Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Medicine

Kvantitativ immunhistokemi af det cellulære mikromiljø i patientglioblastomresektioner

doi: 10.3791/56025 Published: July 31, 2017

Summary

Denne protokol blev udviklet til kvantitativt at identificere tumor mikro-miljøkomponenter i glioblastom patientresektioner ved anvendelse af kromogen immunhistokemi og ImageJ.

Abstract

Med den voksende interesse for tumor mikromiljøet satte vi op for at udvikle en metode til specifikt at bestemme mikromiljøkomponenterne inden for patientprøver af glioblastom, den dødeligste og mest invasive hjernekræft. Ikke alene er kvantitative metoder til gavn for nøjagtigt at beskrive syge væv, de kan også potentielt bidrage til mere nøjagtig prognose, diagnose og udvikling af vævsmonterede systemer og udskiftninger. I glioblastom er glialceller, såsom microglia og astrocytter, uafhængigt korreleret med dårlig prognose baseret på patologisk klassificering. Tilstanden af ​​disse celler og andre glialcellekomponenter er imidlertid ikke blevet beskrevet godt kvantitativt. Dette kan være svært på grund af de store processer, der markerer disse glialceller. Desuden fokuserer de fleste histologiske analyser på den samlede vævsprøve eller kun inden for størstedelen af ​​tumoren, i modsætning til at afgrænse kvantifikationer baseret på regioner hvideHin det meget heterogene væv. Her beskriver vi en metode til at identificere og kvantitativt analysere populationerne af glialceller inden for tumorvolumen og tilstødende regioner af tumorresektioner fra glioblastompatienter. Vi anvendte kromogen immunhistokemi til at identificere glialcellepopulationerne i patienttumorresektioner og ImageJ for at analysere procentdækning af farvning for hver glialpopulation. Med disse teknikker er vi i stand til bedre at beskrive glialcellerne i regionerne af gliomastomikromiljøet.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Glioblastom (GBM), den mest almindelige og ondartede hjernecancer, er præget af en meget diffus invasion fra den primære tumorbulb i den omgivende sunde hjerneparenchym 1 , 2 . Denne diffuse invasion gør tumoren særligt vanskelig at resektere fuldt ud, og de invaderende kræftceller, der forbliver post-terapi, er den mest almindelige årsag til uundgåelig gentagelse 2 , 3 , 4 . Tidligere fandt vi, at den diffuse gliomcelleinvasion er inhiberet for at være terapeutisk gavnlig 5 , men der er ikke meget kendt om de komplekse mekanismer, som bidrager til GBM-invasionen. Tumormiljømiljøet eller vævet omkring kræften har været impliceret i progressionen af ​​tumorer i flere kræftformer 6 , 7 . Glioblastom tumor mikromiljøet, på sArtikulær, er relativt underkarakteriseret og er entydigt kompleks, sammensætning af flere gliaceller, såsom astrocytter, microglia og oligodendrocytter, såvel som ekstracellulær matrix, opløselige faktorer og biofysiske faktorer. Eksperimentelt har astrocytter og microglia vist sig at øge gliomprogressionen og invasionen 8 , 9 , 10 , men sammensætningen af ​​alle glialceller i den native humane hjerne mikromiljø er ukendt.

Vi tidligere viste mikromiljøkomponenter kan forudse patientoverlevelse ved kvantitativt at analysere cellulære komponenter i glioblastom mikromiljøet og inkorporere vores analyser i en proportional fare model 11 . Her beskriver vi den kvantitative analysemetode til identifikation af populationerne af glialceller i tumorvolumenet og tilstødende regioner af tumorresektioner fra glioblastompasientens. Vi anvendte kromogen immunhistokemi for at identificere glialcellepopulationerne og ImageJ for at analysere procentdækning af farvning for hver glialpopulation. Vurdering af procentdækning skaber en simpel måling til bestemmelse af de morfologiske forskelle i celler, især dem, der påvirkes af interaktioner med kræftceller. Tidligere undersøgelser til kvantificering af histopatologisk farvning anvender standardfarvning, såsom hæmatoxylin og eosin 12 eller Massons trichrom 13 , som ikke udnytter specificiteten af ​​antistofbaseret immunhistokemist farvning. Vores metode blev udviklet til direkte kvantificering af glialpopulationerne inden for glioblastom-patienttumorresektioner, som vi tilstræber at bruge til at belyse det komplekse glioblastom-mikromiljø.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Denne protokol identificerer cellulære komponenter i formalin-fikserede paraffinindlejrede (FFPE) prøver, som det er typisk for bankede kliniske patientprøver. Paraffin indlejring giver mulighed for den bedste vedligeholdelse af cellulær og vævs morfologi samt har bedre levetid af sektioner. De prøver, der blev brugt til denne analyse, blev adgang til via University of Virginia Biorepository og Tissue Research Facility. Patientprøver blev udvalgt af en neuropatolog baseret på en endelig diagnose af glioblastom (astrocytom, WHO grade IV), der havde afsluttet tumorresektioner ved University of Virginia mellem 2010 og 2013 og blev de-identificeret forud for denne analyse 11 .

1. FFPE Prøve Deparaffinisering og Rehydrering

BEMÆRK: Denne del af protokollen er specifik for FFPE-prøver. Mens paraffinindlejrede prøver kan være mere anvendelige til denne analyse på grund af bevarelsen af ​​cellulær og tUdstede morfologi, kan denne analyse også gøres med frosne sektioner. Ved anvendelse af frosne sektioner kan denne del udelades og fortsætte direkte til kromogen immunhistokemi.

  1. Udfør følgende vasker i 5 minutter hver: Xylen, Xylen, 100% Ethanol, 100% Ethanol, 95% Ethanol, 95% Ethanol, 70% Ethanol, Deioniseret vand, Deioniseret vand

2. Antigen hentning

BEMÆRK: Denne del af protokollen er nødvendig for at bryde methylenbroer dannet under formalinfixering af FFPE-prøver og udsætte antigensteder for antistoffer til binding.

  1. Fortynd Tris-baseret høj-pH-antigen-afmaskningsopløsning ved producentens anbefaling i destilleret vand.
  2. Udfør varmemedieret antigenudhentning ved hjælp af en mikrobølgeovn. Andre former for varmemedieret hentning (såsom trykkomfur, vegetabilsk dampkoger eller kogende vand) ville også være tilstrækkelige.
    1. Tilsæt den fortyndede opløsningsmiddelopløsning i en ikke-forseglet mikrobølgeovnbeholder. Placer dias i beholderen. Placer dias i mikrobølgeovn.
    2. Kog i 20 minutter ved høj effekt. Overvåg væskeniveauer til fordampning, og efterfyld med destilleret vand efter behov.
  3. Lad prøverne afkøle i opløsning i 1 time ved stuetemperatur.

3. Kromogen immunhistokemi

  1. Skitsere vævsprøve med en hydrofob pen for at minimere mængden af ​​reagenser, der er nødvendige for at dække prøven.
    BEMÆRK: Sørg for at holde vævsprøverne hydreret og lad dem ikke tørre ud, da dette vil påvirke farvningsevnen.
  2. Pipet nok permeabiliseringsopløsning (Tris-pufret saltvand (TBS) + 0,01% Triton-X) til dækning af vævsprøve (typisk ca. 100-200 μl).
  3. Fjern og kassér opløsning og gentag trin 3.2.
  4. Inkuber prøver ved stuetemperatur med blokeringsopløsning (2,5% hesteserum + permeabiliseringsopløsning).
  5. Inkuber prøver natten over i 4 ºC med primære antistoffer fortyndetI blokerende opløsning.
    BEMÆRK: Alle primære antistoffer, der anvendes her, fortyndes ved 1: 200, men optimale fortyndinger kan bestemmes ved anvendelse af serielle fortyndinger, der starter med producentens anbefaling. Detaljerede oplysninger om antistoffer anvendt i denne protokol blev tidligere offentliggjort 11 .
  6. Registrere primære antistoffer ved anvendelse af et peberrodsperoxidase polymerreagens svarende til det primære antistof værtsdyr, efter producentprotokol.
  7. Pipet nok permeabiliseringsopløsning til dækning af vævsprøve og inkubering i 5 minutter.
  8. Fjern og kassér opløsning og gentag trin 3.7.
  9. Inkuber objektglassene i 0,3% H2O 2 i 1 x TBS i 15 min.
  10. Udvikle prøver med et peroxidase diaminobenzidin (DAB) substrat i 2 - 10 minutter, indtil den ønskede pletintensitet opnås.
  11. Modstå prøver for at identificere cellekerner, såsom med hæmatoxylin, efter producentprotokol.
  12. Dehydrere prøver med 100%Ethanol og xylen.
  13. Monter prøverne permanent med monteringsmedier.

4. Regionsinteressidentifikation

  1. Billedbilleder under brightfieldmikroskopi, der er i stand til billeder i høj opløsning.
    BEMÆRK: Brug billeddannende cellulære komponenter med mindst 20x opløsning.
  2. Flyt kameraet til bestemte områder af interesse gennem vævsprøver.
  3. Gem billeder som TIFF-filer til kvantificering.

5. Billedanalyse

  1. Åbn billeder i ImageJ for kvantificering af procentdækning.
  2. Brug tærskelfarve-plugin'en til at fjerne lilla farve fra hæmatoxylinfarvede kerner.
  3. Konverter billede til 8-bit.
  4. Tilføj tærskel uden mørk baggrund.
  5. Procesbillede ved hjælp af et af de 17 forudindlæste ImageJ-tærskefiltre ( dvs. MaxEntropy), så kun DAB-farvede dele er inkluderet i tærsklen.
    BEMÆRK: Vælg det optimale forudindlæste tærskelfilter, der minimererHerunder inddragelse af baggrundsfarvning. Dette kan afhænge af kvaliteten af ​​farvning og specificitet af antistof. Brug samme tærskel for alle tekniske replikater inden for hver patientprøve.
  6. Anvend tærskelværdi.
  7. Mål procent område af tærsket billede.
  8. Gennemsnitlig areal dækning for flere regioner inden for hver prøve.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Til denne analyse blev to interessegrupper inden for vores tumorresektioner - den primære tumorvolumen og de tilstødende regioner, primært sammensat af sundt væv med diffus invaderende kræftceller ( figur 1A , 1B ) - identificeret af samarbejdende neuropatologer på hæmatoxylin og eosinfarvet patient prøver. Inden for hver patientprøve identificeredes positiv farvning for astrocytter ( figur 1C ), microglia ( figur 1D ) og oligodendrocytter ( figur 1E ) via kromogen immunhistokemi. Disse populationer blev identificeret ved anvendelse af primære antistoffer ALDH1L1, Iba1 og Oligodendrocytspecifik Protein (OSP1) henholdsvis 11 . Optimering af antistof fortyndinger anbefales, samt konsultation med producentprotokoller for at bekræfte, om farvning er nøjagtig og positiv ( Figur 2 ). Eksempelvis udførte vi farvning uden primær antistof til negativ kontrol ( figur 2A ), producentens anbefalede ( figur 2B ) og yderligere fortyndinger ( figur 2C , 2D ) inden aflejring på 1: 200 fortyndingen ( figur 2C ) på grund af Optimal positiv farvning af cellelegemet og processer med minimering af baggrund for anti-ALDH1L1 antistoffet.

Ved anvendelse af ImageJ blev procentdelen af ​​dækning af OSP1 + oligodendrocytfarvning kvantificeret til i sidste ende at sammenligne forskelle i vores interesseområder ( figur 3A ). Vi fjernede de modstridte kerner fra billedet ved hjælp af tærskelfarve-pluginet for udelukkende at vurdere den positive DAB-farvning ( figur 3B ). Efter konvertering af billedet til 8 bit (Ss = "xfig"> Figur 3C), anvendte vi derefter MaxEntropy standardtærsklen til den resterende positive DAB-farvning ( Figur 3D ). Her brugt vi MaxEntropy-tærskelværdien, fordi denne særlige standardtærskel bedst fangede vores positive farve, mens du minimerer baggrunden, men forskellige tærskler kan bruges til at sikre analyse af interessepopulationen. Når den passende tærskel er blevet anvendt på billedet ( Figur 3E ), kan procentdækningen fra tærsklen måles ( figur 3F ) og sammenlignes for flere patienter. Her kvantificerede vi 3 - 5 områder inden for hver region af interesse afhængigt af det samlede område af interesseområdet og sammenlignede grupper ved hjælp af parrede t-test med GraphPad Prism-software. Vi sammenlignede også vores GBM analyser med tilsvarende farvning fundet i sundt hjernevæv i Protein Atlas databasen ( Figur 3F ). I vores Tidligere offentliggørelse anvendte vi denne analyse for flere mikroenvrionmentale komponenter (astrocytter, microglia, oligodendrocytter og blodkar) på tværs af 33 patienter for at udvikle en proportional risikofaktor til forudsigelse af overordnet patientoverlevelse 11 .

figur 1
Figur 1 : Sammenligning af tumorbulk og tumor tilstødende interesseområder for glialceller.
A) Hele tumorprøve fra patient 63 farvet med hæmatoxylin og eosin med bulk og tilstødende regioner angivet. B) Hematoxylin og eosinfarvning, C) ALDH1L1 + astrocytter, D) Iba1 + microglia og E) Oligodendrocyt-specifik Protein-1 (OSP1) + oligodendrocytter. Målestang = 100 μm. 25fig1large.jpg "target =" _ blank "> Venligst klik her for at se en større version af denne figur.

Figur 2
Figur 2 : Eksempel Titrering af Anti-ALDH1L1 Antistof.
A) Negativ kontrol, B) 1:70 producent anbefaling fortynding fra lager, C) 1: 200 fortynding fra lager, og D) 1: 400 fortynding fra lager. 1: 200 fortynding blev brugt til farvning og analyse på grund af optimal positiv farvning af cellelegeme og processer med minimalisering af baggrunden. Målestang = 100 μm. Klik her for at se en større version af denne figur.

Jpg "/>
Figur 3 : ImageJ-analyse og kvantificering af arealdækning for oligodendrocytter.
A) Original OSP1 + farvning af patient 52. B) Fjernelse af lilla kerner ved hjælp af Threshold_Colour plugin. C) Konvertering til 8 bit. D) MaxEntropy-tærskelfanget og E) anvendt for at minimere baggrundsfarvning. F) Sammenligning af tilstødende og bulkregioner i fem patientprøver samt sund hjernevæv gennem Protein Atlas, til OSP1 + procent dækning. *** p <0,001, **** p <0,0001 via parrede t-test. Målestang = 100 μm. Klik her for at se en større version af denne figur.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Vores metode foreslået her er en kvantitativ tilgang til analyse af histologiske prøver farvet ved anvendelse af traditionel kromogen immunhistokemi. Nuværende metode til denne type analyse indeholder lignende farvningsprotokoller efterfulgt af gradering af uafhængige patologer. Denne metode har været pålidelig, men for en række anvendelser kræves en mere præcis forståelse af cellulær sminke, såsom bedre forståelse af heterogeniteten forbundet med tumorer og nøjagtig rekapitulation af tumorer til in vitro-undersøgelser.

Denne protokol demonstrerer en retfærdig teknik til kvantitativt at analysere populationerne af glialceller inden for hjerne tumor mikroemiljøet. Denne teknik er bredt tilpasselig og kan udvides til at identificere mange andre komponenter i mikromiljøet, såsom blodkar, kemokiner og mere samt andre kræftformer, såsom bryst eller pankreas, hvor tumorresektionerne kan haveStørre parenkymregioner. Desuden kan denne teknik tilpasses til at erhverve andre målinger, såsom tæller og perimeter af celler for at vurdere celleformen, samt mere komplekse morfologiske resultater isotropi, klyngning, orientering og mere. Disse teknikker er heller ikke begrænset til kræft, idet disse farvnings- og kvantificeringsmetoder kan anvendes til enhver hjerneanalyse, som det fremgår af vores repræsentative Protein Atlas-kvantificering af sundt væv, og vores tidligere offentliggjorte sammenligning med epileptisk hjernevæv 11 .

Kritiske trin inden for denne protokol indbefatter korrekt inkubation og udvikling af det kromogene sekundære. Pas på, at det kromogene farvestof ikke overudvikler. Dette vil gøre det vanskeligt at skelne mellem positiv farvning og baggrund. Udviklingstiden varierer afhængigt af anvendte substratreagens og affiniteten af ​​det primære antistof. Vi bruger lyse feltMikroskopi til overvågning af udvikling for at sikre optimal farvning under minimalisering af baggrundsfarvning. Efter farvning kan korrekt tærskel under analysen hjælpe med at differentiere baggrunden fra positiv farvning. En væsentlig begrænsning for denne metode er manglende evne til at plette flere komponenter inden for samme vævsprøve på grund af brugen af ​​kromogen farvningsudvikling. Immunofluorescensanalyse kunne udføres på en lignende måde, men kræver ændring af de redskaber, der er diskuteret ved denne metode.

Specifikt for glioblastom er der en række markører og cellulære pletter, der er blevet brugt til at analysere patientprøver. Disse indbefatter IDH1 14 , 15 , EGFRvIII 16 , 17 som prognostiske markører, såvel som CD11b og CD45 for microglia og makrofager 18 , 19 . Vores metode udvider denne type analyseTil den cellulære mikromiljø, en ofte overset komponent af tumormikromiljøet i glioblastom. Undersøgelser har kigget på microglia-tilstedeværelse og densitet i tumorer 20 , 21 , 22 samt bidrag fra astrocytter 9 , 23 , 24 . Her udviklede vi en protokol, der undersøgte alle glia-astrocytterne, microglia og oligodendrocytterne - i hjernetumor-mikromiljøet og differentiere de tilstødende eller invasive regioner i tumoren fra tumorvolumenet, hvilket er, hvor markører normalt identificeres i disse tumorer. Ved at gøre dette mener vi, at vi mere præcist kan vurdere patientsituationen, fordi vi fastslår intra-patient heterogenitet, og vores tidligere publikation viste, at analyse af disse placeringer og inddragelse i statistiske modeller er stærkere for at forudsige resultater end enten sted aloNe eller samlede prøver 11 . Da glioblastom-invasionen er så diffus, hvilket gør det vanskeligt at genoprette fuldstændigt 1 , 2 , mener vi, at vævet i de tilstødende regioner er mere repræsentativt for det invasive væv, der efterlades efter resektion, hvilket bidrager til uundgåelig gentagelse. Derfor kan bedre forståelse af de tilstødende regioner give mere information om sygdomsgenoptagelse og patientbehandlingsplanlægning i modsætning til det traditionelt studerede bulkvæv, der resekteres forud for terapi hos patienter med glioblastom.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen.

Acknowledgments

Forfatterne takker dr. Fahad Bafakih og Jim Mandell til erhvervelse og identifikation af patientprøver, Garrett F. Beeghly til bistand med immunhistokemi og Biorepository and Tissue Research Facility, Histology Core for Cardiovascular Research Center og Biomolecular Analysis Facility ved University of Virginia for at få hjælp til Prøveopkøb, immunhistokemi og billeddannelse.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Xylene Fisher Chemical X3P
Ethanol
High pH antigen unmasking solution Vector Labs H-3301
TBS
Triton-X Amresco 9002-93-1
Horse serum
Anti-ALDH1L1  abcam  ab56777
Anti-Iba1  abcam  ab5076
Anti-Oligodendrocyte Specific Protein1  abcam  ab53041
ImmPRESS anti-goat Vector Labs MP-7405
ImmPRESS Universal (anti-mouse/rabbit) Vector Labs MP-7500
Hydrogen peroxide Sigma Aldrich 216763
ImmPACT DAB substrate Vector Labs SK-4105
Hematoxylin counterstain ThermoScientific 72404
Histochoice Mounting Media Amresco H157-475
Aperio Scanscope Leica Biosystems
Image Scanscope Leica Biosystems
Super HT PAP Pen Research Products International 195506

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Claes, A., Idema, A. J., Wesseling, P. Diffuse glioma growth: a guerilla war. Acta Neuropathol. 114, (5), 443-458 (2007).
  2. Holland, E. C. Glioblastoma multiforme: the terminator. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97, (12), 6242-6244 (2000).
  3. Wild-Bode, C., Weller, M., Rimner, A., Dichgans, J., Wick, W. Sublethal Irradiation Promotes Migration and Invasiveness of Glioma Cells. Cancer Res. 61, (6), (2001).
  4. Tuettenberg, J., et al. Recurrence pattern in glioblastoma multiforme patients treated with anti-angiogenic chemotherapy. J. Cancer Res. Clin. Oncol. 135, (9), 1239-1244 (2009).
  5. Munson, J. M., et al. Anti-invasive adjuvant therapy with imipramine blue enhances chemotherapeutic efficacy against glioma. Sci. Transl. Med. 4, (127), 127ra36 (2012).
  6. Correia, A. L., Bissell, M. J. The tumor microenvironment is a dominant force in multidrug resistance. Drug Resist. Updat. 15, (1-2), 39-49 (2012).
  7. Rubin, J. B. Only in congenial soil: the microenvironment in brain tumorigenesis. Brain Pathol. 19, (1), 144-149 (2009).
  8. Bettinger, I., Thanos, S., Paulus, W. Microglia promote glioma migration. Acta Neuropathol. 103, (4), 351-355 (2002).
  9. Le, D. M., et al. Exploitation of astrocytes by glioma cells to facilitate invasiveness: a mechanism involving matrix metalloproteinase-2 and the urokinase-type plasminogen activator-plasmin cascade. J. Neurosci. 23, (10), 4034-4043 (2003).
  10. Ye, X., et al. Tumor-associated microglia/macrophages enhance the invasion of glioma stem-like cells via TGF-β1 signaling pathway. J. Immunol. 189, 444-453 (2012).
  11. Yuan, J. X., Bafakih, F. F., Mandell, J. W., Horton, B. J., Munson, J. M. Quantitative Analysis of the Cellular Microenvironment of Glioblastoma to Develop Predictive Statistical Models of Overall Survival. J. Neuropathol. Exp. Neurol. (2016).
  12. Yuan, Y., et al. Quantitative Image Analysis of Cellular Heterogeneity in Breast Tumors Complements Genomic Profiling. Sci. Transl. Med. 4, (157), (2012).
  13. Yi, E. S., et al. Distribution of Obstructive Intimal Lesions and Their Cellular Phenotypes in Chronic Pulmonary Hypertension. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 162, (4), 1577-1586 (2000).
  14. Turcan, S., et al. IDH1 mutation is sufficient to establish the glioma hypermethylator phenotype. Nature. 483, (7390), 479-483 (2012).
  15. Songtao, Q., et al. IDH mutations predict longer survival and response to temozolomide in secondary glioblastoma. Cancer Sci. 103, (2), 269-273 (2012).
  16. Shinojima, N., et al. Prognostic Value of Epidermal Growth Factor Receptor in Patients with Glioblastoma Multiforme. Cancer Res. 63, 6962-6970 (2003).
  17. Karpel-Massler, G., Schmidt, U., Unterberg, A., Halatsch, M. E. Therapeutic inhibition of the epidermal growth factor receptor in high-grade gliomas: where do we stand? Mol. Cancer Res. 7, (7), 1000-1012 (2009).
  18. Badie, B., Schartner, J. Role of microglia in glioma biology. Microsc. Res. Tech. 54, (2), 106-113 (2001).
  19. Watters, J. J., Schartner, J. M., Badie, B. Microglia function in brain tumors. J. Neurosci. Res. 81, (3), 447-455 (2005).
  20. Alves, T. R., et al. Glioblastoma cells: A heterogeneous and fatal tumor interacting with the parenchyma. Life Sci. 89, (15), 532-539 (2011).
  21. Hambardzumyan, D., Gutmann, D. H., Kettenmann, H. The role of microglia and macrophages in glioma maintenance and progression. Nat. Neurosci. 19, (1), 20-27 (2015).
  22. Zhai, H., Heppner, F. L., Tsirka, S. E. Microglia/macrophages promote glioma progression. Glia. 59, (3), 472-485 (2011).
  23. Placone, A. L., Quiñones-Hinojosa, A., Searson, P. C. The role of astrocytes in the progression of brain cancer: complicating the picture of the tumor microenvironment. Tumor Biol. 37, (1), 61-69 (2016).
  24. Rath, B. H., et al. Astrocytes Enhance the Invasion Potential of Glioblastoma Stem-Like Cells. PLoS One. 8, (1), e54752 (2013).
Kvantitativ immunhistokemi af det cellulære mikromiljø i patientglioblastomresektioner
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Yuan, J. X., Munson, J. M. Quantitative Immunohistochemistry of the Cellular Microenvironment in Patient Glioblastoma Resections. J. Vis. Exp. (125), e56025, doi:10.3791/56025 (2017).More

Yuan, J. X., Munson, J. M. Quantitative Immunohistochemistry of the Cellular Microenvironment in Patient Glioblastoma Resections. J. Vis. Exp. (125), e56025, doi:10.3791/56025 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter