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Behavior

चलने बिल्ली में बाधा स्मृति के लिए Cortical योगदान का अध्ययन करने के प्रतिवर्ती शीतलक प्रेरित निष्क्रियता

Published: December 11, 2017 doi: 10.3791/56196
Automatic Translation
1,2, 1,2,3,4,5
1Cerebral Systems Laboratory, University of Western Ontario, 2Graduate Program in Neuroscience, University of Western Ontario, 3Brain and Mind Institute, University of Western Ontario, 4Department of Physiology and Pharmacology, University of Western Ontario, 5Department of Psychology, University of Western Ontario

Summary

अंगों के सावधान समंवय की आवश्यकता प्राकृतिक वातावरण में जटिल गतिवान पार्श्विका प्रांतस्था के क्षेत्रों शामिल है । निंनलिखित प्रोटोकॉल प्रतिवर्ती शीतलक प्रेरित निष्क्रियता का उपयोग करने के लिए चलने बिल्ली में स्मृति-निर्देशित बाधा परिहार में पार्श्विका 5 क्षेत्र की भूमिका का प्रदर्शन का वर्णन ।

Abstract

जटिल, प्राकृतिक इलाके पर, एक पर्यावरणीय बाधा के बारे में संवेदी जानकारी तेजी से परिहार के लिए हरकत आंदोलनों को समायोजित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । उदाहरण के लिए, बिल्ली में, एक आसंन बाधा के बारे में दृश्य जानकारी परिहार के लिए कदम जुटाना कर सकते हैं । हरकत अनुकूलन भी दृष्टि से स्वतंत्र हो सकते हैं, एक उंमीद की बाधा से पैर को अचानक स्पर्श आदानों के रूप में परिहार के लिए सभी चार पैरों के घुसने को संशोधित कर सकते हैं । इस तरह के जटिल हरकत समंवय supraspinal संरचनाओं, जैसे पार्श्विका प्रांतस्था के रूप में शामिल है । इस प्रोटोकॉल के उपयोग का वर्णन प्रतिवर्ती, शीतलक-प्रेरित cortical निष्क्रियता के लिए पार्श्विका प्रांतस्था योगदान का आकलन करने के लिए स्मृति-निर्देशित बाधा गतिवान बिल्ली में । छोटे ठंडा छोरों, cryoloops के रूप में जाना जाता है, विशेष रूप से ब्याज की असतत क्षेत्रों को निष्क्रिय करने के लिए एक खुलकर व्यवहार के लिए उनके योगदान का आकलन के आकार का है । इस तरह के तरीकों को बिल्ली में स्मृति-निर्देशित बाधा परिहार में पार्श्विका क्षेत्र 5 की भूमिका स्पष्ट करने के लिए इस्तेमाल किया गया है ।

Introduction

प्राकृतिक पर, असमान इलाके, एक बाधा है, जो दृष्टि या स्पर्श के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता है के बारे में संवेदी जानकारी, तेजी से परिहार के लिए गतिवान संशोधित कर सकते हैं । आंदोलनों कदम के इस सावधान समंवय एकाधिक cortical क्षेत्र1,2शामिल है । उदाहरण के लिए, मोटर प्रांतस्था के क्षेत्रों3,4 और पार्श्विका प्रांतस्था5,6,7 बाधा परिहार जैसे जटिल हरकत कार्यों के दौरान फंसाया गया है । चौपाया जानवरों में, बाधा परिहार के लिए आवश्यक कदम मॉडुलन दोनों forelegs और hindlegs के लिए विस्तार करना चाहिए. यदि आगे गतिवान foreleg और hindleg बाधा निकासी के बीच देरी हो रही है (जो एक जानवर के रूप में पैदा हो सकता है ध्यान से एक जटिल, प्राकृतिक पर्यावरण पीछा शिकार के माध्यम से चलने), स्मृति में बनाए रखा बाधा के बारे में जानकारी गाइड करने के लिए प्रयोग किया जाता है hindleg बाधा पर कदम एक बार फिर से शुरू घूमना ।

असतत cortical क्षेत्रों को निष्क्रिय करने के उद्देश्य से प्रयोगात्मक तकनीक स्मृति निर्देशित बाधा गतिवान के लिए cortical योगदान का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । शीतलक प्रेरित cortical निष्क्रियण एक खुला व्यवहार करने के लिए cortical योगदान का आकलन करने के लिए एक प्रतिवर्ती, विश्वसनीय, और प्रतिलिपि विधि प्रदान करता है8. Cryoloops स्टेनलेस स्टील टयूबिंग से बना ब्याज के cortical क्षेत्र के लिए विशिष्ट आकार के हैं, loci की अत्यधिक चयनात्मक और असतत निष्क्रियता सुनिश्चित करने । एक बार प्रत्यारोपित, ठंडा मेथनॉल एक cryoloop के लुमेन के माध्यम से पंप प्रांतस्था के क्षेत्र को सीधे पाश के नीचे < 20 ° c को ठंडा । इस महत्वपूर्ण तापमान के नीचे, synaptic ट्रांसमिशन प्रांतस्था के क्षेत्र में सीधे पाश के नीचे हिचकता है । इस तरह के निष्क्रियण बस मेथनॉल के प्रवाह को बंद करके उलट जा सकता है । इस विधि संवेदी प्रसंस्करण और व्यवहार के लिए cortical योगदान का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है9,10,11,12,13,14,15 , 16 , 17, साथ ही saccadic नेत्र आंदोलनों18 और स्मृति-निर्देशित बाधा गतिवान19के मोटर नियंत्रण ।

इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य बिल्ली में हरकत समंवय के लिए पार्श्विका cortical क्षेत्रों की भागीदारी का आकलन करने के लिए प्रतिवर्ती कूलिंग-प्रेरित निष्क्रियताओं का उपयोग करने के लिए है । विशेष रूप से, स्मृति-निर्देशित बाधा गतिवान के साथ या बिना सक्रिय पार्श्विका प्रांतस्था की जांच की गई । इन तरीकों को सफलतापूर्वक चल बिल्ली19में स्मृति निर्देशित बाधा परिहार में पार्श्विका 5 क्षेत्र की भूमिका का प्रदर्शन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है ।

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Protocol

सभी प्रक्रियाओं की देखभाल और प्रयोगशाला जानवरों के उपयोग के लिए राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद गाइड के अनुपालन में आयोजित किया गया (आठवें संस्करण; २०११) और कनाडा की देखभाल और प्रायोगिक जानवरों के उपयोग के लिए पशु देखभाल गाइड पर परिषद (१९९३), और थे विश्वविद्यालय के पश्चिमी ओंटारियो पशु देखभाल पर विश्वविद्यालय परिषद की उपसमिति द्वारा अनुमोदित ।

निंनलिखित प्रक्रिया चल बिल्ली में हरकत नियंत्रण के लिए cortical योगदान का अध्ययन प्रयोगों के लिए लागू किया जा सकता है ।

1. उपकरण

  1. बाधा स्मृति का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया तंत्र का निर्माण ।
    नोट: तंत्र एक २.४३ मीटर लंबे, 29 सेमी चौड़ा 18 सेमी उच्च स्पष्ट ऐक्रेलिक दीवारों (चित्रा 1) से घिरा रास्ता के होते हैं । तंत्र के साथ आधे रास्ते में एक संकीर्ण स्लॉट एक २५.८ सेमी चौड़ी एक्स 3 मिमी मोटी बाधा पर उठाया जा सकता है या एक लीवर का उपयोग कर रास्ता से हटा दिया चलने की सतह के नीचे घुड़सवार ।
  2. यह सुनिश्चित करने के लिए कि पशुओं का ध्यान खाने पर बनाए रखा जाए, हाथ को उठाने या बाधा को कम करने के लिए उपयोग करने से बचें । इसके बजाय, बाधा उठाया जा सकता है या प्रयोगकर्ता के पैर का उपयोग कम करने के लिए रास्ता के नीचे लीवर ले, प्रयोगकर्ता जानवर खिला जारी रखने की अनुमति ।
  3. ठीक से लीवर प्रणाली को बनाए रखने के लिए सुनिश्चित करें कि बाधा उठाया जा सकता है या कम soundlessly ।
  4. एक छोटे से ऊंचा मंच का प्रयोग करें (23 सेमी लंबी x 23 सेमी चौड़ा x 16 सेमी उच्च) जिस पर नरम खाना रखा जाता है, जानवरों के आंदोलनों का मार्गदर्शन करने के लिए ।
  5. एक ईथरनेट कैमरा (५४ फ्रेंस/s) का उपयोग कर सभी परीक्षणों को रिकॉर्ड एक तिपाई पर घुड़सवार १.८५ दूर रास्ता के midline से मीटर ।

2. प्रशिक्षण प्रक्रियाएं

नोट: सफल डेटा अधिग्रहण के लिए, व्यवहार परीक्षण पूर्ववर्ती प्रशिक्षण की अवधि सुनिश्चित करता है कि प्रत्येक जानवर ठीक से परीक्षण कमरे और उपकरण के लिए आदत है । एक उपंयास पर्यावरण को दोहराया जोखिम चौंकाने या अंय तनावपूर्ण व्यवहार को कम करने में सहायता करेगा ।  Acclimation जानवरों के बीच भिंन हो सकते है और प्रशिक्षण के 1-2 महीने की आवश्यकता हो सकती है । प्रारंभिक acclimation सत्र लंबाई में 5 मिनट के लिए ध्यान और पशु की प्रेरणा खाने के आधार पर हो सकता है । बाद के सत्र के लिए समय की अवधि बढ़ाने के उद्देश्य है कि पशु (आमतौर पर लगभग 20-25 मिनट) काम करने के लिए प्रेरित किया जाना चाहिए ।

  1. मोल परिपक्व (> 6 महीने की उम्र) किसी भी वजन या सेक्स के एक वाणिज्यिक प्रयोगशाला ब्रीडर से घरेलू लघु बाल बिल्लियों ।
    ध्यान दें: प्रेरणा भोजन के लिए काम करने के लिए और एक सहकारी स्वभाव चयन मानदंड शामिल जब विचार जो जानवरों के अध्ययन में शामिल किया जाना चाहिए ।
  2. एक दोहन है जो एक 1 मीटर लंबे पट्टा संलग्न है पहनने के लिए प्रत्येक जानवर Acclimate । रास्ता के मध्यबिंदु पर रास्ता ऊपर एक शेल्फ के लिए पट्टा लंगर ।
    नोट: यह जानवर किसी भी तनाव के बिना तंत्र के केंद्रीय भाग के साथ चलने के लिए अनुमति देता है, इस प्रकार के पशु तंत्र के इस हिस्से के भीतर रहने के लिए प्रोत्साहित । ऐसी सीमाओं की स्थापना एक गतिमान परीक्षण विषय के साथ काम करने के लिए सहायक है ।
  3. रास्ता पर जानवर प्लेस, यह मंच है जिस पर नरम भोजन रखा जाता है से खाने के लिए अनुमति दी ।
    नोट: इस प्रारंभिक प्रशिक्षण का एक उद्देश्य यह सुनिश्चित करना है कि जानवर आसानी से भोजन मंच के बाद जब आगे चले गए, और दोहन और पट्टा के साथ आराम से चल सकता है । सकारात्मक सुदृढीकरण के रूप में नरम भोजन का उपयोग पशु प्रत्येक प्रशिक्षण या परीक्षण सत्र भर में केंद्रित रहने के लिए प्रोत्साहित करती है, और एक आरामदायक काम कर वातावरण को बढ़ावा देता है ।
  4. सुनिश्चित करें कि पशु हैंडलिंग के साथ सहज है, उदाहरणों सहित, जहां जानवर रास्ता के शुरू क्षेत्र में ले जाया जाना चाहिए ।

3. व्यवहार प्रशिक्षण और परीक्षण प्रोटोकॉल

नोट: बाधा स्मृति दो मानदंड: एक नेत्रहीन निर्भर बाधा स्मृति कार्य में मूल्यांकन किया है, और एक स्पर्श निर्भर बाधा स्मृति कार्य । दोनों मानदंड प्रारंभिक प्रशिक्षण और बाद में परीक्षण के दौरान इस्तेमाल किया जाना चाहिए ।

  1. दृश्य बाधा स्मृति
    1. दृश्य बाधा स्मृति का आकलन करने के लिए, रास्ता (चित्रा 2a) पर बाधा बढ़ा. बाधा के दूर ओर मंच लगाएं । रास्ता के शुरू क्षेत्र में पशु प्लेस ।
    2. पशु भोजन दृष्टिकोण, केवल अपने forelegs के साथ बाधा पर कदम के लिए मंच से खाने के लिए अनुमति देते हैं ।
    3. जानवर के रूप में खाने के लिए जारी है, बाधा कम ऐसी है कि यह रास्ता किसी भी आगे दृश्य या स्पर्श आदानों को रोकने के साथ फ्लश हो जाता है ।
    4. एक परिवर्तनीय देरी अवधि के बाद, भोजन फिर से आगे बढ़ना जानवर घूमना फिर से शुरू करने के लिए प्रोत्साहित करने के लिए; यह देरी 2 मिनट के ऊपर से कम 1 एस हो सकता है ।
    5. महत्वपूर्ण बात, परीक्षण प्रदर्शन जहां बाधा अनुपस्थित है क्रम में बाधा और एक सीखा परिहार प्रतिक्रिया के विकास के लिए habituation को रोकने के लिए । इस तरह के दृश्य बाधा-अनुपस्थित परीक्षणों में, बाधा रास्ता के शुरू क्षेत्र में पशु रखने से पहले उस पर नहीं उठाया है कि सुनिश्चित करें ।
    6. निरीक्षण hindleg बाधा वर्तमान और बाधा-अनुपस्थित परीक्षणों में कदम ठेठ हरकत व्यवहार और बरकरार दृश्य बाधा स्मृति को ठंडा करने से पहले सत्यापित करने के लिए । सुनिश्चित करें कि पशु संपर्क के बिना बाधा स्पष्ट कर सकते हैं, और है कि सभी चार पैरों के कदम काफी बाधा वर्तमान परीक्षणों में ऊंचा है ।
      नोट: प्रशिक्षण परीक्षणों के वीडियो देख इस सत्यापन में सहायता कर सकते हैं ।
  2. स्पर्श बाधा स्मृति
    1. स्पर्श बाधा स्मृति का आकलन करने के लिए, यह सुनिश्चित करना है कि बाधा रास्ता के शुरू क्षेत्र में जानवर रखने से पहले नहीं उठाया है (चित्रा बीसी) ।
    2. अनुमति पशु बाधा स्लॉट के दूर ओर रखा भोजन मंच की ओर चलने के लिए ।
    3. के रूप में जानवर खाती है, खाना पकवान के नीचे रास्ता पर बाधा बढ़ा, बाधा के किसी भी दृश्य इनपुट को रोकने ।
    4. भोजन के रूप में आगे बढ़ जाता है, ध्यान दें कि पशु इस पर कदम रखने से पहले अपने forelegs के साथ बाधा से संपर्क करना चाहिए ।
    5. जानवर अपने सामने-और hindlegs के बीच बाधा झीनी करते हुए खाने को जारी रखने के लिए अनुमति दें । इस समय के दौरान, बाधा इतनी कम है कि यह रास्ता किसी भी आगे दृश्य या स्पर्श आदानों को रोकने के साथ फ्लश हो जाता है ।
    6. एक परिवर्तनीय देरी अवधि के बाद, भोजन आगे बढ़ना एक बार फिर से पशु को प्रोत्साहित करने के लिए चलना शुरू करते हैं ।
    7. महत्वपूर्ण बात, परीक्षण जहां बाधा अनुपस्थित है प्रदर्शन और कोई foreleg संपर्क बाधा और एक सीखा परिहार प्रतिक्रिया के विकास के लिए habituation को रोकने के लिए होता है ।
      1. इन स्पर्श बाधा-अनुपस्थित परीक्षणों में, पशु दृष्टिकोण है और भोजन मंच से खाने के रूप में कदम 3.2.1 में वर्णित है । हालांकि, कदम 3.2.3 में आगे बढ़ने से पहले आमजन और बाधा (स्टेप 3.2.2) को कम करें । यह सुनिश्चित करें कि एक समान विलंब अवधि जहां पशु को भोजन जारी रखने की अनुमति है (step 3.2.4) गतिवान के अंतिम निरंतरता (step 3.2.5) से पहले ।
    8. hindleg बाधा-वर्तमान और बाधा-अनुपस्थित परीक्षणों में घुसने का निरीक्षण करने के लिए सामांय हरकत व्यवहार और बरकरार दृश्य बाधा स्मृति को ठंडा करने से पहले सत्यापित करें ।

4. वीडियो विश्लेषण

नोट: बाधा स्मृति का आकलन करने के लिए, प्रारंभिक प्रशिक्षण के दौरान विश्लेषण और बाद में परीक्षण के बाद ठंडा लूप प्रत्यारोपण शामिल पीक कदम ऊंचाई, कदम निकासी, और पैर की अंगुली और बाधा के लिए प्रत्येक कदम के शिखर पर के बीच क्षैतिज दूरी बढ़ाता है दोनों दृश्य और स्पर्श मानदंड (चित्रा 2c) ।

  1. कस्टम लिखा लिपियों का उपयोग वीडियो का विश्लेषण ।
  2. हर परीक्षण के लिए, प्रत्येक चरण में कैमरे के निकटतम पैर की अंगुली की स्थिति अंकन द्वारा प्रत्येक पैर को ट्रैक ।
  3. हर कदम पथ में उच्चतम बिंदु पर पैर की अंगुली और रास्ता की सतह के बीच सीधा दूरी के रूप में चोटी कदम ऊंचाई उपाय (चित्रा 2c) ।
  4. बाधा वर्तमान परीक्षणों में, बाधा की ऊंचाई से घटाई बाधा स्लॉट के ऊपर सीधे कदम ऊंचाई के रूप में कदम निकासी को मापने.
  5. इसके अतिरिक्त, बाधा वर्तमान परीक्षणों में प्रत्येक चरण के चरम पर पैर की अंगुली और बाधा के बीच क्षैतिज दूरी को मापने ।
  6. पुष्टि करें कि बाधा स्मृति क्षमताओं को बरकरार रखने से पहले की पुष्टि कर रहा है कि चोटी कदम ऊंचाई बाधा वर्तमान परीक्षणों में बाधा-अनुपस्थित परीक्षणों में घुसने की तुलना में ऊंचा है द्वारा शीतलक लूप आरोपण से ।

5. शीतलक लूप (Cryoloop) आरोपण

  1. प्रत्यारोपण 5 और 7 क्षेत्रों पर द्विपक्षीय cryoloops पहले सर्जिकल प्रक्रियाओं8 (चित्रा 3) की सूचना के अनुसार ।
  2. संक्षेप में, प्रत्येक गोलार्द्ध के लिए, एक craniotomy और Horsley से durotomy प्रदर्शन-क्लार्क निर्देशांक A25 करने के लिए20 A15 ansate और पार्श्व sulci के मोड़ को बेनकाब करने के लिए.
  3. स्थिति व्यक्तिगत ठंडा 23 से आकार छोरों गेज पार्श्विका क्षेत्र के cortical सतह के साथ सीधे संपर्क में पाश के साथ स्टेनलेस स्टील hypodermic टयूबिंग 5 या 7 ।
  4. दंत स्टेनलेस स्टील शिकंजा करने के लिए लंगर एक्रिलिक के साथ खोपड़ी के लिए प्रत्येक cryoloop के आधार सुरक्षित ।
  5. अतिरिक्त दंत एक्रिलिक के साथ craniotomies बंद; ऐक्रेलिक किनारों और टांका एक साथ करने के लिए ऊपर त्वचा मार्जिन ड्रा ।

6. Cortical शीतलक प्रोटोकॉल

  1. प्रायोगिक सेटअप
    नोट: परीक्षण कक्ष में पशु लाने से पहले, शीतलक सर्किट तैयार है और परीक्षण किया है । शीतलक सर्किट एक सेवन ट्यूब के साथ एक मेथनॉल जलाशय के होते है (३.२ mm आयुध, १.६ mm आईडी), एक घूमकर पिस्टन पंप, और सूखी बर्फ स्नान polytetrafluoroethylene टयूबिंग के माध्यम से जुड़े (१.६ mm आयुध, ०.५ mm आईडी; चित्र 4) । इसके अतिरिक्त, एक डिजिटल थर्मामीटर की आवश्यकता है ।
    1. बर्फ स्नान में मेथनॉल के २०० मिलीलीटर के लिए ५०० सीसी सूखी बर्फ जोड़ें । फ़िट ट्यूबिंग एक डमी cryoloop के प्रवेश और आउटलेट पर आराम से समाप्त होता है कूलिंग सर्किट को पूरा करने के लिए ।
    2. दो पुरुष thermocouple connectors और एक thermocouple तार से बना एक केबल का उपयोग सतत तापमान की निगरानी के लिए एक डिजिटल थर्मामीटर के लिए thermocouple प्लग संलग्न. सुनिश्चित करें कि इस केबल की लंबाई एक छोर थर्मामीटर में खामियों को दूर किया जाता है जब जानवर के सिर तक पहुँचने के लिए पर्याप्त है ।
    3. पिस्टन स्विच का उपयोग पंप पर बारी है ।
      नोट: मेथनॉल जलाशय से तैयार किया जाना चाहिए, सूखी बर्फ स्नान के लिए पंप के माध्यम से पारित कर दिया, जहां टयूबिंग में बह मेथनॉल-७५ डिग्री सेल्सियस ठंडा हो जाएगा । सर्द मेथनॉल तो बर्फ के स्नान से बाहर निकल जाएँगे और मेथनॉल जलाशय में लौटने से पहले ही संलग्न cryoloop के माध्यम से चलेंगे.
    4. सुनिश्चित करें कि पंप की स्थापना, बर्फ स्नान के भीतर टयूबिंग की लंबाई, और डमी छोरों के लिए बर्फ स्नान से टयूबिंग की लंबाई इष्टतम कर रहे हैं कि डमी cryoloop तापमान के आसपास एक स्थिर राज्य तक पहुँच सकते हैं-५.० ° c.
      नोट: इस प्रारंभिक सेटअप के दौरान प्राप्त तापमान अक्सर ३.० ± १.० डिग्री सेल्सियस के परीक्षण तापमान को प्राप्त करने के लिए पर्याप्त है जब एक ही प्रणाली एक प्रत्यारोपित cryoloop शांत करने के लिए प्रयोग किया जाता है । पर्याप्त शीतलक प्राप्त करने में कठिनाई पंप की गति का समायोजन करके हल किया जा सकता है, बर्फ स्नान के भीतर जलमग्न टयूबिंग की लंबाई में वृद्धि, और/या cryoloop के लिए बर्फ स्नान से टयूबिंग की लंबाई को कम करने ।
    5. यदि आवश्यक हो, एक ट्यूब के अंत फिटिंग और एक flanging उपकरण के साथ ट्यूब के अंत निकला हुआ किनारा के माध्यम से ट्यूब के अंत थ्रेडिंग द्वारा टयूबिंग का एक खंड लंबा । एक इसी तरह निकला हुआ किनारा अंत के साथ एक वांछित लंबाई के टयूबिंग संलग्न एक संबंधक का उपयोग ।
    6. सत्यापित करें कि सभी कनेक्शन सुखद रहे है और कोई लीक मौजूद हैं । एक बार प्रारंभिक सेटअप के साथ संतुष्ट है, बंद पंप स्विच, और डमी cryoloop को दूर; अब एक टेस्ट पशु के लिए सर्किट तैयार किया गया है ।
  2. व्यवहार परीक्षण
    1. परीक्षण उपकरण पर पशु प्लेस । सिर पर दोहन स्लाइड और पशु के आसपास snuggly पट्टा सुरक्षित । पट्टा देते हैं ।
    2. प्रत्यारोपित cryoloop के सुरक्षात्मक टोपी निकालें प्रवेश और आउटलेट ट्यूबों बेनकाब । फ़िट टयूबिंग प्रवेश और cryoloop के आउटलेट ट्यूबों पर आराम से समाप्त होता है । डिजिटल थर्मामीटर के लिए thermocouple प्लग कनेक्ट ।
    3. एक दृश्य (चरण ३.१) या स्पर्श (चरण ३.२) बाधा स्मृति परीक्षण के साथ परीक्षण सत्र शुरू करो । एक यादृच्छिक फैशन में सभी चार प्रकार (दृश्य बाधा-वर्तमान, दृश्य बाधा-अनुपस्थित, स्पर्श बाधा वर्तमान, स्पर्श बाधा अनुपस्थित) के अतिरिक्त परीक्षणों के साथ का पालन करें ।
      नोट: एक ठेठ परीक्षण सत्र परीक्षण के एक ' गर्म ' ब्लॉक के होते हैं, जहां स्मृति निर्देशित बाधा परिहार शीतलक के अभाव में आधारभूत उपायों की स्थापना के लिए मनाया जाता है ।
    4. पिस्टन पंप पर स्विच करें, और cryoloop के लिए प्रतीक्षा करने के लिए ३.० ± १.० ° c (1-2 मिनट) के तापमान तक पहुंचने । फिर, पिस्टन पंप पर बंद किया गया है के बाद परीक्षण के एक ' कूल ' ब्लॉक चलाते हैं । परीक्षणों के इस खंड के दौरान, यदि आवश्यक हो, स्मृति को ठंडा क्षेत्र के योगदान का आकलन-निर्देशित । सुनिश्चित करें कि cryoloop का तापमान पूरे ब्लॉक भर में ३.० ± १.० डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा है ।
      नोट: सभी चार परीक्षण प्रकार यादृच्छिक interspersed पूरे ब्लॉक में होना चाहिए ।
    5. भागो एक अंतिम परीक्षण के ' वार्म ' ब्लॉक पिस्टन पंप के बाद बंद कर दिया गया है, और cryoloop अपने मूल तापमान पर लौट आया है ।
      नोट: आधारभूत व्यवहार कदम इस ब्लॉक के दौरान फिर से स्थापित है । फिर, सभी चार परीक्षण प्रकार बेतरतीब ढंग से ब्लॉक भर में interspersed होना चाहिए ।
  3. साफ-सुथरा
    1. जब व्यवहार परीक्षण निष्कर्ष निकाला है, प्रवेश और आउटलेट ट्यूबों से टयूबिंग हटा दें । अवशिष्ट मेथनॉल कि ट्यूबिंग से ड्रिप समाप्त हो सकता है के प्रति सचेत हो और जानवर परेशान हो सकता है ।
    2. सुनिश्चित करें कि सुरक्षात्मक टोपी की जगह है । कॉलोनी में जानवर लौटने से पहले पट्टा और दोहन निकालें । छांटो टयूबिंग समाप्त होता है (3-4 mm) एक टयूबिंग कटर का उपयोग करने के लिए अगले परीक्षण दिवस पर लीक कनेक्शन को रोकने के ।

7. कूलिंग की हद का सत्यापन

  1. व्यवहार परीक्षण के अंत में, पुष्टि करें कि निष्क्रियण की हद तक प्रांतस्था के क्षेत्र के लिए सीधे प्रत्येक cryoloop पहले रिपोर्ट की गई तकनीकों का उपयोग कर के नीचे प्रतिबंधित है8।
    नोट: यह thermocline मानचित्रण के साथ12 या एक थर्मल इमेजिंग कैमरा13,14,19के साथ सत्यापित किया जा सकता है ।

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Representative Results

इस प्रोटोकॉल को सफलतापूर्वक चलने बिल्ली19में बाधा स्मृति को पार्श्विका प्रांतस्था योगदान की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया है । इस अध्ययन में, cryoloops को पार्श्विका क्षेत्रों में 5 और 7 को तीन वयस्क (> 6 वर्ष की आयु) महिला बिल्लियों (चित्र 5 ए) पर द्विपक्षीय रूप से प्रत्यारोपित किया गया । पशुओं स्पर्श बाधा स्मृति प्रतिमान में ठंडा के अभाव में मूल्यांकन किया गया (गर्म, नियंत्रण हालत), या जब क्षेत्र 5 या 7 द्विपक्षीय निष्क्रिय था ।

कि अध्ययन से प्रतिनिधि परिणाम प्रदर्शित करता है कि जब 5 क्षेत्र द्विपक्षीय था ठंडा, hindleg कदम काफी बाधा वर्तमान परीक्षणों में तनु थी (चित्रा 5d, नीला) । गर्म हालत में, प्रमुख और पीछे hindlegs के लिए मतलब पीक कदम ऊंचाई ९.५ ± २.२ सेमी और ८.० ± २.१ सेमी, क्रमशः था । एक तरह से बहुभिंनरूपी ANOVA से पता चला कि जब क्षेत्र 5 ठंडा था, अग्रणी और पीछे hindlegs के लिए पीक कदम ऊंचाई काफी ४.३ ± २.२ सेमी (पी < 0.0001) और ३.४ ± १.४ सेमी (पी < 0.0001), क्रमशः कम हो गया था । बाधा वर्तमान परीक्षणों में forelegs की चोटी कदम ऊंचाई या बाधा अनुपस्थित परीक्षणों में किसी भी पैर के क्षेत्र 5 निष्क्रियता से प्रभावित नहीं था । इसी तरह, या तो बाधा मौजूद या बाधा-अनुपस्थित परीक्षणों में किसी भी पैर के लिए चोटी कदम ऊंचाई गर्म स्थिति से अलग नहीं था जब क्षेत्र 7 निष्क्रिय कर दिया गया था ।

इसके अलावा, hindleg कदम निकासी इसी तरह प्रभावित जब 5 क्षेत्र निष्क्रिय किया गया था । दोनों गर्म और क्षेत्र 7 ठंडा शर्तों की तुलना में, कदम निकासी अग्रणी hindleg चरण में ४.७ ± २.२ सेमी के लिए कम किया गया था (p < 0.0001; चित्र) और − ५.६ ± १.४ सेमी में ट्रेलिंग hindleg चरण (p < 0.0001) । इसके अतिरिक्त, ट्रेलिंग hindleg के चरण पथ क्षेत्र 5 निष्क्रियता से प्रभावित था, के रूप में चोटी बाधा से पहले हुई, दोनों गर्म और क्षेत्र में कदम के विपरीत 7 ठंडा स्थिति (आंकड़ा5) ।

कुल मिलाकर, पीक कदम ऊंचाई में इस तरह के परिवर्तन, कदम निकासी, और कदम पथ गहरा बाधा स्मृति घाटे संकेत दिया जब 5 क्षेत्र निष्क्रिय किया गया था । महत्वपूर्ण बात, के रूप में क्षेत्र में 5 निष्क्रियता ही बाधा वर्तमान परीक्षणों में कदम hindleg की विशेषताओं को बदल दिया और आंदोलनों कदम बनाने की क्षमता ख़राब नहीं किया, गतिवान में इन मनाया परिवर्तन स्मृति प्रतिबिंबित नहीं, मोटर घाटे । इसके अलावा, थर्मल इमेजिंग व्यवहार परीक्षण के समापन पर प्रदर्शन की पुष्टि की है कि ठंडा क्षेत्र के लिए प्रतिबंधित किया गया था 5 या 7 जब प्रत्येक पाश व्यक्तिगत प्रत्येक गोलार्द्ध के लिए ठंडा था (चित्रा 6). इस प्रकार कुल मिलाकर, इन परिणामों पार्श्विका क्षेत्र के योगदान को प्रदर्शित 5 स्मृति को बिल्ली में निर्देशित बाधा गतिवान ।

Figure 1
चित्र 1: चित्र कैमरा, शीतलक उपकरण, और चलने तंत्र बिल्ली में बाधा स्मृति का आकलन करने के लिए इस्तेमाल चित्रण । एक २.४३ मीटर लंबे, 29 सेमी चौड़ा रास्ता 18 सेमी उच्च स्पष्ट Plexiglas दीवारों से घिरा हुआ है । रास्ता, एक २५.८ सेमी चौड़ा 3 मिमी मोटी बाधा के साथ आधे रास्ते पर उठाया जा सकता है एक संकीर्ण एक रास्ता के नीचे घुड़सवार लीवर का उपयोग कर स्लॉट के माध्यम से रास्ता । प्रत्येक परीक्षण के लिए, जानवर रास्ता के शुरू क्षेत्र में बाधा से कदम के एक जोड़े को रखा गया है । भोजन एक छोटे से ऊंचा मंच पर रखा गया है (23 सेमी लंबी x 23 सेमी चौड़ा x 16 सेमी उच्च) शुरू क्षेत्र के विपरीत बाधा स्लॉट के दूर ओर । सभी परीक्षण एक ईथरनेट कैमरे के माध्यम से दर्ज कर रहे है एक तिपाई के शीर्ष पर घुड़सवार और एक लैपटॉप पर बचाया । यह आंकड़ा वोंग एट अल से संशोधित किया गया है । 19 कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्रा 2: आरेख दोनों दृश्य और स्पर्श बाधा स्मृति कार्यों और कदम माप घूमना बिल्ली में बाधा स्मृति का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया. (ए) दृश्य बाधा स्मृति का आकलन करने के लिए, बाधा जानवर भोजन मंच दृष्टिकोण के रूप में रास्ता पर उठाया है । केवल अपने forelegs के साथ बाधा पर कदम के बाद, पशु को मंच से खाने की अनुमति दी है, के रूप में बाधा छिपकर कम है रास्ता की सतह के साथ फ्लश होता जा रहा है । एक परिवर्तनीय देरी अवधि के बाद, भोजन के आगे चला गया है पशु को प्रोत्साहित करने के लिए चलने को फिर से शुरू । (ख) स्पर्श बाधा स्मृति का आकलन करने के लिए, बाधा जानवर भोजन मंच दृष्टिकोण के रूप में रास्ता पर उठाया नहीं है । के रूप में जानवर खाती है, बाधा चुपचाप रास्ता पर उठाया है सीधे भोजन मंच के नीचे । खाना आगे ले जाया जाता है जानवर के forelegs के लिए इस पर कदम से पहले बाधा से संपर्क के कारण । पशु को अपने forelegs और hindlegs के बीच बाधा की झीनी करते हुए खाना प्लेटफार्म से खाने-पीने को जारी रखने की अनुमति है । इस समय के दौरान, बाधा छिपकर रास्ता से कम है । भोजन एक बार फिर से आगे चले गए है पशु को प्रोत्साहित करने के लिए चलना फिर से शुरू । बाधा स्मृति का आकलन करने के लिए Hindleg कदम मापा जाता है । (ग) स्टेपिंग दोनों दृश्य और स्पर्श बाधा स्मृति प्रतिमान में पीक कदम ऊंचाई, कदम निकासी, और प्रत्येक कदम और बाधा के शिखर के बीच क्षैतिज दूरी को मापने के द्वारा मूल्यांकन किया गया है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्रा 3: cryoloop के योजनाबद्ध । cryoloop एक सुरक्षात्मक टोपी, जो प्रवेश और आउटलेट ट्यूबों पर फिट बैठता है के होते हैं । इन ट्यूबों एक लड़ी पिरोया पोस्ट के माध्यम से चलाने के लिए और पाश है कि ब्याज के क्षेत्र पर cortical सतह के साथ सीधे संपर्क में बैठता रूपों । एक microthermocouple cryoloop तापमान को मापने के लिए पाश के संघ में टांका है. इसके तारों को वापस चलाने के माध्यम से गर्मी-टयूबिंग हटना (जो भी स्टेनलेस स्टील टयूबिंग wraps) और एक संबंधक से जुड़े हैं । पूरे विधानसभा दंत एक्रिलिक के साथ खोपड़ी के लिए सुरक्षित है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्रा 4: शीतलक सर्किट. शीतलक सर्किट मेथनॉल जलाशय, घूमकर पिस्टन पंप, बर्फ स्नान, थर्मामीटर, और cryoloop के होते हैं । शांत करने के लिए, पंप मेथनॉल का सेवन ट्यूब (१.६ mm आईडी) के माध्यम से जलाशय से ऊपर खींचता है । मेथनॉल polytetrafluoroethylene टयूबिंग (०.५ mm आईडी) के माध्यम से पंप से बाहर निकलता है और सूखी बर्फ स्नान, जहां टयूबिंग में बह मेथनॉल-७५ डिग्री सेल्सियस ठंडा है के माध्यम से पंप है । सर्द मेथनॉल तो बर्फ के स्नान से बाहर निकलता है और मेथनॉल जलाशय में लौटने से पहले ही संलग्न cryoloop के माध्यम से चलता है. यह cryoloop एक डमी पाश (प्रत्यारोपित नहीं) प्रारंभिक सेटअप के दौरान इस्तेमाल किया जा सकता है, या एक परीक्षण पशु में प्रत्यारोपित cryoloop हो सकता है । cryoloop भी एक डिजिटल थर्मामीटर से जुड़ा व्यवहार परीक्षण भर में पाश तापमान रिकॉर्ड है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्रा 5: प्रतिवर्ती, पार्श्विका क्षेत्र के शीतलक प्रेरित निष्क्रियता बाधा स्मृति घाटे में 5 परिणाम । (क) बिल्ली मस्तिष्क के दाहिने गोलार्द्ध के पार्श्व दृश्य दिखा cryoloops पार्श्विका क्षेत्रों पर सीधे प्रत्यारोपित 5 (नीला) और 7 (ग्रीन) वोंग एट अल में जांच की । 19 डी: पृष्ठीय, एक: पूर्वकाल । (ख-ङ) बार बाधा-वर्तमान (बी के लिए कदम ऊंचाई ± एसडी मतलब चित्रण भूखंडों, घ) और बाधा-अनुपस्थित परीक्षण (सी, ई) forelegs के लिए (बी, सी) और hindlegs (डी, ई) के लिए गर्म (लाल), क्षेत्र 5 कूल्ड (नीला), और क्षेत्र 7 ठंडा शर्तों ( हरा) । कदम ऊंचाई काफी बाधा में दोनों प्रमुख और पीछे hindlegs में कम था वर्तमान परीक्षणों जब 5 क्षेत्र निष्क्रिय किया गया था । (च) बार प्लॉट प्रत्येक कूलिंग स्थिति के लिए hindleg चरण निकासी ± एसडी मतलब चित्रण । क्षेत्र 5 निष्क्रियण दोनों प्रमुख और पीछे hindleg चरणों के लिए कम निकासी के परिणामस्वरूप । (G) बार साजिश प्रत्येक चरण के शिखर और प्रत्येक ठंडा हालत के लिए बाधा के बीच मतलब क्षैतिज दूरी का चित्रण । जब 5 क्षेत्र ठंडा था, कदम पथ अधिक चर रहे थे और गर्म और क्षेत्र 7 ठंडा शर्तों से काफी भिंन । *p < 0.005, * *p < 0.0001, एन: महत्वपूर्ण नहीं है । यह आंकड़ा वोंग एट अल से संशोधित किया गया है । 19 कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 6
चित्रा 6: थर्मल इमेजिंग ठंडा करने के दौरान क्षेत्र के 5 या 7 प्रतिबंधित निष्क्रियता की पुष्टि के लिए इस्तेमाल किया । (क) पार्श्विका क्षेत्रों के साथ संपर्क में cryoloops चित्रण फोटोग्राफ ५ और दाएँ गोलार्द्ध के ७. शीर्ष पृष्ठीय है, सही पूर्वकाल है । डैश्ड रेखा पार्श्विका क्षेत्रों 5 और 7 के बीच बॉर्डर का प्रतिनिधित्व करती है । (ख-ग) पार्श्विका cortical सतह के थर्मल छवियां फोटो खिंचवाने जब cryoloop क्षेत्र पर 5 (ख) या 7 क्षेत्र (ग) 3 डिग्री सेल्सियस ठंडा था । यह आंकड़ा वोंग एट अल से संशोधित किया गया है । 19 कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

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Discussion

वर्णित प्रतिमान शीतलता-असतत cortical cryoloop का उपयोग करने के लिए बिल्ली में स्मृति निर्देशित बाधा गतिवान का अध्ययन करने के क्षेत्रों की निष्क्रियताओं प्रेरित रोजगार । दृश्य और स्पर्श बाधा स्मृति मानदंड जानवरों के लिए काफी सरल के रूप में वे प्राकृतिक हरकत व्यवहार है कि ंयूनतम प्रयास के साथ होते है जब एक जानवर एक चलती खाद्य स्रोत का पालन करने के लिए प्रेरित किया जाता है शोषण निष्पादित करने के लिए कर रहे हैं । इस प्रकार, प्रशिक्षण अवधि के बहुमत के लिए पशु परीक्षण कक्ष और शीतलक उपकरण acclimating समर्पित है । अधिकांश जानवरों के दोहन पहने और आराम से और स्वाभाविक रूप से उपकरण पर चलने से पहले पट्टा के माध्यम से सीमित किया जा रहा करने के लिए प्रदर्शन दोहराया की आवश्यकता है । इसके अतिरिक्त, परीक्षण के दौरान, पिस्टन पंप की आवाज विचलित या जानवर चौंका सकता है । डमी cryoloop के साथ शीतलक सर्किट को पूरा करने और प्रारंभिक प्रशिक्षण के दौरान पंप चल पशु पंप की आवाज को acclimate करने की अनुमति दे सकते हैं । परीक्षण करने से पहले पर्याप्त प्रशिक्षण के बावजूद, वहाँ की संभावना पशु बेचैन हो जाता है पहले परीक्षण के लिए एक सीमित समय हो जाएगा । इसलिए, पर्याप्त समय उचित स्थापना सुनिश्चित करने के लिए समर्पित है और परीक्षण कक्ष में पशु लाने से पहले समस्या निवारण बाद में डेटा संग्रह का अनुकूलन करेगा ।

पर्याप्त कूलिंग प्राप्त करने में कठिनाई पंप गति का समायोजन करके संबोधित किया जा सकता है । हालांकि, ध्यान बढ़ती दबाव है कि ट्यूबिंग बंद प्रवेश या cryoloop के आउटलेट ट्यूबों मजबूर किया जा रहा है के साथ परिणाम हो सकता है के लिए भुगतान किया जाना चाहिए । वैकल्पिक रूप से, बर्फ स्नान में डूबे ट्यूबिंग की लंबाई अधिक समय के लिए ट्यूबों के भीतर मेथनॉल के प्रवाह ठंडा करने के लिए सक्षम हो बढ़ाया जा सकता है । इसके अतिरिक्त, यह सुनिश्चित करना है कि बर्फ स्नान से cryoloop के लिए बाहर निकलने के बिंदु से टयूबिंग की लंबाई के रूप में संभव के रूप में कम ठंडा के नुकसान को कम करना होगा । हालांकि, इस दूरी भी काफी लंबे समय के लिए एक दिया व्यवहार प्रतिमान के लिए गतिवान की पर्याप्त रेंज की अनुमति होनी चाहिए । टयूबिंग लचीला फोम लपेटन ठंडा दक्षता का अनुकूलन के साथ अछूता हो सकता है । इस तरह के लपेटन भी संघनित्र की बूंदों को रोकने के जानवर है, जो जलन या चौंक सकता है जानवर पर गिरने से टयूबिंग के आसपास फार्म कर सकते हैं । परीक्षण के दौरान, प्रवेश और cryoloop के आउटलेट ट्यूबों पर ट्यूबिंग के एक सुखद फिट सुनिश्चित करने cryoloop मुश्किल जोड़ने कर सकते हैं । एक नाइट्राइल या लेटेक्स दस्ताने पहने हुए टयूबिंग की एक बेहतर पकड़ प्रदान कर सकते हैं । यह सुनिश्चित करना कि पशु आरामदायक और रोगी है, जबकि प्रयोगकर्ता संलग्न टयूबिंग आवश्यक है । भोजन के लिए पशु स्थिर और सामग्री रखने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।

Cryoloops नियमित रूप से व्यवहार में अत्यधिक प्रतिलिपि परिवर्तन उपज ठंडा किया जा सकता है जब एक विशेष क्षेत्र निष्क्रिय है । एक ही जानवर के भीतर cortical निष्क्रियता की उपस्थिति और अनुपस्थिति में एक ही कार्य का आकलन करके, इस्तेमाल किया जानवरों की कुल संख्या कम हो सकती है । इसके अलावा, ठंडा की हद तक आगे एक विशिष्ट व्यवहार के लिए cortical योगदान निर्दिष्ट हेरफेर किया जा सकता है । उदाहरण के लिए, दोनों एकतरफा और द्विपक्षीय निष्क्रियताओं एक ही जानवर में किया जा सकता है एक व्यवहार के संभावित lateralization प्रभाव की जांच । इसके अतिरिक्त, कूलिंग की डिग्री लामिना योगदान की जांच करने के लिए अलग किया जा सकता है । ३.० ± १.० डिग्री सेल्सियस के लिए cortical सतह पर cryoloops ठंडा करके, प्रत्येक पाश के नीचे सीधे प्रांतस्था के सभी छह परतों < 20 ° c करने के लिए ठंडा कर रहे हैं, बाधित ंयूरॉन spiking गतिविधि22। वैकल्पिक रूप से, cryoloops ८.० ± १.० डिग्री सेल्सियस, जो चुनिंदा 20 डिग्री सेल्सियस के इस महत्वपूर्ण तापमान के नीचे केवल supragranular cortical परतों ठंडा करने के लिए ठंडा किया जा सकता है । ऐसे सतही cortical निष्क्रियण के साथ व्यवहार का आकलन करने के साथ ही पूर्ण cortical निष्क्रियण cortical समारोह के translaminar dissociations की अनुमति मई21

ऐसी बहुमुखी प्रतिभा के बावजूद, प्रयोगात्मक डिजाइन के दौरान निंनलिखित सीमाओं पर विचार किया जाना चाहिए । जबकि ठंडा एक दिया cortical क्षेत्र में सभी प्रकार के कोशिका को निष्क्रिय करने के लिए एक उत्कृष्ट दृष्टिकोण है, यह सेलुलर विशिष्टता है कि optogenetic निष्क्रियता तकनीक के साथ प्राप्त किया जा सकता है के साथ निष्क्रियता का एक साधन नहीं प्रदान कर सकते हैं । इसके अलावा, शीतलक cryoloop तापमान कार्यात्मक निष्क्रियण के लिए ३.० ± १.० डिग्री सेल्सियस के महत्वपूर्ण तापमान पर स्थिर करने से पहले ४५ s की एक ंयूनतम आवश्यकता है । इस प्रकार, कार्यात्मक निष्क्रियता को प्राप्त करने के लिए आवश्यक समय अवधि के लिए विचार पसंद के प्रायोगिक प्रोटोकॉल में शामिल किया जाना चाहिए ।

कुल मिलाकर, शीतलन प्रणाली कम रखरखाव की आवश्यकता है । टयूबिंग और शीतलक सर्किट के connectors नियमित रूप से लीक के लिए जांच की जानी चाहिए । जलाशय के भीतर मेथनॉल को सुनिश्चित करना है कि मेथनॉल बात कण से मुक्त है साप्ताहिक प्रतिस्थापित किया जाना चाहिए । प्रत्यारोपित cryoloops भी कम रखरखाव की आवश्यकता होती है । हाशिए एक 3% हाइड्रोजन पेरोक्साइड एक शल्य सफ़ाई के समाधान के बाद समाधान के साथ समय पर साफ कर रहे हैं । उचित उपयोग और देखभाल के साथ, प्रत्यारोपित cryoloops कई वर्षों के लिए नियमित रूप से ठंडा किया जा सकता है । इन cortical शीतलक प्रक्रियाओं अंय व्यवहार मानदंड के लिए अनुकूलित किया जा सकता है10,11,12 या electrophysiological रिकॉर्डिंग तैयारी13,14 वैकल्पिक पशु मॉडल में 15,17,18,22.

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

हम कृतज्ञता स्वास्थ्य अनुसंधान, प्राकृतिक विज्ञान और इंजीनियरिंग अनुसंधान कनाडा के परिषद (NSERC), और नवाचार के लिए कनाडा फाउंडेशन के कनाडा संस्थानों के समर्थन स्वीकार करते हैं । C.W. एक अलेक्जेंडर ग्राहम बेल कनाडा स्नातक छात्रवृत्ति (NSERC) द्वारा समर्थित किया गया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Camera IDS Imaging Development Systems GmbH Model: UI-5240CP-C-HQ
Intake tubing Restek 25306 Unflanged end is submerged in the methanol reservoir while the flanged end is connected to the pump
Pump Fluid Metering, Inc. Model: QG 150
Nalgene Dewar vacuum flask Sigma-Aldrich F9401
Teflon tubing Ezkem A051754
Microprobe thermometer Physitemp Model: BAT-12
Flanged tube end fittings Valco Instruments Co. Inc. CF-1BK Assorted colours available for colour coding. Packages include the same number of washers as fittings
Washers Valco Instruments Co. Inc. CF-W1 Extra washers
Flanging kit Pro Liquid GmbH 201553
Tubing connector Restek 25323
Tubing cutter Restek 25069
Male thermocouple connector Omega SMPW-T-M Used to make cable connection to thermometer
Thermocouple wire Omega PP-T-24S Used to make cable connection to thermometer
MATLAB MathWorks n/a

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References

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व्यवहार अंक १३० Cortical शीतलक cryoloop बिल्ली गतिवान बाधा परिहार स्मृति
चलने बिल्ली में बाधा स्मृति के लिए Cortical योगदान का अध्ययन करने के प्रतिवर्ती शीतलक प्रेरित निष्क्रियता
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Wong, C., Lomber, S. G. Reversible… More

Wong, C., Lomber, S. G. Reversible Cooling-induced Deactivations to Study Cortical Contributions to Obstacle Memory in the Walking Cat. J. Vis. Exp. (130), e56196, doi:10.3791/56196 (2017).

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