Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Medicine

الكيمياء المناعية الكمية للمكروية الخلوية في المرضى ارتجاجات الأرومة الدبقية

doi: 10.3791/56025 Published: July 31, 2017

Summary

وقد تم تطوير هذا البروتوكول لتحديد كميا مكونات المكروية الورم في ريسيكلتيونس المريض ورم أروميوجيستوك باستخدام الكيمياء المناعية و إيماجيج.

Abstract

مع الاهتمام المتزايد في المكروية الورم، وضعنا إلى وضع طريقة لتحديد على وجه التحديد مكونات المكروية داخل عينات المريض من أرومة دبقية، والأكثر دموية والأكثر سرطان الدماغ الغازية. ليس فقط الطرق الكمية المفيدة لوصف الأنسجة المريضة بدقة، فإنها يمكن أيضا أن تسهم في تشخيص أكثر دقة، والتشخيص، وتطوير النظم التي تعمل على الأنسجة الأنسجة والاستبدالات. في الخلايا الدبقية، الخلايا الدبقية، مثل الخلايا الدبقية الصغيرة و الخلايا النجمية، وقد ارتبطت بشكل مستقل مع سوء التشخيص على أساس الدرجات علم الأمراض. ومع ذلك، فإن حالة هذه الخلايا وغيرها من مكونات الخلية الدبقية لم يتم وصفها بشكل جيد كميا. هذا يمكن أن يكون صعبا بسبب العمليات الكبيرة التي تميز هذه الخلايا الدبقية. وعلاوة على ذلك، فإن معظم التحليلات النسيجية تركز على عينة الأنسجة الشاملة أو فقط في الجزء الأكبر من الورم، بدلا من تحديد الكميات على أساس المناطق الطرافةهين الأنسجة غير متجانسة للغاية. هنا، نحن تصف طريقة لتحديد وتحليل كميا من السكان من الخلايا الدبقية داخل الورم السائبة والمناطق المجاورة من استئصال الورم من مرضى أرومة دبقية. استخدمنا المناعية اللوني لتحديد السكان الخلية الدبقية في استئصال الورم المريض و إيماجيج لتحليل التغطية في المئة من تلطيخ لكل السكان الدبقية. مع هذه التقنيات ونحن قادرون على وصف أفضل الخلايا الدبقية في جميع أنحاء المناطق المكروية الورم الدبقية.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

ورم أرومي دبقي (غم)، وسرطان الدماغ الأكثر شيوعا والخبيثة، وتتميز غزو منتشر للغاية من السائبة الورم الرئيسي في محيط حمة صحية المحيطة 1 ، 2 . هذا الغزو منتشر يجعل الورم من الصعب بشكل خاص على استئصال تماما، والخلايا السرطانية الغازية التي تبقى بعد العلاج هو السبب الأكثر شيوعا لتكرار لا مفر منه 2 ، 3 ، 4 . في السابق، وجدنا تثبيط غزو خلية دبقية منتشر ليكون مفيدا علاجيا 5 ، ولكن لا يعرف سوى القليل عن الآليات المعقدة المساهمة في غم غزو. وقد تورط المكروية الورم، أو الأنسجة المحيطة بالسرطان، في تطور الأورام في سرطانات متعددة 6 ، 7 . ورم أرومي غليوبلاستوما المكروية، في صالمفصلي، هو نسبيا أقل من وصفها، وهي معقدة بشكل فريد، وتتألف من الخلايا الدبقية متعددة، مثل الخلايا النجمية، الدبقية الصغيرة، و أوليغوديندروسيتس، فضلا عن مصفوفة خارج الخلية، والعوامل القابلة للذوبان، والعوامل الفيزيائية الحيوية. من الناحية التجريبية، وقد أظهرت الخلايا النجمية والدبقية الصغيرة لزيادة تطور الورم والغزو 8 ، 9 ، 10 ، ولكن تكوين جميع الخلايا الدبقية في المكروية الدماغ البشري الأصلي غير معروف.

لقد أظهرنا في السابق أن مكونات المكروية يمكن أن تتنبأ بقاء المريض عن طريق التحليل الكمي للمكونات الخلوية للمكروية الدبقية ودمج تحليلاتنا في نموذج المخاطر النسبية 11 . هنا، نحن تصف طريقة التحليل الكمي لتحديد السكان من الخلايا الدبقية داخل الورم السائبة والمناطق المجاورة من استئصال الورم من مريض أرومي دبقيالصورة. استخدمنا المناعية اللوني لتحديد السكان الخلايا الدبقية و إيماجيج لتحليل التغطية في المئة من تلطيخ لكل السكان الدبقية. تقييم نسبة التغطية يخلق قياس بسيط لتحديد الاختلافات المورفولوجية للخلايا، وخاصة تلك المتضررة من التفاعلات مع الخلايا السرطانية. الدراسات السابقة لقياس كميا تلطيخ الأنسجة استخدام تلطيخ القياسية مثل الهيماتوكسيلين ويوزين 12 أو ثلاثي الألوان ماسون في 13 ، والتي لا تستفيد من خصوصية تلطيخ المناعية القائمة على الأجسام المضادة. وقد تم تطوير أسلوبنا لتحديد كمية السكان الدبقية مباشرة داخل الورم الأرومي الدبقي استئصال الورم المريض، والتي نهدف إلى استخدامها لتوضيح المكروية الدبقية المعقدة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

هذا البروتوكول يحدد المكونات الخلوية في الفورمالين ثابتة البارافين جزءا لا يتجزأ من عينات (فب)، كما هو الحال بالنسبة لعينات المريض السريرية السريرية. التضمين البارافين يسمح لأفضل صيانة التشكل الخلوي والأنسجة وكذلك لديه طول العمر أفضل من المقاطع. تم الوصول إلى العينات المستخدمة في هذا التحليل من خلال مرفق أبحاث المستودعات الحيوية والأنسجة بجامعة فرجينيا. تم اختيار عينات المرضى من قبل طبيب الأعصاب على أساس تشخيص نهائي من ورم أرومي دبقي (نجمي، الصف الرابع لمنظمة الصحة العالمية) الذين أكملوا استئصال الورم في جامعة فيرجينيا بين عامي 2010 و 2013، وتم إلغاء تحديدها قبل هذا التحليل 11 .

1. فب عينة ديبارافينيزاتيون والجفاف

ملاحظة: هذا الجزء من البروتوكول هو محدد لعينات فب. في حين أن العينات جزءا لا يتجزأ من البارافين يمكن أن تكون أكثر فائدة لهذا التحليل بسبب الحفاظ على الخلوية و tقضية مورفولوجيا، ويمكن أيضا أن يتم هذا التحليل مع أقسام المجمدة. إذا استخدام المقاطع المجمدة، ويمكن حذف هذا الجزء والمضي قدما مباشرة إلى المناعية اللوني.

  1. أداء يغسل التالية لمدة 5 دقائق كل: الزيلين، الزيلين، الإيثانول 100٪، الإيثانول 100٪، الإيثانول 95٪، الإيثانول 95٪، الإيثانول 70٪ والمياه منزوع الأيونات والمياه منزوع الأيونات

2. أنتيجن استرجاع

ملاحظة: هذا الجزء من بروتوكول ضروري لكسر الجسور الميثيلين شكلت خلال تثبيت الفورمالين من عينات فب وفضح مواقع مستضد للأجسام المضادة لربط.

  1. تمييع تريس المستندة إلى ارتفاع الرقم الهيدروجيني مستضد حل حل في توصية المصنع في الماء المقطر.
  2. إجراء استرجاع مستضد بوساطة الحرارة باستخدام الميكروويف. كما أن أشكال أخرى من استرجاع بوساطة الحرارة (مثل طنجرة الضغط أو باخرة الخضار أو الماء المغلي) تكفي أيضا.
    1. إضافة حل مخفيا كشف في الميكروويف غير مختومةوعاء. وضع الشرائح في السفينة. ضع الشرائح في الميكروويف.
    2. يغلي لمدة 20 دقيقة في قوة عالية. مراقبة مستويات السائل للتبخر، وتجديد بالماء المقطر حسب الضرورة.
  3. السماح للعينات لتبرد في حل لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.

3. كروموجينيك المناعية

  1. مخطط عينة الأنسجة مع القلم مسعور لتقليل حجم الكواشف اللازمة لتغطية العينة.
    ملاحظة: تأكد من الحفاظ على عينات الأنسجة رطب وعدم السماح لهم تجف لأن هذا سيؤثر على فعالية تلطيخ.
  2. الماصة ما يكفي من حل بيرمابيليزاتيون (تريس مخزنة المالحة (تبس) + 0.01٪ تريتون- X) لتغطية عينة الأنسجة (عادة حوالي 100-200 ميكرولتر).
  3. إزالة وتجاهل الحل وتكرار الخطوة 3.2.
  4. احتضان العينات في درجة حرارة الغرفة مع حل عرقلة (مصل الحصان 2.5٪ + حل بيرمابيليزاتيون).
  5. احتضان عينات بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية مع الأجسام المضادة الأولية المخففةفي حجب الحل.
    ملاحظة: يتم تخفيف جميع الأجسام المضادة الأولية المستخدمة هنا في 1: 200، ولكن يمكن تحديد التخفيفات المثلى باستخدام التخفيفات المسلسل بدءا من توصية الشركة المصنعة. تم نشر معلومات مفصلة عن الأجسام المضادة المستخدمة في هذا البروتوكول سابقا 11 .
  6. الكشف عن الأجسام المضادة الأولية باستخدام كاشف البيروكسيداز البيروكسيديز الفجل المقابلة مع الحيوان المضيف الأجسام المضادة الأولية، بعد بروتوكول الشركة المصنعة.
  7. الماصة ما يكفي من حل بيرمابيليزاتيون لتغطية عينة الأنسجة واحتضان لمدة 5 دقائق.
  8. إزالة وتجاهل الحل وتكرار الخطوة 3.7.
  9. احتضان الشرائح في 0.3٪ H 2 O 2 في تبس 1X لمدة 15 دقيقة.
  10. تطوير عينات مع البيروكسيديز ديامينوبنزيدين (داب) الركيزة لمدة 2-10 دقيقة حتى يتم تحقيق كثافة وصمة عار المطلوب.
  11. عينات كونتيرستين لتحديد نوى الخلية، مثل مع الهيماتوكسيلين، بعد بروتوكول الشركة المصنعة.
  12. يذوى عينات مع 100٪الإيثانول والزيلين.
  13. جبل عينات بشكل دائم مع وسائل الإعلام المتصاعدة.

4. مناطق تحديد الهوية

  1. صورة الشرائح تحت برايتفيلد المجهري قادرة على صور عالية الدقة.
    ملاحظة: استخدام مكونات الخلوية التصوير على الأقل 20X القرار.
  2. نقل الكاميرا إلى مناطق محددة من الفائدة في جميع أنحاء عينات الأنسجة.
  3. حفظ الصور كملفات تيف للكمية.

5. تحليل الصورة

  1. فتح الصور في إيماجيج لتقدير كمية التغطية في المئة.
  2. استخدام المكون عتبة اللون لإزالة اللون الأرجواني من النوى الملطخة الهيماتوكسيلين.
  3. تحويل الصورة إلى 8 بت.
  4. أضف عتبة بدون خلفية داكنة.
  5. صورة العملية باستخدام واحدة من 17 مرشحات عتبة إيماجيج قبل تحميلها ( أي ماكسنتروبي) حتى يتم تضمين فقط أجزاء ملطخة داب في عتبة.
    ملاحظة: حدد فلتر العتبة الأمثل قبل التحميل الذي يقللإس، الجمع، بسبب، الخلفية.، ستينينغ. هذا يمكن أن تعتمد على نوعية تلطيخ وخصوصية الأجسام المضادة. استخدام نفس العتبة لجميع المكررات التقنية داخل كل عينة المريض.
  6. تطبيق الحد الأدنى.
  7. قياس نسبة النسبة المئوية للصورة المحددة.
  8. متوسط ​​نسبة تغطية المنطقة لمناطق متعددة داخل كل عينة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

لهذا التحليل، تم تحديد منطقتين من المصالح داخل استئصال الورم لدينا - الجزء الأكبر السرطانية الورم والمناطق المجاورة، تتألف أساسا من نسيج صحي مع الخلايا السرطانية الغازية منتشر ( الشكل 1A ، 1B ) من قبل علماء الأعصاب المتعاونين على الهيماتوكسيلين والمريض الملون يوزين العينات. داخل كل عينة المريض، تلطيخ إيجابي لالخلايا النجمية ( الشكل 1C )، تم تحديد الدبقية الصغيرة ( الشكل 1D )، و أوليغوديندروسيتس ( الشكل 1E ) عن طريق المناعية الكروماتينية. تم التعرف على هؤلاء السكان باستخدام الأجسام المضادة الأولية ALDH1L1، Iba1، والبروتين أوليغوديندروسيت محددة (OSP1) على التوالي 11 . من المستحسن الاستفادة من التخفيفات الأجسام المضادة، وكذلك التشاور مع بروتوكولات الشركة المصنعة لتأكيد إذا تلطيخ دقيقة وإيجابية ( الشكل 2 ). على سبيل المثال، أجرينا تلطيخ مع أي الأجسام المضادة الأولية للسيطرة السلبية ( الشكل 2A )، أوصت الشركة المصنعة ( الشكل 2B )، ومزيد من التخفيفات ( الشكل 2C ، 2D ) قبل تسوية على التخفيف 1: 200 ( الشكل 2C ) بسبب تلطيخ إيجابي الأمثل للجسم الخلية والعمليات مع تقليل الخلفية للجسم المضاد ALDH1L1 المضادة.

باستخدام إيماجيج، تم قياس كميا تغطية OSP1 + أوليغوديندروسيت تلطيخ في نهاية المطاف مقارنة الاختلافات في مناطقنا من الفائدة ( الشكل 3A ). أزلنا نواة كونتيرستيند من الصورة باستخدام المساعد عتبة اللون من أجل تقييم فقط تلطيخ داب إيجابية ( الشكل 3B ). بعد تحويل الصورة إلى 8 بت (سس = "زفيغ"> الشكل 3C)، ثم طبقنا العتبة الافتراضية ماكسنتروبي إلى تلطيخ داب إيجابية المتبقية ( الشكل 3D ). هنا، استخدمنا عتبة ماكسنتروبي الافتراضي لأن هذه العتبة الافتراضية الخاصة أفضل التقاط لدينا وصمة عار إيجابية مع التقليل من الخلفية، ولكن يمكن استخدام عتبات مختلفة لضمان تحليل السكان من الفائدة. مرة واحدة وقد تم تطبيق العتبة المناسبة للصورة ( الشكل 3E )، والتغطية مئوية من عتبة يمكن قياس ( الشكل 3F ) ومقارنة لعدة مرضى. هنا، نحن كميا 3 - 5 مناطق داخل كل منطقة من الفائدة، اعتمادا على المساحة الإجمالية للمنطقة ذات الفائدة، ومقارنة المجموعات باستخدام يقترن تي الاختبارات مع برنامج غرافباد بريزم. قارنا أيضا لدينا تحليل غم مع تلطيخ المقابلة وجدت في أنسجة المخ صحية في قاعدة بيانات البروتين أطلس ( الشكل 3F ). في منطقتنا السابق، استخدمنا هذا التحليل لعدة مكونات ميكروينفريونمنتال (الخلايا النجمية، الدبقية الصغيرة، أوليغوديندروسيتس، والأوعية الدموية) عبر 33 مريضا لتطوير نموذج المخاطر النسبية للتنبؤ بقاء المريض بشكل عام 11 .

شكل 1
الشكل 1 : مقارنة بين الورم السائبة والأورام المناطق المجاورة من الفائدة للخلايا الدبقية.
أ) عينة ورم كاملة من المريض 63 ملطخة الهيماتوكسيلين ويوزين مع السائبة والمناطق المجاورة المشار إليها. ب) الهيماتوكسيلين ويوزين تلطيخ، C) ALDH1L1 + النجمية، D) iba1 + الدبقية الصغيرة، و E) أوليغوديندروسيت بروتين-1 (OSP1) + أوليغوديندروسيتس. شريط مقياس = 100 ميكرون. 25fig1large.jpg "تارجيت =" _ بلانك "> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2
الشكل 2 : مثال المعايرة من المضادة ALDH1L1 الأجسام المضادة.
a) السيطرة السلبية، b) 1:70 الصانع توصية التخفيف من الأسهم، c) 1: 200 التخفيف من الأسهم، d) 1: 400 التخفيف من الأسهم. تم استخدام 1: 200 التخفيف لالتلطيخ والتحليل بسبب تلطيخ إيجابي الأمثل للجسم الخلية والعمليات مع التقليل من الخلفية. شريط مقياس = 100 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

جبغ "/>
الشكل 3 : تحليل إيماجيج والكمي للتغطية المنطقة ل أوليغوديندروسيتس.
A) OSP1 الأصلي + تلطيخ المريض 52. ب) إزالة نوى الأرجواني باستخدام Threshold_Colour المساعد. ج) تحويل إلى 8bit. D) ماكسنتروبي عتبة القبض و E) تطبيقها لتقليل تلطيخ الخلفية. F) مقارنة المناطق المجاورة والسائبة في خمسة عينات من المرضى، وكذلك أنسجة المخ صحية من خلال أطلس البروتين، لتغطية OSP1 + في المئة. *** p <0.001، **** p <0.0001 عبر اختبارات t المقترنة. شريط مقياس = 100 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

طريقة لدينا المقترحة هنا هو النهج الكمي لتحليل العينات النسيجية الملون باستخدام المناعية التقليدية اللونية. المنهجية الحالية لهذا النوع من التحليل تشمل بروتوكولات تلطيخ مماثلة تليها الدرجات من قبل علماء الأمراض مستقل. وكانت هذه الطريقة موثوق بها، ولكن بالنسبة لعدد من التطبيقات، وهناك حاجة إلى فهم أكثر دقة للمكياج الخلوي، مثل فهم أفضل للتغاير المرتبطة بالأورام والتلخيص الدقيق للأورام للدراسات في المختبر.

هذا البروتوكول يوضح تقنية واضحة لتحليل كميا من السكان من الخلايا الدبقية داخل المكروية ورم في المخ. هذه التقنية قابلة للتكيف على نطاق واسع ويمكن توسيعها لتحديد العديد من المكونات الأخرى للمكروية، مثل الأوعية الدموية، الكيموكينات، وأكثر من ذلك، فضلا عن غيرها من أنواع السرطان، مثل الثدي أو البنكرياس، حيث يمكن استئصال الورمأكبر متني المناطق. وعلاوة على ذلك، يمكن تكييف هذه التقنية للحصول على قياسات أخرى، مثل التهم، ومحيط الخلايا لتقييم شكل الخلية، فضلا عن أكثر تعقيدا التشكل نتائج التشكل، والتجمع، والتوجه، وأكثر من ذلك. هذه التقنيات هي أيضا لا تقتصر على السرطان، في أن هذه المنهجيات تلطيخ وكمي يمكن استخدامها في أي تحليلات الدماغ، كما هو مبين في ممثلنا أطلس البروتين الكمي للأنسجة السليمة، والمقارنة التي نشرت سابقا مع أنسجة المخ الصرع 11 .

الخطوات الحاسمة داخل هذا البروتوكول تشمل الحضانة المناسبة والتنمية الثانوية اللونية. وينبغي الحرص على أن الصبغة الكروموجينية لا تتطور. وهذا سيجعل من الصعب التفريق بين تلطيخ إيجابي والخلفية. يختلف وقت التطوير اعتمادا على كاشف الركيزة المستخدمة وتقارب الأجسام المضادة الأولية. نحن نستخدم حقل مشرقالمجهر لرصد التنمية لضمان تلطيخ الأمثل مع التقليل من تلطيخ الخلفية. بعد تلطيخ، ثريشولدينغ السليم أثناء التحليل يمكن أن تساعد على تمييز الخلفية من تلطيخ إيجابي. والقيود الرئيسية لهذا الأسلوب هو عدم القدرة على وصمة عار مكونات متعددة داخل نفس عينة الأنسجة بسبب استخدام تلطيخ تلوين لوني. ويمكن إجراء تحليل المناعي بطريقة مماثلة، ولكن يتطلب تعديل الأدوات التي نوقشت في هذه الطريقة.

خاصة إلى ورم أرومي غليوبلاستوما، وهناك عدد من علامات والبقع الخلوية التي تم استخدامها لتحليل عينات المريض. وتشمل هذه IDH1 14 ، 15 ، إغفرفيي 16 ، 17 كما علامات النذير، وكذلك CD11b و CD45 للدبقية الصغيرة والضامة 18 ، 19 . أسلوبنا يوسع هذا النوع من التحليلإلى المكروية الخلوية، وهو عنصر غالبا ما يتم تجاهلها من المكروية الورم في ورم أرومي دبقي. وقد نظرت الدراسات في وجود الخلايا الدبقية الصغيرة والكثافة في الأورام 20 ، 21 ، 22 ، فضلا عن مساهمات الخلايا النجمية 9 ، 23 ، 24 . هنا وضعنا بروتوكول فحص كل من الدبقية - الخلايا النجمية، الدبقية الصغيرة، و أوليغوديندروسيتس - في المكروية ورم في الدماغ والتفريق المناطق المجاورة أو الغازية من الورم من السائبة الورم، والذي هو عادة ما يتم تحديد علامات في هذه الأورام. من خلال القيام بذلك، ونحن نعتقد أننا يمكن أن تقييم أكثر دقة حالة المريض لأننا حدد عدم التجانس داخل المريض وأظهرت نشرتنا السابقة أن تحليل هذه المواقع وإدراجها في النماذج الإحصائية أقوى في التنبؤ النتائج من أي موقع ألون أو عينات شاملة 11 . وعلاوة على ذلك، منذ غزو الورم الأروماتي هو منتشر جدا، مما يجعل من الصعب على استئصال تماما 1 ، 2 ، ونحن نعتقد أن الأنسجة في المناطق المجاورة هو أكثر تمثيلا للأنسجة الغازية خلفها بعد استئصال، مما يساهم في تكرار لا مفر منه. ولذلك، فإن فهم أفضل للمناطق المجاورة قد تعطي المزيد من المعلومات حول تكرار المرض وتخطيط العلاج للمريض، على عكس الأنسجة السائبة درس تقليديا التي يتم استئصالها قبل العلاج في المرضى ورم أرومي دبقي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

لا شيء.

Acknowledgments

المؤلفين أشكر درس. فهد بفاكيه وجيم مانديل لاقتناء وتحديد عينات المرضى، غاريت بيغلي للمساعدة في المناعية، ومرفق البحوث البيولوجية والأنسجة، ومركز بحوث القلب والأوعية الدموية الأساسية الأنسجة، ومرفق التحليل الجزيئي البيولوجي في جامعة فيرجينيا للحصول على مساعدة مع اكتساب العينة، المناعية، والتصوير.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Xylene Fisher Chemical X3P
Ethanol
High pH antigen unmasking solution Vector Labs H-3301
TBS
Triton-X Amresco 9002-93-1
Horse serum
Anti-ALDH1L1  abcam  ab56777
Anti-Iba1  abcam  ab5076
Anti-Oligodendrocyte Specific Protein1  abcam  ab53041
ImmPRESS anti-goat Vector Labs MP-7405
ImmPRESS Universal (anti-mouse/rabbit) Vector Labs MP-7500
Hydrogen peroxide Sigma Aldrich 216763
ImmPACT DAB substrate Vector Labs SK-4105
Hematoxylin counterstain ThermoScientific 72404
Histochoice Mounting Media Amresco H157-475
Aperio Scanscope Leica Biosystems
Image Scanscope Leica Biosystems
Super HT PAP Pen Research Products International 195506

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Claes, A., Idema, A. J., Wesseling, P. Diffuse glioma growth: a guerilla war. Acta Neuropathol. 114, (5), 443-458 (2007).
  2. Holland, E. C. Glioblastoma multiforme: the terminator. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97, (12), 6242-6244 (2000).
  3. Wild-Bode, C., Weller, M., Rimner, A., Dichgans, J., Wick, W. Sublethal Irradiation Promotes Migration and Invasiveness of Glioma Cells. Cancer Res. 61, (6), (2001).
  4. Tuettenberg, J., et al. Recurrence pattern in glioblastoma multiforme patients treated with anti-angiogenic chemotherapy. J. Cancer Res. Clin. Oncol. 135, (9), 1239-1244 (2009).
  5. Munson, J. M., et al. Anti-invasive adjuvant therapy with imipramine blue enhances chemotherapeutic efficacy against glioma. Sci. Transl. Med. 4, (127), 127ra36 (2012).
  6. Correia, A. L., Bissell, M. J. The tumor microenvironment is a dominant force in multidrug resistance. Drug Resist. Updat. 15, (1-2), 39-49 (2012).
  7. Rubin, J. B. Only in congenial soil: the microenvironment in brain tumorigenesis. Brain Pathol. 19, (1), 144-149 (2009).
  8. Bettinger, I., Thanos, S., Paulus, W. Microglia promote glioma migration. Acta Neuropathol. 103, (4), 351-355 (2002).
  9. Le, D. M., et al. Exploitation of astrocytes by glioma cells to facilitate invasiveness: a mechanism involving matrix metalloproteinase-2 and the urokinase-type plasminogen activator-plasmin cascade. J. Neurosci. 23, (10), 4034-4043 (2003).
  10. Ye, X., et al. Tumor-associated microglia/macrophages enhance the invasion of glioma stem-like cells via TGF-β1 signaling pathway. J. Immunol. 189, 444-453 (2012).
  11. Yuan, J. X., Bafakih, F. F., Mandell, J. W., Horton, B. J., Munson, J. M. Quantitative Analysis of the Cellular Microenvironment of Glioblastoma to Develop Predictive Statistical Models of Overall Survival. J. Neuropathol. Exp. Neurol. (2016).
  12. Yuan, Y., et al. Quantitative Image Analysis of Cellular Heterogeneity in Breast Tumors Complements Genomic Profiling. Sci. Transl. Med. 4, (157), (2012).
  13. Yi, E. S., et al. Distribution of Obstructive Intimal Lesions and Their Cellular Phenotypes in Chronic Pulmonary Hypertension. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 162, (4), 1577-1586 (2000).
  14. Turcan, S., et al. IDH1 mutation is sufficient to establish the glioma hypermethylator phenotype. Nature. 483, (7390), 479-483 (2012).
  15. Songtao, Q., et al. IDH mutations predict longer survival and response to temozolomide in secondary glioblastoma. Cancer Sci. 103, (2), 269-273 (2012).
  16. Shinojima, N., et al. Prognostic Value of Epidermal Growth Factor Receptor in Patients with Glioblastoma Multiforme. Cancer Res. 63, 6962-6970 (2003).
  17. Karpel-Massler, G., Schmidt, U., Unterberg, A., Halatsch, M. E. Therapeutic inhibition of the epidermal growth factor receptor in high-grade gliomas: where do we stand? Mol. Cancer Res. 7, (7), 1000-1012 (2009).
  18. Badie, B., Schartner, J. Role of microglia in glioma biology. Microsc. Res. Tech. 54, (2), 106-113 (2001).
  19. Watters, J. J., Schartner, J. M., Badie, B. Microglia function in brain tumors. J. Neurosci. Res. 81, (3), 447-455 (2005).
  20. Alves, T. R., et al. Glioblastoma cells: A heterogeneous and fatal tumor interacting with the parenchyma. Life Sci. 89, (15), 532-539 (2011).
  21. Hambardzumyan, D., Gutmann, D. H., Kettenmann, H. The role of microglia and macrophages in glioma maintenance and progression. Nat. Neurosci. 19, (1), 20-27 (2015).
  22. Zhai, H., Heppner, F. L., Tsirka, S. E. Microglia/macrophages promote glioma progression. Glia. 59, (3), 472-485 (2011).
  23. Placone, A. L., Quiñones-Hinojosa, A., Searson, P. C. The role of astrocytes in the progression of brain cancer: complicating the picture of the tumor microenvironment. Tumor Biol. 37, (1), 61-69 (2016).
  24. Rath, B. H., et al. Astrocytes Enhance the Invasion Potential of Glioblastoma Stem-Like Cells. PLoS One. 8, (1), e54752 (2013).
الكيمياء المناعية الكمية للمكروية الخلوية في المرضى ارتجاجات الأرومة الدبقية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Yuan, J. X., Munson, J. M. Quantitative Immunohistochemistry of the Cellular Microenvironment in Patient Glioblastoma Resections. J. Vis. Exp. (125), e56025, doi:10.3791/56025 (2017).More

Yuan, J. X., Munson, J. M. Quantitative Immunohistochemistry of the Cellular Microenvironment in Patient Glioblastoma Resections. J. Vis. Exp. (125), e56025, doi:10.3791/56025 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter