Summary
Mantle hücreli Lenfoma (MCL) bir B hücre bozukluğu tedavi etmek zordur ve eşit bir xenograft fare modeli eğitim ve tedavi geliştirmek için birincil MCL kurmak zordur. Burada, onun temel Biyoloji anlamak farelerde MCL xenografts başarılı kurulması açıklayın.
Abstract
B lenfositler anahtar oyuncular bağışıklık hücre dolaşım ve onlar çoğunlukla ev sahipliği ve lenfoid organlarda bulunan. Normal B hücreleri yalnızca T lenfositler tarafından uyardığında çoğalırlar, oncogenic B hücreleri hayatta kalmak ve özerk olarak tanımlanmamış organ niş genişletin. Mantle hücreli Lenfoma (MCL) bir tür B hücresi, hastalarin medyan sağkalım oranı 4-5 yıl nerede hastalıktır. Bu etkili mekanizmalar tarafından posta ve bu hücrelerin engraftment hayatta kalma artırmak için engellenen ihtiyacı ve uzun ömürlü hastalar için çağırır. Bu nedenle, izleme mekanizması içinde vivo engelleyerek MCL tedavi etkinliğinin çalışmaya xenograft fare modeli geliştirmek için çaba son derece önemlidir. Erken sahne uyuşturucu test etmek için insan hücre xenotransplantation hayvan alıcılarına gelişimi uzun takip, ilgili preklinik fare modelleri ekran yeni terapötik ajanlar için çok önemli olduğu gibi. Bu hayvan modeli insan greft reddi önlemek ve insan hastalıkları için bir model kurmak için geliştirilen ve hastalık ilerleme farklı Lenfoma türlerinden çalışmaya ve preklinik için aday ilaçların test gerçekleştirmek için son derece yararlı bir araç olabilir hematolojik maligniteler, MCL gibi. Çalışma ve MCL için yeni tedavi yaklaşımları geliştirmek için mükemmel bir kaynak olarak görev yapacak bir xenograft fare modeli kurduk.
Introduction
Lenfositler doğası gereği immün gözetim içinde önemli bir rol oynamaktadır ve lenfosit kaçakçılığı antijen belirli bağışıklık1,2montaj kritik bir adımdır. Bu işlem geçiş saf T lenfositlerin kan akışına timus ve soydaş antijenleri buluştuğu orada ikincil lenfoid organlara, lenf düğümleri, Peyer's yamalar veya dalak, dahil olmak üzere içerir. B lenfositler kemik iliğinde ayırt etmek ve saf hücreler olarak ikincil lenfoid organlara3köklerinin geçirilir. Bazı bu B hücrelerinin antijen ile onların reseptör bağlamak ve belirli T hücreleri tarafından aktif hale gelir. Yayılması ve bu B hücrelerinin farklılaşma folikül manto bölgeye sigara-harekete geçirmek, naif B hücreleri iter. Aktif hücre sonra vücut devriye veya kemik iliği4' e göç plazma hücreleri salgılayan immünglobulin içine Olgun Hücreler içine bellek B ayırt edebilir.
Naif B lenfositler manto bölgedeki tümör dönüştürdüğünüzde MCL oluşur. Bu Lenfoma hücreleri lenfoid organlar microenvironment içinde bulunan ve belirli T lenfosit kontrol bağımsız olarak çoğalırlar. Ancak, yoğunluğu belirli bir aşamada onlar bu niş kaçış ve diğer organlarda nişler için arama kan recirculate. Adezyon molekülleri karmaşıklığı ve karışıklık kemokinler ve onların reseptörleri, göz önüne alındığında bu hücresel kaçakçılığı vivo içinde mekanizmasının kötü anlaşılmaktadır ve bu nedenle terapi engellemektedir. Roman yöntemleri etkili Lenfoma B hücreleri yeni microenvironments ulaşmasını önlemek için bu geçiş süreci engellemek için gereklidir.
MCL B hücre maligniteler tedavisi en zor biridir. MCL neoplastik bir fenotip biyolojik özellikleri benzersiz edinimi ile karakterize bir multistep çağlayan sonucu gelişmedir. Tanı zaman çoğu hasta (% 70) Dissemine hastalık ile çoğu durumda dalak, kemik iliği ve/veya gastrointestinal sistem5,6Ekstranodal tutulum sergilenmesi ile zaten var. Tedavi edilen hastalarda, konvansiyonel kemoterapi yüksek remisyon oranları kısa vadeli7,8indükler olsa bile bir kaç yıl içinde dayanıklı tümör tarafından nüks yaygındır. MCL yayılması ve onun temel Biyoloji anlamak yardımcı olabilir yeni bir hastalık modeli mevcut burada: hastaların birincil tümör hücreleri kökenli insan MCL xenograft fare modeli kurduk. Biz bu model MCL yayılması karşı tedavi stratejileri geliştirmek ve muhtemelen en iyi tanı ve Relaps hastaların tedavisi için yeni klinik Perspektifler sağlar yardımcı olacağını umuyoruz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
İnsan kanı örnekleri yerel etik ve insan deneme Komiteler Cenevre Üniversitesi Hastanesi tarafından onaylanmış yordamlara göre belirleme yapılacağı kullanılmıştır.
Hayvan yordamlar kurumsal Etik Komitesi hayvan bakımı Cenevre, İsviçre ve Kanton veteriner Office uygun olarak gerçekleştirilen (yetki numarası: GE/26/15).
1. birincil periferik kan mononükleer hücreler (PBMCs) yoğunluk Gradient ayırma tarafından hazırlanması
Not: 3-5 mL periferik kan MCL ile lösemik aşamasında sunulması hastalardan elde edildi. Tanı tanı ölçütlerini standart Akış Sitometresi (CD5 +, CD23−, CD200 +, monoklonal B hücre nüfus) göre kurulan ve daha sonra kromozom translocation t(11;14) varlığı ve siklin D1 overexpression tarafından onaylandı. Her durumda, için monoklonal B hücreleri oluşturmaktadır > toplam B hücre nüfusun % 90. Kalan hücreleri esas olarak monosit ve bazı T hücreleri vardı.
- MCL kan örneği (1:1) 5 mL 5 mL Roswell Park Memorial Enstitüsü orta 1640 (RPMI) (şekil 1A) ile sulandırmak.
- Yoğunluk gradient medya (Malzemeler tablo) ayrıntılı karıştırma sağlamak için kullanmadan önce birkaç kez tersine çevirin.
- Bir pipet aspiratör kullanarak bir 15 mL santrifüj tüpüne 5 mL yoğunluk gradient medya ekleyin.
- Hafifçe sulandırılmış kan örneği (kan yoğunluk gradient medya oranı olmalıdır 2:1, örneğin, 10 mL 5 mL yoğunluk gradient medya için kan) bir aspiratör kullanarak 15 mL santrifüj tüpü yoğunluk gradient medyada üzerinde katman. Bakım değil karıştırmak için iki katman (1B rakam, C) alınmalıdır.
- 400 x g oda sıcaklığında 40 min için de örnek devre dışı santrifüj frenler ile santrifüj kapasitesi.
- Steril bir Pasteur pipet kullanarak yavaşça Orta tabaka ((şekil 1 d, E) bir okla işaretli beyazımsı, ince halka) Aspire mononükleer hücreler içeren ve temiz bir tüpün içine aktarabilirsiniz.
- Çamaşır mononükleer hücre
- Transfer edilen hücre süspansiyon hacmi tahmin etmek ve eklemek steril 1 fosfat tamponlu tuz (PBS) % 1 sığır serum albumin (BSA) ile x 3 cilt.
- Süspansiyon tarafından pipetting yukarı ve aşağı birkaç kez karıştırın.
- 400-500 x g 10-15 dakika oda sıcaklığında, süspansiyon santrifüj kapasitesi.
- Hücre Pelet elde edilir ve yıkama adım tekrar süpernatant atmak.
- Süpernatant kaldırmak ve istediğiniz ses, örneğin, PBS 1 veya 2 mL hücrelerde resuspend.
- Bir otomatik hücre sayaç ya da el ile bir hemasitometre (Neubauer odası) kullanarak hücreleri saydırmak.
2. B hücreleri B hücre negatif seçim tarafından zenginlik
- PBS hücrelerde son konsantrasyonu 50 x 106 hücre/ml seyreltik.
- Hücreleri yuvarlak alt polistren tüp 5 mL aktarın. Antikor kokteyl 100 µL B hücre zenginleştirme Seti'nden hücre süspansiyon için 2 mL ekleyin ve karışımı yavaşça (Şekil 2-1yukarı ve aşağı) pipetting tarafından.
- Hücreleri, oda sıcaklığında 10 dakika için kuluçkaya.
- Kısaca girdap manyetik parçacıklar için 30 B hücre zenginleştirme Seti'nde sağlanan s (Şekil 2-2). Manyetik parçacıkların 150 µL 2 mL örnek ekleyin.
- Örnek oda sıcaklığında başka bir 5 min için kuluçkaya.
- Numune hacmi 2.5 mL 1 x PBS % 2 fetal buzağı serum (FCS) ve 1 mM ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) içeren getir. Tüp mıknatıs yerleştirin ve başka bir 3-5 dk (Şekil 2-3) için tüp kuluçkaya.
- Mıknatıs tüp yerinde ve bir sürekli hareket ile almak, böylece zenginleştirilmiş hücre süspansiyon (Şekil 2-4) taze bir tüpte toplanır tüp dikkatle boşaltmak. Bir otomatik hücre sayaç ya da el ile B hücrelerinin toplam verim elde etmek için bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak.
Not: Genellikle, verim ~ 105 B hücre/mL normal B hücreleri ve 5-50 x 106 hücre/mL MCL için için olur. - B hücre zenginleştirme saflığı teyit
- Al ~ 50.000 hücreleri ve anti-CD19/CD20 antikorları içeren hücreleri kuluçkaya (1:20 seyreltme) ve anti-CD45 antikor birleştiğinde için farklı fluorochromes (1:10 seyreltme) için 15-30 dakika oda sıcaklığında.
- 1 mL 1 x PBS + % 1 BSA ile yıkayın, 400-500 x g 5 min için de hücreleri santrifüj kapasitesi ve PBS ~ 200 µL hücrelerde resuspend.
- Akış Sitometresi tarafından hücre örnekleri almak ve B hücreleri saflık için analiz. Saflık olduğunu çoğunlukla > 90 oranında bu yöntem (şekil 3).
3. Xenograft fare modeli geliştirilmesi
- ~ 40-60 x 1 x PBS (fare enjekte etmek için gerekli miktar) 150-200 µL 106 hücrelerde askıya alma.
- Hücre süspansiyon 150 µL intravenöz enjekte (IV) 6-7 hafta eski immünyetmezligi NOD scid gama (NSG) fareler (şekil 4A) Cinsiyeti ne olursa olsun her kuyruk ven içine.
- Fareler ~ 10 hafta boyunca insan Lenfoma geliştirmeye olanak sağlar.
Not: Birincil insan Lenfoma hücreleri insan Lenfoma hücre hatları (~ 3 hafta) karşılaştırıldığında tümör geliştirmek çok daha uzun sürer. - Hayvanlar kilo kaybı gibi ölümcül hastalık belirtileri göstermek başlattığınızda, fırfır yakalı saç, azalmış aktivite, hind felç, vb, kurban fareler tarafından CO2 boğulma kalp kalp delik tarafından kan elde etmek için takip.
- Toplamak farklı organları gibi kemik iliği, dalak ve karaciğer fareler anatomi ve tümör engraftment analiz için kurban anda kalpten kan çizerek periferik kan toplamak (şekil 4B -F).
4. chimerism analiz farklı organlarda Engrafted tümör hücresi
- Farklı organları topladıktan sonra bunları tek hücre süspansiyonlar 1 amonyum klorür potasyum arabellek x 200 µL kullanmak için kan ve kemik iliği, dalak için 500 µL ve karaciğer için 2 mL kırmızı kan hücresi (RBC) lizis takip oluşturmak için mekanik bozulma tarafından işlenmesi .
- Say ve insan B hücre belirli antikor, Yani, anti-CD19, anti CD20 ve anti-CD45 kullanarak hücreleri leke.
Not: NSG fareler B hücreleri eksikliği ve bu nedenle analiz için hücreleri insan belirli B hücre işaretleri ile lekeli. - B hücreleri (CD19, CD20 +, CD45 +) çoğunluğuna göre Akış Sitometresi tarafından her organ dan türetilmiş hücre analiz.
- Engrafted tümör hücreleri farklı organlarda enjekte MCL fareler adım 4.3 (şekil 4 g) belirtildiği gibi geçişli hücreleri temel alan türetilmiş ölçmek.
Not: Malzeme tablo Ayrıntılar için bkz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
El yazması bir xenograft fare modeli engraftment MCL hücre için başarılı gelişimi için en iyi duruma getirilmiş bir protokolünü açıklar. Hazırlık nüfusun bir saf hücre (Bu durumda MCL hücreleri), başarılı MCL xenografts geliştirmek için çok önemlidir. Şekil 1 MCL hastanın kan mononükleer hücre izolasyon için partiye hazırlık adımları yoğunluk gradient ayırma tarafından temsil eder. Mononükleer hücreler daha da saf hücre nüfus fareler içine xenograft enjeksiyon için elde etmek için bir negatif B hücre zenginleştirme kit kullanarak saf B hücreleri elde etmek için işlenir. Maksimum saflık başarılı MCL engraftment için elde etmek için özen gösterilmelidir. Genellikle bu yöntemi kullanarak elde edilen saflık olduğunu > % 90. Kalan hücreleri esas olarak monosit ve bazı T hücreleri (veri gösterilmez) idi.
Şekil 2 yöntemleri bölümünde açıklandığı gibi B hücre arıtma protokolünün farklı adımları temsil eder. Zenginleştirilmiş hücreleri daha fazla farklı işaretçileri (CD45, CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, kappa ve lambda) kullanarak Akış Sitometresi tarafından kendi saflık için analiz edilir. Şekil 3 ' te gösterildiği gibi sıralı geçişi sağlar MCL hücreleri ile karakterize: CD45 +, CD19 +, CD20 +, CD5 +, CD23− ve CD200− seçilir. Çok renkli boyama için tazminat her biri, standart sitometresi set-up göre kullanılan fluorochromes için tek lekeli denetimler kullanılarak gerçekleştirilmiştir.
Şekil 3E G B hücreleri tipik nokta arsa öncesi ve sonrası zenginleştirme temsil eder. Bu durumda, > Bu kit kullanarak zenginleştirilmiş hücreleri % 95'i B hücreleri vardır. Hücreleri bir konsantrasyon protokolünde bahsedilen 150-200 µL PBS 40-60 × 106 hücrelerinin, PBS içinde askıya alınır. Onlar hemen damardan NSG farelere enjekte edildi. 10 hafta sonra > enjekte hayvanlar geliştirilen Lenfoma yüzde 90'ını (kilo kaybı, fırfır yakalı saç, azalmış aktivite, vb) ölümcül hastalık belirtileri gösterir. Kurban, dalak ve karaciğer kaldırılır ve tek hücre süspansiyonlar elde etmek için mekanik bozulma (şekil 4 d, F); tarafından işlenen sonra kan dikkatle kalp kalp ponksiyon tarafından çizilmiş ve kemik iliği her iki ucunda da uyluk kesim tarafından işlenir ve 2 mL şırınga kullanarak kızarma RPMI orta veya PBS (şekil 4 c) ile dolu. Hücreleri daha fazla insan B hücre CD19/CD20 ve CD45 gibi belirli işaretçileri kullanarak Akış Sitometresi tarafından işlenir. Alıcı fare zorlanma (NSG) B hücreleri yoksun çünkü biz burada insan B hücre belirli işaretleri kullanılır. Şekil 4B - F organ kurban sonra topluluğu ve daha fazla işlem adımları temsil eder. Engraftment iki hastalardan elde edilen MCL hücre derecesini şekil 4 ggösterilir. Bu teknik takip engraftment desen farklı organlarda ve hastalar arasında karşılaştırılabilir.
Şekil 1: PBMCs tam kan gelen yalıtım. MCL hastadan çizilmiş kan seyreltilmiş 1:1 RPMI orta(a)'deve bu yoğunluk gradient medya (C) kan karıştırma olmadan üzerinde yoğunluk gradient medya Katmanı (B) dikkatlice yerleştirilen. Santrifüjü 45 dakika için 400 x g de ayıran beyazımsı halkası olarak görünür mononükleer hücreler (ok gösterir mononükleer hücre Katmanı) (D). Bu katman yavaşça içine temiz bir tüp daha fazla işleme (E) diğer katmanları ile karıştırma olmadan pipetted. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2: zenginleştirme b hücreleri PBMCs. Yoğunluk gradient Santrifüjü tarafından izole PBMCs iki kez PBS ile yıkanır. Negatif kullanarak B hücre zenginleştirme kiti ve üreticinin iletişim kuralı takip ederek, B hücreleri saf bir nüfusa (1-4) elde edilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3: FACS analizi MCL hücre ve saflık b hücreleri öncesi ve sonrası zenginleştirme. Mononükleer MCL hücreleri CD45, CD19, CD20, CD23, CD200, CD5, kappa ve lambda gibi farklı işaretçileri kullanarak FACS analizi tarafından karakterize edilmektedir. Seçili hücreleri CD23 ve CD200 CD45, CD19, CD20, CD5 ve negatif pozitif olan (A-F). G zenginleştirme önce olan E, göre negatif seçim seti kullanarak zenginleştirme sonra hücre popülasyonu temsil. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4: NSG fareler MCL hücre engraftment xenograft model olarak. B hücreleri MCL hastalardan elde edilen serum NSG fareler(a)yan kuyruk ven yoluyla enjekte edildi. Birkaç gün engraft tümör için izin, fareler kurban edildi sonra (farklı organlara (kalp kalp ponksiyon tarafından çizilen), kemik iliği (C), dalak (D), periferik kan (E) gibi toplamak için,B) disseke ve karaciğer (F). Bu organların daha fazla işlenen ve B hücreleri varlığı için Akış Sitometresi tarafından analiz edildi. G temsil eder engraftment desen farklı organları MCL türetilmiş MCL hücrelerinin enjekte NSG fareler. İki hasta sonuçlarını gösterilir. Veri ± SEM, demek gibi gösterilir n = 3. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Klinik çalışmalar gelişmiş bir gelişme aşamasında olan, ancak ilaç keşfi için kullanılan ilaçlar için mümkündür. Hayvan insan hücre xenotransplantation alıcılarına erken sahne ilaçları test amacıyla geliştirmek için çabalarını uzun takip edilmiştir. Burada insan greft reddi önler ve MCL gibi insan hastalıkları için bir model oluşturabilir bir hayvan modeli mevcut. Bu şu anda insan tümör engraftment ve tümör büyüme mekanizmaları incelemek için bir sanat devlet xenograft modelidir. Burada NSG fareler, en bağışıklık eksik fare modelleri bugüne Lenfoma engraftment büyük başarı elde etmek için kullanırız. NSG fareler Olgun T hücreleri, B hücreleri ve NK hücreleri eksikliği. Ayrıca sitokin sinyal verme güçlüğü ve kusurları doğuştan gelen bağışıklık yanıtında olup.
Lenfosit hazırlık yoğunluk gradient tarafından birincil MCL örnekten diğer hücre tipleri kırmızı kan hücreleri ve trombosit gibi kaldırmak için önemli bir adımdır. Geleneksel olarak, bir yoğunluk gradient Santrifüjü lenfositlerin başarılı yalıtım sağlar. Daha fazla bu lenfositler B hücre nüfus zenginleştirmek alay bu el yazması içinde açıklandığı gibi protokol sonrası B hücre zenginleştirme kiti kullanılarak elde edilebilir. B lenfosit nüfusun Lenfoma hücrelerinin en uygun engraftment ulaşmak için yüksek saflıkta ulaşmak için özen gösterilmelidir. MCL hücreleri intravenöz enjekte edilir (en az 106 hücreler/fare x 40-60) yanal kuyruk ven ve fare Lenfoma 10 haftaya kadar geliştirmek için izin verildi. Fareler yakından muayene dahil olmak üzere, kilo kaybı, hastalık belirtileri saç, karıştırdı için her gün etkinlik, hind felç azalmıştır, vb dalak, karaciğer, kemik iliği ve kan Akış Sitometresi tarafından gibi farklı organları analizini MCL ortaya engraftment. Son zamanlarda, birincil MCL hücreler kemik iliği ve dalak radyasyonlu NSG farelerin enjeksiyon920 haftalıkken engraft gösterilmiştir. Bağımsız bu bulgu, başarılı bir şekilde daha hızlı tümör oluşumu ile birincil MCL kendi xenograft modeli geliştirdik.
Bu xenograft fare modeli farklı Lenfoma türlerinin hastalık progresyon çalışma için son derece yararlı bir araç olabilir. Xenograft modelleri de preklinik MCL gibi hematolojik maligniteler için aday ilaçların test gerçekleştirmek için güçlü çözümler sağlar, ancak, bazı sınırlamalar ile örneğin, baskın klon bir hastada nüks mevcut mutlaka klon değil xenotransplantation10üzerinde ortaya çıkan. Bu xenograft farklı ana bilgisayar sistemlerinde uğrar farklı seçici basınç nedeniyle olabilir. Bu zorlanma hematopoetik bileşiminde insan hücreleri uzun vadeli bakım sınırlama böylece, insan hematopoiesis, tam olarak özetlemek değil. İnsan tümör xenografts kullanmanın avantajları sonuçları insan tümör biyopsi ile ilgili tedaviye yanıt üzerinden bir kaç hafta içinde elde edilen gibi sınırlamalar geçersiz kılar. Uyuşturucu yanıt kez ile klinik faaliyetler hastaların11 ne zaman insan hücre satırları yerine birincil tümör hücreleri xenografts kullanılır, ancak olası tedavi yanıtları için zemin oluşturmak yardımcı ilişkili değil. Özellikle klinik ilaç dozu kullanılan11,12,13olduğunda birincil tümörleri kullanımı orthotropic bir xenograft olarak daha güçlü bir akıllı yanıt değeri vardır. Posta onların niş için Lenfoma hücrelerinin tümör engraftment kurmak için ve hayatta kalmak için önemli bir önceden gerekli olduğunu. Bu işlemi lenf sistemi majorly düzenlenir ve lenfositler aracılığıyla yüksek endotel venüller dolaşan giriş lenf düğümleri lenfosit homeostazı korur.
B lenfositler aracılığıyla lenf dolaşımını geçiş endotel engelleri ve chemoattractant tetiklemeli hücre göç farklı adezyon molekülleri ile koordineli etkileşim gerektirir. Bu nedenle, onlar normal lenfositler benzer davranır gibi onların hayatta kalma nişler için lenfositlerin posta kontrol molekülleri hedefleme B hücre lenfomalarin bazilarinin için yeni bir tedavi stratejisi teşkil edebilir. Amacımız molekül reçel-C, MCL üzerinde mevcut bir bileske adezyon molekül hedef olmuştur. Bu xenograft model reçel-C antikor posta üzerinde tedavi edici etkileri ve engraftment onların hayatta kalma nişler için birincil Lenfoma hücrelerinin çalışma için kullanılacak. Biz son zamanlarda alınan MCL hücre kültürünü, Jeko-114farelerde JAM-C antikor bir etkisini göstermiştir. Bu antikor Jeko-1 hücre posta engelleme etkisi vardı ve ayrıca düzenli aralıklarla yönetilen zaman verimli bir şekilde engraftment Jeko-1 hücre engelledi. Posta üzerindeki etkisi yanı sıra, antikor tedavisi bu fareler14' te test organları engrafted Lenfoma ortadan kaldırılacak.
Ele alınmaktadır klinik ve bilimsel açıdan soru ışığında, bu xenografted tümör şu anda, MCL, tedavi sonucunu incelemek için ilginç bir model temsil eder.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.
Acknowledgments
Bu eser Ligue Genevoise contre le kanser, tarafından desteklenen Fondation Dr Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 ve 2914-02-2012 ve İsviçre Ulusal Bilim Vakfı Hibe 31003A_156760 ve 310030-153456.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
References
- Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. Human chemokines: an update. Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).
- Baggiolini, M. Chemokines and leukocyte traffic. Nature. 392, 565-568 (1998).
- Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , 5th edition, (2001).
- De Silva, N. S., Klein, U. Dynamics of B cells in germinal centres. Nat Rev Immunol. 15 (3), 137-148 (2015).
- Cohen, P. L., Kurtin, P. J., Donovan, K. A., Hanson, C. A. Bone marrow and peripheral blood involvement in mantle cell lymphoma. Br. J. Haematol. 101, 302-310 (1998).
- Meusers, P., Hense, J., Brittinger, G. Mantle cell lymphoma: diagnostic criteria, clinical aspects and therapeutic problems. Leukemia (Baltimore). 11 (Suppl 2), S60-S64 (1997).
- Herrmann, A., et al. Improvement of overall survival in advanced stage mantle cell lymphoma. J Clin Oncol. 27 (4), 511-518 (2008).
- Martin, P., et al. Intensive treatment strategies may not provide superior outcomes in mantle cell lymphoma: overall survival exceeding 7 years with standard therapies. Ann Oncol. 19 (7), 1327-1330 (2008).
- Iyengar, S., et al. Characteristics of human primary mantle cell lymphoma engraftment in NSG mice. Br J Haematol. 173 (1), 165-169 (2016).
- Klco, J. M., et al. Functional heterogeneity of genetically defined subclones in acute myeloid leukemia. Cancer cell. 25 (3), 379-392 (2014).
- Kerbel, R. S. Human tumor xenografts as predictive preclinical models for anticancer drug activity in humans: better than commonly perceived-but they can be improved. Cancer Biol Ther. 2 (4 Suppl 1), S134-S139 (2003).
- Johnson, J. I., et al. Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials. Br. J. Cancer. 84, 1424-1431 (2001).
- Scholz, C. C., Berger, D. P., Winterhalter, B. R., Henss, H., Fiebig, H. H. Correlation of drug response in patients and in the clonogenic assay with solid human tumour xenografts. Eur. J. Cancer. 26, 901-905 (1990).
- Doñate, C., Vijaya Kumar, A., Imhof, B. A., Matthes, T. Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma. J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).
