Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Biology

مورين الكولين تعاني من نقص، تستكمل اثيونيني (الرفيق) النظام الغذائي النموذجي لإصابة الكبد المزمنة

doi: 10.3791/56138 Published: October 21, 2017

Summary

هنا يصف لنا طريقة شائعة للحث على إصابة الكبد المزمنة في الفئران عن طريق تغذية غذائي (الرفيق) تفتقر إلى مادة الكولين وتستكمل اثيونيني. ندلل على رصد الصحة، نضح الكبد، والعزلة، والحفاظ على. يمكن إطلاع مرة دورة لمدة ستة أسابيع في إصابة الكبد، باثوهيستولوجي، والتليف، والالتهابات، واستجابات الخلايا السلف الكبد.

Abstract

أمراض الكبد المزمنة، مثل التهاب الكبد الفيروسي، وأمراض الكبد الكحولية، أو مرض الكبد الدهني غير الكحولية، وتتميز بالتهاب مستمر والتدمير التدريجي والتجديد للخلية السلف لحمه الكبد، الكبد الانتشار، والتليف. المرحلة النهائية لكل أمراض الكبد المزمنة هو تليف الكبد، عامل خطر رئيسي لتنمية سرطانه الخلية الكبدية. دراسة العمليات التي تنظم بدء المرض، وإنشاء، وتقدم، تستخدم العديد من النماذج الحيوانية في المختبرات. هنا يصف لنا دورة وقت ستة أسابيع من طراز الماوس (الرفيق) تفتقر إلى مادة الكولين وتستكمل اثيونيني الذي ينطوي على تغذية القديم الأسبوع-ستة ذكور الفئران C57BL/6J مع نقص الكولين تشاو 0.15% DL--اثيونيني--استكملت مياه الشرب و. وأوضح رصد صحة الحيوان ومنحني فقدان وزن جسم نموذجية. البروتوكول يوضح إجمالي دراسة مجموعة الكبد والدم تعامل الرفيق بثقب القلب لتحليلات المصل اللاحقة. المقبل، هي تقنية التروية الكبد وجمع الفصوص الكبدية المختلفة فيما يتعلق بالتقييمات القياسية الأنسجة الكبد أظهرت، بما في ذلك التقييمات التي توضع وويوزين أو ستينينجس "الأحمر سيريوس"، الكشف عن إيمونوفلوريسسينت من السكان الخلية الكبدية كذلك الترنسكربيتوم التنميط من المكروية الكبد. هذا الطراز الماوس مناسبة لدراسة الالتهابات والتليف وخلية الكبد السلف الديناميات التي يتسبب فيها عن طريق أمراض الكبد المزمنة، ويمكن استخدامها لاختبار العوامل العلاجية المحتملة التي قد تعدل هذه العمليات.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

الكبد هو أكبر جهاز غدي الأيضية للجسم والعديد من الوظائف المعقدة. وتشمل الأدوار الرئيسية للكبد الهضم، الأيض، إزالة السموم، وتخزين المواد الغذائية الأساسية، إنتاج مكونات بروتين بلازما الدم، والحصانة بوساطة من خلال الضامة المقيم أو خلايا كوبفر. الكبد له قدرة كبيرة على تجديد حتى لو كان ما يصل إلى 70-90 في المائة كتلتها الإجمالية المفقودة. في حالة إصابة الكبد الحاد، مثل كما رأينا عقب ظهرت جزئية أو التسمم أسيتامينوفين، تتكاثر خلايا الكبد السليمة المتبقية لإصلاح الضرر الذي لحق ب درجة عالية من تنسيق عملية1. ومع ذلك، عندما مزمن يصابون خلايا الكبد سبب العدوى الفيروسية طويلة الأجل، الكحولية أو غير الكحولية مرض الكبد الدهني، المكروية التحريضية تنتج تفعيل القيادة التليف الكبدي الخلايا النجمية تكاثر الخلايا السلف الكبد (لبكس) مع احتمال أن تفرق في تشولانجيوسيتيس أو خلايا الكبد2،3،،من45. الأصل دقيقة، مصير التمايز لبكس، إسهامها في تجديد الكبد، وهيباتوكارسينوجينيسيس كانت مواضيع نقاش مكثف والأرجح تعتمد على شدة الإصابة وسياق2. ترتيب الأحداث المرتبطة بالتجديد المبكر هو ناقش أيضا مثير للجدل، مع بعض المحققين تفيد بأن تنشيط الخلية النجمية الكبد وإعادة عرض مصفوفة غير ضرورية لتوليد تحابي LPC مكانة6، بينما البعض الآخر التقرير أن توسيع LPC و "رد فعل" ما يسمى دوكتولار مطلوبة للمشغل فيبروجينيسيس7. وهناك العديد من النماذج الحيوانية لدراسة جوانب محددة من الإصابة والتجدد، في محاولة لفهم جميع العوامل الكامنة التي تنظم تطور المرض ووضع استراتيجيات جديدة للعلاج للمرضى8في نهاية المطاف.

نموذج الغذائية (الرفيق) تفتقر إلى مادة الكولين وتستكمل اثيونيني وضعت أصلاً للاستخدام في الفئران وتعديلها في وقت لاحق لتحريض إصابة الكبد المزمنة في الفئران9،10. النتائج الغذائية ونقص الكولين في الجمعية البصر وإفراز البروتينات الدهنية low-density جداً. جنبا إلى جنب مع هيباتوكارسينوجين اثيونيني دل، وهذا النظام يؤدي إلى الدهون الكبدية المفرط تحميل، التهاب مستمر، والتليف بيريبورتال، استجابة LPC وطويلة الأجل سرطانه الخلية الكبدية التنمية11،12 . ولكن الأهم من ذلك، يحمل سلالات مختلفة من الماوس أنماط متميزة من التليف التحريضية، ومجلس السلام الليبيري استجابة ديناميات13. ويصف هذا البروتوكول سلالة الماوس التعريفي في الفئران C57BL/6J، الأكثر استخداماً فطري إصابة الكبد المزمنة.

في أبحاث أمراض الكبد المزمنة، تحليلات نموذجية تشمل تقييمات النسيجي الهيماتوكسيلين وويوزين فضلا عن تلطيخ "الأحمر سيريوس" لتصور ترسبات الكولاجين أو المناعي أو الكشف عن إيممونوفلوريسسينت من السكان الخلية الكبدية، وتحليلات ترانسكريبتوميك من المكروية الكبد الذي ينظم التغييرات الخلوية المستحثة من خلال عامل نمو معقدة وسيتوكين شبكات14،15،،من1617 , 18.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. "التجريب الحيوان"

جميع الدراسات الحيوانية الموصوفة في هذا التحقيق كانت أقرته "لجنة أخلاقيات الحيوان جامعة كورتين" (رقم الاعتماد: AEC_2014_28) قبل بدء والتجارب وتنفيذها وفقا للقانون الأسترالي لرعاية واستخدام الحيوانات.

  1. الحيوانات
    1. استخدام القديم الأسبوع-ستة ذكور الفئران C57BL/6J للتجارب-
  2. التصميم التجريبي
    1. عقب وصوله إلى "مرفق الحيوان"، السماح للفئران التأقلم لمدة أربعة أيام قبل البدء في أي تجارب.
    2. بيت الفئران في الفراش قش قمح، التي استنفدت الحبوب مرئية وسيقان وإبقاء الفئران على مدار 12 ساعة اليوم/ليلة دورات في منفردة التهوية الأقفاص. تغيير الفراش في أيام ثلاثة وسبعة، ثم أسبوعية بعد ذلك.
    3. الفئران تقديم إعلانية libitum الوصول إلى مادة الكولين تعاني من نقص الغذاء ومياه الشرب التي استكملت بنسبة 0.15 في المائة من DL-اثيونيني. الحفاظ DL-اثيونيني-تستكمل الماء عند 4 درجة مئوية واستبدال مياه الشرب كل يوم ثان لضمان نضارة وتشجيع شرب. أعلى يصل تشو الكولين التي تفتقر إلى كل يوم الثاني مع تغيير كامل تشاو مرة واحدة في أسبوع-
    4. مراقبة الفئران في الراحة وأثناء المناولة. رصد علامات قياسية للصحة الحيوانية، بما في ذلك المظهر العام، والموقف، والتفاعل الاجتماعي، والاستمالة، معطف الشرط، ووزن جسم.
    5. هي euthanized
    6. وزن الفئران يوميا خلال الأسبوعين الأولين من هذه التجربة لضمان أي الحيوانات المعرض أكثر من 20% الجسم وفقدان الوزن للحد من معاناة لا داعي لها. عادة هذا هو الحال في أقل من 5% من الحيوانات. وبعد أسبوعين، يمكن خفض تواتر وزنها بثلاث مرات أسبوعيا (مثلاً، الاثنين، الأربعاء، الجمعة).
  3. نضح الكبد والعزلة
    1. تخدير الفئران في النقاط الزمنية المشار إليها (في هذه الدراسة واحد واثنين وستة أسابيع في النظام الغذائي الرفيق) مع الكيتامين (100 مغ/كغ) وإكسيلازيني (10 مغ/كغ) بالحقن داخل. اختبار منعكس سحب دواسة لضمان التخدير الكافي.
    2. الرطب الفراء مع الإيثانول 70% وجعل شق خط الوسط عمودي في جدار البطن تصل إلى الحجاب الحاجز باستخدام مقص مايو كلينيك. يمكن إزالة القفص الصدري لتسهيل الوصول إلى القلب.
    3. جمع الدم ببطء ثقب القلب باستخدام 25 x 1/2 " إبرة الجدار العادية لتفادي انهيار القلب. يسمح الدم إلى تجلط في أنبوب ميكروسينتريفوجي في درجة حرارة الغرفة للحصول على عينات المصل بعد الطرد المركزي في 2,000 س ز لمدة 10 دقائق. وبعد قياس مستويات المصل transaminase ألانين الإجراءات الموحدة في 12-
    4. تحريك المعدة والأمعاء إلى الجانب
    5. وفضح الوريد البابي. قطع القلب باستخدام مقص مايو كلينيك للسماح للسوائل للخروج ونتخلل في الكبد مع الفوسفات العقيمة مخزنة المالحة (pH = 7.4) قبل كانولاتينج الوريد البابي باستخدام 27 x 1/2 " إبرة الجدار العادية. كبد بالتساوي متبيض يشير إلى نضح ناجحة من جميع الفصوص الكبد.
    6. فصل الكبد ووضعه في طبق بتري استخدام ملقط ومقص مايو كلينيك بعناية. إزالة الأنسجة الزائدة، غير الكبد والمرارة.
  4. الحفاظ على الكبد
    1. بعد تم تسجيل إجمالي وزن الكبد، قطع الفص صغير واحد إلى عدة قطع صغيرة من بضعة مليمترات مربعة، نقلها إلى أنابيب العقيمة، وتجميد المفاجئة في النتروجين السائل لوقت لاحق الجيش الملكي النيبالي واستخراج البروتين، وفقا للبروتوكولات القياسية. الأداة الإضافية-تجميد هذه القطع الأنسجة أسرع بعد جمع الجهاز لتجنب أي تدهور الأنسجة.
    2. جمع فلقة واحدة في 10% فورمالين مخزنة محايدة للمعالجة لاحقاً وتضمين البارافين، كما كل البروتوكولات القياسية.
    3. وضع فص واحد في العفن مليئة كريوماتريكس درجة الحرارة المثلى قطع التضمين الراتنج والمفاجئة-التجميد في النيتروجين السائل-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

طوال الوقت ستة أسابيع للإصابة الكبد المزمنة الناجمة عن الرفيق، تم تقييم المعلمات في أيام 7 (المرحلة التعريفي) و 14 و 21 (مرحلة الإنشاء) و 42 (مرحلة الصيانة). مقارنة لمكافحة الفئران، الفئران المعالجة بالرفيق فقد تصل إلى 20% وزن الجسم الأولية في مرحلة تكيف أولية وتميل إلى استعادة الوزن في مراحل إنشاء وصيانة (الشكل 1). وزن الجسم كان ارتباطاً عكسيا مع مستويات المصل transaminase ألانين، مؤشرا لإصابة كبدية (الشكل 2). كانت ملطخة أربعة أنسجة الكبد رقيقة ميكرومتر، الفورمالين--الثابتة، وجزءاً لا يتجزأ من البارافين أقسام الهيماتوكسيلين وويوزين لتقييم بنية الكبد. كبد صحي عرض بنية عادية مع الحبال المنظم لخلايا الكبد يشع من الوريد المركزي، تشكل لحمه الكبد. في المقابل، أظهر كبد تعامل الرفيق تعطلت إلى حد كبير بنية الكبد ومتني تسلل العديد من الخلايا باسوفيليك في مرحلة التوجيهي وإنشاء والتطبيع في مرحلة الصيانة (الشكل 3). لتقييم فيبروجينيسيس، 4-ميكرومتر رقيقة، الفورمالين-ثابتة، وجزءاً لا يتجزأ من البارافين أقسام الكبد كانت ملطخة بصبغة الآزو بولي "سيريوس الأحمر"، الذي يتصور ترسيب الكولاجين في الكبد. في المرحلة التعريفي للإصابة الكبد المزمنة الناجمة عن الرفيق، تراكم الكولاجين في حمة في مناطق بيريبورتال. ومع ذلك، تطبيع مستويات في إنشاء وصيانة المرحلة (الشكل 4). قطع أنسجة الكبد جزءا لا يتجزأ من المصفوفة ومجمدة في الأداة الإضافية إلى أقسام رقيقة 7-ميكرومتر في كريوستات. ثم أجرى تلطيخ إيمونوفلوريسسينت لعلامات خلية لتحليل الترتيب الزماني والمكاني للسكان الخلية الكبدية محددة خلال دورة وقت. بنك علامة الخلية السلف الصفراوية والكبد في الكبد السليم، فقط الملون هياكل القناة الصفراوية، حين اكتشاف علامة التهاب الخلايا CD45 الضامة المقيم الكبد أو خلايا كوبفر. في كبد مزمن المصابين، بيد تلطيخ بنك زيادة تعكس انتشار الخلايا السلف الصفراوية والكبد، الذي بلغ ذروته، ووصل إلى حالة مستقرة بعد حوالي 14 يوما من العلاج الرفيق. عدد الخلايا CD45 إيجابية التحريضية، تمثل الخلايا المتسللة والمقيم في الكبد، كما بلغت ذروتها في المرحلة التعريفي للضرر الناجم عن الرفيق وتطبيعها ببطء إلى مستويات التحكم في مراحل إنشاء وصيانة ( الشكل 5). ورافق هذا التوسع في السكان الخلية الملتهبة في كبد مزمن إصابة التغيرات السريعة في المكروية الكبد. وقد لوحظ على الاستقراء السريع أو زيادة كبيرة في مستويات النسخ من السيتوكينات وعوامل النمو. وتشمل هذه ورم نخر عاملة (تنف)، مثل عامل نخر الورم محفز ضعيفة للمبرمج (قرص)، ليمفوتوكسين-بيتا (LTβ)، عامل النمو تتمثل (هجف)، تحويل عامل النمو-بيتا (TGFβ)، وانترلوكين-6 (إيل-6)، على سبيل المثال. كل ما وصلت إلى ذروتها في المرحلة التعريفي مستوياتها نسخة وتطبيع خلال مرحلة إنشاء وصيانة-مشابهة للمرض هو موضح سابقا معلمات (الشكل 6).

Figure 1
الشكل 1 . هيئة التسجيلات وزن الفئران صحية وتعامل الرفيق. فقد تصل إلى 20% وزن الجسم الأولية في المرحلة التعريفي لتغذية الرفيق الفئران إصابة مزمنة واستردادها فيما بعد. ويرد رسم تخطيطي لممثل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
الشكل 2 . مستويات المصل transaminase ألانين في الفئران صحية وتعامل الرفيق. مستويات المصل ألانين transaminase (البديل) ظلت ثابتة في الفئران صحية خلال دورة لمدة ستة أسابيع مرة ولكن بلغت ذروتها في مرحلة التوجيهي، مع التطبيع في مرحلة إنشاء وصيانة في الحيوانات المعالجة بالرفيق. ويرد رسم تخطيطي لممثل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 3
الشكل 3 . ستينينجس هايماتوكسيلين وويوزين من أقسام الكبد. أقسام ثابتة الفورمالين وجزءاً لا يتجزأ من البارافين أنسجة الكبد التي كانت ملطخة ح & ه أظهرت الترتيبات منظم من الحبال تتمثل في مكافحة الفئران. وفي المقابل، تعطلت بنية الكبد إلى حد كبير في الفئران المعالجة بالرفيق في مرحلة التوجيهي، مع التطبيع نهاية الدورة الزمنية ستة أسابيع. يمثل الشريط مقياس 100 ميكرومتر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 4
الشكل 4 . الأحمر سيريوس الكولاجين تلطيخ-يسرت التصور في الفئران صحية وتعامل الرفيق. بالمقارنة مع الفئران التحكم المعروضة فقط ترسبات الكولاجين بيريفينوس طفيفة، مزمن إصابة الحيوانات أظهرت تراكم الكولاجين في بيريبورتال حمة المناطق في المرحلة التعريفي، مع بطء التطبيع إلى مرحلة الصيانة الرفيق وقت الدورة التدريبية لمدة ستة أسابيع. يمثل الشريط مقياس 100 ميكرومتر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 5
الشكل 5 . الكشف عن الخلايا السلف التحريضية والكبد/المرارة إيمونوفلوريسسينت. في كبد سليمة، فقط الصفراوية هياكل ملطخة ببنك علامة الخلية السلف الصفراوية والكبد (أحمر) وتصور جسم CD45 الضامة المقيم في الكبد أو خلايا كوبفر (أخضر). في المرحلة التعريفي للرفيق التغذية، عدد CD45+ الخلايا ارتفع إلى حد كبير التي شملت خلايا التهاب الكبد-المقيم وكذلك المتسللة. تطبيع هذه الاستجابة الالتهابية نهاية tأنه بالطبع الوقت ستة أسابيع. السلف الصفراوية والكبد الخلايا أن وصمة عار مع علامة بانك زيادة في أرقام تصل إلى الأسبوع الثاني والتوصل إلى حالة مستقرة بعد ذلك. واستخدم DAPI كوانتيتيشن النووية. يمثل الشريط مقياس 100 ميكرومتر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 6
الرقم 6 . تحليلات ترانسكريبتوميك السيتوكينات وعوامل النمو. الجيش الملكي النيبالي كانت معزولة من قطع أنسجة الكبد تعامل الرفيق إجراء تحليلات ترانسكريبتوميك من المكروية الكبد مجمدة في الأداة الإضافية. رسومات تخطيطية الممثل عامل نخر الورم (تنف)، مثل تنف محفز ضعيفة للمبرمج (قرص)، تظهر بيتا ليمفوتوكسين (LTβ)، عامل النمو تتمثل (هجف)، تحويل عامل النمو-بيتا (TGFβ)، وانترلوكين-6 (إيل-6). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

أمراض الكبد المزمنة غالباً مرض صامت مع معظم المرضى بأعراض، واحد المساهمين الرئيسيين في المراضة والوفيات في جميع أنحاء العالم. إدمان الكحول المزمن والعدوى بفيروس التهاب الكبد الوبائي هي الأسباب الرئيسية. تتميز الإصابة الكبد المزمنة بالتهاب الكبد، تليف وتليف الكبد في الحالات الشديدة وسرطان وفشل الكبد في نهاية المطاف. لا تتوفر حاليا لا علاج وعلى الرغم من أن تقدما كبيرا قد بذلت لفهم آليات مرض الكبد، السبل العلاجية الجديدة لا تزال مطلوبة على وجه الاستعجال.

النظام الغذائي الرفيق نموذج بسيط، اعتبارا من الوقت، ويمكن إدارتها بسهولة للاستقراء، ودراسة التغيرات الدهنية أو ذلك الكبد، والتهاب، التليف، وانتشار LPC، وفي تجارب طويلة الأمد، تطوير سرطانه الخلية الكبدية6 ،11،،من1213،،من1617. يستخدم في البداية في الفئران19،20، أنه كان في وقت لاحق تكييف لتيسير الدراسات LPC wildtype والفئران المعدلة وراثيا9.

في المختبر، وجدنا أنها حاسمة بالنسبة لاستخدام قش قمح بدلاً من البدائل الأخرى في الأسرة. على الرغم من أنه هو استنفاد الحبوب مرئية وسيقان، مغذيات إضافية قليلة البقاء في الفراش قش قمح وموازنة بعض من الآثار القاسية للإصابة الكبد المزمنة الناجمة عن الرفيق التعريفي. وبالإضافة إلى ذلك، يوفر الإثراء البيئي هذه الأسرة وتشجع سلوك البحث عن الغذاء الطبيعي في الفئران. كانت الغالبية العظمى من الأحداث الضائرة الملاحظ في الأسبوع الأول من العلاج الرفيق ونادراً ما ينظر إليها بعد ذلك. يمكن تقليل احتمال وقوع الأحداث الضارة باستخدام الفئران التي لديها على الأقل 16 غ وزن. ومع ذلك، إذا كان وزن يبدأ أكثر من 18-20 g، عدد الخلايا المستحثة السلف الكبد قد تكون أقل. يمكن استخدام نموذج الرفيق لدراسة ذلك الكبد والتهاب واستجابات الخلايا السلف الكبد، والتليف وسرطانه الخلية الكبدية التنمية دون الوجود لتليف الكبد، مثل كما رأينا في بعض غير الكحولية مرض الكبد الدهني (NAFLD) و 21،المرضى المصابين بعدوى فيروس الالتهاب الكبدي ب22. وبالمقارنة، نموذج ثيواسيتاميدي (ﻷعمالهم) لإصابة الكبد المزمنة يمثل نظاما أكثر عدوانية. فإنه يدفع التغيرات الدهنية خفيفة والتهاب وخلايا السلف الكبد والتليف الذي سبق تقدم تليف الكبد المبكر حول نقطة زمنية 6-الأسبوع12. ومن ثم فهو اقترح الرفيق تغذية إذا كانت العمليات NAFLD المرتبطة هي محور الدراسة، بينما دورة وقت ﻷعمالهم قد يكون من المفيد عند مختلف مراحل شدة التليف تحظى باهتمام.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

لا يوجد شيء لكشف مقدمو البلاغ.

Acknowledgments

وأيد هذا العمل منح مقدمة من "الوطنية للصحة" ومجلس البحوث الطبية (NHMRC) أستراليا (APP1042370، APP1061332، APP1087125). المؤلفون أود أن أشكر موظفي معهد بحوث الابتكار الصحة كورتين للمساعدة التقنية.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Six-week-old male C57BL/6J mice  Animal Resource Centre of Western Australia, Murdoch, WA,  Australia N/A
10 Kg Steam Cut Wheaten Chaff  Specialty Feeds, Glen Forrest, WA, Australia  N/A
Water for irrigation 1000ml bottle (Baxter)  Surgical House, Perth, WA, Australia  AHF7114A
Choline- deficient diet, modified (pellets)  MP Biomedicals Australasia Pty Limited, WA, Australia 02960210
DL-Ethionine  Sigma-Aldrich, Castle Hill, NSW,  Australia  E5139-25G
Ketamil injection  Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia  N/A
Ilum Xylazil-20 injection  Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia  N/A
27G x 1/2", Regular Wall Needle  Terumo Australia Pty Limited, NSW, Australia  NN-2713R
Syringes Terumo 1ml and 10ml  Terumo Australia Pty Limited, Macquarie Park, NSW, Australia  1018242, 1018037
Tissue-Tek OCT compound  VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia  25608-930
Neutral buffered formalin  Amber Scientific, Midvale, WA, Australia  NBF-2.5L
Ethanol absolute anaLaR normalpur  VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia  20821.33
Superfrost Plus slides  Grale Scientific Pty Limited, Ringwood, VIC, Australia  SF41296SP
Dako Protein Block, serum-free  Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia   X090930-2
Dako antibody diluent  Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia   s0809
rat anti-CD45  eBioscience, San Diego, California, USA  m0701  1/200 dilution
rabbit anti-panCK  Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia   Z0622 1/300 dilution
Goat anti-rabbit (Alexa Fluor 488) Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia A-11008 1/500 dilution
Goat anti-rat IgG (Alexa Fluor 594)  Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia  A-11007 1/500 dilution
ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI  Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia  P36935  
Picrosirius Red Stain Kit Polysciences Inc., Warrington, PA, USA  ab150681 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Taub, R. Liver regeneration: from myth to mechanism. Nat Rev Mol Cell Biol. 5, 836-847 (2004).
  2. Kohn-Gaone, J., Gogoi-Tiwari, J., Ramm, G. A., Olynyk, J. K., Tirnitz-Parker, J. E. The role of liver progenitor cells during liver regeneration, fibrogenesis, and carcinogenesis. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 310, G143-G154 (2016).
  3. Lu, W. Y., et al. Hepatic progenitor cells of biliary origin with liver repopulation capacity. Nat Cell Biol. 17, 971-983 (2015).
  4. Prakoso, E., et al. Analysis of the intrahepatic ductular reaction and progenitor cell responses in hepatitis C virus recurrence after liver transplantation. Liver Transpl. 20, 1508-1519 (2014).
  5. Tirnitz-Parker, J. E., Tonkin, J. N., Knight, B., Olynyk, J. K., Yeoh, G. C. Isolation, culture and immortalisation of hepatic oval cells from adult mice fed a choline-deficient, ethionine-supplemented diet. Int J Biochem Cell Biol. 39, 2226-2239 (2007).
  6. Van Hul, N. K., Abarca-Quinones, J., Sempoux, C., Horsmans, Y., Leclercq, I. A. Relation between liver progenitor cell expansion and extracellular matrix deposition in a CDE-induced murine model of chronic liver injury. Hepatology. 49, 1625-1635 (2009).
  7. Clouston, A. D., et al. Fibrosis correlates with a ductular reaction in hepatitis C: roles of impaired replication, progenitor cells and steatosis. Hepatology. 41, 809-818 (2005).
  8. Forbes, S. J., Newsome, P. N. Liver regeneration - mechanisms and models to clinical application. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 13, 473-485 (2016).
  9. Akhurst, B., et al. A modified choline-deficient, ethionine-supplemented diet protocol effectively induces oval cells in mouse liver. Hepatology. 34, 519-522 (2001).
  10. Shinozuka, H., Lombardi, B., Sell, S., Iammarino, R. M. Early histological and functional alterations of ethionine liver carcinogenesis in rats fed a choline-deficient diet. Cancer Res. 38, 1092-1098 (1978).
  11. Knight, B., Tirnitz-Parker, J. E., Olynyk, J. K. C-kit inhibition by imatinib mesylate attenuates progenitor cell expansion and inhibits liver tumor formation in mice. Gastroenterology. 135, 969-979 (2008).
  12. Kohn-Gaone, J., et al. Divergent Inflammatory, Fibrogenic, and Liver Progenitor Cell Dynamics in Two Common Mouse Models of Chronic Liver Injury. Am J Pathol. 186, 1762-1774 (2016).
  13. Knight, B., et al. Attenuated liver progenitor (oval) cell and fibrogenic responses to the choline deficient, ethionine supplemented diet in the BALB/c inbred strain of mice. J Hepatol. 46, 134-141 (2007).
  14. Dwyer, B. J., Olynyk, J. K., Ramm, G. A., Tirnitz-Parker, J. E. TWEAK and LTbeta Signaling during Chronic Liver Disease. Front Immunol. 5, 39 (2014).
  15. Karin, M., Clevers, H. Reparative inflammation takes charge of tissue regeneration. Nature. 529, 307-315 (2016).
  16. Ruddell, R. G., et al. Lymphotoxin-beta receptor signaling regulates hepatic stellate cell function and wound healing in a murine model of chronic liver injury. Hepatology. 49, 227-239 (2009).
  17. Tirnitz-Parker, J. E., et al. Tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis is a mitogen for liver progenitor cells. Hepatology. 52, 291-302 (2010).
  18. Viebahn, C. S., Yeoh, G. C. What fires prometheus? The link between inflammation and regeneration following chronic liver injury. Int J Biochem Cell Biol. 40, 855-873 (2008).
  19. Hayner, N. T., Braun, L., Yaswen, P., Brooks, M., Fausto, N. Isozyme profiles of oval cells, parenchymal cells, and biliary cells isolated by centrifugal elutriation from normal and preneoplastic livers. Cancer Res. 44, 332-338 (1984).
  20. Tee, L. B., Smith, P. G., Yeoh, G. C. Expression of alpha, mu and pi class glutathione S-transferases in oval and ductal cells in liver of rats placed on a choline-deficient, ethionine-supplemented diet. Carcinogenesis. 13, 1879-1885 (1992).
  21. Chayanupatkul, M., et al. Hepatocellular carcinoma in the absence of cirrhosis in patients with chronic hepatitis B virus infection. J Hepatol. 66, 355-362 (2017).
  22. Mittal, S., et al. Hepatocellular Carcinoma in the Absence of Cirrhosis in United States Veterans is Associated With Nonalcoholic Fatty Liver Disease. Clin Gastroenterol Hepatol. 14, 124-131 (2016).
مورين الكولين تعاني من نقص، تستكمل اثيونيني (الرفيق) النظام الغذائي النموذجي لإصابة الكبد المزمنة
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Gogoi-Tiwari, J., Köhn-Gaone, J., Giles, C., Schmidt-Arras, D., Gratte, F. D., Elsegood, C. L., McCaughan, G. W., Ramm, G. A., Olynyk, J. K., Tirnitz-Parker, J. E. E. The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury. J. Vis. Exp. (128), e56138, doi:10.3791/56138 (2017).More

Gogoi-Tiwari, J., Köhn-Gaone, J., Giles, C., Schmidt-Arras, D., Gratte, F. D., Elsegood, C. L., McCaughan, G. W., Ramm, G. A., Olynyk, J. K., Tirnitz-Parker, J. E. E. The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury. J. Vis. Exp. (128), e56138, doi:10.3791/56138 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter