Summary
Vi beskriver en metode til at måle aktivering af Fc-medieret effektor funktion af antistoffer der er rettet mod influenza virus hemagglutinin. Denne analyse kan også tilpasses for at vurdere monoklonale antistoffer eller polyklonale sera rettet mod andre virale overflade glykoproteiner evne til at fremkalde Fc-medieret immunitet.
Abstract
Antistoffer spiller en afgørende rolle i at kombinere de medfødte og adaptive immunrespons mod viral patogener gennem deres antigen bindende domæner og Fc-regioner. Her, vi beskriver, hvordan at måle aktivering af Fc effektor funktion af monoklonale antistoffer rettet mod influenza virus hemagglutinin med brug af en genetisk manipuleret Jurkat cellelinje udtrykker en aktivering af type 1 Fc-FcγR. ved hjælp af denne metode, den bidrag af specifikke Fc-FcγR interaktioner tillagt immunoglobuliner kan bestemmes ved hjælp af en i vitro assay.
Introduction
Immunitet, som den sæsonbestemte influenzavaccine er traditionelt blevet vurderet af den hemagglutination hæmning (HI) analyse1, hvilke måler tilstedeværelsen af antistoffer rettet mod webstedet receptor binding af hemagglutinin. Disse HI-aktive antistoffer kan overdrage sterilisering immunitet, men er generelt smalle i deres bredde af beskyttelse, giver immunitet til kun en udvalgt nogle stammer af influenzavirus. Isolering og karakterisering af bredt reaktive monoklonale antistoffer, der genkender hemagglutinin (HA) tyder på at udvikle en universal influenzavaccine er inden for rækkevidde2,3,4, 5 , 6 , 7 , 8. en af de vigtigste mål for en universal influenzavaccine er at fremkalde en stærk antistofrespons mod de bevarede dele af influenza virus9,10,11,12 , 13 , 14 , 15 , 16. stort set reaktive antistoffer, der anerkender disse bevaret epitoper, består af både neutraliserende og ikke-neutraliserende antistoffer17,18, har vist sig at kræve Fc-FcγR interaktioner for optimal beskyttelse i vivo og Fremhæv bidrag af Fc-medieret immunitet over for influenza virus19,20samlede immunresponset.
Korrelerer beskyttelse er afgørende for vurderingen af immunitet over for infektion. Disse målinger giver mulighed for forskere og klinikere til at vurdere effekten af vacciner, betydningen af data og behandlingsforløbet. Den eneste etablerede korrelat af beskyttelse mod influenza virusinfektion er hemagglutination hæmning assay. En titer på 1:40 er forbundet med en 50% reduktion i risikoen for sygdom1,21 – og afspejler tilstedeværelsen af antistoffer, der hæmmer agglutination af målretning receptor bindende stedet ligger på den kugleformede hoved af HA. Det skal dog også bemærkes, at T-celle svar kan være en bedre korrelat af beskyttelse mod influenza virusinfektion hos ældre. Interessant nok, tyder en nylig rapport på, at neuraminidasetypen hæmning aktivitet kan være en bedre indikator for immunitet over for influenza22. Heldigvis, typisk in vitro- undersøgelser såsom neutralisering eller neuraminidase hæmning assays kan måle HA stilk - eller neuraminidase-specifikke antistoffer. De fleste af disse konventionelle in vitro- assays, imidlertid kun tages hensyn til funktionen af antigen bindende region af antistoffet og måler ikke rolle i regionen Fc. Derudover bidrag af ikke-neutraliserende antistoffer, som beskytter via Fc receptor engagement i vivo er ikke opdaget17,18. For at måle af antistoffer, der inducerer Fc-medieret immunitet som antistof afhængig celle medieret cytotoksicitet (ADCC) ydede beskyttelse, der er behov for en robust i vitro assay.
Metoden beskrevet nedenfor vurderer murine monoklonale antistoffer evne til at fremkalde Fc-medieret funktioner ved hjælp af en genetisk modificeret Jurkat cellelinje udtrykker en aktivering murine skrive 1 FK, FcγRIV. Antistof engagement af FcγR transduces intracellulær signalering at udløsere nukleare faktor af aktiverede T-celler-medieret luciferase aktivitet. Analysen har flere fordele frem for traditionelle teknikker, der kræver isolering og kultur af primære effektor celler og brugen af flowcytometri hen til opdager aktivisering af Fc-medieret effektor funktion19,23,24 ,25,26. Først kan protokollen beskrevet her nemt tilpasses til at optage forskellige viral mål, FcγRs og antistoffer fra forskellige arter (menneskelige og murine). Andet brugen af en modificeret Jurkat celle linje at udtrykke en FcγR med et luciferase reporter gen under en nuklear faktor af aktiverede T-celle (NFAT) giver mulighed for et stort format assay, der nemt kan analyseres ved hjælp af en Pladelæser måling luminescens. Her, erstattes den traditionelle aktivering af primære effektor celler med induktion af NFAT-luciferase ved antistof engagement i en FcγR på overfladen af cellen Jurkat. Denne 96-brønd plade format assay giver mulighed for måling af op til fire forskellige prøver i tre med syv fortyndinger – et antal stikprøver, der kunne være besværligt, ved hjælp af traditionelle teknikker. Der er yderligere punkter at overveje, med denne analyse, der kan påvirke design af eksperimenter og fortolkning af data. Viral målet skal udtrykkes på celleoverfladen i rækkefølge for antistof anerkendelse. For at afbøde dette, kan målet antigen (f.eks. en intern viral protein) belægges direkte på overfladen af en plade. Men dette ikke endnu er blevet grundigt testet. Derudover den modificerede Jurkat-cellelinie udtrykker kun én type af aktivering FcγR og udtrykker ikke nogen hæmmende FcγRs, mens primær cellelinjer udtrykke alle receptorer i en fysiologisk kontekst.
Vi har tidligere brugt dette assay for at demonstrere at epitopspecificitet et polyklonalt led spiller en afgørende rolle i reguleringen af Fc-medieret effektor funktion og at optimal aktivering af antistof-afhængige celle-medieret reaktion kræver to punkter i Kontakt27,28. Her, beskriver vi en metode, der vurderer evne til stilk-specifikke monoklonale antistoffer til at engagere sig og aktivere den murine aktivering FcγRIV. Selvom der er undtagelser29,30, et stort antal bredt reaktive antistoffer målrette hemagglutinin antigent bevarede stilk-regionen og dermed spille en vigtig rolle i udviklingen af en universel influenza vaccine.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Eksperimenter præfabrikerede i dette håndskrift var gjort følgende Icahn School of Medicines institutionelle kodeks for etik og forordninger.
1. angivelse af Influenza Virus Hemagglutinin via Transfektion eller infektion
Transfektion:
- Plade menneskelige embryonale nyre (HEK 293T) celler med en tæthed på 2 x 104 celler/brønd i en hvid vævskultur behandlet 96-brønd plade og lad det sidde i 4 h i et 37 °C inkubator (med 5% CO2).
- Transfect celler med 100 ng af DNA, der koder for viral hemagglutinin og 0,2 μL Transfektion reagens pr. brønd i en samlet maengde paa 50 μL.
Bemærk: Begge plasmid og transfectant reagens er fortyndet i 1 x Opti-Minimum væsentlige medier (MEM) reducerede Serum Medium. - Efter inkubation plader i et 37 °C kuvøse med 5% CO2 til 18 h, fjerne Transfektion medier.
2. infektion
- Plade A549 eller Madin Darby canine nyreceller med en tæthed på 2 x 104 celler/brønd i en hvid vævskultur behandlet 96-brønd plade og vokse i mindst 18 timer i et 37 °C kuvøse med 5% CO2.
- Fortyndet virus i 1 x MEM og inficere celler på en mangfoldighed af infektion af 3, 1 eller 0,33 for 1 h i et 37 °C kuvøse med 5% CO2. Samlede volumen skal være lig med 100 μL.
Bemærk: 10 x MEM er fortyndet med vand for at lave en 1 x MEM arbejder lager for virus fortynding nævnt ovenfor. - Efter infektion, fjerne inokulat og tilsæt 100 μL af 1 x MEM i pladen i mangel af trypsin.
- Vokse inficerede celler for 18-24 h i et 37 °C kuvøse med 5% CO2.
3. vurdering af FcRg/NFAT-medieret aktivering af Luciferase aktivitet af monoklonale antistoffer eller Sera
- Først, erstatte vækst medier af transfekteret eller inficerede celler med 25 µL af assay media (1 x RPMI 1640 suppleret med 4% (vol/vol) lav IgG føtal bovin sera).
- I en separat 96-brønd plade, udføre firefoldige fortyndinger af antistoffer af interesse begynder ved 30 μg/mL ved hjælp af assay medier. Udføre fortyndinger i tre og et eksempel plade layout er illustreret i figur 1A. Sørg for at medtage en kontrol, som udelukker antistof (ingen antistofkontrol) samt en baggrund kontrol (analysebuffer alene).
Bemærk: For begge 'ingen antistof' og baggrund kontrol, tilsæt 25 µL af analysebuffer i stedet for antistof. - Overføre 25 μl af de seriefremstillede fortyndet antistoffer fra trin 3.2 tilsvarende brønde på pladen af transfekteret celler eller inficerede celler.
- Inkuber pladen i et 37 °C inkubator (med 5% CO2) i 15 min.
- Tilsættes 25 μL af cellen passende modificeret effektor Jurkat udtryk for murine FcgRIV eller menneskelige FcgRIIIa (75.000 af celler/brønd). Samlede volumen for hver vel bør være 75 µL og start endelige koncentration af antistoffet er på 10 µg/mL (figur 1B).
Bemærk: For kontrolelementet baggrund tilføje 25 µL af analysebuffer i stedet for effektor celler. For at undersøge antistof-afhængige celle-medieret fagocytose, kan en modificeret Jurkat cellen at udtrykke den menneskelige FcgRIIa bruges. - Inkuber pladen i et 37 ° C kuvøse med 5% CO2 til 6 h.
- Tø og varme luciferase substratbuffer i et 37 °C vand for ca 1 time før brug.
Bemærk: For at gøre substratbuffer luciferase, rekonstruere frysetørrede luciferase assay substrat i analysebuffer forudsat. Den rekonstituerede substratbuffer kan opbevares ved-30 °C til-10 °C i op til seks uger. - Tilføje 75 μl/brønd af luciferase substratbuffer i alle pladens huller, undtagen baggrund kontrol.
- Læs om en luminometrisk.
- Beregne fold induktion med følgende ligning: Fold induktion = (Induced værdi-baggrund værdi) / (ingen mAb værdi-baggrund værdi).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi vist, at en stilk-specifikke mAb, 6F12, men ikke hovedet-specifikke en hoved-specifikke mAb, PY102, var i stand til at aktivere primære naturlige dræberceller ved upregulating CD107a og interferon γ19. For at modellere en stilk-specifikke antistof evne til at aktivere primære menneskelige NK celler, viser vi, at en stilk-specifikke mAb, 6F12, håndfast kan aktivere cellen modificerede Jurkat udtrykker den murine FcγRIV af ~ 14-fold. På den anden side gør hoved-specifikke mAb, PY102 og kontrol IgG ikke (figur 2)28.
For at undersøge hvis multipliciteten af infektion (MOI) kan påvirke induktion af Jurkat celler, der udtrykker den murine FcγRIV, inficeret vi MDCK celler med X31 (en reassortant influenza A virus udtrykker hemagglutinin og neuraminidase af A/Hong Kong/1/68 (H3N2) virus med de indre segmenter af A/Puerto Rico/8/34 (H1N1)) med et MOI 3, 1 eller 0,33. Fire og tyve timer senere, blev Jurkat celler, der udtrykker murine FcγRIV og mAb 9H 10 tilføjet til de inficerede MDCK celler. I figur 3viser vi, at celler inficeret med en MOI 3 kan fremkalde luminescence omkring 3-fold højere end MDCK celler inficeret med en MOI af 0.33.
Figur 1 : En skematisk af en prøve plade layout og sammensætning af de eksperimentelle grupper. (A) den begyndende koncentration for hver antistof prøve er på 10 µg/mL og seriefremstillede fortyndes hen over pladen (kolonne 1 kolonne 12) bukkes 4 gange. Hver prøve er udført i tre. Række G reserveret til kontrolelementet ingen mAb og træk H er baggrunden. (B) endelige mængden for hver eksperimentelle gruppe før tilsætning af luciferase substratbuffer er 75 µL. Af note har prøven og 'ingen mAb grupper' 25 µL af effektor celler tilføjet, mens baggrunden kontrolgrupper har 75 µL af assay medier. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Induktion af modificerede Jurkat celler udtrykker FcgR af en stilk monoklonalt antistof. A549 celler var inficeret med A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) med en MOI af 3. 24 timer efter infektion, murine FcγRIV-udtrykker Jurkat celler i kombination med PY102, 6F12 eller en IgG kontrol blev tilføjet. Induktion af Jurkat celler blev vurderet af luminescence signal genereret af firefly luciferase under elementet NFAT svar. Fejllinjer = standardafvigelser. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 : Mangfoldighed af infektion påvirker induktion af en stilk-specifikke antistof. MDCK celler var inficeret med X31 (H3N2) med en MOI 3, 1 eller 0,33. På 24 h efter infektion, FcgR-udtrykker Jurkat celler i kombination med 9H 10 (Start fortynding af 10 µg/mL) tilføjet. Induktion af Jurkat celler blev vurderet af luminescence signal genereret af firefly luciferase under elementet NFAT svar. Fejllinjer = standardafvigelser. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Metoden beskrevet her tillader brugeren at måle en HA-specifikke monoklonale antistof evne til at engagere de murine FcγRIV. Target antigen, influenza virus hemagglutinin, udtrykkes på overfladen af celler efter infektion med virus eller Transfektion af plasmid DNA. Analysen er yderligere modtagelig hen til benytter forskellige overflade-udtrykt virale proteiner i kombination med andre FcγRs (mennesker eller murine). Derudover har vi brugt sera prøver for at vurdere antistoffer i forbindelse med polyklonale evne til at fremkalde Fc effektor funktion (data ikke vist), som kan give mere relevant information, når studerer den adaptive immunrespons induceret af infektion eller vaccination. Vi spekulere desuden, at analysen kan ændres til at måle induktion af antistoffer, der genkender interne virale proteiner af direkte belægning plader med opløseligt protein. Men denne metode er ikke blevet grundigt testet.
Induktion af antistof-afhængige effektor funktion kan påvirkes af flere faktorer, herunder men ikke begrænset til effektor til target ratio (antal effektorer celler tilføjet pr. brønd), koncentration af antistof anvendes, varigheden af inkubationen mellem effektor og target-cellerne, og koncentrationen af lav IgG serum anvendes i analysebuffer.
Historisk set har indebærer den standard assay at måle antistoffer eller polyklonale sera antistof-afhængige cellulære cytotoksicitet aktivitet primære natural killer (NK) celler høstet fra donorer. Engagement i FcγR og aktivering af intracellulære pathway bestemmes typisk udtryk for aktivering markører CD107a og/eller IFN-γ19,23,24,31. Selv om den klassiske assay bruger mere relevante effektor celler som de ikke har været genetisk manipuleret, kan donor variation skyldes allel forskelle i FcγR påvirke NK celle aktivering og resultere i batch til batch variationer. Alternative assays bruges som surrogater for ADCC aktivitet omfatter en FcγR dimer-baserede ELISA eller en chrom udgivelse dræbe assay25. Selv om brugen af en FcγR dimer-baserede ELISA er høj overførselshastighed, kan analysen ikke være fysiologisk relevante, som denne analyse ikke bruger effektor celler32. Mens chrom release assay foranstaltninger direkte drab, det er ikke høj overførselshastighed og kræver primære NK-celler, som igen er donor afhængige33. En nyere metode beskriver brugen af murine T-celle hybridomer stabilt udtrykker kimære FcγR-CD3ζ kæde molekyler og foranstaltninger aktivering gennem udskillelsen af IL-2. Analysen beskrives er lig den beskrevne metode her, som gør brug af en modificerede T-celle som et surrogat for en effektor celler udtrykker en ental aktivering FcγR34. Alternativt, en cellelinje (NK92.05-CD16) udtrykker FcγRIIIa kan bruges som effektor celler og opregulering af degranulering antigen CD107a bruges som en aktivering markør. Brug af virioner og viral peptider på ELISA-plader på den sidstnævnte protokol bør imidlertid bemærkes, som proteiner belagt på hydrofobe overflader ikke kan altid sammenfatte de fysiologiske strukturen af antigener35.
Metoden beskrevet her er en 96-brønds format assay, gør brug af fysiologisk relevante og indbygget udtrykt viral mål og kan ændres for murine eller humane antistoffer. Genetisk modificerede Jurkat cellerne kan bevares i kultur og befrugtede36. Men i øjeblikket effektor celler udtrykker kun en aktiverende FcγR, bør de mange fordele ved at bruge denne protokol, der er beskrevet i denne undersøgelse tages i betragtning ved måling af antistof-afhængige celle-medieret effektor funktion.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.
Acknowledgments
Dette projekt har været finansieret delvist med føderale midler fra det nationale Institut for allergi og smitsomme sygdomme, National Institutes of Health, Department of Health og Human Services, under CEIRS kontrakt P01AI097092-04S1 (P.E.L.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A549 cells | ATCC | CCL-185 | Adenocarcinomic human alveolar basal epithelial cells |
| HEK 293T cells | ATCC | CRL-3216 | Human embryonic kidney cells |
| Lipofectamine 2000 | Life Technologies | 11668019 | Transfection reagent |
| 1X Opti-MEM Reduced Serum Medium | ThermoFisher Scientific | 51985-034 | |
| White tissue culture treated 96-well plate | Corning, Inc. | 3917 | Assay plates |
| 10X MEM | Gibco | 11430-030 | |
| Jurkat cell expressing murine FcgRIV | Promega | M1201 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Jurkat cell expressing human FcgRIIIa | Promega | G7010 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Jurkat cell expressing human FcgRIIa | Promega | G9901 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Luminometer | BioTek | Synergy H1 Multi-Mode reader | Luminescence plate reader |
| Bio-Glo Luciferase Assay System | Promega | G7940 | Contains luciferase assay buffer and luciferase assay substrate |
| Madin Darby canine kidney cells | ATCC | CCL-34 | Canine kidney cells |
References
- Hobson, D., Curry, R. L., Beare, A. S., Ward-Gardner, A. The role of serum haemagglutination-inhibiting antibody in protection against challenge infection with influenza A2 and B viruses. J Hygiene. 70 (04), 767-777 (1972).
- Throsby, M., et al. Heterosubtypic neutralizing monoclonal antibodies cross-protective against H5N1 and H1N1 recovered from human IgM+ memory B cells. PloS One. 3 (12), e3942 (2008).
- Ekiert, D. C., et al. Antibody recognition of a highly conserved influenza virus epitope. Science. 324 (5924), 246-251 (2009).
- Ekiert, D. C., et al. A Highly Conserved Neutralizing Epitope on Group 2 Influenza A Viruses. Science. 333 (6044), 843-850 (2011).
- Tan, G. S., et al. A pan-H1 anti-hemagglutinin monoclonal antibody with potent broad-spectrum efficacy in vivo. J Virol. 86 (11), 6179-6188 (2012).
- Tan, G. S., et al. Characterization of a Broadly Neutralizing Monoclonal Antibody That Targets the Fusion Domain of Group 2 Influenza A Virus Hemagglutinin. J Virol. 88 (23), 13580-13592 (2014).
- Friesen, R. H. E., et al. A common solution to group 2 influenza virus neutralization. PNAS. 111 (1), 445-450 (2014).
- Dreyfus, C., et al. Highly Conserved Protective Epitopes on Influenza B Viruses. Science. 337 (6100), 1343-1348 (2012).
- Krammer, F., Palese, P., Steel, J. Advances in Universal Influenza Virus Vaccine Design and Antibody Mediated Therapies Based on Conserved Regions of the Hemagglutinin. Curr Top Microb and Immunol. , Chapter 408 (2014).
- Impagliazzo, A., et al. A stable trimeric influenza hemagglutinin stem as a broadly protective immunogen. Science. , (2015).
- Nachbagauer, R., Krammer, F. Clinical Microbiology and Infection. Clin Microb Infect. , 1-7 (2017).
- Krammer, F. Novel universal influenza virus vaccine approaches. Current opinion in virology. 17, 95 (2016).
- Steel, J., et al. Influenza virus vaccine based on the conserved hemagglutinin stalk domain. mBio. 1 (1), (2010).
- Krammer, F., Pica, N., Hai, R., Margine, I., Palese, P. Chimeric hemagglutinin influenza virus vaccine constructs elicit broadly protective stalk-specific antibodies. J Virol. 87 (12), 6542-6550 (2013).
- Krammer, F., Pica, N., Hai, R., Tan, G. S., Palese, P. Hemagglutinin Stalk-Reactive Antibodies Are Boosted following Sequential Infection with Seasonal and Pandemic H1N1 Influenza Virus in Mice. J Virol. 86 (19), 10302-10307 (2012).
- Hai, R., et al. Influenza viruses expressing chimeric hemagglutinins: globular head and stalk domains derived from different subtypes. J Virol. 86 (10), 5774-5781 (2012).
- Dunand, C. J. H., et al. Both Neutralizing and Non-Neutralizing Human H7N9 Influenza Vaccine-Induced Monoclonal Antibodies Confer Protection. Cell Host and Microbe. 19 (6), 800-813 (2016).
- Tan, G. S., et al. Broadly-Reactive Neutralizing and Non-neutralizing Antibodies Directed against the H7 Influenza Virus Hemagglutinin Reveal Divergent Mechanisms of Protection. PLoS Path. 12 (4), e1005578 (2016).
- DiLillo, D. J., Tan, G. S., Palese, P., Ravetch, J. V. Broadly neutralizing hemagglutinin stalk-specific antibodies require FcγR interactions for protection against influenza virus in vivo. Nat Med. 20 (2), 143-151 (2014).
- DiLillo, D. J., Palese, P., Wilson, P. C., Ravetch, J. V. Broadly neutralizing anti-influenza antibodies require Fc receptor engagement for in vivo protection. J Clin Invest. 126 (2), 605-610 (2016).
- Potter, C. W., Oxford, J. S. Determinants of immunity to influenza infection in man. Brit Med Bull. 35 (1), 69-75 (1979).
- Memoli, M. J., et al. Evaluation of Antihemagglutinin and Antineuraminidase Antibodies as Correlates of Protection in an Influenza A/H1N1 Virus Healthy Human Challenge Model. mBio. 7 (2), e00417 (2016).
- Jegaskanda, S., et al. Age-associated cross-reactive antibody-dependent cellular cytotoxicity toward 2009 pandemic influenza A virus subtype H1N1. J Infect Dis. 208 (7), 1051-1061 (2013).
- Jegaskanda, S., et al. Cross-Reactive Influenza-Specific Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity Antibodies in the Absence of Neutralizing Antibodies. J Immunol. 190 (4), 1837-1848 (2013).
- Jegaskanda, S., Wheatley, A. K., Kent, S. J. ScienceDirectAntibody-dependent cellular cytotoxicity and influenza virus. Curr Opin Virol. 22 (C), 89-96 (2017).
- Srivastava, V., et al. Identification of Dominant Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity Epitopes on the Hemagglutinin Antigen of Pandemic H1N1 Influenza Virus. J Virol. 87 (10), 5831-5840 (2013).
- He, W., et al. Epitope specificity plays a critical role in regulating antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity against influenza A virus. PNAS. 113 (42), 11931-11936 (2016).
- Leon, P. E., et al. Optimal activation of Fc-mediated effector functions by influenza virus hemagglutinin antibodies requires two points of contact. PNAS. , 201613225 (2016).
- Benjamin, E., et al. A Broadly Neutralizing Human Monoclonal Antibody Directed against a Novel Conserved Epitope on the Influenza Virus H3 Hemagglutinin Globular Head. J Virol. 88 (12), 6743-6750 (2014).
- Ekiert, D. C., Kashyap, A. K., et al. Cross-neutralization of influenza A viruses mediated by a single antibody loop. Nature. 488 (7417), 526-532 (2013).
- He, W., et al. Broadly Neutralizing Anti-Influenza Virus Antibodies: Enhancement of Neutralizing Potency in Polyclonal Mixtures and IgA Backbones. J Virol. 89 (7), 3610 (2015).
- Kristensen, A. B., et al. Antibody Responses with Fc-Mediated Functions after Vaccination of HIV-Infected Subjects with Trivalent Influenza Vaccine. J Virol. 90 (12), 5724-5734 (2016).
- Greenberg, S. B., Criswell, B. S., Six, H. R., Couch, R. B. Lymphocyte cytotoxicity to influenza virus-infected cells. II. Requirement for antibody and non-T lymphocytes. J Immunol (Baltimore, Md. : 1950). 119 (6), 2100-2106 (1977).
- Corrales-Aguilar, E., Trilling, M., et al. A novel assay for detecting virus-specific antibodies triggering activation of Fcγ receptors. J Immunol Meth. 387 (1-2), 21-35 (2013).
- de Vries, R. D., et al. Influenza virus-specific antibody dependent cellular cytoxicity induced by vaccination or natural infection. Vaccine. 35 (2), 238-247 (2017).
- Cheng, Z., et al. Development of a robust reporter-based ADCC assay with frozen, thaw-and-use cells to measure Fc effector function of therapeutic antibodies. J Immunol Meth. 414 (1), 69-81 (2014).
