Summary
Burada bir Kolin eksikliği ve ethionine desteklenmiştir (özgür) diyet yedirerek, kronik karaciğer hasarı farelerde ikna etmek için kullanılan genel yöntem açıklanmaktadır. Sağlık izleme, karaciğer perfüzyon, yalıtım ve koruma göstermektedir. Altı hafta bir zaman ders karaciğer hasarı, pathohistology, fibrozis, enflamatuar ve karaciğer progenitör hücre yanıt hakkında bilgilendirebilir.
Abstract
Viral hepatit, alkolik karaciğer hastalığı veya non alkolik yağlı karaciğer hastalığı gibi kronik karaciğer hastalıkları sürekli iltihap, ilerici imha ve karaciğer parankimi, karaciğer progenitör hücre rejenerasyonu ile karakterizedir nükleer silahların yayılmasına karşı ve fibrozis. Her kronik karaciğer hastalığının son aşama siroz, Hepatosellüler karsinom geliştirmek için önemli bir risk faktörü olduğunu. Hastalık başlatma, kuruluş ve ilerleme düzenleyen işlemleri incelemek için birkaç hayvan modelleri laboratuvarlarda kullanılır. Burada altı haftalık zaman ders 6 - hafta eski erkek C57BL/6J fareler Kolin eksikliği chow ve % 0.15 DL ethionine takıma içme suyu ile besleme içeren Kolin eksikliği ve ethionine desteklenmiştir (özgür) fare modeli açıklar. Hayvan sağlığı ve tipik vücut ağırlık kaybı eğrisi izleme açıkladı. Protokol sonraki serum analizleri için kardiyak ponksiyon tarafından bir pencere tedavi karaciğer ve kan toplama brüt incelenmesi göstermektedir. Daha sonra karaciğer perfüzyon tekniği ve standart değerlendirme için farklı karaciğer lobları toplanması gösterilen, dahil karaciğer Histoloji Hematoksilen ve Eozin veya Sirius kırmızı stainings, hepatik hücre popülasyonlarının immünfloresan tespiti değerlendirmelerinin transcriptome karaciğer microenvironment yanı sıra profil oluşturma. Bu fare modeli inflamatuar okuyan, fibrogenic ve dinamikleri kronik karaciğer hastalığı ile indüklenen ve bu işlemlerin modüle potansiyel terapötik ajanlar sınamak için kullanılan karaciğer progenitör hücre için uygundur.
Introduction
Karaciğer vücudun en büyük beze gibi metabolik organ ve birçok karmaşık fonksiyonlar vardır. Karaciğer için anahtar rolleri sindirim, metabolizma, detoksifikasyon, depolanmasını gerekli besinlerin, üretim ikamet makrofajlar veya Kupffer hücreleri aracılığıyla aracılı bağışıklık ve kan plazma protein bileşenleri içerir. Karaciğer toplam kütlesi % 70-90 kadar kayıp olsa bile yeniden oluşturmak için büyük bir yeteneği vardır. Akut karaciğer hasarı durumunda kısmi hepatectomy veya asetaminofen zehirlenmesi, aşağıdaki görüldüğü gibi son derece koordineli işlemi1' deki hasarı onarmak için kalan sağlıklı tetkikine çoğalırlar. Ancak, inflamatuar microenvironment fibrozis sürüş hepatik Yildiz Seklinde hücre aktivasyonu tetkikine uzun vadeli viral enfeksiyon nedeniyle, alkollü veya alkolsüz yağlı karaciğer hastalığı, kronik yaralı tetikler ve karaciğer progenitör hücrelerin (LPCs) cholangiocytes veya tetkikine2,3,4,5ayırt etmek için potansiyeli çoğalması. Kesin kökeni, LPCs, karaciğer rejenerasyonu ve hepatocarcinogenesis yaptıkları katkı kaderi farklılaşma konularda yoğun tartışmaların edilmiştir ve olasılıkla yaralanma şiddeti ve bağlam2üzerinde bağlıdır. Erken rejenerasyon ilişkili olay sırası da tartışmalı, hepatik Yildiz Seklinde hücre aktivasyonu ve matris remodeling nesil bir LPC lehine niş6, diğerleri için gerekli olduğunu belirten bazı araştırmacılar ile ele alınmıştır rapor LPC genişleme ve sözde Ductular reaksiyon tetikleyici fibrogenesis7için gereklidir. Hastalık ilerleme düzenleyen temel faktörleri anlamak için ve sonuçta hasta8için yeni tedavi stratejileri geliştirmek için bir girişim yaralanma ve rejenerasyon, belirli yönlerini incelemek için çok sayıda hayvan modeli var.
Kolin eksikliği ve ethionine desteklenmiştir (özgür) diyet model başlangıçta Sıçanlarda kullanılmak üzere geliştirilen ve kronik karaciğer hasarı indüksiyon fareler9,10için değişikliğin. Diyet Kolin eksikliği Engelli derleme ve çok düşük yoğunluklu lipoproteinler salgısı ile sonuçlanır. DL-ethionine hepatocarcinogen ile birlikte, bu rejimi aşırı karaciğer yağ yükleme, sürekli iltihap, periportal fibroz, LPC yanıt yol açar ve Hepatosellüler karsinom geliştirme11,12 uzun vadeli . Ancak, önemlisi, enflamatuar, fibrogenic ve LPC farklı desenler farklı fare suşları sergi yanıt dinamikleri13. Bu iletişim kuralı kronik karaciğer hasarı yakın akraba evliliğinden doğan indüksiyon en sık kullanılan C57BL/6J farelerde fare zorlanma açıklar.
Kronik karaciğer hastalığı araştırma, tipik analizleri Hematoksilen Eozin ve kollajen ifadeleri, immunohistokimyasal veya hepatik hücre popülasyonlarının immünfloresan tespiti görselleştirmek için Sirius kırmızı boyama tarafından histolojik Değerlendirmeler dahil, ve indüklenen hücresel değişikliklerin üzerinden karmaşık büyüme faktörü ve sitokin ağlar14,15,16,17 orchestrates karaciğer microenvironment transcriptomic analizleri , 18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. hayvan deney
Bu araştırmada açıklanan tüm hayvan çalışmaları Curtin Üniversitesi hayvan Etik Komitesi tarafından kabul edildi (onay numarası: AEC_2014_28) başlamasından önce deneyler ve Avustralya kod bakım ve hayvanların kullanımı için uygun olarak gerçekleştirilen.
- Hayvan
- 6 - hafta eski erkek C57BL/6J fareler için deneyler kullanın.
- Deneysel tasarım
- hayvan tesisi varış herhangi bir deney başlamasından önce dört gündür parkenizin fareler izin.
- Ev fareler üzerinde görünür tahıl ve SAP tükenmiş ve 12 saatlik gün/gece döngüsü içinde ayrı ayrı fareler kulak buğday saman yatak kafesleri havalandırılmış. Üç ve yedi gün yatak takımları değiştirmek o zaman bundan sonra haftalık.
- Sağlamak fareler Kolin eksikliği ad libitum ulaşabilen diyet ve içme suyu DL-ethionine % 0.15 ile desteklenmiştir. DL-ethionine-takıma su 4 ° C'de tutmak ve tazelik sağlamak ve içme teşvik etmek için iki günde içme suyu değiştirin. Kolin eksikliği chow chow haftada bir kez tam bir değişim ile iki günde kontör.
- Gözlemlemek fareler istirahat ve işleme sırasında. Hayvan sağlığı, genel görünümü, duruş, bakım, sosyal etkileşim de dahil olmak üzere standart belirtileri monitör kat koşul ve vücut ağırlığı.
- Tartmak fareler kilo kaybı % 20'den fazla sergilenmesi herhangi bir hayvan vücut sağlamak için deneme ilk iki hafta boyunca her gün are euthanized aşırı acı sınırlamak için. Bu genellikle % 5 daha az durumda hayvan var. İki hafta sonra tartma frekans için üç kez azaltılabilir haftalık (örneğin, Pazartesi, Çarşamba, Cuma).
- Karaciğer perfüzyon ve yalıtım
- fareler ketamin (100 mg/kg) ve xylazine (10 mg/kg) (çalışmada bir, iki ve altı hafta yerini diyet) belirtilen süre noktalarda mayi enjeksiyonu ile anestezi. Yeterli anestezi sağlamak için pedal çekilme refleks testi.
- % 70 etanol kürkle ıslak ve dikey bir ensizyon karın duvarı Mayo makas kullanarak diyafram kadar yapabilirsiniz. Göğüs kafesi-ebilmek var olmak çıkarmak daha kolay erişim için kalp. 25 G x 1/2 kullanarak yavaş kalp ponksiyon kanla
- toplamak " kalbinde çöken önlemek için düzenli duvar iğne. Santrifüjü 2.000 x g 10 dakika için sonra serum numuneleri almak için oda sıcaklığında bir microcentrifuge tüp pıhtısı kan izin. Daha sonra Standart prosedürler 12 ile serum alanin transaminaz düzeyleri ölçmek.
- Mide ve ince bağırsak kenara çek ve portal ven bulaşmasına neden. Çıkmak ve karaciğer tamponlanmış steril fosfat ile sıvı sıvı tuz izin vermek için mayo makas kullanarak kalp kesim (pH 7.4 =) 27 G x 1/2 kullanarak portal ven cannulating tarafından " düzenli duvar iğne. Bir eşit olarak beyazlatılmış karaciğer tüm karaciğer LOB başarılı perfüzyon gösterir.
- Dikkatle karaciğer ayırmak ve forseps ve Mayo makas kullanarak bir kabında yerleştirin. Aşırı, Sigara-karaciğer doku ve safra kesesi kaldırma.
- Karaciğer koruma
- Toplam karaciğer ağırlığı, bir küçük LOB birkaç milimetre kare, birkaç küçük parçalar halinde kesin kayıt altına alınmış sonra onları steril tüpler aktarabilir ve ek-sıvı azot için daha sonra RNA donma ve standart protokolleri göre protein çıkarma. Ek-bu doku parçaları herhangi bir doku yıkımı önlemek için en kısa zamanda organ toplandıktan sonra dondurma.
- Standart protokolleri gibi başına % 10 daha sonra işleme ve parafin katıştırma, tarafsız tampon formalin bir lobunda toplamak.
- Bir LOB reçine katıştırma optimum kesim sıcaklık cryomatrix ile dolu ve ek-freeze sıvı azot bir kalıba yerleştirin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ÖZGÜR kaynaklı kronik karaciğer hasarı altı haftalık süre boyunca parametreleri gün 7 (indüksiyon fazında), 14 ve 21 (kuruluş aşaması) ve 42 (bakım faz) değerlendirildi. Kontrol fareler için karşılaştırıldığında, pencere tedavi fare onların ilk vücut ağırlığının % 20 bir ilk uyum aşamasında kaybetti ve kuruluş ve bakım aşamalarında (şekil 1)ağırlık kazanmak eğilimindedir. Vücut ağırlığı ters hepatosellüler yaralanma (Şekil 2)bir göstergesidir serum alanin transaminaz düzeyleri ile ilişkili. Dört mikrometre-ince, formalin sabit ve parafin gömülü karaciğer dokusu bölümü Hematoksilen ve hepatik mimari değerlendirmek için Eozin ile lekeli. Sağlıklı Karaciğer karaciğer parankimi şekillendirme Merkezi damar yayılan tetkikine düzenli kabloları ile normal bir mimari görüntülenir. Buna ek olarak, pencere tedavi karaciğer büyük ölçüde kesintiye karaciğer mimarisi ve birçok bazofilik hücreler parenkima infiltrasyonu indüksiyon ve kuruluş aşaması ve normalleştirme bakım aşamasında (şekil 3)gösterdi. Fibrogenesis değerlendirmek için 4-mikrometre ince, formalin sabit ve parafin gömülü karaciğer bölümleri Poli-azo boya ile hepatik kollajen birikimi görüntüler Sirius kırmızı lekeli. ÖZGÜR kaynaklı kronik karaciğer hasarı indüksiyon aşamasında periportal bölgelerde parankimi kolajen birikmiş. Ancak, kuruluş ve bakım faz (şekil 4)düzeyleri normalleştirilmiş. Matris gömülü ve ek donmuş karaciğer dokusu 7 mikrometre ince bölümlere bir cryostat kesildi. İmmünfloresan hücre işaretler için boyama sonra belirli karaciğer hücre popülasyonlarının zamansal ve mekansal düzenleme zaman ders sırasında analiz gerçekleştirildi. İnflamatuar hücre işaretçisi CD45 karaciğer ikamet makrofajlar veya Kupffer hücreleri tespit ederken sağlıklı karaciğer safra ve karaciğer progenitör hücre işaretçisi panCK safra kanalını yapıları, sadece lekeli. Kronik yaralı karaciğerleri içinde ancak, artan panCK boyama hangi numaraya kadar yükseldi ve kararlı bir duruma pencere tedavi yaklaşık 14 gün sonra ulaştı safra ve karaciğer progenitör hücre çoğalması yansıtıyordu. Ayrıca özgür kaynaklı yaralanma indüksiyon fazında yükselmiştir ve yavaş yavaş kuruluş ve bakım aşamalarında ( Denetim düzeyleri için normalleştirilmiş karaciğer yerleşik ve infiltre hücreleri, temsil eden CD45 pozitif inflamatuar hücrelerin sayısı Şekil 5). Bu genişleme kronik yaralı karaciğerleri inflamatuar hücre nüfusun hızlı değişiklikler hepatik microenvironment eşlik etti. Bir hızlı indüksiyon veya önemli sitokinler ve büyüme faktörleri transkripsiyon düzeylerinde artış gözlendi. Bunlar tümör nekrozis dönüştürme büyüme faktörü-beta (TGFβ) ve İnterlökin-6 (Il-6), örneğin faktör (TNF), Apoptozis (TWEAK), lymphotoxin-beta (LTβ), hepatosit büyüme faktörü (HGF), tümör nekrozis faktör gibi zayıf uyarıcı içerir. Transkript düzeyleri ve tüm indüksiyon aşamasında doruğa kuruluş ve bakım aşamasında - daha önce gösterilen hastalığı parametreleri (şekil 6)benzer normalleştirilmiş.
Resim 1 . Vücut ağırlığı kayıtları sağlıklı ve özgür tedavi farelerin. Kronik yaralı fare onların ilk vücut ağırlığının % 20 özgür beslenme indüksiyon fazında kaybetti ve bundan sonra kurtarıldı. Temsil edici bir diyagramı gösterilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2 . Alanin transaminaz düzeylerinin sağlıklı ve özgür tedavi fareler. Serum alanin transaminazlar (ALT) düzeyleri altı haftalık süre boyunca sağlıklı farelerde değişmemiştir ama normalleştirme pencere tedavi hayvanlarda kuruluş ve bakım aşamasında ile indüksiyon fazında numaraya kadar yükseldi. Temsil edici bir diyagramı gösterilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3 . Karaciğer bölümlerinin Haematoxylin ve Eozin stainings. H ile lekeli formalin sabit ve parafin gömülü karaciğer dokusu bölümleri & E düzenli kontrol fareler kelimesinde Hepatosit düzenlemelerin gösterdi. Buna ek olarak, karaciğer mimarisi büyük ölçüde özgür tedavi edilen farelerde indüksiyon aşamasında, normalleştirme altı haftalık zaman ders sonuna doğru ile kesilmiş olabilir. Ölçek çubuğu 100 µm. temsil eden Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 4 . Sirius kırmızı boyama-kolaylaştırdı kollajen görselleştirme sağlıklı ve özgür tedavi edilen farelerde. Sadece küçük perivenous kollajen işlemimiz görüntülenen denetim fareler için karşılaştırıldığında, kronik yaralı hayvanları kollajen birikimi içinde periportal parankimi bölgeler bakım aşaması doğru yavaş normalleştirme ile indüksiyon fazında gösterdi Altı hafta VASIL saat ders. Ölçek çubuğu 100 µm. temsil eden Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5 . Enflamatuar ve safra/karaciğer progenitör hücre immünfloresan algılama. Sağlıklı karaciğer, safra yapıları sadece safra ve karaciğer progenitör hücre işaretçisi panCK ile (kırmızı) lekeli ve CD45 antikor karaciğer yerleşik makrofajlar veya Kupffer hücreleri (yeşil) görüntülenir. Besleme, CD45 sayısı yerini indüksiyon aşamasında+ hücreleri infiltre yanı sıra karaciğer yerleşik inflamatuar hücreleri dahil büyük ölçüde arttı. Bu inflamatuar yanıt t yılının sonuna doğru normalleştirilmişo altı haftalık zaman ders. Safra ve karaciğer Dede o leke rakamlarla iki haftaya kadar artmış ve bundan sonra kararlı bir duruma ulaştı işaret panCK ile hücreleri. DAPI nükleer Nefelometri için kullanıldı. Ölçek çubuğu 100 µm. temsil eden Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 6 . Transcriptomic analizleri sitokinler ve büyüme faktörleri. RNA dokuların karaciğer microenvironment transcriptomic analizleri gerçekleştirmek için pencere tedavi karaciğer ek donmuş parçalarıyla izole edildi. Tümör nekroz faktör (TNF), Apoptozis (TWEAK), TNF gibi zayıf uyarıcı temsilcisi diyagramların lymphotoxin-(LTβ), beta hepatosit büyüme faktörü (HGF), dönüştürme büyüme faktörü-beta (TGFβ) ve İnterlökin-6 (Il-6) gösterilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Kronik karaciğer hastalığı genellikle asemptomatik olan çoğu hasta ile sessiz bir hastalıktır ve morbidite ve mortalite dünya çapında büyük katkıyı biridir. Kronik alkolizm ve hepatit C virüs enfeksiyonu önde gelen nedenidir. Kronik karaciğer hasarı karaciğer iltihabı tarafından karakterize fibrozis ve ağır vakalarda siroz, Karsinomu ve sonuçta Karaciğer yetmezliği. Şu anda hiçbir tedavi kullanılabilir ve önemli gelişmeler karaciğer hastalığı mekanizmaları anlamak için yapılan rağmen yeni tedavi yolları hala şiddetle ihtiyaç vardır.
İndüksiyon ve çalışma yağlı değişiklikleri veya hepatik yağlanma, iltihap, fibrozis, LPC yayılması ve uzun vadeli deneylerde, Hepatosellüler karsinom6 geliştirilmesi için bir basit, zaman etkili ve kolayca administrable modeli yerini diyet olduğunu ,11,12,13,16,17. Başlangıçta fareler19,20dakika içinde kullanılan, o daha sonra wildtype ve genetiği değiştirilmiş fare9LPC çalışmaları kolaylaştırmak için uyarlanmıştır.
Bizim laboratuvar buğday saman yatak alternatifi yerine kullanmak için kritik bulduk. Görünür tahıl ve SAP tükenmiş olsa bile, birkaç ek besin buğday saman yatak içinde kalır ve bazı özgür kaynaklı kronik karaciğer hasarı indüksiyon sert etkileri dengelemek. Buna ek olarak, bu yatak çevre zenginleştirme sağlar ve normal yiyecek arama davranışı farelerde teşvik eder. Olumsuz olayların büyük çoğunluğu pencere tedavi ilk hafta içinde gözlenen ve nadiren bundan sonra gördüm. Olumsuz olayların olasılığını en az 16 g başlangıç ağırlığı var fare kullanılarak azaltılabilir. Ancak, başlangıç ağırlığı fazla 18-20 g ise, bağlı karaciğer progenitör hücre sayısı düşük olabilir. ÖZGÜR modeli hepatik yağlanma, iltihabı, karaciğer progenitör hücre yanıt, fibrozis ve Hepatosellüler karsinom gelişimini karaciğer sirozu, varlığı olmadan çalışmaya bazı alkolsüz yağlı karaciğer hastalığı (NAFLD) görüldüğü gibi kullanılabilir ve Hepatit B virüs enfeksiyonlu hastaların21,22. Buna karşılık, kronik karaciğer hasarı thioacetamide (tad) modelinin daha agresif bir rejim temsil eder. Hafif yağlı değişiklik, iltihabı, karaciğer progenitor hücreler ve zaten 6 haftalık saat noktası12çevresinde erken siroz için ilerledikçe fibrozis neden olmaktadır. Bu nedenle, özgür besleme TAA zamanlı Kurs avantajlı zaman farklı olabilir, ancak NAFLD ilişkili işlemler çalışma odak fibrozis önem aşamalarında ilgi iseniz önerilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar tarafından açıklanacak bir şey yoktur.
Acknowledgments
Bu eser hibe Ulusal Sağlık ve tıbbi araştırma Konseyi (NHMRC), Avustralya (APP1042370, APP1061332, APP1087125) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar Curtin sağlık yenilik Araştırma Enstitüsü personel teknik destek için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Six-week-old male C57BL/6J mice | Animal Resource Centre of Western Australia, Murdoch, WA, Australia | N/A | |
| 10 Kg Steam Cut Wheaten Chaff | Specialty Feeds, Glen Forrest, WA, Australia | N/A | |
| Water for irrigation 1000ml bottle (Baxter) | Surgical House, Perth, WA, Australia | AHF7114A | |
| Choline- deficient diet, modified (pellets) | MP Biomedicals Australasia Pty Limited, WA, Australia 02960210 | ||
| DL-Ethionine | Sigma-Aldrich, Castle Hill, NSW, Australia | E5139-25G | |
| Ketamil injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
| Ilum Xylazil-20 injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
| 27G x 1/2", Regular Wall Needle | Terumo Australia Pty Limited, NSW, Australia | NN-2713R | |
| Syringes Terumo 1ml and 10ml | Terumo Australia Pty Limited, Macquarie Park, NSW, Australia | 1018242, 1018037 | |
| Tissue-Tek OCT compound | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 25608-930 | |
| Neutral buffered formalin | Amber Scientific, Midvale, WA, Australia | NBF-2.5L | |
| Ethanol absolute anaLaR normalpur | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 20821.33 | |
| Superfrost Plus slides | Grale Scientific Pty Limited, Ringwood, VIC, Australia | SF41296SP | |
| Dako Protein Block, serum-free | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | X090930-2 | |
| Dako antibody diluent | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | s0809 | |
| rat anti-CD45 | eBioscience, San Diego, California, USA | m0701 | 1/200 dilution |
| rabbit anti-panCK | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | Z0622 | 1/300 dilution |
| Goat anti-rabbit (Alexa Fluor 488) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11008 | 1/500 dilution |
| Goat anti-rat IgG (Alexa Fluor 594) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11007 | 1/500 dilution |
| ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | P36935 | |
| Picrosirius Red Stain Kit | Polysciences Inc., Warrington, PA, USA | ab150681 |
References
- Taub, R. Liver regeneration: from myth to mechanism. Nat Rev Mol Cell Biol. 5, 836-847 (2004).
- Kohn-Gaone, J., Gogoi-Tiwari, J., Ramm, G. A., Olynyk, J. K., Tirnitz-Parker, J. E. The role of liver progenitor cells during liver regeneration, fibrogenesis, and carcinogenesis. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 310, G143-G154 (2016).
- Lu, W. Y., et al. Hepatic progenitor cells of biliary origin with liver repopulation capacity. Nat Cell Biol. 17, 971-983 (2015).
- Prakoso, E., et al. Analysis of the intrahepatic ductular reaction and progenitor cell responses in hepatitis C virus recurrence after liver transplantation. Liver Transpl. 20, 1508-1519 (2014).
- Tirnitz-Parker, J. E., Tonkin, J. N., Knight, B., Olynyk, J. K., Yeoh, G. C. Isolation, culture and immortalisation of hepatic oval cells from adult mice fed a choline-deficient, ethionine-supplemented diet. Int J Biochem Cell Biol. 39, 2226-2239 (2007).
- Van Hul, N. K., Abarca-Quinones, J., Sempoux, C., Horsmans, Y., Leclercq, I. A. Relation between liver progenitor cell expansion and extracellular matrix deposition in a CDE-induced murine model of chronic liver injury. Hepatology. 49, 1625-1635 (2009).
- Clouston, A. D., et al. Fibrosis correlates with a ductular reaction in hepatitis C: roles of impaired replication, progenitor cells and steatosis. Hepatology. 41, 809-818 (2005).
- Forbes, S. J., Newsome, P. N. Liver regeneration - mechanisms and models to clinical application. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 13, 473-485 (2016).
- Akhurst, B., et al. A modified choline-deficient, ethionine-supplemented diet protocol effectively induces oval cells in mouse liver. Hepatology. 34, 519-522 (2001).
- Shinozuka, H., Lombardi, B., Sell, S., Iammarino, R. M. Early histological and functional alterations of ethionine liver carcinogenesis in rats fed a choline-deficient diet. Cancer Res. 38, 1092-1098 (1978).
- Knight, B., Tirnitz-Parker, J. E., Olynyk, J. K. C-kit inhibition by imatinib mesylate attenuates progenitor cell expansion and inhibits liver tumor formation in mice. Gastroenterology. 135, 969-979 (2008).
- Kohn-Gaone, J., et al. Divergent Inflammatory, Fibrogenic, and Liver Progenitor Cell Dynamics in Two Common Mouse Models of Chronic Liver Injury. Am J Pathol. 186, 1762-1774 (2016).
- Knight, B., et al. Attenuated liver progenitor (oval) cell and fibrogenic responses to the choline deficient, ethionine supplemented diet in the BALB/c inbred strain of mice. J Hepatol. 46, 134-141 (2007).
- Dwyer, B. J., Olynyk, J. K., Ramm, G. A., Tirnitz-Parker, J. E. TWEAK and LTbeta Signaling during Chronic Liver Disease. Front Immunol. 5, 39 (2014).
- Karin, M., Clevers, H. Reparative inflammation takes charge of tissue regeneration. Nature. 529, 307-315 (2016).
- Ruddell, R. G., et al. Lymphotoxin-beta receptor signaling regulates hepatic stellate cell function and wound healing in a murine model of chronic liver injury. Hepatology. 49, 227-239 (2009).
- Tirnitz-Parker, J. E., et al. Tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis is a mitogen for liver progenitor cells. Hepatology. 52, 291-302 (2010).
- Viebahn, C. S., Yeoh, G. C. What fires prometheus? The link between inflammation and regeneration following chronic liver injury. Int J Biochem Cell Biol. 40, 855-873 (2008).
- Hayner, N. T., Braun, L., Yaswen, P., Brooks, M., Fausto, N. Isozyme profiles of oval cells, parenchymal cells, and biliary cells isolated by centrifugal elutriation from normal and preneoplastic livers. Cancer Res. 44, 332-338 (1984).
- Tee, L. B., Smith, P. G., Yeoh, G. C. Expression of alpha, mu and pi class glutathione S-transferases in oval and ductal cells in liver of rats placed on a choline-deficient, ethionine-supplemented diet. Carcinogenesis. 13, 1879-1885 (1992).
- Chayanupatkul, M., et al. Hepatocellular carcinoma in the absence of cirrhosis in patients with chronic hepatitis B virus infection. J Hepatol. 66, 355-362 (2017).
- Mittal, S., et al. Hepatocellular Carcinoma in the Absence of Cirrhosis in United States Veterans is Associated With Nonalcoholic Fatty Liver Disease. Clin Gastroenterol Hepatol. 14, 124-131 (2016).
