Summary
असामान्य संवेदी समारोह आंत में दर्द और कार्यात्मक और भड़काऊ आंत्र रोगों के अन्य लक्षणों में निहित है । एक पूर्व vivo चूहा colorectum तैयारी में बृहदांत्र afferent नसों की electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए एक प्रोटोकॉल यहां प्रस्तुत किया है ।
Abstract
बृहदांत्र संवेदी नसों की शिथिलता कार्यात्मक और भड़काऊ आंत्र रोग और मधुमेह सहित कई आम स्थितियों, के pathophysiology में फंसाया गया है । यहां, हम चूहों में बृहदांत्र afferents के electrophysiological गुणों के इन विट्रो में लक्षण वर्णन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन । colorectum, बरकरार श्रोणि नाड़ीग्रंथि (स्नातकोत्तर) संलग्न के साथ, चूहे से हटा दिया जाता है; रिकॉर्डिंग चैंबर में carbogenated Krebs समाधान के साथ superfused; और मौखिक और गुदा में cannulated को तनाव के लिए अनुमति समाप्त होता है । एक ठीक तंत्रिका बंडल स्नातकोत्तर से निर्गत की पहचान की है, और multiunit afferent तंत्रिका गतिविधि एक चूषण इलेक्ट्रोड का उपयोग कर दर्ज की गई है । multiunit निर्वहन में कालोनी खंड के तनाव में वृद्धि हुई है । एक प्रमुख घटक विश्लेषण कम दहलीज, उच्च दहलीज, और व्यापक गतिशील रेंज afferent फाइबर अंतर करने के लिए आयोजित किया जाता है । बृहदांत्र afferents की रासायनिक संवेदनशीलता परीक्षण यौगिकों के स्नान या intraluminal प्रशासन के माध्यम से अध्ययन किया जा सकता है । इस प्रोटोकॉल इस तरह के चूहों और गिनी सूअरों के रूप में अन्य प्रजातियों, के लिए आवेदन के लिए संशोधित किया जा सकता है, और सामान्य में घटते बृहदांत्र के thoracolumbar/hypogastric और lumbosacral/श्रोणि afferents के electrophysiological गुणों में अंतर का अध्ययन करने के लिए और रोग की स्थिति ।
Introduction
जठरांत्र संबंधी मार्ग (GIT) बाह्य afferent नसों के साथ बड़े पैमाने पर innervated है कि पेट से केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के लिए संवेदी संकेत देते है और है कि आंत मस्तिष्क संपर्क करने के लिए योगदान । इन बाह्य afferents की बदल उत्तेजित, साथ ही afferent आदानों के बदल केंद्रीय प्रसंस्करण, आंत में दर्द और कार्यात्मक और भड़काऊ आंत्र रोगों सहित1, सैनिक शर्तों के अन्य लक्षणों पर निर्भर करता है । colorectum से संवेदी जानकारी मुख्य रूप से thoracolumbar/hypogastric और lumbosacral/श्रोणि नसों (PN)2के माध्यम से अवगत करा दिया है । कुतर रोग मॉडलों में इन प्राथमिक afferent तंतुओं के electrophysiological गुणों का अध्ययन करने में रुचि बढ़ी है । हालांकि, विवो में electrophysiological में कालोनी afferents की रिकॉर्डिंग एक तकनीकी चुनौती है और काफी शल्य चिकित्सा कौशल की आवश्यकता है । इसके अलावा, hemodynamic परिवर्तन, ऊतक आंदोलन, और निश्चेतक भी vivo मेंउत्तेजनाओं का परीक्षण करने के लिए तंत्रिका गतिविधि और संवेदनशीलता को प्रभावित कर सकते हैं । इसलिए, हाल के वर्षों में, अध्ययन की बढ़ती संख्या इन विट्रो (पूर्व vivo) विभिंन प्रजातियों के चूहों, चूहों, गिनी सूअरों, और मनुष्यों सहित की तैयारी में कार्यरत है, में संवेदी transduction के तंत्र की जांच करने के लिए बृहदांत्र afferents और रोग की स्थिति में बदल उत्तेजित । 3 , 4 , 5 , ६ , 7 , 8
पूर्व vivo बृहदांत्र तैयारी के दो प्रकार के मुख्य रूप से रिपोर्ट किया गया है: "फ्लैट-पत्र" तैयारी5,9,10 और "ट्यूब" तैयारी3,4। "समतल-पत्रक" murine colorectum तैयारी के लिए एक वीडियो प्रोटोकॉल पहले11प्रकाशित किया गया है । इस प्रोटोकॉल में, माउस colorectum, PN के साथ) या काठ का splanchnic नसों (LSN) संलग्न, काटा जाता है और एक ऊतक चैंबर में superfused । colorectum खुला longitudinally कटौती है, और तंत्रिका बंडल एक रिकॉर्डिंग आयल तेल से भरा डिब्बे में विस्तारित है । तंत्रिका गतिविधि एक monopolar प्लेटिनम-इरिडियम इलेक्ट्रोड का उपयोग कर दर्ज की गई है । प्रोटोकॉल निष्पक्ष बिजली उत्तेजना का उपयोग करके व्यक्तिगत afferent फाइबर के ग्रहणशील क्षेत्रों की पहचान के लिए अनुमति देता है । यह रासायनिक उत्तेजनाओं के आवेदन के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अलग यांत्रिक उत्तेजना मानदंड (जैसे, फोकल श्लैष्मिक जांच और circumferential खिंचाव) के आवेदन, afferent तंत्रिका अंत करने के लिए स्थानीयकृत । क्योंकि तंत्रिका ऊतक चैंबर से एक अलग चैंबर के लिए बढ़ाया जाना चाहिए, यह संलग्न तंत्रिका अपेक्षाकृत लंबे समय रखने के लिए महत्वपूर्ण है; नसों के सफल विच्छेदन इस पद्धति के लिए नए उन लोगों के लिए एक चुनौती बन गया है । हाल ही में, Nullens एट अल के लिए एक वीडियो प्रोटोकॉल प्रकाशित इन विट्रो murine jejunal और कालोनी खंडों12में mesenteric afferents की रिकॉर्डिंग । इस "ट्यूब" तैयारी में, संलग्न अन्त्रपेशी के साथ आंत खंड बरकरार रखा है, इस प्रकार वर्गीकृत तनाव के लिए अनुमति और अंतर और अतिरिक्त-विभिंन रसायनों के चमकदार प्रशासन । चूंकि अन्त्रपेशी तंत्रिका एक चूषण इलेक्ट्रोड, जो ऊतक के करीब तैनात किया जा सकता का उपयोग कर दर्ज की गई है, afferent गतिविधि भले ही अन्त्रपेशी तंत्रिका अपेक्षाकृत कम है दर्ज किया जा सकता है । हालांकि, अन्त्रपेशी तंत्रिका मिश्रित आबादी के होते हैं वागल और रीढ़ की हड्डी afferent फाइबर कि आना jejunum या thoracolumbar hypogastric. Lumbosacral श्रोणि afferents आना को colorectum, जिससे इस प्रोटोकाल में भेदभाव नहीं किया जा सकता । यहां, हम एक बरकरार स्नातकोत्तर के साथ "ट्यूब" colorectum तैयारी का उपयोग चूहे colon afferents की electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । इस विधि काठ का splanchnic (hypogastric) और lumbosacral श्रोणि afferents के कार्यात्मक गुणों के लक्षण वर्णन के लिए अनुमति दे सकता है ।
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Protocol
- की 5 L तैयार Krebs हल: ११३ मिमी NaCl, ५.९ मिमी KCl, १.२ मिमी णः 2 पो 4 , १.२ मिमी MgSO 4 , 25 मिमी NaHCO 3 , १.२ मिमी CaCl 2 , और ११.५ mM ग्लूकोज । एक ९५% ओ 2 + 5% कं 2 गैस मिश्रण के साथ समाधान संतृप्त । प्री-कूल ~ ५०० एमएल के फ्रिज में oxygenated Krebs.
- स्टॉक टेस्ट यौगिकों (इथेनॉल में 1 मिमी capsaicin और खारा में 10 मिमी 5-hydroxytryptamine (5-एचटी)) की जरूरत के रूप में aliquots तैयार करते हैं । Krebs में शेयर (स्नान आवेदन के लिए) पतला और खारा में (intraluminal प्रशासन के लिए) अंतिम एकाग्रता के लिए बस का उपयोग करने से पहले ।
- एक पारंपरिक इलेक्ट्रोड खींचने का उपयोग भीतरी रेशा (१.५ मिमी बाहरी व्यास) के बिना मानक कांच ट्यूबों से रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड खींचो. गर्मी के लिए खींचने सेटिंग्स को समायोजित करें और खींच इलेक्ट्रोड की पिंडली 20 और 25 मिमी के बीच है कि इतना खींचो.
- Anaesthetize चूहा गहरा सोडियम pentobarbital का उपयोग (८० मिलीग्राम/kg, आईएफसआई) । & #160;
- बाँझ सुनिश्चित करने, एक स्केलपेल का उपयोग कर पेट की दीवार पर एक midline चीरा प्रदर्शन करके उदर गुहा बेनकाब. colorectum को बेनकाब करने के लिए अन्त्रपेशी और अन्य ऊतकों को एक तरफ खींचो ।
- पशु को विदारक माइक्रोस्कोप के नीचे रखें । सावधान विच्छेदन के माध्यम से, बाएँ स्नातकोत्तर की स्थिति जानें और PN और LSN में शामिल होने की पहचान. इन नसों को पीजी से कुछ मिलीमीटर दूर काटें ।
नोट: पीजी कोलोरेक्टल जंक्शन के करीब स्थित है । सामान्यतया, 3-4 PN से lumbosacral स्पाइनल कॉर्ड और पीजी करने के लिए एक LSN प्रोजेक्ट (< सुदृढ वर्ग = "xfig" > चित्रा 1 ). - मलाशय को बेनकाब करने के लिए symphysis हड्डी में कटौती । colorectum के ऊपर के ऊतकों ( अर्थात, मूत्राशय, आदि ) को हटा दें; पीजी को यथावत छोड़ने पर बरतें सावधानी ।
- pentobarbital की ओवरडोज की नसों में इंजेक्शन द्वारा चूहे की बलि । Transect पीजी के ऊपर 3 सेमी के बारे में बृहदांत्र और संदंश. का उपयोग कर पशु से colorectum को दूर
- colorectum को प्री-कूल्ड Krebs सॉल्यूशन से भरे पेट्री डिश में ट्रांसफर कर दीजिये । धीरे बृहदांत्र फ्लश द्वारा मल निकालें । शेष मूत्राशय और अंय ऊतकों को ध्यान से निकालें, स्नातकोत्तर समझौता किए बिना
- एक रिकॉर्डिंग चैंबर (20 एमएल) में बृहदांत्र जगह और ऊतक carbogenated Krebs समाधान के साथ लगातार perfuse । 15 मिलीलीटर/ पर छिड़काव दर निर्धारित करें
- Cannulate मौखिक और गुदा पर colorectum समाप्त होता है । गुदा दिशा के लिए मौखिक में 10 मिलीलीटर की दर से खारा के साथ बृहदांत्र के intraluminal अर्क शुरू करो ।
- विदारक माइक्रोस्कोप के अंतर्गत प्रमुख स्नातकोत्तर का पता लगाएँ. कीट पिन का उपयोग करने के लिए नाड़ीग्रंथि बेनकाब । सावधान विच्छेदन के साथ, नाड़ीग्रंथि से उत्पन्न तंत्रिका की एक ठीक शाखा मिल और बृहदांत्र की ओर चल रहा है (< मजबूत वर्ग = "xfig" > चित्रा 1 ). नाड़ीग्रंथि के करीब नर्व को काट लें ।
नोट: < सशक्त वर्ग = "xfig" > चित्रा 1 एक तंत्रिका शाखा से बाहर स्नातकोत्तर के लिए एक रिकॉर्डिंग दिखाता है । तंत्रिका संभवतः श्रोणि और काठ का एक मिश्रण splanchnic afferent फाइबर शामिल हैं । वैकल्पिक रूप से, एक रिकॉर्डिंग PN और/या LSN समीपस्थ से स्नातकोत्तर करने के लिए बनाया जा सकता है । - ताप स्नान पर बारी और गर्म चैंबर तापमान रखने के लिए Krebs समाधान पर ३४ & #177; ०.५ & #176; ग.
- एक पूर्व खींच लिया गिलास पिपेट (चरण 2) ले लो और यह विदारक माइक्रोस्कोप के तहत निरीक्षण. संदंश की एक जोड़ी के साथ इलेक्ट्रोड के टिप तोड़ इतना है कि यह तंत्रिका के व्यास के साथ संगत आकार का है दर्ज किया जाना है ।
- को एक हल्का सा भड़कने के कारण उसे पास रखकर नोक बेवल कर देता है.
- इलेक्ट्रोड धारक के लिए बेवल्ड इलेक्ट्रोड कनेक्ट करें । इलेक्ट्रोड के लिए नकारात्मक या सकारात्मक दबाव लागू करने के लिए धारक पर पक्ष बंदरगाह के लिए एक 10 मिलीलीटर सिरिंज कनेक्ट करें.
- धारक के headstage को जोड़ने के लिए और एक जोड़ तोड़ पर headstage माउंट ।
- ऊतक स्नान के लिए इलेक्ट्रोड ले जाएँ और यह धारक के चांदी के तार संपर्क जब तक कोमल चूषण लागू करने के द्वारा Krebs समाधान के साथ इलेक्ट्रोड को भरने. इलेक्ट्रोड टिप तंत्रिका के कट अंत करने के लिए बंद रखें और नकारात्मक दबाव इलेक्ट्रोड में तंत्रिका चूसना करने के लिए लागू होते हैं. अधिक नकारात्मक दबाव लागू करें ताकि तंत्रिका के ~ 1 मिमी इलेक्ट्रोड में खींच लिया है और एक तंग सील रूपों.
- एम्पलीफायर पर बारी और ३००-३,००० हर्ट्ज के लिए फिल्टर सेट. आस्टसीलस्कप पर सिग्नल की निगरानी और तंत्रिका संकेत रिकॉर्ड (20-kHz नमूना दर) और intraluminal दबाव संकेत (१००-हर्ट्ज नमूना दर) एक कील डेटा प्रोसेसिंग के साथ एक कंप्यूटर का उपयोग software.
- के आउटलेट प्रवेशनी पर तीन तरह से नल को बंद करने से बृहदांत्र के रैंप पर गुमान लागू करते हुए लगातार intraluminally मना । मॉनिटर intraluminal दबाव जब तक यह ६० mmHg तक पहुंचता है, जिस पर समय तीन नाली प्रवेशनी पर रास्ता नल खुला ।
- 15 मिनट के नियमित अंतराल पर इस कार्यविधि को दोहराएँ. दवाओं के अतिरिक्त लागू करें-या intraluminally afferent नसों की रासायनिक संवेदनशीलता का परीक्षण करने के लिए.
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Representative Results
चित्रा 1 पूर्व vivo "ट्यूब" colorectum तैयारी के लिए प्रयोगात्मक सेटअप के योजनाबद्ध चित्रण है, एक प्रतिनिधि के साथ एक पीजी के लिए बाहर तंत्रिका से रिकॉर्डिंग. तंत्रिका संभवतः श्रोणि और काठ का एक मिश्रण splanchnic afferents निहित । सामान्य चूहों से तैयारियों में, कालोनी afferent नसों में आम तौर पर अनियमित सहज गतिविधि का स्तर कम होता है । इस बृहदांत्र के रैंप पर तनाव गोलीबारी दर (आंकड़ा 1b) में एक क्रमिक वृद्धि लाती है । प्रत्येक तंत्रिका के mechanosensory संपत्ति intraluminal दबाव-afferent तंत्रिका प्रतिक्रिया वक्र (चित्रा 1C) की साजिश रचने के द्वारा प्रतिनिधित्व किया है । औसत दबाव-प्रतिक्रिया घटता समूहों के बीच की तुलना में किया जा सकता है (यानी, नियंत्रण बनाम इलाज) पता चलता है कि क्या एक उपचार बृहदांत्र afferent नसों के mechanosensory संपत्ति बदल (रॉंग एट अल देखें । 13 दबाव-afferent प्रतिक्रिया वक्र पर विवरण के लिए) ।
वैकल्पिक रूप से, रिकॉर्डिंग PN या LSN समीपस्थ से स्नातकोत्तर करने के लिए बनाया जा सकता है । चित्रा 2 एक PN बंडल से एक प्रतिनिधि रिकॉर्डिंग है जो गुणात्मक रूप से स्नातकोत्तर के लिए बाहर के बंडल के समान है कि एक mechanosensory प्रतिक्रिया का प्रदर्शन, चित्रा में दिखाया गया है 1b. प्रमुख घटक तंत्रिका संकेत के विश्लेषण एकल इकाई गतिविधि की पहचान के लिए अनुमति देता है । भेदभाव एकल इकाइयों के रूप में वर्गीकृत कर रहे है कम दहलीज (एलटी) फाइबर, वाइड-गतिशील रेंज (WDR) फाइबर, और उच्च दहलीज (एचटी) फाइबर, तनाव को प्रतिक्रियाओं की प्रोफाइल के अनुसार । एलटी इकाइयां कम तनाव के दबाव में सक्रिय होती हैं, और गोलीबारी की दर लगभग 20 mmHg में अधिकतम पहुंच जाती है । WDR इकाइयां भी कम तनाव के दबाव में सक्रिय हो जाती हैं, और गोलीबारी दर intraluminal दबाव बढ़ जाती है (चित्र 2a और C) के रूप में बढ़ जाती है । एचटी यूनिट्स एक टेंशन प्रेशर & #62 पर सक्रिय हैं; 20 mmHg (दांग एट अल देखें.) 4.
बृहदांत्र afferents की रासायनिक संवेदनशीलता superfusion (स्नान आवेदन) या intraluminal अर्क द्वारा परीक्षण किया जा सकता है । उदाहरण के लिए, 10 µ एम 5 के स्नान आवेदन-एचटी एक मामूली वृद्धि हुई है, जबकि ०.३ µ मीटर में capsaicin श्रोणि afferent निर्वहन कि कमी (चित्रा 3) के कारण गतिविधि की अवधि के बाद किया गया में मजबूत वृद्धि पैदा की ।
चित्र 1. Electrophysiological विट्रो मेंचूहे बृहदांत्र Afferent नसों की रिकॉर्डिंग । ए पूर्व vivo "ट्यूब" चूहे के बृहदांत्र तैयारी के एक योजनाबद्ध चित्रण । colorectum, संलग्न स्नातकोत्तर के साथ, रिकॉर्डिंग चैंबर में superfused है और दोनों सिरों पर cannulated है । Intraluminal अर्क एक सिरिंज पंप का उपयोग कर हासिल की है और गुदा दिशा के लिए मौखिक में चलता है । बृहदांत्र के तनाव आउटलेट प्रवेशनी पर तीन तरह से नल (घ) बंद करने से प्रभावित है । स्नातकोत्तर से एक ठीक तंत्रिका शाखा में कटौती और एक चूषण इलेक्ट्रोड का उपयोग कर दर्ज की है । पीजी में शामिल होने वाले PN के LSN और तीन शाखाओं की एक शाखा भी दिखाई गई है । a. एक ठीक बृहदांत्र के लिए पेश तंत्रिका के समीपस्थ कट अंत । ख. इलेक्ट्रोड में चूसा तंत्रिका के बाहर कट अंत । c. दो ठीक मूत्राशय को पेश नसों के कट अंत । LSN: काष्ठ splanchnic नसों, PN: श्रोणि नसों । ख. बृहदांत्र afferent तंत्रिका संकेत और intraluminal दबाव के प्रतिनिधि निशान । C. इस तंत्रिका के दबाव की प्रतिक्रिया वक्र की एक साजिश । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 2. प्रतिनिधि Electrophysiological पूर्व Vivo Colorectum के रैंप पर तनाव के दौरान श्रोणि तंत्रिकाओं की एक शाखा से रिकॉर्डिंग । A. दो सिंगल यूनिट्स (WDR और एलटी यूनिट्स) का रिस्पांस पैटर्न, साथ में रैंप के दौरान multiunit mechanosensory प्रतिक्रिया । ख. तंत्रिका बंडल के एक योजनाबद्ध चित्रण दर्ज की जा रही है । LSN: काष्ठ splanchnic नसों, PN: श्रोणि नसों । दो एकल इकाइयों की सी. आरोपित तरंग । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 3. प्रतिनिधि Electrophysiological 5 के स्नान आवेदन के दौरान श्रोणि तंत्रिकाओं की एक शाखा से रिकॉर्डिंग-एचटी और Capsaicin । बाएं) 10 µ एम 5 के आवेदन-एचटी. (दाएँ) आवेदन के ०.३ µ m capsaicin. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल एक अपेक्षाकृत सरल प्रायोगिक पद्धति है जिससे चूहों की कालोनी afferents के electrophysiological गुणों का आकलन किया जा सके. प्रोटोकॉल (ऊतक विच्छेदन से तंत्रिका रिकॉर्डिंग स्थापित करने के लिए) आमतौर पर के बारे में 2 एच पूरा करने के लिए लेता है । ऊतक संग्रह (चरण 3) और चूषण इलेक्ट्रोड की तैयारी (चरण 5) महत्वपूर्ण कदम हैं. यह स्नातकोत्तर, LSN, और PN का पता लगाने और ऊतक विच्छेदन के दौरान नाड़ीग्रंथि और नसों को नुकसान नहीं करने के लिए ध्यान रखना करने के लिए सक्षम होने के लिए महत्वपूर्ण है । कांच पिपेट की नोक और टूट जाना चाहिए एक तंत्रिका बंडल के साथ संगत आकार के लिए बेवल ।
तैयारी आमतौर पर कई घंटे के लिए व्यवहार्य है, mechanosensitivity, chemosensitivity, और कोलोरेक्टल afferent नसों के औषधीय प्रोफाइल के अध्ययन के लिए अनुमति देता है । "फ्लैट-शीट" तैयारी11, जिसमें यांत्रिक उत्तेजना श्लैष्मिक पथपाकर या circumferential खींच के माध्यम से लागू किया जाता है के साथ तुलना में, इस "ट्यूब" तैयारी रैंप के लिए अनुमति देता है या एक आवेदन के समान तरीके में वर्गीकृत वितनाव anesthetized या पशुओं को आंत में दर्द का आकलन करने में कोलोरेक्टल गुमान (CRD) । एक समान प्रोटोकॉल का उपयोग कर, व्यान एट अल । 3 mechanosensory transduction के चूहे बृहदांत्र afferents के लिए purinergic रिसेप्टर्स के योगदान का अध्ययन किया और पाया कि बृहदांत्र afferents एटीपी (P2X और P2Y एगोनिस्ट) और α, β-meATP (P2X एगोनिस्ट) के स्नान आवेदन द्वारा सक्रिय किया गया और वह नजरबंद-प्रेरित श्रोणि afferent निर्वहन P2 रिसेप्टर विरोधी द्वारा तनु थी । हाल ही में, हम सामांय और streptozotocin (STZ)-प्रेरित मधुमेह चूहों के बीच बृहदांत्र afferents के mechanosensory प्रतिक्रियाओं की तुलना में । हम multiunit afferent तंत्रिका प्रतिक्रियाओं में एक महत्वपूर्ण कमी पाया मधुमेह चूहों में पूर्व vivo बृहदांत्र के रैंप पर तनाव (3-6 सप्ताह के बाद STZ इंजेक्शन) नियंत्रण चूहों की तुलना में. कालोनी afferents में मनाया mechanosensory प्रतिक्रिया इन विट्रो में एक तनु visceromotor प्रतिक्रिया (VMR) के लिए vivo में CRD मधुमेह समूह के अनुरूप था । एकल इकाई विश्लेषण संकेत दिया है कि बिगड़ा mechanosensitivity एलटी और WDR फाइबर के मधुमेह बृहदांत्र में afferent hyposensitivity आबाद हो सकता है4. इसी तरह के प्रोटोकॉल का उपयोग करके, हम भी सफलतापूर्वक murine बृहदांत्र afferents से दर्ज की गई और DSS-प्रेरित आईबीडी चूहों (अप्रकाशित टिप्पणियों) में काफी वृद्धि हुई बृहदांत्र afferent उत्तेजक का पता चला ।
colorectum thoracolumbar/hypogastric और lumbosacral/श्रोणि afferent फाइबर1,2द्वारा innervated है । यह प्राथमिक afferents के इन दो सेट उनके कार्यात्मक गुणों में काफी अलग हो सकता है कि उभर रहे हैं और बृहदांत्र उत्तेजनाओं के विभिन्न गुणों का संकेत हो सकता है14,15,16,17 . वर्तमान प्रोटोकॉल का एक महत्वपूर्ण लाभ यह तुलनात्मक रूप से colorectum के hypogastric और श्रोणि afferents का अध्ययन करने की क्षमता है । के रूप में चित्रा 1में सचित्र, एक काठ का splanchnic (hypogastric) तंत्रिका और PN की 3-4 शाखाओं प्रमुख स्नातकोत्तर और फिर अवरोही बृहदांत्र और मूत्राशय के लिए परियोजना के माध्यम से पारित । हमने कहा कि PN बंडल के mechanosensory प्रतिक्रिया गुणात्मक कि स्नातकोत्तर, जो संभवतः मिश्रित काठ का splanchnic और श्रोणि afferents निहित करने के लिए बाहर तंत्रिका के समान था । तकनीकी रूप से, यह उच्च स्नातकोत्तर के पास दो सक्शन इलेक्ट्रोड जगह के लिए एक साथ LSN और PN रिकॉर्ड करने के लिए और अगर वे अलग यांत्रिक और रासायनिक उत्तेजना के लिए जवाब का आकलन करने के लिए संभव है.
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Disclosures
लेखक हितों के टकराव की घोषणा नहीं की ।
Acknowledgments
इस प्रोटोकॉल को राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन ऑफ चाइना (#31171066, #81270464) और चीन-जर्मन विज्ञान केंद्र (GZ919) से अनुसंधान अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sodium Pentobarbital | Shanghai Westang Bio-Tech | B558 | |
| Capsaicin | Sigma | M2028 | |
| Electrode puller | MicroData Instrument Inc | PMP107 | |
| Neurolog System (Bioamplifier) | Digitimer, Ltd | Neurolog System | |
| A/D converter | Cambridge Electronic Design | Micro1401 | |
| Data processing software | Cambridge Electronic Design | Spike2 version 6 | |
| Silver wire | World Precision Instruments | EP12 | |
| Glass tubes | World Precision Instruments | 1B150-4 | |
| Electrode holder | World Precision Instruments | MEH3SBW | |
| Heating bath | Grant | GR150 | |
| Dissecting microscope | Leica | Zoom2000 | |
| Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIII-BS | |
| Cigarette lighter | any | NA | |
| Surgical tools | World Precision Instruments | NA | |
| Insect pins | home-made from 0.1 mm stainless steel wire | NA | |
| Three way manipulator | World Precision Instruments | KITF-R | |
| Rats | Any | NA | Any strain/sex can be used. |
References
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