Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

الحفاظ على بعوض الزاعجة المصرية "البعوض مصابة" ولبخيه

Published: August 14, 2017 doi: 10.3791/56124
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1
1School of BioSciences, Bio21 Institute and University of Melbourne

Summary

هي أن يطلق سراحه البعوض بعوض الزاعجة المصرية المصابين ولبخيه إلى السكان الطبيعية لمنع انتقال سيتناقش. يصف لنا أساليب لخلفي عبد اللطيف-مصرية مع التهابات ولبخيه في المختبر للتجارب والإفراج عن الميدان، مع أخذ الاحتياطات اللازمة للتقليل من التكيف مع المختبر واختيار.

Abstract

ويجري استخدام البعوض بعوض الزاعجة المصرية المصابة تجريبيا مع ولبخيه في برامج السيطرة على انتشار سيتناقش مثل حمى الضنك وداء شيكونغونيا وزكى. ولبخيه-يمكن إطلاق البعوض في الحقل أما تقليل أحجام السكان عن طريق ماتينجس غير متوافقة أو تحويل السكان مع البعوض التي صهر لانتقال الفيروس. لهذه الاستراتيجيات أن تنجح، يجب أن يكون البعوض التي تطلق في الميدان من المختبر تنافسية مع البعوض الأصلي. ومع ذلك، يمكن أن يؤدي الحفاظ على البعوض في المختبر في الاستيلاد والانجراف الجينية ومختبر التكيف التي يمكن أن تقلل من لياقتهم البدنية في الميدان، وقد يتيه نتائج التجارب. لاختبار مدى ملاءمة مختلف الإصابات ولبخيه للنشر في الميدان، من الضروري الحفاظ على البعوض في بيئة مختبرية تحت التحكم عبر أجيال متعددة. يمكننا وصف بروتوكول بسيط للحفاظ على البعوض Ae-مصرية في المختبر، ومناسبة لكلا ولبخيه-البعوض المصاب والبرية من نوع. الأساليب تقليل التكيف المختبر وتنفيذ التهجين إلى زيادة أهمية التجارب في ميدان البعوض. بالإضافة إلى ذلك، يتم الاحتفاظ بالمستعمرات تحت الظروف المثلى لتعظيم لياقتهم للإطلاقات فتح الحقل.

Introduction

البعوض بعوض الزاعجة المصرية المسؤولة عن تحيل بعض سيتناقش الأكثر أهمية في العالم، بما في ذلك حمى الضنك، Zika وشيكونغونيا1. وأصبحت هذه الفيروسات تهديدا متزايداً للصحة العالمية بتوزيع واسع النطاق عبد اللطيف. الزاعجة المصرية في المناطق المدارية وتواصل توسيع2،،من34. أنثى الزاعجة المصرية عبد اللطيف. تفضيلي تتغذى على الدم البشري5 وهكذا تميل إلى العيش بالقرب من البشر، وبخاصة في المناطق الحضرية حيث السكان أكثر كثافة. من خلال هذا الارتباط الوثيق مع البشر أنها تكيفت أيضا تولد في الموائل الاصطناعية، بما في ذلك إطارات السيارات والأواني ومزاريب وخزانات المياه6،7. عبد اللطيف-مصرية أيضا سهولة التكيف مع بيئات المختبرات حيث أنها يمكن الحفاظ عليه دون أي متطلبات خاصة بعد يجري جمعها مباشرة من الميدان، وعلى عكس بعض الأنواع الأخرى في جنس بعوض 8، 9،10. سهولة الصيانة شهد لهم درس على نطاق واسع في المختبر في طائفة واسعة من المجالات، وتهدف في نهاية المطاف إلى السيطرة على البعوض الأمراض قد يحيل.

تقليديا، أربوفيرال التحكم تعتمد اعتماداً كبيرا على استخدام المبيدات الحشرية للحد من السكان البعوض. مع ذلك، هناك اهتمام متزايد في النهج حيث البعوض المعدل يتم تربيتها في المختبر وثم أطلق سراحه في السكان الطبيعية. البعوض المفرج عنهم قد معدلة وراثيا11،12،13، بيولوجيا14،15، عن طريق تشعيع16،17،العلاج الكيميائي18، أو بالجمع بين تقنيات19 قمع سكان البعوض أو استبدالها بالبعوض التي المقاوم للحرارة إلى انتقال أربوفيرال20.

ولبخيه هي البكتيريا التي تستخدم حاليا كعامل مكافحة البيولوجية سيتناقش. وأدخلت مؤخرا عدة سلالات ولبخيه في Ae. مصرية تجريبيا باستخدام microinjection الجنينية21،22،،من2324. هذه السلالات تقلل من قدرة سيتناقش نشر وتكرار في البعوضة، تتضاءل انتقال المحتملة23،25،،من2627،28 . ولبخيه العدوى تنتقل من الأم إلى ذرية، إلا أن بعض سلالات حمل العقم عند الذكور المصابين تتزاوج مع الإناث غير مصاب22. ولبخيه-ولذلك يمكن إطلاق الذكور المصابة بكميات كبيرة لقمع السكان البعوض الطبيعية، أظهرت مؤخرا في15،الأنواع الأخرى من بعوضة 29. بيد منذ ولبخيه تمنع أيضا انتقال أربوفيرال في Ae. مصرية، يمكن أيضا إصدار البعوض لاستبدال السكان الأصليين بناقلات الأكثر فقراً. عبد اللطيف-مصرية مصابة تجريبيا ولبخيه تصدر الآن في الميدان في العديد من البلدان باستخدام هذا النهج الأخير14،،من3031.

ولبخيه-استناداً إلى النهج للتحكم أربوفيرال تعتمد على فهم سليم للتفاعلات بين ولبخيهوالبعوض والبيئة. ولبخيه تحدث طبيعيا في طائفة واسعة من الحشرات، والسلالات أدخلت البعوض المتنوعة في تلك الآثار32. كما يتم عرض أنواع العدوى ولبخيه جديدة في Ae. مصرية24، من الضروري أن تميز كل سلالة لآثارها على اللياقة البدنية البعوض والاستنساخ والتدخل أربوفيرال ضمن مجموعة من الشروط. ولذلك مطلوب التجريب الدقيق في المختبر لتقييم إمكانات سلالات ولبخيه لتحقيق النجاح في هذا المجال.

يمكن أن تتطلب فتح الحقل إطلاقات عبد اللطيف-مصرية مع التهابات ولبخيه غالباً ما تربى الآلاف إلى عشرات آلاف البعوض كل منطقة الإفراج عن أن يكون كل أسبوع14،،من3031. ويمكن تحسين نجاح الإصدارات الأولية عن طريق الإفراج عن البعوض حجم كبير إلى أقصى حد ممكن على خصوبتها33 و34،نجاح التزاوج35. كما ينبغي أن يكون البعوض تتكيف مع الظروف أنهم سوف الخبرة في هذا المجال، تربية المختبر الطويلة الأجل ولكن قد يسبب تغييرات في السلوك، وعلم وظائف الأعضاء التي يمكن أن تؤثر في مجال أداء36،37، 38.

يمكننا وصف بروتوكول بسيط لتربية عبد اللطيف-مصرية في المختبر باستخدام المعدات الأساسية. هذا البروتوكول مناسبة لكل نوع البرية و ولبخيه-إصابة البعوض، هذه الأخيرة التي يمكن أن تتطلب اهتماما خاصا ببعض سلالات ولبخيه آثاراً كبيرة على البعوض تاريخ حياة الصفات39، 40-شروط تربية تجنب الاكتظاظ والتنافس على الغذاء لإنتاج البعوض بحجم متسقة، وهي حاسمة بالنسبة لناقلات اختصاص وتجارب اللياقة البدنية، ويضمن أن البعوض يتمتعون بصحة جيدة للإفراج عن الحقل41 . ونحن أيضا اتخاذ الاحتياطات اللازمة للتقليل من التكيف مختبر والاستيلاد بتقليل الضغوط انتقائية والتأكد من أن الجيل القادم هو أخذ عينات من تجمع كبير وعشوائي. ومع ذلك، مختبر البيئات تختلف اختلافاً واضحا من الأوضاع الميدانية، والصيانة على المدى الطويل في ظروف مريحة يمكن أن تقلل من اللياقة البدنية للبعوض عند الإفراج عنهم إلى الحقل37،42،43 . ولذلك نعبر الإناث من خطوط المختبر إلى ميدان جمع الذكور بصورة دورية، الناتج في المستعمرات التي تشبه وراثيا للمقارنات التجريبية والتي يتم تطويعها وفقا ل السكان الحقل الهدف39. الأساليب لا تتطلب أي معدات متخصصة ويمكن زيادتها إلى الخلفي عشرات الآلاف من الأفراد أسبوعيا للإطلاقات الحقل. البروتوكول أيضا أولويات اللياقة بدنية البعوض داخل وعبر الأجيال، واعتبار هام للحشرات المتجهة إلى إنشاء في السكان طبيعية. البروتوكول مناسبة لمعظم المختبرات التي تتطلب الحفاظ على عبد اللطيف-مصرية، خاصة بالنسبة للمقارنات التجريبية الهامة فيها نوعية متسقة للبعوض و relatability إلى الميدان.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

تغذية الدم للبعوض على البشر وأقر جامعة "ملبورن لجنة الأخلاقيات البشرية" (الموافقة على رقم: 0723847). وأبلغ جميع المتطوعين تقديم موافقة خطية.

1. تربية اليرقات

ملاحظة: تجري البعوض في 26 ± 0.5 درجة مئوية و 50-70% رطوبة نسبية، مع 12:12 ح (الضوء: الظلام) كبيرة لهذا البروتوكول صيانة مستعمرة. هذه الشروط مماثلة لمتوسط الظروف المناخية في كيرنز، أستراليا وضمن النطاق الحراري الأمثل لبقاء عبد اللطيف. مصرية والتنمية44،،من4546. ارتفاع درجات الحرارة يمكن أن يؤدي إلى فقدان ولبخيه العدوى من البعوض المستعمرات وينبغي تجنبها47. ونحن الحفاظ على الأفراد 500 على الأقل كل السكان للتقليل من الاستيلاد؛ الحفاظ على مستعمرات حجم أصغر يمكن أن عواقب اللياقة البدنية [روس وآخرون غير منشورة]. تحت هذه الظروف والتغذية الكافية بافتراض، هو الوقت جيل متوسط 28 يوما (انظر الجدول 1).

  1. غمر البيض على الركازة في الصواني (الشكل 1A) التي تحتوي على 3 لتر ماء (مياه التناضح العكسي أو مياه الحنفية سنة، ولدت بترك ماء الصنبور في علب ل 24 ساعة قبل الاستخدام)، ~ 300 ملغ من الأسماك الغذاء (واحدة سحقت الكمبيوتر اللوحي، انظر الجدول للمواد)، عدد قليل من الحبوب من الخميرة الجافة النشطة للحث على الفقس48.
  2. يوم واحد بعد الفقس، استخدام ماصة زجاجية لنقل ما يقرب من 500 اليرقات إلى علب تحتوي على 4 لتر الماء (الشكل 1B)، عد استخدام عداد الفرس. إضافة الأغذية السمكية سحقت قرصين لكل علبة. إذا لزم الأمر، استخدام حاويات ذات أحجام مختلفة لتربية اليرقات (الشكل 1A)، ولكن الحفاظ على كثافة اليرقات أسفل 0.5 مليلتر اليرقات لتجنب الازدحام.
  3. تحقق في علب يوميا لضمان حصول اليرقات على الغذاء الكافي؛ إضافة حوالي قرصين الغذاء إلى الصواني كل يومين. توفير الغذاء إعلانية libitum ولكن ضمان أن يتسق 0.5 يتوفر مغ/يرقة يوميا خلال هذه الفترة لضمان التنمية المتزامنة، وهيئة المساحة، وخلاف ذلك قد خلطت بين نتائج التجارب (انظر نتائج الممثل).
  4. الحرص على تجنب الإتخام اليرقات، لا سيما في حاويات تربية أصغر مع الماء أقل مساحة وحجم. إذا كان الماء تبدو غائمة أو إذا لم يكن هناك وفيات اليرقات كبيرة، استبدله بالمياه العذبة؛ ينبغي أن يكون معدل الوفيات لا يعتد بها إذا كان يتم تغذية اليرقات على النحو الأمثل.

2-الكبار ظهور

ملاحظة: سوف تبدأ اليرقات في بوبات من خمسة أيام بعد الفقس إذا تغذية جيدة وينبغي بوبات الأغلبية بسبعة أيام بعد الفقس. الكبار ستبدأ الخارجة حوالي يومين بعد بوبيشن إذا حافظت على النحو الأمثل في 26 درجة مئوية (انظر نتائج الممثل). التنمية اليرقات تتأثر عادة بالتهابات ولبخيه عندما يتوفر الغذاء الكافي23،،من3949.

  1. سبعة أيام بعد الفقس صب محتويات العلبة بالكامل من خلال شبكة غرامة (حجم المسام 0.4 مم). الحفاظ على المياه اليرقات التي تمت تصفيتها لاستخدامها لاحقاً في أوفيكوبس (انظر قسم "الدم تغذية وأوفيبوسيشن"). عكس الشبكة وتراجع ذلك في وعاء من بلاستيك مع 200 مل الماء لنقل الخوادر. تقديم أغذية إضافية إذا بقيت أي اليرقات.
  2. إعداد الأقفاص ظهور الكبار (الشكل 1) عن طريق توفير كوبين من محلول السكروز 10% (الشكل 1F) وكوبين من القطن والصوف رطبة لمنع جفاف (الشكل 1E).
  3. إذا لا تحتاج الخوادر فرزها حسب الجنس، مكان الحاويات غطاء الخوادر في القفص غسيلك واترك الغطاء قليلاً للسماح للكبار في الظهور في القفص. بدلاً من ذلك، ضع قمع مقلوب فوق الحاوية للتقليل من الغرق. ضمان جميع البالغين قد ظهرت قبل إزالة الحاوية من القفص لمنع تحديد ضد مطوري بطيئة.

3-الخوادر Sexing التهجين

  1. إذا الخوادر حاجة إلى فرز حسب الجنس (مثلاً، التهجين)، "الماصة؛" الخوادر من الصواني اليرقات وفصل الجنسين (الشكل 2) في حاويات بلاستيكية (الشكل 1A) مع 200 مل الماء كل 24 ساعة حتى العدد المطلوب من كل جنس تم التوصل إلى ذلك. وضع أغطية على الحاويات وتركها مغلقة.
  2. ستظهر الكبار في الحاويات؛ تأكيد الجنس قبل الإفراج في أقفاص (الشكل 2). قم بإزالة أي الكبار مسحه بشكل غير صحيح مع المضخة خلال 24 ساعة ظهور قبل أن تصل إلى مرحلة النضج الجنسي. مرة واحدة وقد تأكدت الجنسين، الإفراج عن الكبار في أقفاص كل 24 ساعة.
  3. للحصول على ولبخيه-التهجين المستعمرات المصابة من خلفية وراثية مماثلة لسكان طبيعية، عن طريق إضافة ولبخيه-إصابة الإناث من المستعمرات مختبر لاقفاص الذكور المعافين المستمدة من البيض جمعتها أوفيترابس في حقل39، الحفاظ على الكثافة المقررة للأفراد 500 كل السكان.
    1. كرر التهجين لعلى الأقل ثلاثة أجيال متعاقبة لإنتاج المستعمرات التي هي على الأقل 87.5% مماثل جينياً ل السكان الميدانية39. الحرجة: التأكد من صحة الجنسين في هذه المرحلة (راجع الخطوة 3.1).
  4. أنثى الزاعجة المصرية عبد اللطيف. يتم عادة الصهر للتلقيح أخرى في غضون ساعة من التزاوج50. عند التهجين المستعمرات، السماح للإناث والذكور الناضجة في أقفاص منفصلة لمدة يومين وثم نضح الإناث في قفص الذكور لتوفير فرصة متساوية لجميع الذكور.

4-الدم تغذية وأوفيبوسيشن

  1. الانتظار لمدة ثلاثة أيام على الأقل بعد ذكر الماضي برز قبل الدم تغذية للسماح بوقت كاف لتنضج. الدم آر الإناث خلال أسبوعين ظهور لمنع الوفيات المفرطة، خاصة بالنسبة للبعوض مع التهابات ولبخيه التي تؤثر سلبا على طول العمر22،،من2449. إزالة أكواب السكر في اليوم السابق للتغذية لتحسين معدلات التغذية.
    1. أطلب متطوعا لإدراج تلك الساعد في القفص للسماح للبعوض الإناث لتغذية. معظم الإناث ينبغي تغذية للإحلال في 5 دقائق، ولكن لتقليل التحديد ضد مغذيات بطيئة، اترك الساعد في قفص لمدة 15 دقيقة، أو حتى شكل واضح محتقن جميع الإناث؛ قفاز مطاط لحماية اليد من لدغ اختياري ولكن يوصي.
    2. يومين بعد تغذية الدم، ضع كوبين البلاستيكية التي تحتوي على الماء تربية اليرقات واصطف مع شريط من ورق زجاج (الشكل 1) (أو ورق الترشيح (الشكل 1 ح)) في قفص للإناث وضع البيض. جزئيا تغرق في قطاع الصنفرة في الماء للحفاظ على رطوبة. إزالة مصادر أخرى للمياه للحيلولة دون حصول الإناث تضع بيضها خارج كأس أوفيبوسيتيون.
      ملاحظة: يمكن استخدام مياه الحنفية في الكؤوس، ولكن المياه تربية اليرقات تشجع أوفيبوسيشن51،52 والإناث سوف تضع بيضها أكثر شكل متزامن.

5-البيض جمع والتكييف

  1. سوف تضع الإناث البيض على الصنفرة فقط فوق خط المياه؛ جمع واستبدالها الشرائط من ورق زجاج يوميا حتى تزرع لا المزيد من البيض. لاحظ أن أوفيبوسيشن قد يستمر لمدة تصل إلى أسبوع واحد.
  2. شرائط الصنفرة الجافة جزئيا من النشاف لهم بلطف في منشفة ورقية لمدة 30 ثانية، مع الحرص على عدم إزاحة البيض. ثم لف الشرائط في ورقة منشفة ورقية جافة ووضعها في كيس من بلاستيك يمكن إغلاقها بشرط (1I الشكل).
  3. تحقق من حالة البيض تحت مجهر تشريح (الشكل 3). إذا كانت شرائط الصنفرة هي رطبة جداً، قد يفقس البيض قبل يجري المغمورة بالمياه (الشكل 3B)، ولكن إذا جفت جداً قسوة، البيض قد ينهار (الشكل 3).
  4. يمكن أن تكون دبرت البيض في أي وقت بعد جمع ما بعد ثلاثة أيام؛ يفقس كل البيض من كل مستعمرة، جمعت عبر جميع الأيام، في نفس الحاوية للمياه التأكد من أن الجيل القادم هو أخذ عينات من مجموعة كبيرة وعشوائية من الأفراد.
  5. للتخزين على المدى الطويل، يبقى البيض في حاوية محكمة الإغلاق في رطوبة عالية (> 80 ٪) في حوالي 20 درجة مئوية. في ظل هذه الظروف، يمكن تخزين البيض دون ولبخيه لعدة أشهر مع الحفاظ على معدلات عالية هاتش53،54.
  6. كما أن بعض الإصابات ولبخيه يقلل كثيرا من صلاحية البيض مع49،سن55، يفقس البيض من ولبخيه-المصابين خطوط في غضون أسبوع واحد من جمع لمنع الوفيات المفرطة لذات الصلة سلالات. الدم آر الإناث مرة أخرى بعد أسبوع واحد إذا كان هناك حاجة إلى المزيد من البيض.
اليوم الخطوة
0 يفقس البيض
1 عدد اليرقات في علب
7 نقل اليرقات والخوادر إلى أقفاص مستعمرة
17 الدم آر الإناث البالغات
21 البدء في جمع البيض
25 الانتهاء من جمع البيض
28 يفقس البيض

الجدول 1: نظرة عامة على جدول الصيانة مستعمرة Ae-مصرية في 26 درجة مئوية. توقيت الدم-تغذية الإناث وتفقيس بيض يتسم بالمرونة، ولكن ينبغي تجنب فترات طويلة في هذه المراحل، خاصة بالنسبة للبعوض مصابة ولبخيه، بغية الحد من معدل الوفيات. بعد هذا الجدول الزمني تصغير التحديد ضد البعوض التي سريعة أو بطيئة تطوير أو النضج في جميع مراحل الحياة، شريطة أن يتم تغذية اليرقات على النحو الأمثل.

Figure 1
الشكل 1: المعدات المستخدمة لتربية عبد اللطيف-مصرية في المختبر. (أ) الحاويات البلاستيكية المستخدمة لتفقيس بيض أو تربية اليرقات بكميات من 500، 750 و 5000 مل (من اليسار إلى اليمين). (ب) الصواني المستخدمة لتربية اليرقات في كثافة التي تسيطر عليها، عادة 500 اليرقات في 4 لتر مياه. (ج) 19.7 L والأقفاص (د) ل 3 المستخدمة للسكن الكبار. بكثافة للبالغين 25 أو أقل للتر الواحد ينبغي الإبقاء على توفير مساحة كافية. (ﻫ) 35 مل كأس مع القطن والصوف رطبة المقدمة كمصدر للمياه للبالغين. (و) كأس 35 مل مع محلول السكروز المقدمة عن طريق الحبل أو الفتيل الأسنان كمصدر للسكر. (حمنغ–) أكواب مملوءة بالماء تربية اليرقات واصطف مع الركيزة أوفيبوسيشن ورق زجاج أو ورق الترشيح (G H، على التوالي). (أنا) الرمز البريدي قفل الحقيبة المستخدمة لتخزين شرائط ورق زجاج أو ورق الترشيح. البقع السوداء على الصنفرة بيض البعوض. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
الشكل 2: الجانبي (A) والظهريه (ب) آراء الخوادر والكبار عبد اللطيف-مصرية (ج) مما يدل على مظهري الجنسي. يتم وضع الذكور على اليسار والإناث على اليمين في كل فريق. عندما تتغذى على النحو الأمثل، الخوادر للذكور والإناث وتتميز بالحجم؛ الإناث أكبر من الذكور (A) وأرجلها منتفخة نسبيا مقارنة بالذكور التي قد تملق الجانبين (ب). الذكور البالغين يتم تمييزها بسهولة من الإناث في ظل جميع الظروف تربية، أساسا بهوائيات بلوموسي وبالبس طويلة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 3
الشكل 3. يوم الأربع القديمة Ae. مصرية البيض تحت ظروف مختلفة. البيض سليمة (A) على شرائط الصنفرة الحفاظ رطوبة عالية (> 80 ٪) لكن دون أي رطوبة مرئية. ينبغي أن تكون معدلات هاتش أعلاه 90% للبرية من نوع الزاعجة المصرية عبد اللطيف. وإذا استمر بشكل صحيح. (ب) البيض الذي يفقس قبل يجري المغمورة بالمياه (الفقس المبكر) تتميز بسقف فصل البيض ويرقان مرئية. وهذا يشير إلى أن قطاع الصنفرة أبقى رطبة جداً. البيض (ج) التي يتم تجفيفها أيضا قسوة قد تنهار، وهي واضحة للعيان بمظهرهم مقعرة. إذا أصبح الصنفرة قاسية هذا يشير أيضا إلى أن البيض قد تكون جافة جداً. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

يوضح الشكل 4 آثار التغذية الأمثل على تنمية يرقات Ae. مصرية . عندما يتم توفير حاويات مع 0.25 مغ أغذية كل يرقة يوميا أو أقل، يزيد الوقت التنمية لكل من الذكور والإناث، وهو تقدم متزامن أقل مما في حاويات مع 0.5 ملغ غذاء. إذا لم يتم توفير الغذاء الكافي طوال مدة التنمية اليرقات، هذا يمكن أن يكون له أثر سلبي على جدول الصيانة. بطيئة--وضع الأفراد المعرضين ليجري تحديدها ضد وتغذية الدم قد يتأخر، وهناك خطر أعلى من معدلات وفيات البالغين قبل حدوث الإنجاب.

ويبين الشكل 5 طول الجناح (تقديراً لحجم الجسم) الكبار عبد اللطيف-مصرية تربى تحت مجموعة متنوعة من نظم التغذية. تقليص أطوال الجناح لكل من الذكور والإناث وتصبح أكثر من متغير عند التغذية دون المستوى الأمثل. أحجام هيئة موحدة هامة للمقارنات التجريبية حسب حجم الجسم يرتبط إيجابيا بخصوبتها، والبعوض كبيرة يتوقع أن يحمل أكبر اللياقة البدنية تحت حقل الظروف33،،من3435 .

آثار العدوى ولبخيه على الصفات المذكورة أعلاه موصوفة في دراسات أخرى ولكن عموما هناك القليل للا تأثير23،،من3949.

Figure 4
الرقم 4: نسبة التراكمي للإناث Ae.aegypti (A) و (ب) الذكور النامية إلى مرحلة البلوغ تحت الأنظمة الغذائية المختلفة في 26 درجة مئوية. كانت تربى اليرقات 100 في حاويات المياه 500 مل (كثافة يرقات اليرقات 0.2 كل مل)، قدمت مع مستويات مختلفة من الأغذية (انظر الجدول للمواد) وسجل لوقتهم في التنمية. وأدرجت فقط اليرقات التي نجت إلى سن البلوغ. أشرطة الخطأ أخطاء قياسية، مع n = 4 replicates كل معاملة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 5
الشكل 5: طول الجناح من الإناث Ae.aegypti (A) و (ب) الذكور النامية في إطار النظم الغذائية المختلفة في 26 درجة مئوية. اليرقات 100 كانت تربى في حاويات مياه 500 مل (كثافة يرقات يرقات 0.2 كل مل) وقدمت مع مستويات مختلفة من المواد الغذائية. ثم تم قياس مجموعة فرعية بالغين لطول الجناح باستخدام الأساليب المذكورة سابقا56. أشرطة الخطأ هي الانحرافات المعيارية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

يتبع البروتوكول المعروضة هنا لصيانة ولبخيه-ينبغي أن تكفل المصابة Ae. مصرية أن البعوض صحية نوعية متسقة يتم إنتاجها للتجارب وفتح مجال النشرات. خلافا للبروتوكولات الأخرى التي تعطي الأولوية لإنتاج كميات أسلحة من البعوض (انظر المرجع57)، الأساليب التي تركز على تحقيق الحد الأقصى من لياقتهم البدنية، سواء داخل الأجيال بتنفيذ شروط تربية استرخاء، وعبر الأجيال بالتقليل من التكيف الاستيلاد والتحديد والمختبرات. هذا البروتوكول أيضا مصممة خصيصا عبد اللطيف-مصرية مع التهابات ولبخيه لكن ينبغي أن تكون مناسبة لأي نوع من Ae. مصرية. ومع ذلك، أنها ليست مناسبة لتربية كميات أسلحة (حسب ترتيب الملايين أسبوعيا)، التي يمكن أن تكون ضرورية للإطلاقات الحشرات العقيمة أو غير المتوافقة التي تتطلب أعدادا كبيرة بلوغ السكان قمع57،58.

وهناك بعض الخطوات الهامة التي يجب اتباعها بدقة. من المهم أن تغذية اليرقات على النحو الأمثل، وتجنب الاكتظاظ خلال مدة تنميتها. هذا يضمن أن البعوض وضع شكل متزامن وحجم ثابت. وينبغي أيضا إيلاء عناية خاصة عند تكييف البيض؛ ويمكن بسهولة جداً هاتش اليرقات قريبا جداً أو يمكن ديسيككاتي البيض إذا ركائز أوفيبوسيشن جداً الرطب أو الجاف، على التوالي. في جميع خطوات في البروتوكول، نوصي مما يتيح ما يكفي من الوقت للعديد من الأفراد في المستعمرة قدر الإمكان لإتمام كل مرحلة. اختيار ضد الأفراد التي بطيئة في تطوير، وناضجة، والدم آر، أوفيبوسيت أو هاتش سوف يؤدي إلى فقدان التنوع الوراثي.

ونلاحظ بعض اعتبارات إضافية للصيانة ولبخيه-إصابة البعوض لا الموصوفة في هذا البروتوكول. فمن الممكن للعدوى ولبخيه تفقد من المستعمرات المختبر، وذلك، نوصي بأن المستعمرات سترصد بشكل روتيني لوضعهم العدوى ولبخيه . ونحن نستخدم الكمية بوليميريز سلسلة من ردود الفعل (qPCR)49،59 لاختبار مالا يقل عن 30 شخصا من كل ولبخيه-إصابة خط كل جيل. إذا كان أي من الأفراد اختبار سلبية بالنسبة للإصابة ولبخيه المناسبة، يمكن تنقية المستعمرات بعزل الإناث أكبر عدد ممكن من مستعمرة المتأثرة ومن ثم استخدام ذرية من الأمهات المصابات بالفيروس فقط، للعثور على الجيل القادم. سبب فقدان بعض سلالات ولبخيه من مختبر المستعمرات غير معروف إلى حد كبير، ولكن يمكن تفسير ذلك بعدم مراقبة درجة الحرارة وارتفاع درجات الحرارة يمكن أن يسبب فقدان ولبخيه التهابات47، 60.

المستعمرات والتجارب قد أيضا تصبح ملوثة بالأفراد من خطوط مختلفة إذا لم تتخذ الرعاية عند تربية. يمكن أن يؤدي التلوث من بيبيتينج مهمل من اليرقات، خلط دفعات بيض، وبكتيريا أقفاص أو بشكل غير صحيح sexing الخوادر في تقاطع. ولذلك ينبغي إيلاء عناية خاصة عند التعامل مع المستعمرات مع مختلف أنواع العدوى ولبخيه . دقة تنظيف تنظيف الممصات قبل التعامل مع كل علبة جديدة من اليرقات أي كوب أوفيبوسيشن، تربية الصواني والأقفاص قبل إعادة استخدام لهم، وتنظيف مش كل الوقت عند نقل اليرقات والخوادر للحاويات الأخرى. وعلاوة على ذلك، تفقد الأصابع للبيض عند التعامل مع الصنفرة شرائط واستخدام المناشف الورقية الطازجة عند تجفيف كل قطاع، وضمان أن الكبار هم الجنس الصحيح قبل إطلاق سراحهم في أقفاص، والتعامل مع أي من الهاربين بسرعة. أخذ هذه الاحتياطات يجب تجنب تلوث معظم، ولكن المستعمرات ينبغي لا يزال بشكل روتيني رصد استخدام الاختبارات التشخيصية59.

أنثى الزاعجة المصرية عبد اللطيف. تتطلب وجبة الدم من أجل وضع البيض، ومختبرات العالم توفر لهم في مجموعة متنوعة من الطرق، من غشاء تغذية نظم57،61 من الحيوانات ضبط النفس، وإلى حد أقل، الدم الاصطناعي62 . ومع ذلك، البعوض مع التجريبية ولبخيه الالتهابات غالباً ما أداء ضعيف في الدم غير البشرية، وقد يحمل انخفاض الخصوبة ومعدلات هاتش، وانتقال غير مكتملة ولبخيه ذرية63، 64 , 65-الحفاظ على مدى تقبل الإناث للروائح البشرية مهم أيضا للبعوض أن يفرج عنها في الميدان، وإطعامهم من خلال الأغشية أو غيرها من الحيوانات قد خرق هذا قدرة37. ولذلك نختار استخدام الساعد متطوعين من البشر لهذا البروتوكول صيانة مستعمرة، على الرغم من أن أساليب أخرى مطلوبة في ظل بعض الظروف. الدم التي يجب توفيرها من خلال وسائل أخرى عندما تعمل مباشرة مع سيتناقش، وينبغي توخي الحذر عند المستعمرات تنبع من السكان الميدانية مع الأحمال الفيروسية عالية كما قد يحدث انتقال ترانسوفاريال سيتناقش66. متطوعين من البشر ينبغي أيضا عدم تغذية الدم إذا كانوا قد زار مؤخرا البلدان الموبوءة أربوفيرال كما قد يكون هناك خطر انتقال العدوى.

لدينا صيانة بروتوكول يهدف إلى تقليل الضغوط انتقائية والتكيف مختبر، ولكن هناك مجال للتحسين. Leftwich et al. 42 تقدم مزيدا من التوصيات للحفاظ على اللياقة البدنية للبعوض للإطلاقات فتح الحقل، بما في ذلك استخدام الحمية اليرقات أكثر تنوعاً والطبيعية والحد من كثافة الكبار في أقفاص وتوفير بيئة معقدة. هذه الاعتبارات قد تعزز اللياقة البدنية عبد اللطيف-مصرية بدرجة أكبر، على الرغم من أن هناك حاليا أي دليل على وجود تغييرات اللياقة البدنية بسبب التكيف مختبر بموجب بروتوكول الصيانة الموصوفة هنا [روس وآخرون غير منشورة]. اتخاذ بعض التدابير الإضافية قد لا يكون ممكناً للمختبرات مع مساحة محدودة، والموارد، ولكن مع ذلك تستحق التحقيق. الحفاظ على أحجام كبيرة من السكان، وتجنب الضغوط الانتقائية الرئيسية من خلال تربية البروتوكولات وتنفيذ الدوري التهجين للبعوض ميدان ينبغي أن تساعد في ضمان اللياقة البدنية عالية عبد اللطيف-مصرية لفتح مجال النشرات. يمكن تطبيق مبادئ المشاركة في النهج المتبع لتربية الأنواع الأخرى مكافحة ناقلات الأمراض للإفراج عن التلاعب أو قمع السكان الطبيعية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

Acknowledgments

ونعترف ييب لين هنغ، كريس باتون وجونسون بيترينا ودويغ كلير لمساهمتها في تطوير أساليب عملنا والحفاظ على مستعمرة والمراجعين المجهول ثلاثة لاقتراحاتهم التي ساعدت على تحسين المخطوطة. ابحاثنا معتمد برنامج المنح والزمالات إلى آه من "الصحة الوطنية"، و "مجلس البحوث الطبية" وترجمة منحة من مؤسسة ويلكوم ترست. PAR الحكومة الأسترالية بحوث التدريب برنامج منحة.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Wild type Aedes aegypti Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details
w Mel-infected Aedes aegypti Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain
w AlbB-infected Aedes aegypti Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain
w MelPop-infected Aedes aegypti Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain
Instant dried yeast Lowan Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used
5 L plastic tub Quadrant Q110950 Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used
Fish Food (Tetramin Tropical Tablets) Tetra 16152 Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE
Plastic containers Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable
Glass pipette Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez
Clicker counter RS Pro 710-5212 Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y
Rearing trays Gratnells Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com
Nylon mesh Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white
Cages BugDorm DP1000 Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html
35 mL plastic cup Huhtamaki AA272225 Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used
35 mL plastic cup lid Huhtamaki GB030005 Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used
Cotton wool Cutisoft 71841-13 Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used
White Sugar Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores
Rope M Recht Accessories C323C/W Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/
Plastic cup (large) Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable
Sandpaper Norton Master Painters CE015962 Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html
Filter paper Whatman 1001-150 Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used
Latex gloves SemperGuard Z560979 Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mayer, S. V., Tesh, R. B., Vasilakis, N. The emergence of arthropod-borne viral diseases: A global prospective on dengue, chikungunya and zika fevers. Acta Trop. 166, 155-163 (2017).
  2. Campbell, L. P., et al. Climate change influences on global distributions of dengue and chikungunya virus vectors. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 370 (1665), (2015).
  3. Kraemer, M. U., et al. The global distribution of the arbovirus vectors Aedes aegypti and Ae. albopictus. eLife. 4, (2015).
  4. Carvalho, B. M., Rangel, E. F., Vale, M. M. Evaluation of the impacts of climate change on disease vectors through ecological niche modelling. Bull Entomol Res. , 1-12 (2016).
  5. Scott, T. W., et al. Longitudinal studies of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) in Thailand and Puerto Rico: population dynamics. J Med Ent. 37 (1), 77-88 (2000).
  6. Cheong, W. Preferred Aedes aegypti larval habitats in urban areas. Bull World Health Organ. 36 (4), 586-589 (1967).
  7. Barker-Hudson, P., Jones, R., Kay, B. H. Categorization of domestic breeding habitats of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) in Northern Queensland, Australia. J Med Ent. 25 (3), 178-182 (1988).
  8. Watson, T. M., Marshall, K., Kay, B. H. Colonization and laboratory biology of Aedes notoscriptus from Brisbane, Australia. J Am Mosq Control Assoc. 16 (2), 138-142 (2000).
  9. Williges, E., et al. Laboratory colonization of Aedes japonicus japonicus. J Am Mosq Control Assoc. 24 (4), 591-593 (2008).
  10. Munstermann, L. E. The Molecular Biology of Insect Disease Vectors. , Springer. 13-20 (1997).
  11. McDonald, P., Hausermann, W., Lorimer, N. Sterility introduced by release of genetically altered males to a domestic population of Aedes aegypti at the Kenya coast. Am J Trop Med Hyg. 26 (3), 553-561 (1977).
  12. Rai, K., Grover, K., Suguna, S. Genetic manipulation of Aedes aegypti: incorporation and maintenance of a genetic marker and a chromosomal translocation in natural populations. Bull World Health Organ. 48 (1), 49-56 (1973).
  13. Harris, A. F., et al. Field performance of engineered male mosquitoes. Nature Biotechnol. 29 (11), 1034-1037 (2011).
  14. Hoffmann, A. A., et al. Successful establishment of Wolbachia in Aedes populations to suppress dengue transmission. Nature. 476 (7361), 454-457 (2011).
  15. O'Connor, L., et al. Open release of male mosquitoes infected with a Wolbachia biopesticide: field performance and infection containment. PLoS Negl Trop Dis. 6 (11), e1797 (2012).
  16. Morlan, H. B. Field tests with sexually sterile males for control of Aedes aegypti. Mosquito news. 22 (3), 295-300 (1962).
  17. Grover, K. K., et al. Field experiments on the competitiveness of males carrying genetic control systems for Aedes aegypti. Entomol Exp Appl. 20 (1), 8-18 (1976).
  18. Seawright, J., Kaiser, P., Dame, D. Mating competitiveness of chemosterilized hybrid males of Aedes aegypti (L.) in field tests. Mosq News. 37 (4), 615-619 (1977).
  19. Zhang, D., Lees, R. S., Xi, Z., Gilles, J. R., Bourtzis, K. Combining the sterile insect technique with Wolbachia-based approaches: II- a safer approach to Aedes albopictus population suppression programmes, designed to minimize the consequences of inadvertent female release. PloS One. 10 (8), e0135194 (2015).
  20. McGraw, E. A., O'Neill, S. L. Beyond insecticides: new thinking on an ancient problem. Nature Rev Microbiol. 11 (3), 181-193 (2013).
  21. Xi, Z., Khoo, C. C., Dobson, S. L. Wolbachia establishment and invasion in an Aedes aegypti laboratory population. Science. 310 (5746), 326-328 (2005).
  22. McMeniman, C. J., et al. Stable introduction of a life-shortening Wolbachia infection into the mosquito Aedes aegypti. Science. 323 (5910), 141-144 (2009).
  23. Walker, T., et al. The wMel Wolbachia strain blocks dengue and invades caged Aedes aegypti populations. Nature. 476 (7361), 450-453 (2011).
  24. Joubert, D. A., et al. Establishment of a Wolbachia superinfection in Aedes aegypti mosquitoes as a ppotential approach for future resistance management. PLoS Pathog. 12 (2), e1005434 (2016).
  25. Ferguson, N. M., et al. Modeling the impact on virus transmission of Wolbachia-mediated blocking of dengue virus infection of Aedes aegypti. Sci Transl Med. 7 (279), 279ra237 (2015).
  26. Aliota, M. T., Peinado, S. A., Velez, I. D., Osorio, J. E. The wMel strain of Wolbachia Reduces Transmission of Zika virus by Aedes aegypti. Sci Rep. 6, 28792 (2016).
  27. van den Hurk, A. F., et al. Impact of Wolbachia on infection with chikungunya and yellow fever viruses in the mosquito vector Aedes aegypti. PLoS Negl Trop Dis. 6 (11), e1892 (2012).
  28. Moreira, L. A., et al. A Wolbachia symbiont in Aedes aegypti limits infection with dengue, Chikungunya, and Plasmodium. Cell. 139 (7), 1268-1278 (2009).
  29. Mains, J. W., Brelsfoard, C. L., Rose, R. I., Dobson, S. L. Female Adult Aedes albopictus Suppression by Wolbachia-Infected Male Mosquitoes. Sci Rep. 6, 33846 (2016).
  30. Nguyen, T. H., et al. Field evaluation of the establishment potential of wmelpop Wolbachia in Australia and Vietnam for dengue control. Parasit Vectors. 8, 563 (2015).
  31. Garcia Gde, A., Dos Santos, L. M., Villela, D. A., Maciel-de-Freitas, R. Using Wolbachia releases to estimate Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) population size and survival. PloS One. 11 (8), e0160196 (2016).
  32. Hoffmann, A. A., Ross, P. A., Rašić, G. Wolbachia strains for disease control: ecological and evolutionary considerations. Evol Appl. 8 (8), 751-768 (2015).
  33. Briegel, H. Metabolic relationship between female body size, reserves, and fecundity of Aedes aegypti. J Insect Physiol. 36 (3), 165-172 (1990).
  34. Ponlawat, A., Harrington, L. C. Factors associated with male mating success of the dengue vector mosquito, Aedes aegypti. Am J Trop Med Hyg. 80 (3), 395-400 (2009).
  35. Segoli, M., Hoffmann, A. A., Lloyd, J., Omodei, G. J., Ritchie, S. A. The effect of virus-blocking Wolbachia on male competitiveness of the dengue vector mosquito, Aedes aegypti. PLoS Negl Trop Dis. 8 (12), e3294 (2014).
  36. Imam, H., Zarnigar,, Sofi, G., Seikh, A. The basic rules and methods of mosquito rearing (Aedes aegypti). Trop Parasitol. 4 (1), 53-55 (2014).
  37. Spitzen, J., Takken, W. Malaria mosquito rearing-maintaining quality and quantity of laboratory-reared insects. Proc Neth Entomol Soc Meet. 16, 95-100 (2005).
  38. Lorenz, L., Beaty, B. J., Aitken, T. H. G., Wallis, G. P., Tabachnick, W. J. The effect of colonization upon Aedes aegypti susceptibility to oral infection with Yellow Fever virus. Am J Trop Med Hyg. 33 (4), 690-694 (1984).
  39. Yeap, H. L., et al. Dynamics of the "popcorn" Wolbachia infection in outbred Aedes aegypti informs prospects for mosquito vector control. Genetics. 187 (2), 583-595 (2011).
  40. Turley, A. P., Moreira, L. A., O'Neill, S. L., McGraw, E. A. Wolbachia infection reduces blood-feeding success in the dengue fever mosquito, Aedes aegypti. PLoS Negl Trop Dis. 3 (9), e516 (2009).
  41. Yeap, H. L., Endersby, N. M., Johnson, P. H., Ritchie, S. A., Hoffmann, A. A. Body size and wing shape measurements as quality indicators of Aedes aegypti mosquitoes destined for field release. Am J Trop Med Hyg. 89 (1), 78-92 (2013).
  42. Leftwich, P. T., Bolton, M., Chapman, T. Evolutionary biology and genetic techniques for insect control. Evol Appl. 9 (16), 212-230 (2016).
  43. Calkins, C., Parker, A. Sterile Insect Technique. , Springer. 269-296 (2005).
  44. Tun-Lin, W., Burkot, T., Kay, B. Effects of temperature and larval diet on development rates and survival of the dengue vector Aedes aegypti in north Queensland, Australia. Med Vet Entomol. 14 (1), 31-37 (2000).
  45. Richardson, K., Hoffmann, A. A., Johnson, P., Ritchie, S., Kearney, M. R. Thermal sensitivity of Aedes aegypti from Australia: empirical data and prediction of effects on distribution. J Med Ent. 48 (4), 914-923 (2011).
  46. Richardson, K. M., Hoffmann, A. A., Johnson, P., Ritchie, S. R., Kearney, M. R. A replicated comparison of breeding-container suitability for the dengue vector Aedes aegypti in tropical and temperate Australia. Austral Ecol. 38 (2), 219-229 (2013).
  47. Ross, P. A., et al. Wolbachia infections in Aedes aegypti differ markedly in their response to cyclical heat stress. PLoS Pathog. 13 (1), e1006006 (2017).
  48. Gjullin, C., Hegarty, C., Bollen, W. The necessity of a low oxygen concentration for the hatching of Aedes mosquito eggs. J Cell Physiol. 17 (2), 193-202 (1941).
  49. Axford, J. K., Ross, P. A., Yeap, H. L., Callahan, A. G., Hoffmann, A. A. Fitness of wAlbB Wolbachia infection in Aedes aegypti: parameter estimates in an outcrossed background and potential for population invasion. Am J Trop Med Hyg. 94 (3), 507-516 (2016).
  50. Degner, E. C., Harrington, L. C. Polyandry depends on postmating time interval in the dengue vector Aedes aegypti. Am J Trop Med Hyg. 94 (4), 780-785 (2016).
  51. Bentley, M. D., Day, J. F. Chemical ecology and behavioral aspects of mosquito oviposition. Ann Rev Entomol. 34 (1), 401-421 (1989).
  52. Wong, J., Stoddard, S. T., Astete, H., Morrison, A. C., Scott, T. W. Oviposition site selection by the dengue vector Aedes aegypti and its implications for dengue control. PLoS Negl Trop Dis. 5 (4), e1015 (2011).
  53. Meola, R. The influence of temperature and humidity on embryonic longevity in Aedes aegypti. Ann Entomol Soc Am. 57 (4), 468-472 (1964).
  54. Faull, K. J., Williams, C. R. Intraspecific variation in desiccation survival time of Aedes aegypti (L.) mosquito eggs of Australian origin. J Vector Ecol. 40 (2), 292-300 (2015).
  55. McMeniman, C. J., O'Neill, S. L. A virulent Wolbachia infection decreases the viability of the dengue vector Aedes aegypti during periods of embryonic quiescence. PLoS Negl Trop Dis. 4 (7), e748 (2010).
  56. Ross, P. A., Endersby, N. M., Hoffmann, A. A. Costs of three Wolbachia infections on the survival of Aedes aegypti larvae under starvation conditions. PLoS Negl Trop Dis. 10 (1), e0004320 (2016).
  57. Carvalho, D. O., et al. Mass production of genetically modified Aedes aegypti for field releases in Brazil. J Vis Exp. (83), e3579 (2014).
  58. Benedict, M. The first releases of transgenic mosquitoes: an argument for the sterile insect technique. Trends Parasitol. 19 (8), 349-355 (2003).
  59. Lee, S. F., White, V. L., Weeks, A. R., Hoffmann, A. A., Endersby, N. M. High-throughput PCR assays to monitor Wolbachia infection in the dengue mosquito (Aedes aegypti) and Drosophila simulans. Appl Environ Microbiol. 78 (13), 4740-4743 (2012).
  60. Corbin, C., Heyworth, E. R., Ferrari, J., Hurst, G. D. Heritable symbionts in a world of varying temperature. Heredity. 118 (1), 10-20 (2017).
  61. Day, J. F., Edman, J. D. Mosquito engorgement on normally defensive hosts depends on host activity patterns. J Med Ent. 21 (6), 732-740 (1984).
  62. Gonzales, K. K., Hansen, I. A. Artificial diets for mosquitoes. Int J Environ Res Public Health. 13 (12), (2016).
  63. McMeniman, C. J., Hughes, G. L., O'Neill, S. L. A Wolbachia symbiont in Aedes aegypti disrupts mosquito egg development to a greater extent when mosquitoes feed on nonhuman versus human blood. J Med Ent. 48 (1), 76-84 (2011).
  64. Caragata, E. P., Rances, E., O'Neill, S. L., McGraw, E. A. Competition for amino acids between Wolbachia and the mosquito host, Aedes aegypti. Microb Ecol. 67 (1), 205-218 (2014).
  65. Suh, E., Fu, Y., Mercer, D. R., Dobson, S. L. Interaction of Wolbachia and bloodmeal type in artificially infected Aedes albopictus (Diptera: Culicidae). J Med Entomol. , (2016).
  66. Thangamani, S., Huang, J., Hart, C. E., Guzman, H., Tesh, R. B. Vertical transmission of Zika virus in Aedes aegypti mosquitoes. Am J Trop Med Hyg. 95 (5), 1169-1173 (2016).

Tags

بروتوكول الأساسية، مسألة 126، الحشرات تربية البعوض بعوضة الزاعجة المصرية، حمى الضنك، زكى، ولبخيه، واللياقة البدنية، وتغذية الدم
الحفاظ على <em>بعوض الزاعجة المصرية</em> "البعوض مصابة" <em>ولبخيه</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ross, P. A., Axford, J. K.,… More

Ross, P. A., Axford, J. K., Richardson, K. M., Endersby-Harshman, N. M., Hoffmann, A. A. Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia. J. Vis. Exp. (126), e56124, doi:10.3791/56124 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter