Summary
המטרה של הפרוטוקול היא להכין את hydrolysate קרטין מן נוצות העוף הידרוליזה אלקליין אנזימטיות, כדי לבדוק אם הוספת hydrolysate קראטין לתוך משחה קוסמטיקה הבסיס משפר את תפקוד מחסום העור (מגביה הידרציה ו צמצום איבוד המים transepidermal). הבדיקות נערכות על גברים ואישה מתנדבים.
Abstract
קרטין hydrolysates (KHs) הם הרכיבים הסטנדרטיים הוקמה בתמרוקים ובישום. הבנת השפעת לחות ח' היא יתרון עבור מוצרי קוסמטיקה לטיפוח העור. המטרות של הפרוטוקול הם: (1) כדי לעבד נוצות העוף לתוך ח' על ידי הידרוליזה אלקליין אנזימטי וטהרם על-ידי דיאליזה, (2) כדי לבדוק אם הוספת ח' לתוך בסיס משחה (אבוב) מגבירה את לחות העור, משפר את תפקוד מחסום העור על ידי צמצום אובדן מים transepidermal (TEWL). במהלך הידרוליזה אלקליין אנזימטי נוצות מודגרת קודם בטמפרטורה גבוהה בסביבה אלקליין ולאחר מכן, תחת תנאים מתון, הידרוליזה עם האנזים הפרוטאוליטי. הפתרון של ח' הוא דיאליזה, ואקום מיובשים, ונגרס על אבקה. ניסוחים קוסמטיים המורכבת משמן בתחליב מים (O/W) המכיל 2, 4 ו- 6% במשקל של ח' (מבוסס על משקל OB) מוכנות. בדיקות לחות המאפיינים של ח' מתבצעת ב-10 אנשים, 10 נשים במרווחי זמן של 1, 2, 3, 4, 24 ו 48 ה ניסוחים נבדק פרוסים באתרים האמה volar degreased. לחות העור של הקרנית (SC) מוערך על ידי מדידת קיבוליות של העור, אשר הוא אחד מהשיטות בשימוש ופשוט ביותר ברחבי העולם. TEWL מבוססת על מדידת כמות המים מועברים לכל אזור מוגדר תקופת זמן מן העור. שתי השיטות הן לחלוטין לא פולשנית. ח' הופך occlusive מעולה; בהתאם התוספת של ח' לתוך OB, מביאה להקטנת 30% TEWL לאחר היישום. ח' משמשת גם כחברת humectant, כמו זה נקשר מים מ בשכבות הנמוכות של האפידרמיס SC; על תוספת ח' האופטימלי ב OB, למעלה כדי 19% עלייה הידרציה גברים ו- 22% עלייה נשים מתרחש.
Introduction
בתי המטבחיים, תעשיית המזון, תעשיית שיזוף מדי שנה מייצרים כמויות עצומות של תוצרי קרטין מוצק – צמר, נוצות, זיפים, פרסות, טפרים, קרניים, וכדומה. על פי נתונים סטטיסטיים האחרון, המשקל הכולל בשידור חי של תרנגולות, תרנגולי הודו, ברווזים, ועופות אחרים שחט בארה ב הוא 62.5 מיליארד פאונד לכל השנה1; האיחוד האירופי הוא כ 28.7 מיליארד ליש ט בשנה. בהתחשב כי הנוצות לעשות עד 8.5% של המשקל הכולל עופות, ארה ב לבד מייצרת מדי שנה כ 5.3 מיליארד פאונד של נוצות פסולת2.
קראטין הוא חלבון מפגין עמידות כימית גבוהה כי זה חזק צולבים גשרים דיסולפידי רינדור העיבוד שלו קשה. קבלת מוצרים מסיסים דורש ביקוע חוצה קישורים ואולי בביצוע הידרוליזה של חלבון3. פצילות הגשרים דיסולפידי רשאי להמשיך דרך תגובה של אניון תיול על פי4,התבנית הבאה5:
S– + S-bSc– ↔ – Sb– + – SSc–
עם רמת ה-pH מאוד גבוה, הידרוליזה של הגשרים דיסולפידי מופיע גם, לפי דפוס6
–– אס אס + OH– ← – S– – SOH
בתנאים מתון (pH 8 כ), אפילו sulfitolysis מתקיים לפי התבנית הבאה:
– אס – + HSO ←3– – SH + -SSO3–
הדרך החסכונית ביותר של משפיל קרטין הוא פירוק מיקרוביאלי, אשר מאופיין על ידי תנאי ריאקציה מתון במהלך עיבוד וגבוה התמוטטות יעילות (כ 90%)7,8. Keratinases מיוצרים על ידי מספר החיידקים שבודד פסולת, אדמה, קרטין9. Keratinases חיידקים hydrolyze מבנים צולבים חריפה הנוקשה קרטין10 וח' וכתוצאה מכך מוכן הוא עשיר בחלבונים מסיסים, ללא אובדן של חומצות אמינו חיוניות זוהה זה11.
על מנת לשלב את חלבון ההכנות קוסמטי (למשל, אמולסיות, קרמים, ג'לים), הדרישות להבטיח כי חלבונים כאלה הם מסיסים במים, המערכות נתון הם שקופים, את צבירת מחדש של פפטידים הוא נמנע בשל אינטראקציות הידרופוביות. לכן, מקובל ליישם את hydrolysates של חלבונים, כגון הידרוליזה קולגן, אלסטין, קרטין. בעת הוספת hydrolysates לתוך אמולסיות קוסמטיים, הפעולות הננקטות כדי להבטיח כי hydrolysate קודם מומס במים. במקרים מסוימים, רצוי כי החלבון (או את hydrolysate) הוא מסיס באלכוהול או ממיסים אורגניים אחרים12.
ח' בדרך כלל בהשתתפות שמפו, מזגנים, קרמים, סרומים התזונתי שיער, כמו גם mascaras, לק של סוכנים איפור העין. ההשפעות ח' הכריז בדרך כלל כוללים ויוצרים סרט מגן, החלקת השיער או מסמר המבנה, פלסטיות מוגברת והמראה של היווצרות שטופלו, המסדיר את העקביות של מוצרים, ולעודד היווצרות קצף13 , 14. גם הוכח כי ח' מפחית מתח, ומכאן תוספי בקוסמטיקה יכולים להקל על הפחתה בכמות emulsifier הוסיף לייצב קרמים. ח' להגביל את ההשפעות של גירוי המופעלות על-ידי ניקוי סוכנים (פיתחה) אל העור, העיניים, השיער, ובכך להקטין תופעות לוואי פוטנציאליות של ניקיון סוכנים על רקמות (למשל, התייבשות של העור, קשיות, מחסום ירידה בתפקוד העור). יכולת האגירה גבוהה של hydrolysates הוא מנוצל גם כדי לייצב את רמת החומציות של קוסמטיקה; פפטידים באורך קצר יותר יש יותר חציצה אפקט15,16. למרות KHs להפוך הקמנו בתור הרכיבים הסטנדרטיים שיער ציפורניים קוסמטיקה וכן מנוצל ב מוצרי טיפוח העור, מחקרים על השפעת לחות ח' אינם מופיעים בספרות העכשווית.
פותחה טכנולוגיה אלקליות-אנזימטי לעיבוד תוצרי לוואי קראטין לתוך ח', ויש בדיקות פעיל בתהליך על ההשפעות של מספר תוספים קוסמטיים17,18,19,20 , 21 , 22. היתרון של שני שלבים הידרוליזה אלקליין אנזימטי באמצעות פרוטאזות מיקרוביאלי נוצות העוף משיגה יעילות גבוהה בתנאים תגובה קלה ואת האיכות של ח' הוא גבוה מאוד לעומת הידרוליזה המועסקים חומצות חזקות או בסיסים (אלקלים). בשלב הראשון, נוצות מודגרת בטמפרטורה גבוהה בסביבה אלקליין, אשר באופן חלקי משבש את מבנה קרטין, מתנפח הנוצות; לאחר התאמת רמת ה-pH, הנוצות הן הידרוליזה עם אנזים הפרוטאוליטי בתנאים קלה בשלב השני. ח' dialyzed בעל תכולה גבוהה של חלבונים.
המטרות של השיטה המתוארת כאן עיבוד עופות הנוצות לתוך ח' באמצעות הידרוליזה אלקליין אנזימטיות, בוחן את השפעת לחות המאפיינים של ח' חלה על תחליב קוסמטיים O/W. המאפיינים לחות נחקרות על ידי פלייבק פולשני שיטות ויוו. השיטות הנפוצות למדידת תפקוד הידרציה ומכשול העור של SC כוללים מדידת תכונות חשמליות של העור (מוליכות או קיבול). שיטות שונות עבור חוקרים SC הידרציה כוללים ליד אינפרא-אדום מולטי ספקטריאליות מדמיין את השיטה (נים), ספקטרוסקופיה תהודה מגנטית גרעינית, טומוגרפיה אופטית קוהרנטית או העברה תרמית ארעי23. מחסום הפונקציה של SC המתייחס TEWL של SC, הוא נמדד לפי שיטת החדר מאוורר, שיטת החדר מאוורר וכן שיטת החדר פתוח24.
המאפיינים של ניסוחים מודל נקבעים באמצעות מתאם מרובה בדיקה MPA 5 עם שלושה סוגים של הגששים. Corneometer הראשון, 825 ס מ, מידות לחות העור על-ידי הערכת שינויים ביכולת חשמל של פני השטח של העור; הקבל מדידה מציג שינויים קיבוליות של פני העור ביחידות corneometric. Corneometer נותן רק הערכה היחסי של העור לחות25. TEWL, המכשיר השני, tewameter TM 300, משמש למדידת צפיפות ה גרדיאנט אידוי מים (ב מכשיר פתוח קאמרית בהתבסס על חוק דיפוזיה של Fick) מן העור באופן עקיף על ידי שני זוגות של חיישנים (טמפרטורה, לחות יחסית) המציין את כמות המים מובלים לכל אזור מוגדר תקופת זמן (g/m2/h). בשיטה זו ניתן לזהות אפילו שמץ שיבוש העור מכשול פונקציה26. PH של העור הוא סימן אחד של מכשול ותפקוד אנטי מיקרוביאליים SC27. החומציות של המעטפת העור נמדדה על ידי בדיקה העור PH 905 (השלישי) מחובר לתחנת מגפ ס 5. המכשיר שתוכנן במיוחד הזה מורכב אלקטרודת זכוכית מצופה שטוח של מגע עם העור מלא, מחובר מודד. המערכת מודדת שינויים פוטנציאלי עקב הפעילות של קטיונים מימן סביב לשכבה דקה מאוד של צורות מוצק למחצה נמדד בחלק העליון של המכשיר. שינויי מתח מוצגים pH28.
אנו מציגים ניסויים כולל שלושה חלקים: (1) הכנה של ח' מ עוף נוצות על ידי שני שלבים הידרוליזה אלקליין אנזימטי וטיהור שלה על-ידי דיאליזה (הוצאת מלחים ושברים נמוך-מולקולרי), (2) הכנת קוסמטיקה ניסוחים המכיל 2, 4 ו- 6% ח', ו- (3) בדיקת המאפיינים של ח' על ידי מדידת לחות, TEWL, העור ועור pH. הבדיקה בוצעה על 10 נשים עם והגיל הממוצע של 27.2 שנה, ב-10 אנשים עם והגיל הממוצע של שנים 26.2. השיטה של בחירת המתנדבים ולאחר הבדיקה עצמה נערכו על פי עקרונות אתיים הבינלאומי של מחקר ביו-רפואי ניצול ניסויים29; כל אדם נתן שלהם מדעת לפני ההכללה במחקר. לפני בדיקת התחילה, המתנדבים התבקשו להשלים שאלון על מצב הבריאות שלהם. המתנדבים מחויבים למנוע החלת כל מוצר קוסמטי אתרי מבחן והאזורים הסובבים במהלך 24 שעות לפני, במהלך תקופת הבדיקה; יתר על כן, הם הורשו רק ערב קצר שוטף עם מים זורמים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
מתנדבים גויסו בקרב עובדים וסטודנטים של האוניברסיטה שלנו. השיטה של בחירת נערך על פי "הבינלאומי מוסר מנחים ביו-רפואית במחקר האנושי Involving. המועצה עבור ארגונים בינלאומיים למדעי הרפואה, ז'נבה (2002)." ח' הוא מרכיב קוסמטי נפוץ בשימוש מוצרי טיפוח לשיער (שמפו, מזגנים, וכו '), ומכאן אישור ועדת הבדיקה מוסדי אינו נדרש.
1. תהליך נוצות העוף לתוך בח
- לאסוף נוצות העוף משק עופות.
- לשטוף כל הטומאות לא מסיסים, שרידים דם הנוצות העוף עם עודף מספקת מים מתוקים פועל (קר). למקם את הנוצות על צלחת שטוחה, יבש לילה ב 50 º C.
הערה: הפרוטוקול אפשר לעצור כאן. - לטחון 50 גרם יבשים הנוצות. מפעל חיתוך (מתאים עבור החומרים דגימה רך בינוני-קשה, חומרים של סיבי חום) לתוך מעלת טוהר הסופי של 1.0 מ מ. לחלופין, מידת הדיוק הסופי של נוצות חרקו יכול להיות גבוה יותר, אך לא יותר מ- 3.0 מ מ.
הערה: הפרוטוקול אפשר לעצור כאן. -
Degrease נוצות
הערה: השיטה הכלכלית ויעילים ביותר חביטה עופות נוצה היא באמצעות אנזים מסחרי lipolytic.- בתוך מיכל דוד 27-L פלדת אל-חלד עם בקרת טמפרטורה, לערבב את הנוצות עם מים טרופה עד 40 ± 2 ° C ב- 1:75 יחס משקל. להוסיף אנזים lipolytic (פעילות 100 KLU/g) במינון של 1.5-2.0% (הקשורים שקל בנוצות יבש) ובעדינות מערבבים את התוכן עם בחישה תקורה עבור 5 דקות.
- התאם את רמת החומציות של התערובת ל 9.0 ± 0.2, הערך המתאים לפעילות המרבית של האנזים lipolytic על-ידי הוספת 1% – סודה קאוסטית או 1% H3פו4 פתרון. מערבבים את התערובת למשך 5 דקות עם בחישה תקורה, ו מכן בדוק מחדש להתאים את רמת ה-pH באמצעות מד pH/mV ספסל מעבדה.
- מערבבים בעדינות את התערובת עם בחישה תקורה עבור 24 שעות-40 ± 0.5 מעלות צלזיוס. לחלופין, דגירה התערובת ב 40 ± 0.5 ° C, ומערבבים במהלך ה 6 הראשון של דגירה התוכן במרווחים 1 h.
- לסנן את התערובת דרך מסננת בסדר (גודל 100 מיקרומטר) ולשטוף את הנוצות degreased עם זרם מים מתוקים פועל (קר). יבש את הנוצות על צלחת שטוחה ב 50 מעלות צלזיוס בתוך תא ייבוש למשך הלילה.
הערה: הפרוטוקול אפשר לעצור כאן.
- לבצע את השלב הראשון של הידרוליזה נוצה עוף. מערבבים את הנוצות עם 0.3% קו המים פתרון משקל יחס 1:50 ומערבבים בעדינות עם בחישה תקורה-60 ± 0.5 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ביממה. ה-pH של התערובת יורדת מ- 12.5 כ תחילת הדגירה כדי 11.0 בסוף הדגירה. לאחר סיום השלב הראשון של הידרוליזה, להתאים את רמת ה-pH של התערובת לרמה המתאימה לפעילות המרבית של האנזים הפרוטאוליטי עם 10% H3פו4 (במקרה זה, עד לרמה של 9.0 ± 0.2) על-ידי הוספת 1% NaOH.
- ביצוע השלב השני של עוף נוצה הידרוליזה. להוסיף התערובת, האנזים הפרוטאוליטי במנה של 5.0% (הקשורים יבש עניין של כמות הנוצות. שקל-בתחילת השלב הראשון של הידרוליזה). בעדינות כאבי-ראש קדירות תקורה-60 ± 0.5 מעלות צלזיוס במשך 8 שעות ואז מחממים את התערובת (בתוך המיכל אותו הדוד 27-L פלדת אל-חלד) עד לנקודת רתיחה (100 ° C), להרתיח 10 דקות להשבית את האנזים.
- להפריד את הפתרון של ח' (להכין בשלב 1.6) השריד undissolved על סינון זה נייר סינון בצפיפות נמוכה על משפך בוכנר עם ואקום-לחץ קל; לחלופין, השתמש צנטריפוגה.
הערה: הפרוטוקול ניתן להשהות כאן מספר ימים אם פתרון של ח' מאוחסן ב 5 ± 1 מעלות צלזיוס. - בדלי פלסטיק (26 ס מ קוטר x 26 ס מ גובה) dialyze ח' באמצעות ממברנה MWCO 12 K כדי להסיר פפטידים קטן ומלח. שופכים 400 מ של הפתרון ח' לתוך צינורות דיאליזה, dialyze זה נגד 4 ליטרים של מים מזוקקים עבור 80 שעות בטמפרטורת החדר; לשנות את מים מזוקקים לאחר 18, 36, ו- 60 h.
- שיוטל יחס של 500 מ"ל לאזור לוחית2 ס מ 1,000, אבק יבש זה על סרט דק ב 40 ± 0.5 ° C עבור לילה, יתקעו בצורת אבקה, לשמור על כלי סגור ב- desiccator פתרון dialyzed של ח' בצלחת אנטי דבק (למשל, סיליקון).
הערה: הפרוטוקול ניתן להשהות כאן במשך מספר חודשים אם האבקה ח' מאוחסן במקום יבש.
2. הכנת פורמולציות קוסמטיים עם בח
הערה: המכ המשמשות לבדיקת היה בסיס O/W שמנת הידרופיליות מסחרי, המורכב אקווה, פרפין, פרפין נוזלי, גוטוקולה אלכוהול, לאורט 4, סודיום הידרוקסיד, carbomer, methylparaben ו- propylparaben.
- הכנת פורמולציות המכיל 2, 4 ו- 6% ח' (לפי המשקל הבסיסי של המשחה). לשקול כמות האבקה ח' לתוך כלי פוליאתילן (7 ס מ קוטר x 10 ס מ גובה) ולהוסיף המכ-סכום זה מבטיח את המשקל הכולל של ניסוח שווה 50 גרם; ראו מתכון בטבלה1.
| ניסוח קוסמטיים | המשקל של משחה הבסיס [g] | המשקל של קראטין hydrolysate [g] | המשקל הכולל [g] | |||||
| משחה הבסיס | 50 | 0 | 50 | |||||
| משחה בסיס + 2% בח | 49 | 1 | ||||||
| משחה בסיס + 4% בח | 48 | 2 | ||||||
| משחה בסיס + 6% בח | 47 | 3 | ||||||
טבלה 1: משקל-אין כמויות של משחה hydrolysate, בסיס קראטין להכין ניסוחים קוסמטיים.
- Homogenize את התערובת עם בלנדר מעבדה 3 להבים 10 דקות ב g 134.16 x ולערבב באמצעות קדירות תקורה מכני. לשמור על ניסוחים מוכנים ב 5 ± 1 ° C, לחמם אותם בטמפרטורת החדר במשך 2 שעות לפני השימוש.
הערה: Homogenizing התערובת של OB עם ח' ניתן לעשות עם שאינם דיגיטליים מערבב גם כן. על קדירות שאינם דיגיטליים, ישנם סולמות עם המהירות משוער (ב rpm) גם כן. ערבוב עדין יעבוד הכי טוב בשלב זה.
הערה: הפרוטוקול ניתן להשהות כאן עד 5 חודשים אם ניסוחים מאוחסנים ב 5 ± 1 מעלות צלזיוס.
3. לבחון את המאפיינים של ח' על ידי מדידת לחות העור, TEWL, pH
הערה: לבצע מדידות כל חדר ממוזגים ב 23 ± 2 ° C ולחות יחסית של 56 ± 3%.
- מקום 5 רצועות של נייר סינון (בגודל 2 x 4 ס מ) בתוך תמיסת פיזיולוגיים (0.90% NaCl) ולהשאיר אותם עבור 1 דקות בפתרון.
- חלות שתי רצועות הצד הפנימי של הזרוע הימנית, ושלושה בצד הפנימי של האמה השמאלית, ותקן אותן במשך 4 שעות עם טיח דבק. השלב זה degrease העור ולחסל את המאפיינים האישיים של העור באתר. לאחר 4 שעות, להסיר את הרצועות demark האזורים עם עט קבועה, ראה איור 1.
איור 1: שיטת המיקום של ניסוחים מבחן על האמה של הגפיים השמאלי ואת הימני העליון. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
- החל מ 0.1 ל ניסוחים שנבדקו בנקודה בכל האתרים האמה degreased באמצעות מזרקים, להפיץ את זה על פני השטח המסומן כולו. על האמה השמאלית, לא חלים כל דבר האתר הראשון (זה הפקד), להחיל את המכ לאתר השני, ו את המכ + 2% בח ל השלישי. להחיל את המכ + 4% ח' ו אוב + 6% ח' על היד הימנית.
- למדוד את כל מדגם כל אתר, כל מרווח (1, 2, 3, 4, 24 ו 48 h) ולקחת קריאות 5 עם החללית מד לחות העור לחות העור, קריאות 15 עם החללית מד TEWL לעור TEWL של 1 קורא עם החללית מד pH בעור עבור העור pH. אל תאפשר מתנדבים להחיל כל מוצר קוסמטי על בדיקת אתרים, והסביבה במהלך תקופת הבדיקה; הם רשאים ערב קצר שוטף עם מים זורמים.
הערה: הפרוטוקול אפשר לעצור כאן. - לעבד את הקריאות הנוצרת על-ידי המאפיינים הבסיסיים המספרי של סטטיסטיקה תיאורית, באמצעות תוכנת הגיליון האלקטרוני. מן המקראות הידרציה 5 שנמדד עבור כל דגימה, להתעלם הנמוך ביותר ואת המקראות הגבוהה, לחשב רק 3 קריאות ממוצע, סטיית תקן. מן הממצאים TEWL 15 שנמדד עבור כל דגימה, להתעלם הראשון 5, לחשב רק 10 קריאות ממוצע, סטיית תקן.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ח' שהוכנו לפי נוהל המובאת כאן (ראה איור 2) הוא צהוב בצבע, המתמוסס בקלות מים עם תכולת החלבון הגבוהה (מוצקים אורגניים מייצגים < 2.0%); ה-pH של התמיסה 1.0% של ח' הוא 5.3, מגשימים לכם את הדרישות עבור hydrolysates כיתה קוסמטיים. התשואה של ח' מחומר גלם 50 גרם הוא כ – 30%. חלוקת משקל מולקולרי ח' נקבע על ידי עמודים מרחביות, מוצג באיור3.
איור 2: תמונה ייצוגית של קראטין hydrolysate. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3: מרחביות-דף של סטנדרטים hydrolysate, חלבון קראטין. ליין 1: טווח נמוך במיוחד משקל מולקולרי סמן (3.5-26.6 kDa). מסלולים 2, 3 ו- 4: hydrolysates קרטין מוכן בקבוצות 3. 120 µg ח' מחדש מושעה במאגר µL טעינה 20 נטען כל היטב. ליין 5: מגוון רחב משקל מולקולרי סמן (6.5-200 kDa)
הידרציה וערכים TEWL היו התחום מתנדבים שונים, ולכן לא ניתן להשוות אחד לשני. לכן, הערכים מבוטא בשינוי אחוז בהשוואה המכ באתר שטופלו על ניסוחים, האחרון המכיל 2, 4 ו- 6% תוספות של ח' במרווחי זמן למדידה של 1, 2, 3, 4, 24 ו 48 שעות. ערכי ה-pH לעור מבוטא הממוצע החשבוני של ערכי pH בעור מוקלטות עבור כולם מתנדבים. התוצאות עבור שינוי לחות, TEWL אחוזים, ביחס אבוב, ועבור רמות ה-pH של העור מקבלים בטבלה 2 עבור 10 אנשים, טבלה 3 10 מתנדבים האישה.
| גברים | ||||||
| זמן | 1 h | 2 h | 3 h | 4 שעות | h 24 שעות ביממה | 48 שעות |
| הידרציה (שינוי % לעומת בסיס Oitment) ± SD | ||||||
| משחה בסיס + 2% בח | + 16 ±15 | + 14 ±16 | + 12 ±9 | + 19 ±14 | + 11 ±18 | + 15 ±9 |
| משחה בסיס + 4% בח | + 6 ±19 | + 1 ±18 | + 5 ±10 | + 7 ±16 | + 11 ±9 | + 14 ±15 |
| משחה בסיס + 6% בח | -3 ±25 | -4 ±14 | -7 ±18 | -4 ±17 | + 11 ±14 | -17 ±14 |
| TEWL (שינוי % לעומת בסיס Oitment) ± SD | ||||||
| משחה בסיס + 2% בח | -20 ±15 | -20 ±22 | -11 ±21 | -20 ±21 | -± 20 23 | -21±17 |
| משחה בסיס + 4% בח | -28 ±12 | -± 20 29 | -± 20 28 | -28 ±24 | -± 20 47 | -± 20 36 |
| משחה בסיס + 6% בח | -36 ±16 | -41 ±21 | -31 ±17 | -36 ±17 | -53 ± 20 | -54 ±17 |
| ה-pH | ||||||
| שליטה | 4.7 ± 0.5 | 5.1 ±0.4 | 4.9 ±0.4 | 5.1 ±0.3 | 4.6 ± 0.5 | 4.8 ±0.7 |
| משחה הבסיס | ± 0.5 4.8 | 5.1 ±0.3 | 4.9 ±0.3 | 5.0 ±0.4 | 4.6 ±0.4 | 5.0 ±0.6 |
| משחה בסיס + 2% בח | 5.0 ±0.6 | 4.8 ±0.4 | 4.9 ± 0.5 | 4.9 ± 0.5 | 4.7 ±0.3 | 5.0 ±0.6 |
| משחה בסיס + 4% בח | ± 0.5 4.8 | 4.9 ±0.3 | 4.8 ±0.4 | 4.8 ±0.3 | 4.7 ± 0.5 | ± 0.5 4.8 |
| משחה בסיס + 6% בח | 4.7 ± 0.5 | 5.0 ±0.2 | 4.9 ±0.4 | 4.8 ±0.4 | 4.8 ±0.6 | 5.0 ±0.6 |
טבלה 2: תוצאות שינוי לחות, TEWL ו- pH של העור של עשרה גברים מתנדבים במרווחים מדידה של 1, 2, 3, 4, 24 ו 48 שעות.
| נשים | ||||||
| זמן | 1 h | 2 h | 3 h | 4 שעות | h 24 שעות ביממה | 48 שעות |
| הידרציה (שינוי % לעומת בסיס Oitment) ± SD | ||||||
| משחה בסיס + 2% בח | + 22 ±7 | + 15 ±6 | + 15 ±8 | + 12 ±9 | + 14 ±14 | + 18 ±9 |
| משחה בסיס + 4% בח | 0 ±4 | -6 ±5 | -2 ±5 | + 1 ±7 | + 10 ±13 | + 15 ±10 |
| משחה בסיס + 6% בח | -12 ±5 | -± 2 14 | -9 ±7 | -5 ±9 | + 8 ±12 | + 10 ±9 |
| TEWL (שינוי % לעומת בסיס Oitment) ± SD | ||||||
| משחה בסיס + 2% בח | -32 ±1.6 | -16 ±3.0 | -12 ±1.3 | -20 ±0.9 | -35 ±1.9 | -38 ±1.6 |
| משחה בסיס + 4% בח | -41 ±1.1 | -37 ±2.7 | -24 ±0.8 | -34 ±0.9 | -44 ±1.5 | -38 ±1.9 |
| משחה בסיס + 6% בח | -50 ±1.4 | -39 ±2.2 | -29 ±0.7 | -39 ±0.9 | -16 ±2.4 | -33 ±2.1 |
| ה-pH | ||||||
| שליטה | 5.0 ±0.7 | 5.3 ±0.3 | 4.9 ±0.7 | ± 0.5 5.0 | 5.0 ±0.8 | 4.7 ±0.7 |
| משחה הבסיס | 5.2 ±0.6 | 5.3 ±0.3 | 5.2 ±0.7 | 5.0 ±0.4 | 5.1 ±0.8 | 4.8 ±0.7 |
| משחה בסיס + 2% בח | 5.4 ±0.7 | 5.1 ±0.4 | 4.9 ±0.4 | 5.1 ±0.7 | 4.9 ±0.7 | 5.0 ±1.0 |
| משחה בסיס + 4% בח | 5.2 ±0.7 | 5.1 ±0.3 | 5.0 ±0.4 | 4.9 ±0.4 | 5.1 ±0.6 | 5.1 ±0.2 |
| משחה בסיס + 6% בח | 5.2 ±07 | 5.2 ±0.2 | 5.0 ±0.4 | 5.0 ±0.3 | 5.4 ±0.6 | 5.2 ±0.4 |
טבלה 3: תוצאות שינוי לחות, TEWL ו- pH של העור של 10 נשים מתנדבים במרווחים מדידה של 1, 2, 3, 4, 24 ו 48 שעות.
הידרציה של SC עבור גברים מתנדבים:
במרווחים קצרים מדידה (h 1-4), התוספת הגבוהה הידרציה של העור (12-19%) הוקלטו ניסוחים שכשהם את המכ עם 2% של ח'; התוספת של 4% ח' הראו עלייה קטנים (1-7%) בהידרציה. לעומת זאת, ח' 6% משתקפת באופן שלילי על ערכים לטיפול בהתייבשות SC (ירידה של % 3-7). לאחר 24 שעות של מדידה, גידול של 11% ב- SC הידרציה בנדבכים עבור כל התוספות של בח ל המכ נבדק. מגמה זהה גם נמשכה גם לאחר 48 שעות, בעקבות עם עלייה קלה בהידרציה שעדיין נותר: העלאה של 15% עבור בח ב-2%, עלייה של 14% 4% תוספת של ח', על הירידה של 17% עבור בח ב- 6%.
הידרציה של SC עבור נשים מתנדבים:
. זה נצפות זה שכשהם את המכ עם 2% ח' גורם משוער 22% לודיג הידרציה SC, ביחס OB לבד, מוקדם ככל האפשר-h 1 מידה; תוספת 4% של בח ל המכ היא, למעשה, אין השפעה על שתיה; ואילו, לעומת זאת, הוספת 6% בח ל המכ משתקפת משוער 12% ירידה הידרציה, כפי בהשוואה דומה הרופא הקבוע טהור נטיות נראים לאחר 2, 3 ו- 4 שעות של המדידה, ב אשר מגביר לחות-12-15% עבור תוספי עם 2% ח'; תוספות גדולות יותר של ח', הידרציה נשאר זהה או פוחתת. לאחר 24 שעות של המדידה, הידרציה שהוקלט היה גבוה יותר עבור OB עבור כל נבדק ח' התוספות; העלייה הגדולה ביותר (14%) הידרציה אירעה עבור התוספת של 2% ח', תוך כדי העלייה הנמוך ביותר (8%) נראתה עבור תוספת של 6% של ח'. ניתן להשיג תוצאות דומות לאחר 48 שעות של המדידה, שבו שתיה גדולה יותר מאשר עבור OB טהור הוקלט עבור כל הדגימות עם תוספות של ח'; העלייה הגדולה (18%) הידרציה אירעה עבור התוספת ח' 2%, ואילו העלייה הנמוך ביותר (10%) צוין עבור תוספי בח ב- 6%.
TEWL גברים מתנדבים:
התוצאות של היצרן TEWL זה ברור כי ניסוחים בתוספת ח' לצמצם TEWL, כאשר חל על העור, בהשוואה הרופא הקבוע טהור כמות מוגברת של ח' המופעל השפעה חיובית על ערכים נמוכים יותר של TEWL. לאחר h 1 לאחר החלת את ניסוחים, TEWL הוקלט 20% נמוך יותר עבור המכ טהור, המתייחס ניסוח עם 2% ח'; בעוד ח' 4% ירד 28% ב- TEWL; בעוד ח' 6%, גרמו דרמטי 36% ירידה TEWL. אכן, הערכים TEWL מופחתת נצפו גם ב 2, 3 ו- 4 h למדידת ניסוחים בתוספת ח'. ואחרי 24-48 שעות, TEWL הונמך באופן משמעותי אפילו באתרי שטופלו על ניסוחים בח. לאחר 24 שעות, TEWL נצפתה על העור היה 23% נמוך יותר עבור המכ עם 2% תוספת של ח' מאשר באתר עבור OB טהור; ח' 4% ירד בכ-47% TEWL, בעוד ח' 6% מופעלות TEWL ייפלו-53%. מגמה דומה מתבטא אפילו לאחר 48 ח': TEWL לטיפול בעור שטופלו OB המכיל 2% ח' היה 21% נמוך יותר מאשר באתר עבור OB טהור; ח' 4% הראו TEWL של 36% נמוך יותר; והביא ח' 6% על ירידה של 54%.
TEWL נשים מתנדבים:
זה ברור כי כל התוספות תחת פיקוח של בח ל OB יהיה יתבטא TEWL מופחת, כפי שניתן לראות המתנדבים גברים. לאחר h 1 מיישום, נרשמה ירידה משמעותית TEWL לדגימות OB המכיל את כל התוספות של ח'; על 32% נראתה ירידה TEWL עבור תוספת 2% של ח', סביב ירידה של 41% ל-4% ח' ואפילו 50% ירידה TEWL עבור תוספת של 6% של ח'. בעקבות 2, 3 ו- 4 שעות של מרווחי המדידה, נשאר המצב דומה, קרי, יש ירידה TEWL במרווחי זמן כזה; ירידה TEWL לפחות מתרחש עבור 2% ח', בעוד הגדול ביותר הוא ראה ב – 6% בח. לאחר 2 h, TEWL הקטנת 16% עבור בח כ-2%, 37% עבור בח ב 4% ו- 39% עבור בח ב- 6%. ב-3 שעות, TEWL מצמצם עוד יותר על ידי 12% עבור בח כ-2%, ב 24% עבור בח ב 4%, 29% עבור בח ב- 6%. ב 4h, TEWL נוסף מקטין ב 20% ל-2% ח', 34% ל-4% ח' ו- 39% 6% בח. לאחר 24 שעות, לפחות הקטנת TEWL (16%) אירעה עבור תוספת 6% של ח', ואילו הגדולים (44%) נראתה על 4% תוספת של ח'; ח' ב-2% נצפתה לגרום לירידה 35% TEWL. ב 48 שעות, התוצאות נשארות דומה יחסית מאוזנת, עם הירידה לפחות TEWL (33%) עבור תוספת 6% של ח', הגדול (38%) של 4%, ח', 2% בח.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
היתרון של הידרוליזה אלקליין אנזימטי הוא כך שניתן יהיה לשנותה בהתאם יישומים עתידיים של ח'. לדוגמה, קוסמטיקה טיפוח לשיער היישומים שבהם צבע חום בקלילות של מוצר אינה מהווה מכשול, טמפרטורה גבוהה יותר ב הידרוליזה ניתן להחיל שמוביל תשואה גבוהה יותר של ח'. בנוסף, זמן העיבוד יותר במהלך שני השלבים של ההליך הטכנולוגי משפיע באופן משמעותי את התהליך הכולל יעילות – תשואה של ח' עולה 85%.
הממצאים למדידה הידרציה לעשות את זה ניכר, במהלך מרווח תחת פיקוח של מדידה (h 1-48), התוספת של 2% בח ל OB היא אופטימלית כיוון שהיא גורמת לעלייה 11-19% ב- SC הידרציה גברים מתנדבים, עלייה 12-22% למתנדבי האישה. ח' נוסף בעל התפלגות רחבה של משקל מולקולרי. אנו ממליצים כי חלק נמוך משקל מולקולרי שברים (MW < 20 kDa) חודר לאפידרמיס בעקבות בקשה על העור. לחות מוגברת של העור אחרי ששמתי על ניסוח בתוספת ח' מוסברת דרך המים מחייב ח' משכבות האפידרמיס התחתון במבנה SC, שמוביל היווצרות של H-גשרים בין ח' מולקולות מים. מנגנון פעולה גם מוזמנת על ידי מחברים30. אפקט לחות של ח' משולה עם לחות קונבנציונאלי (למשל, גליצרול, אוריאה ו חומצה היאלורונית) נבדקו בתחליב, ג'ל ניסוחים22.
מדידות TEWL להדגיש כי במהלך הזמן שנצפה מדידה (h 1-48) עבור גברים מתנדבים, כל ניסוחים עם תוספי ח' גרמה TEWL לדחות לאחר היישום. תוספת 2% של בח ל המכ גרמה לירידה TEWL של 11-23%, בהשוואה הרופא הקבוע טהור מתי המכ היה בתוספת 4% ח', TEWL ירד ב- 28-47%; זמן ח' 6% זה מופחתת על ידי ככל 31-54%. עבור אישה מתנדבים, שכשהם המכ עם 4% ח' מייצג את האפשרות הטובה ביותר, כמו ירידה 24-44% ב- SC TEWL. TEWL נמוך משמעותית על ניסוחים בתוספת ח' יכולה להיות מוסברת על ידי התהליך של שברים גבוה יותר משקל מולקולרי של ח' ויוצרים סרט מגן החלתו לאפידרמיס, ובכך מונע איבוד מים באפידרמיס. למעשה, ההשפעה החיובית ביותר של ח' על TEWL דומה או אפילו חורג, לשם השוואה, הערכים של TEWL הקליטה עבור ג'לים קוסמטיים או אמולסיות בתוספת 5-10% של גליצרול ו- 1-5% של sericin. באופן דומה, בעת השוואה בין ח' עם שמנים מינרליים קונבנציונאלי, ח' מוחלש TEWL ע י כ 25-30%31. בנוסף, המאפיינים מכשול של ח' הם יותר טובים מאלה, לדוגמה, אוריאה ו חומצה היאלורונית22.
ה-pH של פני העור:
להתייחסות, pH 3.5 4.3 הוא פני השטח של העור חומצי, 4.4 עד 5.5 pH נייטרלי מבחינה זו, pH 5.6-6.5 מייצג את פני השטח של העור בסיסי32. מצאנו כי ללא שינויים משמעותיים נצפו ב- pH של פני העור אחרי ששמתי על כולנו ניסוחים שנבדקו (OB + 2, 4 ו- 6% ח'); ה-pH של 4.6 ל 5.0 (גברים מתנדבים), ו- 4.9 ל 5.4 (האישה מתנדבים) מקביל משטח עור רגיל. ניתוח סוגיות (יותר מ- 2 ימים) לא הושגה.
שינויים, פתרון בעיות:
עיבוד נוצות העוף לתוך ח' קל מאוד, ופועל תחת הלחץ האטמוספרי, בטמפרטורה מתונה. התהליך יכול להיהפך בחיוב בקנה מידה מעבדה כדי מידה פילוט, של בקנה מידה תעשייתי. בסעיף 2 של הפרוטוקול שבו ח' הוא הומוגני עם האמולסיה (O/W) הבסיס, כמה שיפורים אפשריים. תעשייה לתרגל, O/W, W/O אמולסיות מוכנים על ידי ערבוב מים (W) שלב (מים + מסיסים במים לגמישותו) ושלב שמן (O) (שמן + מסיס בשמן, לגמישותו). ח' הוא מסיס במים, אז זה רייטינג למיזוג זה ישירות לתוך השלב מים של המערכת.
מגבלות של הטכניקה:
לוקליזציה של כל נקודה של מדידת לחות, TEWL ולחץ מרוקע נמדדים עם מד לחות העור אשר יקר.
שלבים קריטיים בתוך הפרוטוקול הם בעיקר סעיף 3. מצב התקינות הבדלים אינדיבידואליים, מעשנים/לא מעשנים, מגדר, הבדלי גיל, המחזור החודשי, מצבו הנפשי יכול להשפיע על לחות העור מדידה ו- TEWL. לרכישת תוצאות נציג, אותו אדם צריכים להחיל ניסוחים שנבדקו על האמות, הידרציה מידה וערכים TEWL. זה חיוני כדי לבצע מדידות כל חדר ממוזגים עם טמפרטורה יציבה, לחות יחסית. במקרה של מדידת ערכים במרווחי זמן של 24 ו-48 שעות, אקלום המתנדבים בחדר ממוזגים במשך לפחות 30 דקות לפני המדידה היא הכרחית.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
מאמר זה נכתב עם תמיכה של הפרויקט איגה/רגל/2017/007 של תומאס באטה אוניברסיטת Zlin.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Material or chemicals | |||
| LIPEX 100T | Novozymes | LJP30020 | Lipex - enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 100 KLU/g |
| Savinase Ultra 16L | Novozymes | PXN40001 | Savinase - enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 16 KNPU-S/g |
| Potassium hydroxide, KOH | Sigma-Aldrich | 302510289 | Potassium hydroxide, KOH, 97,0 %, Mr 56,11 |
| Phosphoric acid solution, H3PO4 | Sigma-Aldrich | W290017 | Phosphoric acid solution, H3PO4, 85 wt. % concentration in water, Mr 98,00 |
| Sodium chloride physiological solution | Sigma-Aldrich | 52455 | Tablets of BioUltra NaCl physiological solution; 1 tablet in 1000 mL of water yields 0.9 % NaCl |
| Sodium hydroxide, NaOH | Penta s.r.o. | 40216 | Sodium hydroxide, NaOH, 97,0 %, Mr 40,00 |
| AmiFarm (Cremor base-A) | Fagron | 608425 | Hydrophilic oil in water (O/W) cream base; the composition: aqua, paraffin, paraffin liquid, cetearyl alkohol, Laureth 4, sodium hydroxide, carbomer, methylparaben, propylparaben. |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| IKA EUROSTAR POWER control-visc stirrers | IKA-labortechnik | Z404020 | Digital laboratory stirrer, for tasks up to the high viscosity range, 230V, 1/cs |
| IKA Propeller stirrer, 3-bladed | IKA-labortechnik | R 1381 | Propeller stirrer, 3-bladed, stirrer Ø: 45 mm, shaft Ø: 8 mm, shaft length: 350 mm |
| Dialysis tubing closures | Sigma-Aldrich | Z371017-10EA | Dialysis tubing closures, red, size 110 mm |
| Dialysis tubing cellulose membrane | Sigma-Aldrich | D9402-100FT | Dialysis tubing cellulose membrane, average flat width 76 mm (3.0 in.) |
| DOMO Pot with stailess, LCD | DOMO Elektronic | DO42325PC | Preserving boiler stainless steel, 2000 W, 27-L container (diameter 37 cm, height 30 cm), temperature control 30-100 ° C, operation LCD display |
| Hettich zentrifugen Universal 32 | Gemini bv | 2770 GS1R | Mid bench centrifuge, speed 18000 rpm |
| LT 3 shaking device | Fischer Scientific | 6470.0002 | Orbital shaking device |
| KERN 440-47N | Kern | 440-47N | Laboratory balance |
| KERN 770 | Kern | 770 -N | Laboratory analytical balance |
| VENTICELL 222 - Komfort | BMT, MMM Group | C 131749 | Drying oven, temperature control 30-100 ° C, air circulation control |
| Vacucell 55 - EVO | BMT, MMM Group | B 050328 | Vacuum drying oven, temperature control 30-100 ° C |
| PULVERISETTE 19 | Fritsch | 19.1030.00 | Universal cutting mill, rotor with V-cutting edges and fixed knives |
| Multi Probe Adapter System MPA 5 | Courage & Kazaka Electronic | 10225237 | MPA 5 Station - equipment for measurement hydratation, TEWL and pH |
| Skin pH-meter PH 905 probe | Courage & Kazaka Electronic | Probe to specifically measure the pH on the skin surface or the scalp | |
| Corneometer CM 825 probe | Courage & Kazaka Electronic | Probe to determine the hydration level of the skin surface (Stratum corneum). | |
| Tewameter TM 300 | Courage & Kazaka Electronic | Probe for the assessment of the transepidermal water loss (TEWL) | |
| Heidolph RZR 2020 | Heidolph | 13-225-007-03-1 | Overhead stirrer, mechanical speed setting and stepless transmission; speed range 40-2000 rpm |
| Heidolph mechanical stirrer BR 10 | Heidolph | Z336688-1EA | Blade impeller crossed stirrer |
| Fagor FS 12 | Fagor | BTT-138 | Laboratory refrigerator with freezer space |
| WTW bench pH/mV meter | WTW | Z313165 | High-performance bench pH and pH/conductivity meters for routine and high precision laboratory measurements in research or quality control laboratories |
| Container | RPC Superfos | 13-L plastic bucket, diameter 26 cm, height 26 cm | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Software | |||
| Microsoft Office 2010 | Microsoft | ||
| C+K software | Courage and Khazaka Electronic GmbH | MPA 5 station operating software |
References
- United States Department of Agriculture - National Agricultural Statistics Services. Poultry Slaughter, 2016 Summary. , (2016).
- McGovern, V. Recycling poultry feathers: more bang for the cluck. Environ.Health Perspect. 108 (8), A336-A339 (2000).
- Gousterova, A., et al. Degradation of keratin and collagen containing wastes by newly isolated thermoactinomycetes or by alkaline hydrolysis. Lett. Appl. Microbiol. 40 (5), 335-340 (2005).
- Yamauchi, K., Yamauchi, A., Kusunoki, T., Khoda, A., Konishi, Y. Preparation of stable aqueous solution of keratins, and physiochemical and biodegradational properties of films. Biomed. Mater. Res. 31 (4), 439-444 (1996).
- Schrooyen, P. M. M., Dijkstra, P. J., Oberthur, R. C., Bantjes, A., Feijen, J. Partially carboxymethylated feather keratins. 2. Thermal and mechanical properties of films. J. Agric. Food Chem. 49 (1), 221-230 (2001).
- Mark, H. F., Gaylord, N. G., Bikales, N. M. Encyclopedia of Polymer Science Technology: vol. 8: Keratin to Modacrylic Fibers. , Wiley-Interscience. New York. (1968).
- Bertsch, A., Cello, N. A biotechnological process for treatment and recycling poultry feathers as a feed ingredient. Bioresour. Technol. 96 (15), 1703-1708 (2005).
- Grazziotin, A., Pimentel, F. A., de Jong, E. V., Brandelli, A. Nutritional improvement of feather protein by treatment with microbial keratinase. Animal Feed Sci. Technol. 126 (1-2), 135-144 (2006).
- Brandelli, A. Bacterial keratinases: useful enzymes for bioprocessing agroindustrial wastes and beyond. Food Bioprocess Technol. 1 (2), 105-116 (2008).
- Gusta, R., Ramnani, P. Microbial keratinases and their prospective applications: an overview. Appl.Microbiol. Biotechnol. 70 (1), 21-33 (2006).
- Vasileva-Tonkova, E., Gousterova, A., Neshev, G. Ecologically safe method for improved feather wastes biodegradation. International Biodeterior & Biodegradation. 63 (8), 1008-1012 (2009).
- Lodén, M. Hydrating Substance. Handbook of Cosmetic Science and Technology. Barel, A. O., Paye, M., Maibach, H. I. , Informa, Healthcare. New York. 107-119 (2009).
- Teglia, A., Secchi, G. Chapter 9: Proteins in Cosmetics. Principles of Polymer Science and Technology in Cosmetics and Personal Care. Goddard, E. D., Gruber, J. V. , Marcel Dekker. New York. (1999).
- Magdassi, S. Delivery systems in cosmetics. Colloids and Surfaces A: Physicochem. Engin. Aspects. 123-124, 671-679 (1997).
- Method for producing a protein hydrolysate. U.S. Patent. Dahms, G., Jung, A. , 20140323702 (2014).
- Pons, R., Carrera, I., Erra, P., Kunieda, G., Solans, C. Novel preparation methods for highly concentrated water-in-oil emulsions. Colloids and Surfaces A: Physicochem. Engin. Aspects. 91 (3), 259-266 (1994).
- Mokrejs, P., Hrncirik, J., Janacova, D., Svoboda, P. Processing of keratin waste of meat industry. Asian J. Chem. 24 (4), 1489-1494 (2012).
- Mokrejs, P., Svoboda, P., Hrncirik, J. Processing poultry feathers into keratin hydrolysate through alkaline-enzymatic hydrolysis. Waste Manage. Res. 29 (3), 260-267 (2011).
- Mokrejs, P., Krejci, O., Svoboda, P. Producing keratin hydrolysates from sheep wool. Orient. J. Chem. 27 (4), 1303-1309 (2011).
- Mokrejs, P., Krejci, O., Svoboda, P., Vasek, V. Modeling technological conditions for breakdown of waste sheep wool. Rasayan J. Chem. 4 (4), 728-735 (2011).
- Polaskova, J., Pavlackova, J., Vltavska, P., Mokrejs, P., Janis, R. Moisturizing effect of topical cosmetic products applied to dry skin. J. Cosmet. Sci. 64 (5), 329-340 (2013).
- Polaskova, J., Pavlackova, J., Egner, P. Effect of vehicle on the performance of active moisturizing substances. Skin Res. Technol. 21 (4), 403-412 (2015).
- Verdier-Sévrain, S., Bonté, F. Skin hydration: a review on its molecular mechanisms. J. Cosmet. Dermatol. 6 (2), 75-82 (2007).
- Darlenski, R., Sassning, S., Tsankov, N., Fluhr, J. W. Non-invasive in vivo methods for investigation of the skin barrier physical properties. Eur. J. Pharm. Biopharm. 72 (2), 295-303 (2009).
- Berardesca, E. EEMCO guidance for assessment of stratum corneum hydration: electrical methods. Skin Res. Technol. 3 (2), 126-132 (1997).
- Rogiers, V. EEMCO guidance for the assessment of transepidermal water loss in cosmetic sciences. Skin Pharmacol. Appl. Skin Physiol. 14 (2), 117-128 (2001).
- Ali, S. M., Yosipovitch, G. Skin pH: from basic science to basic skin care. Acta Derm. Venereol. 93 (3), 261-267 (2013).
- Agache, P., Humbert, P. Measuring the Skin. , Springer-Verlag. Berlin. (2004).
- Council for International Organizations of Medical Sciences. International Ethical Guidelines for Biomedical Research Involving Human Subjects. , Geneva. (2002).
- Ruland, J. K. Transdermal permeability and skin accumulation of amino acids. Int. J. Pharm. 72 (2), 149-155 (1991).
- Draelos, Z. D. Therapeutic moisturizers. Dermatol. Clin. 18 (4), 597-607 (2000).
- Courage and Khazaka Electronic GmbH, Technical Charges. Information and Operating Instructions for the Multi probe Adapter MPA and its Probe. , (2013).
