Summary
一贯地打扫优惠券表面良好定义过程缺乏被确定为低和可变的经济复苏，在清理核查的主要贡献。这份手稿描述的清洗不锈钢优惠券正确的协议。
Abstract
这项工作的目的是找出影响医药残留回收表面的不锈钢优惠券的参数。一系列因素进行评估，包括药物产品穗水平、 扣过程、 药物辅料比率，分析师向分析师变异性、 盘中变异性和清洁程序的优惠券。一贯地打扫优惠券表面良好定义过程缺乏被确定为低和可变的经济复苏的主要原因。评估的清洁表面的地方清洁解决方案 (CIP) 优惠券给高价回收 (> 90%) 和可重复性 （Srel≤ 4%） 无论以前评估的条件。该方法已成功应用的清洁验证的小分子 (MW < 1,000 Da) 以及大分子 (MW 到 50,000 Da)。
Introduction
应在用于制造的中间体及其后续版本之前验证非专用设备的清洁和在产品的活性药物成分 (Api)，改变以防止交叉污染。清洁程序应包含足够的细节，以使操作者能以重现性好和有效的方式，每种类型的设备，这些程序应根据美国食品和药物管理局 (FDA) 要求1验证。无数的警告信，由于不足清洗2，，34、 未能验证清洗的验证方法，以及未能遵循 FDA 已发出5的清洗程序。21 CFR §211.67 概述了成功的清洗验证所需的要求。
它是清洁验证分析方法的验证上不锈钢优惠券与同一表面/完成作为制造设备的行业标准。不锈钢优惠券 （例如，50 厘米2） 用于表示设备表面的清洁验证实验在实验室里。期间的发展，这些分析方法验证的利益 （即，应恢复从设备表面的残留） 样本被涨到了目标残留测定的最大允许结转 (MACO) 限制的不锈钢优惠券上。基于接受曝光极限的定义为，病人可以得到接触过，没有健康的不良影响 （没有观察到不良-影响-级，NOAEL） 的限制，确定了这一级别。
分析师或进行抽汲的制造经营必须遵循结构化的程序，以确保经济复苏是可再生的无论由谁进行抽汲。程序应明确详细说明拭子类型、 使用数量的拭子，稀释剂，溶剂用量，精确的扫描模式，适用于采样表面，所花费的时间抽汲、 提取样品，检测（紫外、 荧光、 质谱、 总有机碳等）的方法，萃取技术从拭子头的物质数量的笔画数等。
此外影响样品回收的优惠券，表面、 因此，在设备表面的所有上述因素也发挥了作用。沉积的薄膜材料表面上的或由于一个或多个不锈钢 （如、 铁、 铬和镍） 中的元素的氧化态的变化，可能修改表面的优惠券6，，78。再生的表面的不锈钢优惠券回其原始状态的定量的交换过程的成功至关重要。研究，不锈钢优惠券不被恰当地清洁，表明恢复包括分析师到另一个，不同的药物或各种穗水平9，，1011，变异性。上一张优惠券十复制恢复中的标准偏差可达 14%和 26%五优惠券9日。它是重要的是注意到，相对标准偏差 (Srel) 值增加随着越来越多的复制或随着越来越多的使用优惠券 （即，而不是在相同的优惠券上扣五次五优惠券）11。在这种情况下，变化不能解释为随机波动。尽管如此，他们的研究结果可以解释我们的清洁表面的优惠券会影响经济复苏。在本文中描述的结果说明恢复结果显著增加和减少变异性正确清洁表面的不锈钢优惠券后。
清洁--就地 (CIP) 是设备的清洁表面，包括最小或没有拆卸设备自动化的方式。在 CIP 清洗过程，期间连续洗与其后酸基地定义的过程执行删除有机和无机残留物。表面活性剂、 螯合的化合物或络合剂通常添加到 CIP 解决方案提高效率的清洗设备表面的任何产品。清洗效率取决于几个参数，包括选择和浓度的 CIP 解决方案 （即，类型和组成基地、 酸及表面活性剂），清洗时间、 温度 (通常为 60-80 ° C)、 污染类型和难清洁部分12的存在。基于类型的药物产品，CIP 解决方案 100 和 200 已选择要用于清洗不锈钢优惠券用于清洁验证，因为它模拟的 CIP 过程用于清洗生产设备。
这项研究报告影响药物残留回收不锈钢优惠券的表面的不同因素的影响，并建议为小分子、 治疗蛋白和抗体分析清洗方法开发的最佳做法。一贯地打扫优惠券表面良好定义过程缺乏被确定为低和可变的经济复苏的主要原因。当表面的优惠券正确清洗13得到高、 重现性好的恢复。
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Protocol
1.样品溶液
- 计算基础的最大允许结转 (MACO) 治疗剂量标准药物清洗极限 (CL)。
注意： 在这里，药物 A 的清洗限制 (CL) 已被计算为 2.4 微克每 50 厘米2的基础的最大允许结转 (MACO) 治疗剂量标准。清洁验证是在 50%、 100%和 150%清洗限制执行的。清洁验证被评定为两种制剂 （2.5%及 60 %w / w 药物负载）。
2.清洗程序优惠券
- 最初的方法
- 通过冲洗和抹面为 10 ~ 15 秒两次水，两次与甲醇，以消除任何残余的存款清洁代用券。甲醇是有毒且极不稳定，在引擎盖执行此过程。
- 先进的方法
- 使用地方清洁解决方案
- 在室温下设置 sonicator。Sonicator 有没有权力设置调整，因此设置的时间给出足够的清洗结果。
- 沉浸在高性能液相色谱法 (HPLC) 级水优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 沉浸在 0.1%碱性洗涤剂溶液 HPLC 级水中优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 沉浸在高效液相色谱法水优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 沉浸在 0.1%酸性洗涤剂溶液在高效液相色谱法水优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 沉浸在高效液相色谱法水优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 采用酸-基地-过氧化物
注意： 这是一种替代的方法，包括使用酸、 碱，、 过氧化氢而不是碱性和酸性洗涤剂。- 在室温下设置 sonicator。Sonicator 有没有权力设置调整，因此设置的时间给出足够的清洗结果。
- 沉浸在水中的优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 沉浸在 0.1 M 氢氧化钠优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 沉浸在水中的优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 沉浸在 0.1 M 盐酸优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 沉浸在水中的优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 沉浸在 0.1 毫克/毫升 NaNo2 优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 沉浸在水中的优惠券、 超声波几为 2 分钟。
- 使用地方清洁解决方案
3.抽汲过程
- 装入不锈钢优惠券使用双面胶的带 250 毫升 （或 500 毫升） 的塑料烧杯底部。
- 守住烧杯，使扣球和抽汲过程很容易。这也减少了一些不良的意外事故，如过度角时抽汲。
- 在回旋在表面图案上的优惠券使用容积式移液管注入特定浓度和制订 （例如，为 12 微克/毫升 2.5 %w / w 药物 A 负荷 200 微升） 定义的体积块。
- 等待，直到表面的优惠券是干 (~ 3-10 分钟，根据波动的样品)。
- 蘸干拭子在用稀释剂 2 毫升的小瓶 (甲醇： 甲酸 100:0.2 音量)。
- 按打击的小瓶里面拭子卸下多余的溶剂。
- 坚定地擦表面的均匀、 重叠的一边到另一边笔画优惠券，直到总 50 厘米2试验区用湿棉棒一边擦干。
- 重复擦拭的过程 （步骤 3.7） 使用拭子的同一侧。
- 两次拭四个边的优惠券。
- 翻转到另一边拭子和旋转 90 °，顺时针或逆时针旋转; 优惠券因此，旋转抽汲由 90 ° 的方向。
- 重复详细步骤 3.7-3.9 的抽汲动议。后的表面采样，砍进溶剂瓶用剪刀的拭子头。
- 旋转 90 ° 向同一方向前选择优惠券同时重复用第二个签抽汲过程。
- 超声波几每小瓶含两个拖把头 5 分钟，然后 10 涡 s。
- 将溶液转移到高效液相色谱法小瓶和标签作为工作液。
4.计算恢复
- 追样
- 通过混合 200 µ L 每个优惠券扣用的稀释剂 1,800 微升解决方案编写控制解决方案。
- 运行色谱系统根据表 1中列出的条件。
- 计算基于工作解决方案峰下的相对面积拭子工作液复苏 (AW) 和控制解决方案 (C)。
- 重复此过程三个优惠券和计算的平均回收率和相对标准偏差 (Srel)。
注： 在此处使用的所有分析方法根据 ICH Q2(R1) 准则进行了验证。材料一节中列出的色谱条件。
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Representative Results
从最初的尝试清洗验证药物代表结果都列在表 2。优惠券洗干净根据实验部分中的详细步骤之前，不一致的结果得出不同穗层面，对于不同比例的 API/辅料，不同分析师，甚至在不同的日子同样的分析师。观察到的变异性的复苏中需要加以解决，为一些结果失败的验证要求 (60%< 恢复 < 150%)，如为 60%的药物恢复负载限制，在所有清洗。
变异性在表 2中观察到的第一类是从相关的恢复结果 （列在括号中的数字），绝大多数高Srel可以看出变异性的精度。此外对预期的分析师向分析师变异性 （参考13中所示的数据） 中，逐日也对于观测与所有其他条件不变，一位分析师前两个实验 （在载药量 2.5%）表 2中所示。不一致的恢复观察在不同穗水平的 50%、 100%和 150%的清洗极限 (Srel达 16%，60%的药物在 150%清洗限制加载)，无论药物负载或做实验的分析师。此外，存在着差异，甚至在不同的 API/辅料配比、 2.5%和 60%载药量 (表 2) 和报告中引用1350%药物加载)。低的配方给最大回收率平均，暗示赋形剂提高采收率的药物从优惠券。很有可能 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine （杜邦），表面活性剂，屏蔽复合从金属螯合物相互作用的有机药物和增强药物从优惠券表面去除时药物/辅料比率较低。
基于类型以上讨论，最初的方法来提高采收率是变异性的重建的提取方法和实验条件，以期获得一致、 高回收率。调整参数包括： 抽汲技术、 稀释剂 （不同溶剂，各种有机水溶液比率、 不同酸和酸的浓度） 和加标溶剂，ph 值的穗状花序和稀释剂，扣球技术，药物从拭子的提取工艺。一些实验将的平均回收率和相对标准偏差的四个不同券图 1示。主要的结论是没有上述变化消除了先前所观察到的变异性，在表 2中。无论改变的实验因素，在从一张优惠券到另一个恢复 (Srel) 变异是明显和在某些情况下它是 > 20%。在实验误差范围内几乎所有的这些实验被认为不具有统计学差异。每个优惠券表面的个人恢复和平均回收率 (ΔRecovery) 之间的区别如图 2所示。很明显，平均回收率是从一张优惠券表面不同的另一个。因此，优惠券表面预计将观察到的变异性的主要贡献。
没有恢复以前观察到的变异是由于优惠券优惠券变异的可能性很大。清洁验证实验为 60%的药物负荷分别进行重复六次，每个尖到四个优惠券的相同材料的配方和表面光洁度，都来自同一供应商。很明显从图 3中所示，60%制定恢复不是一项试验到另一个，与低回收率随着实验的进行的一般趋势非常重现性好的结果。此外，一些差异之间优惠券在这一提法 (图 2)。观察到的变化表明，表面的各种优惠券不相同和互动以不同的方式与矩阵。
第一种方法尽量减少优惠券差异是彻底清除表面的优惠券。根据实验部分中提出的程序清洗了优惠券用于获取图 3中的恢复。在图 3 中介绍了清洗优惠券后的恢复结果。很明显的恢复是一项试验到另一个几乎重现性好和优惠券在恢复的差异最小化。
表 2显示恢复结果的比较之前, 和之后清洗在相同的实验条件下的优惠券。可以得出以下结论： 1） 所有加标回收率高 （90-100%); 2） 每个扣级别Srel值是可以接受及比以前报告的结果，对未清洗的优惠券，3） 从一穗水平恢复到另一个变化最小化，制定 4） 的差异并不影响经济复苏的要小得多。
优惠券用 CIP 清洗解决方案然后用于清洗化合物 B （另一种小分子） C 和 D （大的分子，即，生物制剂） 在不同的配方和穗各级核查。为药物 A 从实验中得出相同的结论，适用于药物 B、 C 和 D （详细结果参考13中所示）。回收率高制得跨分子大小和理化性质的优惠券系统的清洗方法。
图 1.平均恢复从四个优惠券获得。误差线代表相对标准偏差从四个券四项试验。实验数量： 1)正常的穗状花序， 2) 10%蚁酸， 3)没有蚁酸， 4)在穗解决方案中，没有水5)高安慰剂百分比 （97%)， 6)没有安慰剂， 7)用刮刀把，挤压拭子8)添加离心的步骤，和9) 0.1%盐酸。请点击这里查看此图的大版本。
图 2.恢复 (ΔRecovery) 从四个优惠券获得差异。ΔRecovery 是优惠券上的恢复和四个优惠券，平均回收率之间的区别。实验数量： 1)正常的穗状花序， 2) 10%蚁酸， 3)没有蚁酸， 4)在穗解决方案中，没有水5)高安慰剂百分比 （97%)， 6)没有安慰剂， 7)用刮刀把，挤压拭子8)添加离心的步骤，和9) 0.1%盐酸。请点击这里查看此图的大版本。
图 3.在恢复的药物 A 在 2.5%药物/辅料比清洗前后的变异性。清洁的优惠券，同时开放之前恢复值对应实心三角形符号清洗优惠券后对应的恢复值。误差线代表相对标准偏差从四个券四项试验。请点击这里查看此图的大版本。
表 1： 色谱条件。
表 2.飙升回收率为不同药物负荷前、 后清洗优惠券根据实验部分中的步骤。
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Discussion
从不锈钢优惠券 API 残留量低和可变的经济复苏所作的主要贡献被追溯到缺乏明确规程的优惠券表面清理。清洁表面的优惠券导致一致、 准确的加标的回收和重复性好的结果。从不锈钢优惠券回收率高的示威，从制造设备使用经过验证的方法获得的实际清洗验证结果应该是准确和精确，反光的设备上的残留水平以最低风险的假阴性率为可能危及病人安全的产品的结转。
其次是分析师要解决低且不稳定的复苏最初的方法是通过修改实验条件如: %的有机稀释剂、 扣过程、 类型和强度的酸，用于在扣解决方案等。这种方法并没有解决低和不一致的恢复问题。尽管如此，上述是完全解决有关问题时，不锈钢充分清洗使用地方清洁解决方案。这一成就导致大大增加对清洁验证的制造设备的成功传递的机会。它是重要的是要注意，这里使用 CIP 解决方案仅限于制药业和其他类型的行业（加工的食品、 乳制品、 化妆品等），因此应选择合适的 CIP 解决方案。CIP 解决方案和清洗工艺的选择是成功的这一过程的关键步骤。这里介绍议定书 》 将有助于更好的设计在制药业，以及其他行业的分析师和执行成功的清洁验证。工作也将有助于尽量减少批次和/或产品到产品的交叉污染，可能会影响人体健康。
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Disclosures
没有金融利益冲突的存在。
Acknowledgments
没有供资机构支持这项工作。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| stainless steel coupons | GlobePharma (New Brunswick, NJ ). | SS316-20RA-50cm2 | |
| Clean in place solutions (CIP100 and CIP200) | were obtained from Steris Corporation (Mentor, OH) | 1D10BG | Alkaline detergent and acid detergent, respectively |
| Positive displacement pipettes | Gilson (Middleton, WI). | ||
| HPLC grade water | Millipore Milli-Q Advantage Water Purification System (Darmstadt, Germany) or from Honeywell Burdick & Jackson (Muskegon, Michigan) | 7732-18-5 | |
| HPLC grade Methanol | EMD | MX0475-1 | |
| glacial acetic acid | EMD | MAX0073P5 | |
| HPLC grade Acetonitrile | J.T. Baker (Avantor Performance Materials, Center Valley, PA) | 75-05-8 | |
| Trifluoroacetic acid | J.T. Baker (Avantor Performance Materials, Center Valley, PA) | 75-05-8 | |
| Chromatography column Zorbax Eclipse | XDB-C18, 4.6 x 100 mm, 3.5 µm HPLC column | UNSPSC – 41115709 | |
| Vanquish UHPLC system | Thermo Fisher Scientific, Germering, Germany | ||
| Branson B8510 Ultrasonic cleaner | Branson Ultrasonics (Danbury, CT, USA) | model (8510-D7H) |
References
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