamling av organ efter offer och stegen för vidare bearbetning. Graden av engraftment av MCL celler från två patienter är representerade i figur 4 g. Engraftment mönstret i olika organ och mellan patienter kan jämföras efter denna teknik.
Figur 1: isolering av PBMC från helblod. Blod dras från en MCL-patient är utspädd 1:1 i RPMI medium (A), och placeras försiktigt ovanpå lagrets täthet lutning media (B) utan att blanda blodet in i denna täthet lutning media (C). Centrifugering vid 400 x g i 45 min separerar de mononukleära celler, som visas som vitaktig ring (pilen indikerar det mononukleära celllagrar) (D). Detta skikt är pipetteras försiktigt utan att blanda med andra lager till en ren rör för vidare bearbetning (E). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: anrikning av B-celler från PBMC. PBMC isolerade täthet lutning centrifugering tvättas två gånger med PBS. B använda negativa och cell anrikning kit och genom att följa tillverkarens protokollet, erhålls en ren population av B-celler (1–4). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: FACS analys av MCL celler och renhet av B-celler före och efter anrikning. MCL mononukleära celler kännetecknas av FACS analys med hjälp av olika markörer som CD45, CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, kappa och lambda. Celler som är positiva för CD45, CD19, CD20, CD5 och negativ för CD23 och CD200 är markerad (A–F). G representerar cellen befolkningen efter anrikning med hjälp av negativa urval kit jämfört med E, som är före berikning. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: NSG möss som xenograft modell för engraftment av MCL celler. B-celler som härrör från MCL patienter injicerades i.v. via laterala svans venen i NSG möss (A). Efter att flera dagar för tumören till engraft, mössen offrades och dissekerade (B) för att samla in olika organ såsom benmärg (C), mjälte (D), perifert blod (E) (ritad av hjärt hjärtat punktering), och levern (F). Dessa organ var behandlas och analyseras med flödescytometri för förekomst av B-celler. G representerar engraftment mönstret av MCL celler i olika organ härrör från MCL injiceras NSG möss. Resultaten från två patienter visas. Uppgifterna presenteras som menar ± SEM, n = 3. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Kliniska prövningar är möjligt för droger som finns i ett långt framskridet utvecklingsstadium men kan inte användas för läkemedelsutveckling. Ansträngningar att utveckla djur mottagare för mänsklig cell xenotransplantation för att testa tidigt skede läkemedel har länge bedrivits. Här presenterar vi en djurmodell som undviker mänskliga transplantatavstötning och kan upprätta en modell för mänskliga sjukdomar, såsom MCL. Detta är i dagsläget en toppmodern xenograft modell för att studera mekanismerna bakom mänskliga tumör engraftment och tumörtillväxt. Här använder vi NSG möss, en av de mest immun bristfällig musmodeller hittills för att nå större framgång av lymfom engraftment. NSG möss saknar mogna T-celler, B-celler och NK-celler. De också har nedsatt cytokin signalering och defekter i medfödda immunsvaret.
Lymfocyter förberedelse från primära MCL provet av täthetlutningen är ett viktigt steg att ta bort andra celltyper som röda blodkroppar och blodplättar. Traditionellt har tillåter en täthet lutning centrifugering framgångsrik isolering av lymfocyter. Vidare bearbetning av dessa lymfocyter att berika B cell befolkningen uppnås genom användning av en B-cell anrikning kit efter protokollet som beskrivs inom detta manuskript. Försiktighet bör iakttas att uppnå en hög renhet av B-lymfocyter befolkningen att nå optimal engraftment av lymfomceller. MCL cellerna injiceras intravenöst (minst 40-60 x 106 celler/mus) genom laterala svansen ven och möss var tillåtna att utveckla lymfom för upp till 10 veckor. Mössen undersöktes noggrant varje dag för symtom på sjukdom inklusive, viktminskning, ruggig hår, minskad aktivitet, bakbenen förlamning, etc. analys av olika organ som mjälte, lever, benmärg och blod av flödescytometri avslöjade MCL engraftment. Det har nyligen visat att engraft primära MCL celler i benmärg och mjälte bestrålade NSG möss vid 20 veckors injektion9. Oberoende av detta fynd, vi har framgångsrikt utvecklat vår egen xenograft modell av primära MCL med snabbare tumörbildning.
Detta xenograft musmodell kan bli ett mycket användbart verktyg för studier av sjukdomsprogression olika lymfom typer. Xenograft-modeller ger också kraftfulla verktyg för att utföra prekliniska tester av läkemedelskandidater för hematologiska maligniteter som MCL, dock med vissa begränsningar exempelvis den dominerande klonen som är närvarande vid återfall hos en patient är inte nödvändigtvis klonen framväxande på xenotransplantation10. Detta kan bero på de olika selektiva påtryckningar som xenograft genomgår i olika värdsystem. Denna stam hematopoetiska sammansättning inte fullt recapitulate mänskliga blodbildning, således begränsa det långsiktiga underhållet av mänskliga celler. Fördelarna med att använda mänskliga tumör xenograft åsidosätter begränsningarna som resultat erhålls i ett par veckor från en mänsklig tumör biopsi om svar på behandling. Drogen Svaren korrelerar ofta inte med kliniska verksamhet i patienter11 när mänskliga cellinjer istället för primär tumörceller används som xenograft, men de hjälper bildar grunden för möjliga terapeutiskt svar. Användning av primära tumörer som en ortotopisk xenograft har ett starkare prediktiva Svarsvärde, särskilt när en kliniskt relevanta läkemedel dosering är används11,12,13. Homing av lymfomceller till sina nischer är en viktig förutsättning för att överleva och att upprätta tumör engraftment. Denna process regleras majorly via det lymfatiska systemet och tillträdeet av cirkulerande lymfocyter genom de höga endoteliala venules upprätthåller lymfocyter homeostas i lymfkörtlar.
Omsättning av B-lymfocyter genom lymfkörtlar kräver korsning endothelial hinder och korrektiv-utlöst cellmigration genom samordnad interaktion med olika adhesionsmolekyler. Därför kunde riktar sig de molekyler som styr homing av lymfocyter till deras överlevnad nischer utgöra en ny behandlingsstrategi för B-cellslymfom som de beter sig liknar normala lymfocyter. Vårt mål var att rikta molekylen JAM-C, en Junktional vidhäftning molekyl, som finns på MCL. Denna xenograft modell används för att studera de terapeutiska effekterna av JAM-C antikropp på homing och engraftment av primär lymfomceller till deras överlevnad nischer. Vi har nyligen visat en effekt av anti-JAM-C antikroppar hos möss som fått en MCL cellinje, Jeko-114. Denna antikropp hade en blockerande effekt på homing av Jeko-1 celler och även när det administreras i stamgästmellanrum, effektivt hindrade engraftment av Jeko-1 celler. Förutom dess effekt på homing utrotad antikropp behandling lymfom rekonstituerades i de flesta av de organ som testats i möss14.
Mot bakgrund av vetenskapliga och kliniska frågan behandlas, utgör dessa xenografted tumörer för närvarande en intressant modell för att studera terapeutiska resultatet av MCL.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar att de har inga konkurrerande finansiella intressen.
Acknowledgments
Detta arbete stöds av det Ligue Genevoise contre le Cancer, Fondation Dr Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 och 2914-02-2012, och Swiss National Science Foundation Grant 31003A_156760 och 310030-153456.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
References
- Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. Human chemokines: an update. Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).
- Baggiolini, M. Chemokines and leukocyte traffic. Nature. 392, 565-568 (1998).
- Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , 5th edition, (2001).
- De Silva, N. S., Klein, U. Dynamics of B cells in germinal centres. Nat Rev Immunol. 15 (3), 137-148 (2015).
- Cohen, P. L., Kurtin, P. J., Donovan, K. A., Hanson, C. A. Bone marrow and peripheral blood involvement in mantle cell lymphoma. Br. J. Haematol. 101, 302-310 (1998).
- Meusers, P., Hense, J., Brittinger, G. Mantle cell lymphoma: diagnostic criteria, clinical aspects and therapeutic problems. Leukemia (Baltimore). 11 (Suppl 2), S60-S64 (1997).
- Herrmann, A., et al. Improvement of overall survival in advanced stage mantle cell lymphoma. J Clin Oncol. 27 (4), 511-518 (2008).
- Martin, P., et al. Intensive treatment strategies may not provide superior outcomes in mantle cell lymphoma: overall survival exceeding 7 years with standard therapies. Ann Oncol. 19 (7), 1327-1330 (2008).
- Iyengar, S., et al. Characteristics of human primary mantle cell lymphoma engraftment in NSG mice. Br J Haematol. 173 (1), 165-169 (2016).
- Klco, J. M., et al. Functional heterogeneity of genetically defined subclones in acute myeloid leukemia. Cancer cell. 25 (3), 379-392 (2014).
- Kerbel, R. S. Human tumor xenografts as predictive preclinical models for anticancer drug activity in humans: better than commonly perceived-but they can be improved. Cancer Biol Ther. 2 (4 Suppl 1), S134-S139 (2003).
- Johnson, J. I., et al. Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials. Br. J. Cancer. 84, 1424-1431 (2001).
- Scholz, C. C., Berger, D. P., Winterhalter, B. R., Henss, H., Fiebig, H. H. Correlation of drug response in patients and in the clonogenic assay with solid human tumour xenografts. Eur. J. Cancer. 26, 901-905 (1990).
- Doñate, C., Vijaya Kumar, A., Imhof, B. A., Matthes, T. Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma. J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).
