Summary
O objetivo do protocolo é preparar o hidrolisado de queratina de penas de galinha por hidrólise alcalina-enzimática e testar se adicionando hidrolisado de queratina em uma base de pomada de cosméticos melhora a função de barreira da pele (aumentando a hidratação e diminuindo a perda de água transepidermal). Os testes são realizados em homens e mulheres voluntários.
Abstract
Hidrolisado de queratina (KHs) é componentes padrão estabelecido em cosméticos de cabelo. Entender os efeitos hidratantes do KH é vantajoso para cosméticos de cuidados com a pele. Os objetivos do protocolo são: (1) para processar o penas de galinha em KH por hidrólise alcalina-enzimática e purificá-la pela diálise e (2) para testar se adicionar KH em uma base de pomada (OB) aumenta a hidratação da pele e melhora a função de barreira da pele, diminuindo perda de água transepidermal (TEWL). Durante a hidrólise alcalina enzimáticos penas primeiro são incubadas a uma temperatura mais elevada em um ambiente alcalino e em seguida, sob condições suaves, hidrolisadas com enzima proteolítica. A solução de KH é diálise, vácuo seco e moído a um pó fino. Formulações cosméticas, compreendendo de óleo em emulsão de água (O/W) contendo 2, 4 e 6% do peso de KH (com base no peso do OB) estão preparados. Testar as propriedades hidratantes do KH é efectuado em 10 homens e 10 mulheres em intervalos de 1, 2, 3, 4, 24 e 48 h. testado formulações estão distribuídas em locais de antebraço volar desengordurados. A hidratação do estrato córneo (SC) é avaliada pela medição da capacidade da pele, que é um dos métodos usados e simples mais todo o mundo. TEWL baseia-se na medição da quantidade de água transportada por uma área definida e o período de tempo da pele. Ambos os métodos são totalmente não-invasiva. KH faz para uma excelente oclusiva; dependendo a adição de KH no OB, ela traz uma redução de 30% em TEWL após a aplicação. KH também funciona como um umectante, como liga-se água de camadas inferiores da epiderme para a SC; com a adição de KH ideal no OB, se para 19% aumento da hidratação em homens e 22% ascensão nas mulheres ocorre.
Introduction
A indústria de curtumes, indústria alimentar e matadouros anualmente produzem imensas quantidades de subprodutos sólidos queratina – lã, penas, cerdas, cascos, garras, chifres e afins. De acordo com dados estatísticos mais recentes, o peso total de galinhas, perus, patos e outras aves abatidas nos EUA é 62,5 bilhões de libras por ano1; na União Europeia é aproximadamente 28,7 bilhões libras por ano. Considerando que as penas fazem até 8,5% do peso total das aves domésticas, os EUA sozinho produz anualmente aproximadamente 5,3 bilhões quilos de resíduos penas2.
Queratina é uma proteína que exibem alta resistência química, porque é fortemente reticulado com pontes dissulfeto que processam seu processamento difícil. Obtenção de produtos solúveis requer a clivagem de ligações cruzadas e possivelmente realizando a hidrólise das ligações peptídicas3. Clivagem das pontes dissulfeto pode proceder por meio de uma reação do ânion tiol de acordo com o seguinte padrão de4,5:
Sum– + – SbSc– ↔ – Sb– + – SaSc–
Com um nível muito elevado de pH, hidrólise das pontes dissulfeto também aparece, em conformidade com o padrão6
-SS– + → de OH– –– S + -SOH
Sob condições suaves (pH aproximadamente 8), até mesmo sulfitolysis se realiza de acordo com o seguinte padrão:
– SS – + HSO3– → – SH + SSO –3–
A forma mais econômica de degradar queratina é degradação microbiana, que se caracteriza por condições de reação suave durante processamento e alta repartição eficiência (ca. 90%)7,8. Keratinases são produzidas por algumas bactérias isoladas de solo e queratina resíduos9. Keratinases microbianas da hidrolise de estruturas rígidas e fortemente reticulado queratina10 e o KH resultante preparado é rico em proteínas solúveis, sem perda de aminoácidos essenciais detectado nele11.
A fim de incorporar uma proteína em preparações cosméticas (por exemplo, emulsões, loções e géis), os requisitos assegurem que tais proteínas são solúveis em água, os sistemas determinados são transparentes e que re-agregação dos peptides é evitada devido a interações hidrofóbicas. Portanto, uma prática comum é aplicar hidrolisados de proteínas, como colágeno hidrolisado, elastina e queratina. Ao adicionar hidrolisados em emulsões cosméticas, sejam tomadas medidas para assegurar que o hidrolisado primeiro é dissolvido em água. Em alguns casos, é desejável que a proteína (ou hidrolisado) é solúvel em álcool ou outros solventes orgânicos12.
KH é normalmente caracterizado em xampus, condicionadores, loções e soros nutritivos para o cabelo, bem como mascaras, unha polonês e agentes de maquiagem do olho. Os efeitos KH declarados geralmente incluem formando uma película protetora, alisando o cabelo ou unha estrutura, elevada plasticidade e aparência da formação tratada, regulando a consistência dos produtos e incentivando a formação de espuma13 , 14. também tem sido demonstrado que o KH reduz a tensão superficial, portanto, suplementação em cosméticos pode facilitar a redução na quantidade de emulsificante adicionado para estabilizar os cremes. KH limitar os efeitos da irritação provocada por detergentes (surfactantes) para a pele, olhos e cabelos, reduzindo assim os efeitos colaterais potenciais de detergente sobre o tecido (por exemplo, a desidratação da pele, dureza e função de diminuição da barreira de a pele). A alta capacidade de armazenamento em buffer de hidrolisados também é explorada para estabilizar o pH dos produtos cosméticos; peptídeos de menor comprimento têm um maior buffer efeito15,16. KHs se estabeleceram como componentes padrão no cabelo e cosméticos de unhas bem como sendo utilizado em produtos para cuidados com a pele, estudos sobre os efeitos hidratantes do KH não aparecem na literatura contemporânea.
Alcalino-enzimático tecnologia foi desenvolvida para o processamento de subprodutos de queratina em KH, e teste ativo está em processo sobre os efeitos de uma série de aditivos cosméticos17,18,19,20 , 21 , 22. a vantagem de dois estágios de hidrólise alcalina-enzimática usando proteases microbianas para penas de galinha atinge alta eficiência sob condições de reação suave e a qualidade do KH é muito elevada em contraste com a hidrólise empregada em ácidos fortes ou alcalinos. Na primeira fase, as penas são incubadas a uma temperatura mais elevada em um ambiente alcalino, que parcialmente interrompe a estrutura de queratina e incha as penas; Depois de ajustar o pH, as penas são hidrolisadas com uma enzima proteolítica em condições suaves na segunda fase. O KH dializado possui um alto teor de proteínas.
Efeitos do método descrito aqui são penas de aves de capoeira de processamento em um KH através de hidrólise alcalina-enzimática e testar o efeito das propriedades hidratantes de KH aplicada à cosmética emulsão O/W. As propriedades hidratantes são investigadas por métodos não-invasivos instrumental na vivo. Os métodos mais frequentes para medir a função de hidratação e barreira de pele de SC incluem medição de propriedades elétricas da pele (condutância ou capacitância). Diferentes métodos para investigar hidratação SC incluem perto método imaginando multiespectral infravermelho (NIM), espectroscopia de ressonância magnética nuclear, tomografia de coerência óptica ou transferência térmica transiente23. Função de barreira de SC se correlaciona com a TEWL de SC e é medido pelo método de câmara ventilada, método de câmara sem ventilação e câmara aberta método24.
Propriedades das formulações modelo são determinadas usando o sonda Multi adaptador 5 MPA com três tipos de sondas. A primeira coisa, corneometer CM 825, medidas da pele hidratação avaliando alterações na capacidade elétrica da superfície da pele; o capacitor de medição mostra alterações na capacidade da superfície da pele em unidades de corneometric. O corneometer dá apenas uma avaliação relativa da pele hidratação25. Para TEWL, a segunda sonda, tewameter TM 300, é usada para medir o gradiente de densidade de evaporação de água (em um instrumento de câmara aberta com base na lei de Fick difusão) da pele indiretamente por dois pares de sensores (temperatura e umidade relativa) indicando a quantidade de água transportada por uma área definida e o período de tempo (g/m2/h). Este método pode detectar até mesmo a menor perturbação do de função de barreira da pele26. O pH da pele é um indicador da barreira e função antimicrobiana do SC27. A acidez do manto da pele foi medida por uma sonda de pele PH 905 (terceira) conectada à estação 5 MPA. Esta sonda especialmente projetada consiste de um eletrodo de vidro achatadas para contacto com a pele cheia, ligado a um voltímetro. O sistema de medidas possíveis alterações devido à atividade de cátions hidrogênio em torno da camada muito fina de formas semi-sólidas medido no topo da sonda. As alterações na tensão são exibidas como pH28.
Apresentamos experiências divididas em três seções: (1) preparação do KH de galinha penas por duas etapas hidrólise alcalina-enzimática e sua purificação pela diálise (remoção de sais e frações low-molecular), (2) preparação de cosméticos formulações contendo 2, 4 e 6% KH e (3) testar as propriedades de KH medindo pele, TEWL e a hidratação da pele pH. Testes foi realizado em 10 mulheres com idade média de 27,2 anos e em 10 homens com idade média de 26,2 anos. O método de seleção dos voluntários e os testes em si foram conduzidos em conformidade com os princípios éticos internacionais de investigação biomédica utilizando cobaias humanas29; todas as pessoas que deram seu consentimento antes da inclusão no estudo. Antes de testar iniciou, os voluntários foram convidados a preencher um questionário sobre seu estado de saúde. Os voluntários comprometidos com a Evite aplicar qualquer produto cosmético para os sites de teste e regiões circundantes, durante as 24 horas antes e durante o período de teste; Além disso, foram permitidos somente breve noite lavagens com água corrente.
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Protocol
Voluntários foram recrutados entre os funcionários e estudantes da nossa Universidade. O método de seleção foi conduzido de acordo com "as diretrizes éticas internacionais para biomédica pesquisa envolvente cobaias humanas. Conselho para organizações internacionais de ciências médicas, Genebra (2002)." KH é um ingrediente cosmético comum usado em produtos para cabelos (xampus, condicionadores, etc.) e, portanto, não é necessária a aprovação do Conselho de revisão institucional.
1. processo de penas de galinha em KH
- Colete penas de galinha de uma granja.
- Lave quaisquer impurezas insolúveis e restos de sangue das penas de galinha com um excesso suficiente de água fresca em execução (frio). Coloque as penas em uma placa plana e seca durante a noite a 50 ° C.
Nota: O protocolo pode ser pausado aqui. - Moer 50 penas g secas em um moinho de corte (apropriado para materiais macios de dureza média da amostra e materiais fibrosos) em uma finura final de 1,0 mm. em alternativa, a finura final de penas moídas pode ser mais alto, mas não mais de 3,0 mm.
Nota: O protocolo pode ser pausado aqui. -
Desengordurar as penas
Nota: O método mais eficaz e económico de desengorduramento de penas de aves de capoeira é usando uma enzima lipolítica comercial.- Em um recipiente de 27-L caldeira de aço inoxidável com controle de temperatura, misture as penas com água pré-aquecida até 40 ± 2 ° C em um 1:75 de relação de peso. Adicionar uma enzima lipolítica (atividade 100 KLU/g) em uma dose de 1,5-2,0% (relacionadas com pesados-em penas secas) e suavemente agitar o conteúdo com um agitador sobrecarga por 5 min.
- Ajuste o pH da mistura de 9,0 ± 0,2, o valor correspondente para a atividade máxima da enzima lipolítica adicionando NaOH ou 1% H3PO4 solução a 1%. Agitar a mistura por 5 min com um palito, sobrecarga e em seguida, verifique e re-ajustar o nível de pH usando um medidor de pH/mV de bancada de laboratório.
- Suavemente agitar a mistura com um agitador sobrecarga por 24 h a 40 ± 0,5 ° C. Alternativamente, incubar a mistura a 40 ± 0,5 ° C e durante as primeiras 6 horas de incubação, mexa o conteúdo em intervalos de 1 h.
- Filtrar a mistura por uma peneira fina (tamanho de 100 µm) e lavar as penas desengorduradas com um fluxo de água doce (frio) em execução. Seca as penas em uma placa plana a 50 ° C em uma câmara de secagem durante a noite.
Nota: O protocolo pode ser pausado aqui.
- Realize a primeira fase da hidrólise de penas de galinha. Misture as penas com solução de água KOH de 0,3% em um peso proporção 01:50 e mexa delicadamente com um agitador superior a 60 ± 0,5 ° C por 24 h. O pH da mistura diminui de aproximadamente 12,5 no início da incubação de aproximadamente 11,0 no final da incubação. Depois de terminar a primeira fase de hidrólise, ajustar o pH da mistura para o nível correspondente à atividade máxima da enzima proteolítica com 10% H3PO4 (neste caso, a um nível de 9,0 ± 0,2) pela adição de 1% de NaOH.
- Realize a segunda fase da hidrólise de penas de galinha. Adicione à mistura, a enzima proteolítica em uma dose de 5,0% (relacionados à matéria seca, da quantidade de penas pesadas-no início da primeira fase da hidrólise). Suavemente agitar com um agitador superior a 60 ± 0,5 ° C para 8 h aquecer a mistura (no mesmo recipiente 27-L caldeira aço inoxidável) para um ponto de ebulição (100 ° C) e deixe ferver por 10 minutos para inativar a enzima.
- A solução de KH (preparado na etapa 1.6) separar o remanescente não dissolvido por filtragem através de papel de filtro de baixa densidade em um funil de Buchner com ligeira pressão-vácuo; Como alternativa, use uma centrífuga.
Nota: O protocolo pode ser pausado aqui por vários dias se uma solução de KH é armazenada a 5 ± 1 ° C. - No balde de plástico (26 cm de diâmetro x 26 cm de altura) Dialize o KH utilizando membrana MWCO 12K para remover sais e pequenos peptídeos. Despeje 400 mL da solução de KH na tubulação da diálise e Dialize ele contra 4 L de água destilada para 80 h à temperatura ambiente; Mude a água destilada após 18, 36 e 60 h.
- Converter uma solução dializada de KH em um prato de antiadesivo (por exemplo, silicone) na proporção de 500ml para 1.000 cm2 placa área, vácuo seco em uma película fina a 40 ± 0,5 ° C durante a noite, moer para formar um pó fino e mantê-lo em um recipiente fechado num exsicador.
Nota: O protocolo pode ser pausado aqui por vários meses se o pó KH é armazenado num local seco.
2. preparar formulações cosméticas com KH
Nota: Usado para testar o OB era uma base comercial de O/W creme hidrófila e composto de aqua, parafina, parafina líquido, cetearyl álcool, Laureth 4, hidróxido de sódio, carbomer, metilparabeno e propilparabeno.
- Preparar formulações contendo 2, 4 e 6% KH (de acordo com o peso de base da pomada). Pesar a quantidade de pó KH dentro de um vaso de polietileno (7 cm de diâmetro x 10 cm de altura) e adicionar o OB pelo montante que garante que o peso total da formulação é igual a 50 g; Veja a receita no quadro 1.
| Formulação de cosmética | Peso de pomada base [g] | Peso do hidrolisado de queratina [g] | Peso total [g] | |||||
| Pomada de base | 50 | 0 | 50 | |||||
| Pomada de base + 2% KH | 49 | 1 | ||||||
| Pomada de base + 4% KH | 48 | 2 | ||||||
| Pomada de base + 6% KH | 47 | 3 | ||||||
Tabela 1: Peso-em quantidades de hidrolisado de base e queratina pomada para preparar formulações cosméticas.
- Homogeneizar a mistura com um liquidificador de 3 lâminas de laboratório por 10 min a 134.16 x g e misture utilizando um agitador de sobrecarga mecânico. Manter as formulações preparadas a 5 ± 1 ° C e aquecê-los em temperatura ambiente por 2 h antes da utilização.
Nota: Homogeneizando a mistura de OB com KH pode ser feito com um palito, não-digital também. Num agitador não-digital, existem escalas com a velocidade aproximada (em rpm) também. Agitação suave vai funcionar melhor para esta etapa.
Nota: O protocolo pode ser pausado aqui por até 5 meses se as formulações são armazenadas em 5 ± 1 ° C.
3. testar as propriedades de KH por medição de hidratação da pele, TEWL e pH
Nota: Realizar todas as medições em um quarto climatizado a 23 ± 2 ° C e a umidade relativa de 56 ± 3%.
- Lugar 5 tiras de papel de filtro (tamanho 2 x 4 cm) na solução fisiológica (0,90% NaCl) e deixá-los por aproximadamente 1 minuto na solução.
- Aplicar duas tiras para o lado interno do antebraço direito e três para o lado interno do antebraço esquerdo e corrigi-los para 4h com esparadrapos. Esta etapa é para desengordurar a pele e eliminar as características individuais da pele no local. Após 4 h, remover as tiras e demark as áreas com uma caneta permanente, veja a Figura 1.
Figura 1: método para localização de formulações de teste no antebraço dos membros superiores direito e esquerdos. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
- Aplicar 0,1 mL das formulações testadas em cada local dos sites desengordurados antebraço utilizando seringas e espalhe-o sobre toda a superfície marcada. No antebraço esquerdo, não aplicar nada para o primeiro site (é o controle), aplicar o OB para o segundo local e o OB + 2% KH para o terceiro. Aplicar o OB + 4% KH e OB + 6% KH no braço direito.
- Medir cada amostra em cada local e cada intervalo (1, 2, 3, 4, 24 e 48 h) e tirar 5 leituras com a sonda de medidor de hidratação da pele para a hidratação da pele, 15 leituras com a sonda do medidor TEWL para pele TEWL e 1 leitura com a sonda de medidor de pH da pele para o pH da pele. Não permitir que voluntários aplicar qualquer produto cosmético para os sites de teste e áreas adjacentes durante o período de teste; Eles são permitidos breve noite lavagens com água corrente.
Nota: O protocolo pode ser pausado aqui. - Processe as leituras resultantes por características de base numéricas das estatísticas descritivas, usando software de planilha eletrônica. Das 5 hidratação leituras medidas para cada amostra, ignorar as menores e as leituras mais altas e calcular apenas 3 leituras para a média aritmética e desvio-padrão. Das 15 TEWL leituras medidas para cada amostra, ignorar os 5 primeiros e calcular apenas 10 leituras para média aritmética e desvio-padrão.
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Representative Results
O KH preparado de acordo com o procedimento aqui apresentado (ver Figura 2) é amarelo na cor, facilmente solúvel em água com teor elevado de proteínas (sólidos inorgânicos representam < 2.0%); o pH da solução 1,0% de KH é 5.3 e preenche os requisitos para hidrolisados de grau cosmético. O rendimento do KH de 50 g de matéria-prima é aproximadamente 30%. A distribuição de peso molecular de KH foi determinada por SDS-PAGE e é mostrada na Figura 3.
Figura 2: imagem representativa do hidrolisado de queratina. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: SDS-PAGE de padrões de hidrolisado e proteína queratina. Lane 1: marcador de peso molecular ultra baixa escala (3.5-26,6 kDa). Faixas 2, 3 e 4: hidrolisado de queratina, preparado em 3 lotes. 120 µ g re-suspenso em 20 carregamento µ l de tampão KH foi carregado em cada poço. Lane 5: marcador de peso molecular vasta gama (6.5-200 kDa)
A hidratação e TEWL valores foram delineados no voluntários diferentes e, portanto, não podem ser comparados entre si. Portanto, os valores são expressos como mudança de por cento em comparação com o OB no site tratado com as formulações, o último contendo 2, 4 e 6% adições de KH em intervalos para medição de 1, 2, 3, 4, 24 e 48 h. Os valores de pH para a pele são expressos através da média aritmética dos valores de pH da pele gravadas para todos os voluntários. Os resultados para alteração na hidratação e TEWL por cento, em relação o OB e para os níveis de pH da pele são apresentados na tabela 2 para 10 homens e na tabela 3 para 10 voluntários de mulher.
| Homens | ||||||
| Tempo | 1 h | 2 h | 3 h | 4 h | 24 h | 48 h |
| Hidratação (variação percentual vs Dj_fabio_martins base) ± SD | ||||||
| Pomada de base + 2% KH | + ± 15 16 | + ±16 14 | + ±9 12 | + 19 ±14 | + ±18 11 | + ±9 15 |
| Pomada de base + 4% KH | + ±19 6 | + 1 ±18 | + ± 10 5 | + ±16 7 | + ±9 11 | + ± 15 14 |
| Pomada de base + 6% KH | -± 25 3 | -±14 4 | -±18 7 | -±17 4 | + ±14 11 | -±14 17 |
| TEWL (variação percentual vs Dj_fabio_martins base) ± SD | ||||||
| Pomada de base + 2% KH | -± 15 20 | -±22 20 | -±21 11 | -±21 20 | -± 20 23 | -21±17 |
| Pomada de base + 4% KH | -± 12 28 | -± 20 29 | -± 20 28 | -±24 28 | -47 ± 20 | -± 20 36 |
| Pomada de base + 6% KH | -±16 36 | -±21 41 | -±17 31 | -±17 36 | -± 20 53 | -±17 54 |
| pH | ||||||
| Controle | 4,7 ± 0,5 | 5.1 ±0.4 | 4.9-±0.4 | 5.1 ± 0,3 | 4,6 ± 0,5 | 4.8 ±0.7 |
| Pomada de base | 4,8 ± 0,5 | 5.1 ± 0,3 | 4.9 ± 0,3 | ±0.4 5.0 | 4.6 ±0.4 | 0,6 5.0 |
| Pomada de base + 2% KH | 0,6 5.0 | 4.8 ±0.4 | 4.9 ± 0,5 | 4.9 ± 0,5 | 4.7 ± 0,3 | 0,6 5.0 |
| Pomada de base + 4% KH | 4,8 ± 0,5 | 4.9 ± 0,3 | 4.8 ±0.4 | 4,8 ± 0,3 | 4,7 ± 0,5 | 4,8 ± 0,5 |
| Pomada de base + 6% KH | 4,7 ± 0,5 | ± 0,2 5,0 | 4.9-±0.4 | 4.8 ±0.4 | 4.8-0,6 | 0,6 5.0 |
Tabela 2: Resultados para mudam na hidratação, TEWL e pH da pele de voluntários de 10 homens com os intervalos de medição de 1, 2, 3, 4, 24 e 48 h.
| Mulheres | ||||||
| Tempo | 1 h | 2 h | 3 h | 4 h | 24 h | 48 h |
| Hidratação (variação percentual vs Dj_fabio_martins base) ± SD | ||||||
| Pomada de base + 2% KH | + ±7 22 | + 15 ± 6 | + 15 ± 8 | + ±9 12 | + ±14 14 | + ±9 18 |
| Pomada de base + 4% KH | ± 4 0 | -± 5 6 | -2 ± 5 | + 1 ±7 | + ±13 10 | + ± 10 15 |
| Pomada de base + 6% KH | -12 ± 5 | -14 ± 2 | -±7 9 | -±9 5 | + ± 12 8 | + ±9 10 |
| TEWL (variação percentual vs Dj_fabio_martins base) ± SD | ||||||
| Pomada de base + 2% KH | -±1.6 32 | -±3.0 16 | -±1.3 12 | -±0.9 20 | -±1.9 35 | -±1.6 38 |
| Pomada de base + 4% KH | -±1.1 41 | -±2.7 37 | -±0.8 24 | -±0.9 34 | -44 ± 1,5 | -±1.9 38 |
| Pomada de base + 6% KH | -±1.4 50 | -±2.2 39 | -±0.7 29 | -±0.9 39 | -±2.4 16 | -±2.1 33 |
| pH | ||||||
| Controle | ±0.7 5.0 | 5.3 ± 0,3 | 4.9-±0.7 | ± 0,5 5,0 | ±0.8 5.0 | 4.7 ±0.7 |
| Pomada de base | 5.2 0,6 | 5.3 ± 0,3 | 5.2 ±0.7 | ±0.4 5.0 | 5.1 ±0.8 | 4.8 ±0.7 |
| Pomada de base + 2% KH | 5.4 ±0.7 | 5.1 ±0.4 | 4.9-±0.4 | 5.1 ±0.7 | 4.9-±0.7 | ± 1,0 5,0 |
| Pomada de base + 4% KH | 5.2 ±0.7 | 5.1 ± 0,3 | ±0.4 5.0 | 4.9-±0.4 | 5.1 0,6 | 5.1 ± 0,2 |
| Pomada de base + 6% KH | 5.2 ±07 | 5,2 ± 0,2 | ±0.4 5.0 | ± 0,3 5.0 | 5.4 0,6 | 5.2 ±0.4 |
Tabela 3: Resultados para mudam na hidratação, TEWL e pH da pele de voluntários de 10 mulheres com os intervalos de medição de 1, 2, 3, 4, 24 e 48 h.
Hidratação de SC para homens voluntários:
Em curtos intervalos de medição (1-4 h), os maiores aumentos na hidratação da pele (12-19%) foram registrados para formulações completando o OB com 2% de KH; a adição de 4% KH mostrou um aumento menor (% de 1-7) hidratação. Por outro lado, o KH em 6% reflecte-se negativamente sobre valores para hidratação SC (uma diminuição de % 3-7). Após 24h de medida, um aumento de 11% na hidratação de SC foi discernido por todas as adições de KH para o OB testado. A mesma tendência continuou mesmo depois de 48 h, seguindo com um ligeiro aumento na hidratação que ainda permaneceu: um aumento de 15% para KH em 2%, um aumento de 14% para a adição de 4% de KH e a queda de 17% para KH em 6%.
Hidratação de SC para voluntários de mulheres:
É observável que suplementando o OB com 2% KH provoca uma aproximada 22% aumento da hidratação de SC, em relação ao OB sozinho, tão cedo quanto às 1h de medição; uma adição de 4% de KH para o OB, na verdade, não tem efeito na hidratação; enquanto, por outro lado, adicionando 6% KH para o OB é refletida em uma diminuição aproximada de 12% na hidratação, como em comparação com pura OB. Similar tendências são vistas após 2, 3 e 4 h de medição, a qual aumenta de hidratação por 12-15% para a suplementação com 2% KH; para maiores adições de KH, a hidratação permanece igual ou diminui. Após 24h de medição, a hidratação foi gravada como superior para o OB para todas as adições KH testados; o maior aumento (14%) em hidratação ocorreu para a adição de 2%, KH, enquanto o aumento menor (8%) foi visto para suplementação em 6% de KH. Resultados semelhantes são obtidos após 48 h de medição, no qual hidratação maior do que para OB puro foi gravada para todas as amostras com adições de KH; o maior aumento (18%) hidratação ocorreu para a adição de KH 2%, enquanto o aumento menor (10%) foi anotado para suplementação de KH em 6%.
TEWL para homens voluntários:
Os resultados da marca TEWL, claro que formulações suplementado com KH diminuir TEWL, quando aplicado sobre a pele, em comparação com OB. puro Uma quantidade aumentada de KH exerceu um efeito positivo sobre os valores mais baixos de TEWL. Após 1 h depois de aplicar as formulações, TEWL foi gravado como 20% menor do que a puro OB, pertencentes a uma formulação com 2% KH; enquanto KH em 4% caiu 28% em TEWL; Considerando que o KH em 6% resultou em um dramático 36% diminuição de TEWL. Com efeito, os valores TEWL diminuídos também foram observados em 2, 3 e 4 h de medição para formulações suplementado com KH. Após 24 e 48 h, TEWL foi ainda significativamente reduzido em sites tratadas com as formulações de KH. Após 24h, TEWL observada na pele foi 23% inferior para o OB com adição de 2% de KH do que no local para OB puro; KH em 4% diminuído cerca de 47% TEWL, enquanto KH em 6% desencadeada TEWL para cair em 53%. Uma tendência semelhante é evidente, mesmo depois de 48 h: a TEWL para pele tratada com OB contendo 2% KH foi 21% menor do que no local para OB puro; o KH em 4% mostrou uma TEWL em 36% menor; e o KH provocada por uma queda de 54% a 6%.
TEWL para voluntários de mulheres:
É evidente que todas as adições monitoradas de KH para OB deverão reflectir-se na reduzida TEWL, como visto em voluntários homens. Após 1 h de aplicação, uma diminuição significativa no TEWL foi gravada para amostras OB contendo todas as adições de KH; um 32% redução de TEWL foi vista a adição de 2% de KH, em torno de uma diminuição de 41% para 4% KH e até mesmo uma queda de 50% na TEWL para suplementação de 6% de KH. Após 2, 3 e 4 h de intervalos de medição, a situação permanece semelhante, ou seja, há uma diminuição TEWL tais intervalos de tempo; a menor queda de TEWL ocorre por 2% KH, enquanto o maior é visto para 6% KH. Após 2 h, a TEWL diminui 16% para KH em 2%, 37% para KH em 4% e 39% para KH em 6%. Em 3h, TEWL diminui mais de 12% para KH em 2%, 24% para KH em 4% e 29% para KH em 6%. A 4 h, TEWL mais diminui em 20% para 2% KH, 34% para 4% KH e 39% para 6% KH. Após 24 h, a redução menos TEWL (16%) ocorreu a adição de 6% de KH, enquanto o maior (44%) foi visto por 4% de suplementação de KH; o KH 2% foi observado para causar uma diminuição de 35% em TEWL. A 48 h, os resultados permanecem relativamente equilibrada, com a diminuição menos TEWL (33%) para a adição de 6% do KH, o maior (38%) para 4% e similares KH e 2% KH.
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Discussion
A vantagem de hidrólise alcalina-enzimática é que ele pode ser modificado de acordo com as aplicações futuras do KH. Por exemplo, em aplicações de cosméticos capilares onde uma cor levemente acastanhada de um produto não é um obstáculo, uma temperatura mais elevada na hidrólise pode ser aplicada levando a um maior rendimento de KH. Além disso, o tempo de processamento durante as duas fases do processo tecnológico significativamente afeta o processo global de eficiência – rendimento de KH sobe para 85%.
As conclusões para a medição de hidratação fica evidente que, durante o intervalo de medição (1-48 h), a adição de 2% de monitorados KH para OB é ideal uma vez que provoca um aumento de 11-19% na hidratação de SC para homens voluntários e um aumento de 12-22% para voluntários de mulher. O KH é adicionado possui uma ampla distribuição de peso molecular. Sugerimos que uma porção de frações de baixo peso molecular (MW < 20 kDa) penetra a epiderme após aplicação na pele. Maior hidratação da pele depois de colocar em uma formulação suplementada com KH é explicada através da água de ligação do KH de camadas inferiores da epiderme para a estrutura do SC, levando à formação de pontes de H entre a água e moléculas KH. Este mecanismo de ação também é abraçado por alguns autores de30. O efeito hidratante da KH é comparável com hidratantes convencionais (por exemplo, glicerol, ureia e ácido hialurônico) que foram testados em emulsão e gel formulações22.
Medição de TEWL destaca que durante o tempo observado de medida (1-48 h) para voluntários homens, todas as formulações com suplementação de KH causaram TEWL a declinar após a aplicação. A adição de 2% de KH para o OB causou uma redução na TEWL 11-23%, em comparação com OB. puro Quando o OB foi suplementado com 4% KH, TEWL caído 28-47%; tempo para KH é diminuída pelo quanto 31-54% a 6%. Para os voluntários de mulher, completando o OB com 4% representa a KH a melhor opção, como houve uma redução de 24-44% em SC TEWL. A TEWL significativamente menor para formulações suplementado com KH pode ser explicado pelo processo de frações de maior peso molecular de KH, formando uma película protetora, uma vez aplicada a epiderme, evitando assim a perda de água epidérmica. Na verdade, o efeito altamente positivo do KH na TEWL é comparável ou mesmo excede, por uma questão de comparação, valores de TEWL gravado para cosmético gel ou emulsões suplementados com 5-10% de glicerol e 15% de sericin. Da mesma forma, ao comparar o KH com convencional de óleos minerais, KH diminuído TEWL por aproximadamente 25-30%31. Além disso, as propriedades de barreira de KH são melhores do que, por exemplo, as da ureia e do ácido hialurónico22.
pH da superfície da pele:
Para referência, pH 3,5 a 4.3 é uma superfície de pele ácida, pH 4,4 a 5.5 é neutra a esse respeito e pH de 5,6 a 6,5 representa uma superfície de pele básico32. Nós achamos que não há mudanças significativas foram observadas em pH da superfície da pele depois de colocar em todas as formulações testadas (OB + 2, 4 e 6% KH); o pH de 4,6 a 5,0 (voluntários homens) e 4.9 para 5.4 (voluntários de mulher) corresponde a uma superfície de pele normal. A análise de longo prazo (mais de 2 dias) não foi cumprida.
Modificações e solução de problemas:
Transformação das penas de galinha em KH é muito fácil e é executado sob pressão atmosférica e a temperatura amena. O processo pode ser transformado favoravelmente de uma escala de laboratório para uma escala de planta piloto e escala industrial. Na secção 2 do protocolo onde o KH é homogeneizado com a base de emulsão (O/W), algumas modificações são possíveis. Na indústria em prática, O/W e w emulsões são preparados pela mistura de água (W) fase (água + ingredientes cosméticos solúveis em água) e fase de óleo (O) (óleo + ingredientes cosméticos solúveis em óleo). KH é solúvel em água, por isso é favorável para misturá-lo diretamente para a fase de água do sistema.
Limitações da técnica:
Localização de cada ponto de medição hidratação e TEWL e martelado pressão são medidos com medidor de hidratação da pele, que é caro.
Passos críticos dentro do protocolo são principalmente na secção 3. O estado de saúde, as diferenças individuais, fumadores/não fumadores, gênero, diferenças de idade, menstruação e condição mental podem influenciar a medição de hidratação da pele e TEWL. Para a aquisição de resultados representativos, a mesma pessoa deve aplicar-se formulações testadas no antebraço e hidratação de medida e valores TEWL. É vital para realizar todas as medições em um quarto climatizado com uma umidade relativa e uma temperatura estável. No caso de medir os valores em intervalos de 24 a 48 h, a aclimatação dos voluntários em um quarto climatizado para pelo menos 30 minutos antes da medição é necessária.
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Disclosures
Os autores não têm nada para divulgar.
Acknowledgments
Este artigo foi escrito com o apoio do projeto IGA/FT/2017/007 de Tomas Bata Universidade em Zlin.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Material or chemicals | |||
| LIPEX 100T | Novozymes | LJP30020 | Lipex - enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 100 KLU/g |
| Savinase Ultra 16L | Novozymes | PXN40001 | Savinase - enzyme produced by submerged fermentation of a genetically-modified microorganism, activity 16 KNPU-S/g |
| Potassium hydroxide, KOH | Sigma-Aldrich | 302510289 | Potassium hydroxide, KOH, 97,0 %, Mr 56,11 |
| Phosphoric acid solution, H3PO4 | Sigma-Aldrich | W290017 | Phosphoric acid solution, H3PO4, 85 wt. % concentration in water, Mr 98,00 |
| Sodium chloride physiological solution | Sigma-Aldrich | 52455 | Tablets of BioUltra NaCl physiological solution; 1 tablet in 1000 mL of water yields 0.9 % NaCl |
| Sodium hydroxide, NaOH | Penta s.r.o. | 40216 | Sodium hydroxide, NaOH, 97,0 %, Mr 40,00 |
| AmiFarm (Cremor base-A) | Fagron | 608425 | Hydrophilic oil in water (O/W) cream base; the composition: aqua, paraffin, paraffin liquid, cetearyl alkohol, Laureth 4, sodium hydroxide, carbomer, methylparaben, propylparaben. |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| IKA EUROSTAR POWER control-visc stirrers | IKA-labortechnik | Z404020 | Digital laboratory stirrer, for tasks up to the high viscosity range, 230V, 1/cs |
| IKA Propeller stirrer, 3-bladed | IKA-labortechnik | R 1381 | Propeller stirrer, 3-bladed, stirrer Ø: 45 mm, shaft Ø: 8 mm, shaft length: 350 mm |
| Dialysis tubing closures | Sigma-Aldrich | Z371017-10EA | Dialysis tubing closures, red, size 110 mm |
| Dialysis tubing cellulose membrane | Sigma-Aldrich | D9402-100FT | Dialysis tubing cellulose membrane, average flat width 76 mm (3.0 in.) |
| DOMO Pot with stailess, LCD | DOMO Elektronic | DO42325PC | Preserving boiler stainless steel, 2000 W, 27-L container (diameter 37 cm, height 30 cm), temperature control 30-100 ° C, operation LCD display |
| Hettich zentrifugen Universal 32 | Gemini bv | 2770 GS1R | Mid bench centrifuge, speed 18000 rpm |
| LT 3 shaking device | Fischer Scientific | 6470.0002 | Orbital shaking device |
| KERN 440-47N | Kern | 440-47N | Laboratory balance |
| KERN 770 | Kern | 770 -N | Laboratory analytical balance |
| VENTICELL 222 - Komfort | BMT, MMM Group | C 131749 | Drying oven, temperature control 30-100 ° C, air circulation control |
| Vacucell 55 - EVO | BMT, MMM Group | B 050328 | Vacuum drying oven, temperature control 30-100 ° C |
| PULVERISETTE 19 | Fritsch | 19.1030.00 | Universal cutting mill, rotor with V-cutting edges and fixed knives |
| Multi Probe Adapter System MPA 5 | Courage & Kazaka Electronic | 10225237 | MPA 5 Station - equipment for measurement hydratation, TEWL and pH |
| Skin pH-meter PH 905 probe | Courage & Kazaka Electronic | Probe to specifically measure the pH on the skin surface or the scalp | |
| Corneometer CM 825 probe | Courage & Kazaka Electronic | Probe to determine the hydration level of the skin surface (Stratum corneum). | |
| Tewameter TM 300 | Courage & Kazaka Electronic | Probe for the assessment of the transepidermal water loss (TEWL) | |
| Heidolph RZR 2020 | Heidolph | 13-225-007-03-1 | Overhead stirrer, mechanical speed setting and stepless transmission; speed range 40-2000 rpm |
| Heidolph mechanical stirrer BR 10 | Heidolph | Z336688-1EA | Blade impeller crossed stirrer |
| Fagor FS 12 | Fagor | BTT-138 | Laboratory refrigerator with freezer space |
| WTW bench pH/mV meter | WTW | Z313165 | High-performance bench pH and pH/conductivity meters for routine and high precision laboratory measurements in research or quality control laboratories |
| Container | RPC Superfos | 13-L plastic bucket, diameter 26 cm, height 26 cm | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Software | |||
| Microsoft Office 2010 | Microsoft | ||
| C+K software | Courage and Khazaka Electronic GmbH | MPA 5 station operating software |
References
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