Summary
الثانوي تنكس خلايا العقدة الشبكية (رجكس) يحدث عادة في المياه الزرقاء. تصف هذه الدراسة نهجاً مبتكراً من منطوق للعصب البصري الجزئي ترانسيكشن. استخدام هذا النهج المنطوق توفير مساحة يمتد نطاق تطبيق هذا النموذج، ويتيح استكشاف آليات الإصابة الثانوية في رجكس بطريقة جديدة.
Abstract
وقد أظهرت الدراسات السابقة أن انحطاط الثانوي لخلايا العقدة الشبكية (رجكس) يحدث عادة في المياه الزرقاء. ترانسيكشن جزئي في العصب البصري تعتبر نموذجا مفيداً واستنساخه. بالمقارنة مع النماذج إصابة العصب البصري الأخرى المستخدمة عادة لتقييم تنكس الثانوية، مثل العصب البصري كاملة ترانسيكشن ونماذج سحق العصب البصري، العصب البصري الجزئي ترانسيكشن النموذج متفوقة كما أنه يميز الأولية من انحطاط الثانوية في الموقع. ولذلك، هو بمثابة أداة ممتازة لتقييم تنكس الثانوية. تصف هذه الدراسة نهجاً منطوق رواية من ترانسيكشن العصب البصري الجزئي بالوصول مباشرة إلى منطقة العصب البصري خلف المقلة من خلال الجدار الجانبي المداري من مقلة العين. وعلاوة على ذلك، فإننا نقدم أداة جراحية المصممة حديثا ومنخفضة التكلفة لمساعدة مع ترانسيكتيون. كما يتبين من نتائج الممثل في التمييز بين حدود مناطق الإصابة الأولية والثانوية، بنهج جديد وصك يضمن عالية الكفاءة والاستقرار للنموذج بتوفير مساحة كافية لعملية جراحية. وهذا بدوره يجعل من السهل لفصل غمد سحائي وسفن العيون من العصب البصري قبل ترانسيكتيون. فائدة إضافية أن هذا النهج المنطوق الفضاء لإنقاذ يحسن قدرة المحققين بإدارة المخدرات، وشركات النقل، أو انتقائية حكومة كمبوديا الملكية تتبع عقب السيجارة للعصب البصري بحف جزئيا، مما يسمح استكشاف الآليات وراء الإصابة الثانوية في رجكس، بطريقة جديدة.
Introduction
يحدث انحطاط الثانوية شيوعاً في الجهاز العصبي المركزي (CNS) بعد الإصابات الرضية، والأمراض الحادة والمزمنة الأعصاب التالية. 1 , 2 , 3 , 4 , 5 موت الخلايا العصبية والخلايا الدبقية هي نتيجة مبكرة للأحداث المرضية الأولية هو وصف انحطاط الأولية، حين تنكس الثانوي يشير إلى موت الخلايا العصبية والخلايا الدبقية، والتي لا تتأثر إلا جزئيا أو بالابتدائية الأضرار. تنكس الثانوية من رجكس يعتقد أيضا أن يحدث في المياه الزرقاء. 6 يوليس et al. 7 أكدت حدوث إصابة ثانوية من رجكس في نموذج إصابة العصب البصري. أنها أظهرت أن الخلايا العصبية محاور عصبية التي لم تتضرر بعد ضرر حاد سوف تتحول في نهاية المطاف بسبب البيئة التنكسية التي تنتجها الضرر المحيطة بهذه محاور عصبية. هذا تنكس الثانوي يؤثر على الخلايا العصبية بطريقة تدريجية تتصل بفداحة الأضرار التي لحقت. حتى الآن، ما زالت الآليات الأساسية لحكومة كمبوديا الملكية الضرر في الزرق غير واضحة، ولا سيما تلك المتصلة بالضرر الثانوي، مما يؤدي إلى عدم كفاية العلاج السريري. 8 , 9 , 10 ولذلك، من الضروري استكشاف الآليات الكامنة لانحطاط الثانوية من رجكس أثناء تطوير الزرق. 11 إنشاء نماذج حيوانية للإصابات الثانوية التي يمكن تقييم كمي في الحجم والتوزيع وآلية من انحطاط الثانوية من رجكس تجتذب اهتماما متزايداً من العلماء الذين يدرسون الثانوي إصابة رجكس.
لتوضيح هذه المسألة، أنشأت نموذجا بونت الفئران ليفكوفيتش فربين et al. 12 لتقييم الضرر محواري الناجمين عن انحطاط وموت رجكس. ويعتقد هذا النموذج تشكل أداة جيدة لاستكشاف آليات تنكس الثانوية وتحديد عوامل محصن محتملة. الأداة المستخدمة لإنشاء هذا النموذج من الضرر الثانوي سكين الماس مع مقياس قطاع كمياً عن طريق تعيين عمق أبسسيسيون من خلال مفتاح الاتصال الهاتفي، بغية إكمال ترانسيكتيون كمية للعصب البصري. نهج المسار الجراحية من مقلة العين الملتحمة التصاعدي أو الزمنية. أثناء عملية المنطوق، يمكن أن تتأثر بقوة الملقط، الذي بدوره قد يسبب الإصابة الأولية بالشبكية والأعصاب البصرية. الأهم من ذلك، بسبب المساحة المحدودة للعصب البصري المكشوفة، فإنه من الصعب فصل غمد سحائي قبل شق. ولذلك، من الممكن لأضرار السفن العيون أثناء ترانسيكشن جزئي في العصب البصري، مما يؤدي في الاسكيمية الشبكية وفشل النموذج. وباﻹضافة إلى ذلك، سكين الماس مكلف، وكل استخدام يقلل الحدة تلميح. وهذا قد يؤثر بدوره على عمق وتأثير النمذجة.
تم الحصول على نموذج لانحطاط الثانوية من رجكس الموصوفة في هذه الدراسة من خلال اتباع نهج منطوق جديدة من الجدار المداري الأفقي من مقلة العين. وهذا النهج منطوق الرواية الوصول مباشرة إلى العصب البصري خلف المقلة مطوقة بمخروط العضلات المداري، تجنب الإصابة الأولية لمقلة العين والعصب البصري عند سحب أسفل أو نحو الجانب الأفقي الآنف من مقلة العين. هذا أيضا يزيد من مساحة العمليات الجراحية أثناء إنشاء النموذج، ويمكن عزل غمد سحائي قبل جزئيا ترانسيكتينج العصب البصري. من المهم أن نلاحظ أن مشاركة غير مقصود وإصابة السفن العيون يمكن أن يؤدي إلى فشل النموذج. وعلاوة على ذلك، يتيح النموذج تقييم متابعة transfected الخلايا والعقاقير والمواد الكاشفة في عقب السيجارة للعصب البصري بحف جزئيا. الأدوات الجراحية ذاتية مصممة رخيصة ويمكن أن تكون متعددة تستخدم الأوقات، مما يقلل من التكلفة للنمذجة. كان سيظهر نموذج الضرر الثانوي رجكس المنشأة بهذه الطريقة إلى إمكانية تكرار نتائج جيدة والاستقرار.
Protocol
الإجراءات التي تشمل مواضيع الحيوان وقد أقر الحيوان المؤسسية الرعاية واستخدام اللجنة (إياكوك) من جامعة الطب في العاصمة. تم تعقيم جميع الأدوات الجراحية والحلول قبل الجراحة للحد من العدوى الميكروبية-
ملاحظة: البروتوكول جراحية شملت خمسة أجزاء، هي: التخدير والنهج الجراحية والتقييم العصب البصري، إغلاق والانتعاش. وصمم لمساعدة مع ترانسيكتيون الكمية الجزئية للعصب البصري، أداة جراحية جديدة منخفضة التكلفة. نفذت جميع الإجراءات في أعقاب القواعد الأخلاقية والتقنية الجراحية.
1-"تقنية جراحية"
- القيام بتجارب باستخدام تقنية معقمة؛ وبروتوكولات للاستخدام الحيواني ينبغي أن تكون مؤسسة محددة.
- تعقيم الأدوات والمواد (الحلول، واختبار المواد، وتتبع، والإبر، إلخ) ملامسة الأنسجة الحية لمنع العدوى والآثار السلبية على الرفق بالحيوان وكذلك التأثيرات السلبية المحتملة على الدراسة .
2. التخدير
- أنيسثيتيزي التنمية المستدامة الفئران باستخدام نظام المرذاذ isoflurane بيطرية. استخدام الأوكسجين الطبي الصف بمعدل 1 لتر في الدقيقة لتبخير الغاز إيسوفلوراني. وضع الحيوان في المربع التخدير المرفقة وتشغيل إيسوفلوراني بتركيز 4.5 في المائة حتى التنفس بطيء وتخدير الحيوان.
- التبديل تدفق الغاز إلى المرفق قناع الغاز ووضع الحيوان على طاولة العمليات. انخفاض تركيز إيسوفلوراني للتخدير 2% ومراقبة. الحيوانات الكبيرة (> 300 غرام) قد تتطلب وجود تركيز أعلى من إيسوفلوراني. رصد التخدير أثناء الجراحة، مع جرعة isoflurane تعديلها تبعاً لذلك. تقييم عمق ومعدل التنفس باستمرار، وإجراء تقييم قرصه تو كل 5 دقائق، ضمان عدم وجود الألم العميق. إيقاف إيسوفلوراني في
- بمجرد الانتهاء من عملية جراحية، والسماح للحيوان بالأوكسجين التنفس لعدة دقائق قبل إزالة من الجدول العملية. الحفاظ على درجة حرارة الجسم التي تغطي هذا الحيوان ببطانية جراحية و/أو استخدام بطانية تدفئة تنظيم أثناء الجراحة.
3. الذاتي صممت أداة مساعد الجراحية (سي)
- استخدام سي مصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ، وأساساً يتألف قطب باليد (الطول، 100 مم؛ قطرها 9 مم) ورأس مخدد ( الشكل 1). سطح الرأس مخدد مخدد شبه دائرية، مع العمق الرأسي وعرض وطول 200 ميكرومتر و 500 ميكرومتر µm 1,000، على التوالي. بين الجزأين، هناك مقطع مشتركة بطول 50 مم. رئيس مخدد ' حافة s هي 300 ميكرون واسع.
ملاحظة: يمكن السطح مخدد استقرار البطني العصب البصري ترانسيكشن. العصب البصري الظهرية يتعرض للسطح الخارجي للاخدود عندما يضع الجانب البطني للعصب البصري داخله؛ وفي الوقت نفسه، يمكن أن ترانسيكتيد العصب البصري الظهرية تتعرض إلى حافة مخدد عندما يتم قطع رأسي. العصب البصري البطني وضعت داخل السطح مخدد محمي بواسطة رئيس مخدد ' حافة s- - تحقيق الإصابة الأولية في رجكس المقابلة للعصب البصري كمياً بحف محاور عصبية (الظهرية الجانبية)، بينما الثانوية الضرر سيكون أداؤها في المقابلة للعصب البصري أونترانسيكتيد محاور عصبية (الجانب البطني) دون الأضرار المباشرة رجكس.
4. النهج الجراحية
- مكان الجانب الأيمن من الفئران صعودا على طاولة العمليات الجراحية مع الرأس التي تواجه الجراح. ضبط المدار الصحيح في مركز مجال الرؤية الجراحية. ثم تنظيف منطقة شق عدة مرات على طول كانتوس الأفقي إلى الثقبة الصوتية الخارجية من الجلد حق المداري، وتطبيق الكلورهكسيدين 0.5% في الإيثانول 75%. إزالة الفراء بين كانتوس الأفقي إلى الثقبة الصوتية الخارجية باستخدام مقص آيريس.
- جعل شق جلد باستخدام مقص آيريس على طول كانتوس الأفقي إلى الثقبة الصوتية الخارجية بطول 0.5 إلى 1 سم. ثم قرصه برباط والسحب إلى الأعلى لإنشاء آسفين ثلاثي مع ملقط مسنن 0.12 ملم. إدراج شفرة المقص الربيع فانس السفلي في منطقة شق وقطع اللفافة مفتوحة في نفس الاتجاه القص.
- قص اللفافة مع Vannas الربيع المقص وفضح الوريد المدارية. استخدام الملقط حادة مسننة المشبك الجانبين الوريد المدارية وبلانت فتح كلا الجانبين من الشق. مكان الوريد المدارية باتجاه الجراحية لسطح العضلات المداري، الذي وضع لتسهيل عملية المتابعة وتجنب الجراحة المتصلة بنزف الوريد المدارية-
- استخدام قزحية مقص قص الحق اتبع كانتوس الأفقي عن بعضها البعض على طول خط الشق لفضح تماما مجال الرؤية لتشريح كليلة عضلات المدارية خلال المكياج.
- مواصلة المشبك المجلد عضلة سوبفاسسيال المداري، وحادة تفصل عمودياً في اتجاه شق الجلد ولفافة. منفصلة على طول الجانبين تدريجيا تصل إلى عمق المداري، حتى مظهر الأنسجة الدهنية المداري.
- بعد التعرض للأنسجة الدهنية المداري، تغيير اتجاه الرأس الفئران من تواجه الجراح عمودياً على الجانب الأيمن من الجراح. وفي الوقت نفسه، الحفاظ على منطقة رطبة باستمرار استخدام الجراحة أو مسحات القطن التي تحتوي على برنامج تلفزيوني العقيمة. يضمن هذا الإجراء برؤية واضحة لميدان العمليات الجراحية، مع الحفاظ الأنسجة رطبة ولينة.
5. الوصول إلى العصب البصري
- قطع الأنسجة الدهنية المدارية تغطي المخروط العضلات المدارية حول العصب البصري في تجويف المداري. وهذا ما يضمن أفضل من تعرض للنهج الجراحية المناسبة. الحفاظ على استئصال الأنسجة الدهنية محدودة لتجنب استمرار نزيف.
- قطع الأنسجة الدهنية، تعريض المستقيمة الجانبية. المشبك المستقيمة الجانبية إلى الخارج، وبعد ذلك قطع عليه مع مقص الربيع فانس. إذا كان لا يزال الأنسجة الدهنية تحت المستقيمة الجانبية، سحب الدهون السطحية العصب البصري باستخدام مم 0.12 المسننة الملقط وقطع عليه مع مقص الربيع فانس.
ملاحظة: في هذا الوقت، غمد الأنسجة حول العصب البصري يجب أن تكون مرئية- - متابعة لفصل غمد الأنسجة على طول اتجاه العصب البصري في عمق المداري، حتى التعرض الإجمالي للعصب البصري. إبقاء المنطقة نظيفة باستخدام مسحات الجراحية لكميات صغيرة نظيفة من الدم التي تنجم عن إزالة الأنسجة.
ملاحظة: الآن، العصب البصري يجب أن تكون مرئية- - من أجل الوصول إلى ذلك، إزالة غمد سحائي الذي يحيط الأعصاب دون الأضرار بالشريان العيون. تدوير بلطف غمد لدراسة نمط دوراً في تضخم عالية تحت مجهر جراحي الأوعية الدموية-
- تحديد منطقة خالية من الأوعية الدموية، وتؤدي إلى قطع طولية في بلده دوراً. 13 مزق الغمد موازية لاتجاه العصب البصري مع ز 26 إبرة تلميح أو اختطفوهما المسبار الجراحية الياقوت بعناية، تجنب الضرر للمفرج مع التخفيضات الأفقي.
ملاحظة: يجب أن تكون بقايا الوحيد الذي يغطي العصب ميمبرا العنكبوتيني، ورقيقة جداً وشفافة-
- تحديد منطقة خالية من الأوعية الدموية، وتؤدي إلى قطع طولية في بلده دوراً. 13 مزق الغمد موازية لاتجاه العصب البصري مع ز 26 إبرة تلميح أو اختطفوهما المسبار الجراحية الياقوت بعناية، تجنب الضرر للمفرج مع التخفيضات الأفقي.
- على غرار الخطوة 5.2، مزق الغشاء العنكبوتي بلطف مع ز 26 إبرة تلميح أو اختطفوهما المسبار الجراحية الياقوت، موازية لاتجاه العصب البصري- 13
- تكمن في العصب البصري داخل الاخدود الصك بهدوء وعناية، أسفر عن العصب البصري الظهرية يجري أعلى قليلاً من حافة الرأس مخدد. وفي هذا الوقت، قطاع العصب البصري الظهرية فوق الحافة من منصة رئيس مخدد مع تلميح إبرة ز 26 أو اختطفوهما الياقوت المسبار الجراحية لإكمال ترانسيكشن جزئي في العصب البصري-
6. إغلاق والانتعاش
- نقل الصك أعمق قليلاً في اتجاه عمودي اتجاه العصب البصري لتحرير هذا الأخير. ثم، قم بإزالة مخدد رأس الصك بلطف. ليس محاولة لنقطة الصفر في عضلات العين أو الأنسجة الأخرى لتجنب الأضرار إضافية. يمكن ملاحظة عقب السيجارة ترانسيكشن جزئي في العصب البصري- استبدال
- المستقيمة الجانبية ورباط والأنسجة الأخرى المحيطة بها من العين إلى مواقعها الأصلية. ثم، خياطة العضلات وطبقات الجلد للمدار في التسلسل. إذا استمر النزيف، بلطف ملء مع كرة القطن طبي قبل إغلاق الجرح، والحفاظ على ذلك لفترة من الوقت. تطبيق مرهم مضاد حيوي على الجرح لمنع العدوى.
- بدوره قبالة مصدر isoflurane والسماح للحيوان للأكسجين في التنفس لعدة دقائق. عملية الإنعاش الفئران، إعداد العزل الحراري مع حصيرة ساخنة، أو تغطية سطح القفص مع الحشو الجافة. تغطية الحيوانات مع البطانيات، لضمان سالكيه الفئران مجرى الهواء أثناء عملية الاسترداد.
- بيت الحيوانات على حدة بعد الجراحة. إدارة مسكنات الألم بعد الجراحة وفقا للمبادئ التوجيهية التي قدمتها السلطات مؤسسات الرعاية الحيوانية. مراقبة الحيوانات بعناية بعد الجراحة-
Representative Results
للتحقق من نجاح فيما يتعلق بإنشاء نموذج الضرر الثانوي مع النهج الجديد المنطوق باستخدام سي (الشكل 2A)، كانت ريتروجراديلي المسمى رجكس مباشرة بعد إنشاء نموذج. وكان الغرض من هذا الإجراء إلى تسمية رجكس ريتروجراديلي عن طريق حقن صبغة العصبية الراسم (3% فلوروفوري (مثلاً، فلوروجولد) في المحلول الملحي العازلة الفوسفات العقيمة) في والاكيميه متفوقة (الشكل 2). وهذا النهج غلة وسم استنساخه من رجكس قابلة للبقاء مع اختلاف بسيط. 14 , 15 , 16 , 17 , 18 الصبغ سيجري النظر في ريتروجراديلي التي رجكس في الشبكية وتشكل علامة للعيش رجكس، مع محاور عصبية بحف لا في العين اليمنى. وفي الوقت نفسه، رجكس المقابلة للعصب البصري جزئيا بحف محاور عصبية في العين اليمنى لا يمكن أن يكون المسمى مع صبغ الراسم (الشكل 2). كعين، ومراقبة دون العملية، رجكس على طول العصب البصري للشبكية العين اليسرى كانت جميع المسمى مع صبغ الذهب الفلورسنت في طريقة إلى الوراء من والاكيميه متفوقة (الشكل 2D).
سبعة أيام بعد ترانسيكتيون جزئي في العصب البصري ووضع العلامات إلى الوراء من رجكس، شبكية العين تحصد، ثابتة، سويت بالأرض، وشنت. تم تصويرها في رجكس المسمى تحت مجهر فلوري في مناطق محددة من الشبكية. وترد نتائج الأسفار المسماة رجكس مع أو بدون ترانسيكتيون جزئي في العصب البصري في الشكل 3. فقط كانت المسمى رجكس في شبكية العين اليمنى المقابلة للجزء أونترانسيكتيد من العصب البصري مع الذهب الفلورسنت، ويمكن أن تكون حدود واضحة من رجكس المسماة وغير المسماة تصور (الشكل 3A, 3B الشكل)، إظهار الحركة الجزئية للعصب البصري. كمراقبة عين، رجكس كل من الأسفار الشبكية وأظهر العين اليسرى (الشكل 3، الشكل 3D).
تقييم عما إذا كان المفرج حول رأس العصب البصري والشريان العيون أن إمدادات الدم انتوريتينا بجروح وتضررت خلال العملية، وقاع العين اليمنى تم تصويرها قبل وبعد الجراحة. وأظهرت الصور إمدادات الدم إلى العين اليمنى (منطوق العين) قبل وساعة واحدة بعد العملية. وكان الدم في الشرايين كافية. ولوحظ لا عرقلة الوريد. أشارت هذه النتائج إلى أن كان هناك أي ضرر لنظام إمدادات الدم أثناء العملية (الشكل 4A، الشكل 4B). ولذلك، أنشئ نموذج الانحطاط الثانوية رجكس بنجاح.
الشكل 1 : صور فوتوغرافية لمساعد الجراحية الذاتي المصممة الصك، سي. (أ) رؤية بانورامية للأدوات الجراحية، مع جزأين رئيسيين، بما في ذلك قطب باليد ورأس مخدد. بينهما، هناك مقطع مشتركة بطول 50 مم. طول القطب باليد 100 مم وقطر القطب اليدوية 9 مم. (ب) بميزة للاخدود سي. هو سطح الرأس مخدد مخدد شبه دائرية، الذي يتيح للعصب البصري لوضع داخلها، التي استقرت ترانسيكتيون. السطح مخدد مع عمق 200 ميكرومتر رأسي وعرض 500 ميكرومتر وطول 1,000 ميكرومتر. هو عرض الحافة رئيس مخدد 300 ميكرون. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : رسم تخطيطي لحكومة كمبوديا الملكية وضع العلامات على الشبكية بعد ترانسيكتيون جزئي للعصب البصري الأيمن مع الصك مساعد الجراحية الذاتي المصممة (ساي) ووسم والاكيميه متفوقة مع فلوروفوري ريتروجراديلي- (أ) العمليات الجراحية رأي جزئية العصب البصري الأيمن ترانسيكشن في الفئران مع الصك مساعد الجراحية الذاتي المصممة (سي). (ب) بعد النمذجة، رجكس كانت المسمى ريتروجراديلي عن طريق حقن صبغة العصبية الراسم (اللون الأصفر، فلوروفوري 3% في المحلول الملحي العازلة الفوسفات العقيمة) في والاكيميه العليا في الدماغ. حيث تتواجد محاور عصبية رجكس في والاكيميه متفوقة، صبغ التتبع يتم تناولها قبل رجكس ريتروجراديلي ويشكل علامة للخلايا الحية. المقطع العرضي في الشكل يمثل قطاعا عريضاً من العصب البصري. التطوير التنظيمي، تعمل العين؛ نظام التشغيل، والعين تحكم دون العملية. في (ج)، كانت تسمية فقط رجكس المقابلة للجزء أونترانسيكتيد من العصب البصري مع فلوروفوري. الأزرق يمثل المفصول الأعصاب البصرية البطني ورجكس المقابلة على الشبكية؛ الأحمر يعكس جزئيا بحف الأعصاب البصرية الظهرية ورجكس المقابلة على الشبكية. (د) الشبكية رجكس العين اليسرى (مراقبة العين) دون إجراء العمليات الجراحية كانت جميع المسمى بالصبغة. الأعصاب البصرية الظهري والبطني كانت جميع المسمى بالصبغة كذلك. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 : نموذج الشبكية كله ابيفلوريسسينسي ميكروجرافس من فلوروفوري المسمى رجكس 7 أيام بعد إنشاء ترانسيكتيون جزئي في العصب البصري ورجعي وسم من والاكيميه متفوقة. وترد أيضا التخطيطية المقابلة من فلوروجولد الملون المناطق حكومة كمبوديا الملكية على الشبكية. (أ) (ج) تمثل التخطيطية من رجكس في شبكية العين حق (المنطوق) وعيون اليسار (تحكم) بعد وضع العلامات مع فلوروفوري، على التوالي. اللون الأصفر يشير إلى الناحية المسماة مع صبغ الذهب الفلورسنت. الشبكية ينقسم إلى الأجزاء الظهرية والبطني والمركزية. (ب) و (د) تمثل ميكروجرافس ابيفلوريسسينسي كله الشبكية التي تم الحصول عليها تحت مجهر الأسفار؛ الأصفر يمثل مجال رجكس المسمى مع فلوروفوري. في جراحة العين (العين اليمنى) سيظهر في ب، يمثل المنطقة غير مسمى منطقة رجكس المقابلة للعصب البصري الذي هو جزئيا بحف، أساسا في الجهة الظهرية من الشبكية. المنطقة المسماة بصبغ الذهب الفلورسنت هو مجال رجكس المقابلة للعصب البصري الذي لا بحف وتتركز أساسا في الجانبين البطني والمركزية من الشبكية. بنداري بين مجالات رجكس المسماة وغير المسماة واضحة. تنكس الأولية من هيئات حكومة كمبوديا الملكية ستكون مقصورة على الشبكية الظهرية، وفقدان جميع هيئات حكومة كمبوديا الملكية في شبكية العين المركزية والبطني يمكن أن يعزى إلى انحطاط الثانوية. (د) كله الشبكية الصورة المجهرية من العين اليسرى بعد وضع العلامات من رجكس مع فلوروفوري. كانت ملطخة رجكس العين اليسرى من عنصر التحكم دون إجراء العمليات الجراحية تماما من فلوروفوري. تغيير حجم أشرطة = 500 ميكرومتر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 : الحصول على صور قبل الجراحة وبعد الجراحة من النظارة للعين اليمنى بكاميرا النظارة. (أ) صورة النظارة قبل جراحة العين اليمنى في الفئران، عرض إمدادات الدم جيدة في النظارة، ملء الشرايين، ولا العودة الوريدية أو عرقلة، تشير إلى نظام إمدادات دم شبكية جيدة. (ب) صورة النظارة للعين اليمنى 1 ساعة بعد الجراحة. وبالمقارنة مع صورة النظارة قبل الجراحة، لم تلاحظ أي تغييرات كبيرة في إمدادات الدم الشبكية، التي تشير إلى أن نظام إمدادات الدم من مقلة العين لم تتأثر خلال عملية النمذجة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 5 : صور فوتوغرافية للعصب البصري خلف المقلة والشريان العيون الموجودة على غمد سحائي، القبض على من خلال النهج الجراحية. بعد إزالة تماما طول المستهدفة للعصب البصري، كان الشريان العيون (رأس السهم) المتزامن مع غمد السحائي للعصب البصري المكشوفة، وموازية للعصب البصري. تغيير حجم أشرطة = 500 ميكرومتر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 6 : رسم تخطيطي لمواقع تنكس الابتدائي والثانوي في العصب البصري- وقد تحقق شق جزئي للعصب البصري باستخدام الأداة المساعد الجراحية الذاتي المصممة (رأس السهم). محاور عصبية في المواقع المتضررة مباشرة (موقع القطع الظهرية للعصب البصري في المقطع العرضي في الرمادي) الخضوع لانحطاط الأولية، بينما تلك الموجودة في المواقع المتضررة غير مباشر (المناطق الوسطى والبطني للعصب البصري في المقطع العرضي باللون الأصفر) الخضوع لانحطاط الثانوية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Discussion
الإجراءات التنفيذية
هناك بعض النقاط جديرة لإشعار عملية البناء النموذجي. في الخطوة 4، 2، ينبغي إجراء حركة الجراحية بعناية لتجنب إتلاف المفرج أعلاه العضلات سوبفاسسيال. وبخاصة، عندما قطع اللفافة تحت الجلد في كانثوس الجانبي الخارجي، ينبغي استخدام ملقط مسنن حاد لسحب التصاعدي من اللفافة تحت الجلد على سطح اللفافة رأسياً؛ ينبغي قطع اللفافة مع Vannas مقص الربيع تجنب إلحاق الضرر بالوريد المدارية في كانتوس الخارجي، مما يؤدي إلى فشل النموذج بالنزيف. ويمتاز خطوة 4.3 يحتمل أن تمنع النزيف عند إزالة مباشرة من الأوعية الدموية. في فصل العضلات المداري في الخطوة 4، 5، والسبب في ملقط مسنن حاد الانتقاء ولكن لم فانس مقص الربيع لتجنب النزف والنزف المستمر. يتم فصل العضلات صراحة على كلا الجانبين في الاتجاه العمودي لشق لفافة الجلد؛ وفي الوقت نفسه، يتم تمدد العضلات العميقة للمدار إلى الخارج ومحيطيا. هذا الإجراء سوف تكشف عن أعمق أجزاء تجويف المداري، توفير إطار جراحة أكبر والسماح بالوصول دون عائق إلى الأنسجة التي تتراكب على العصب البصري. الإجراءات المذكورة أعلاه، في حالة حدوث نزيف، ضغط ينبغي تطبيق استخدام عقيمة جراحية أو مسحات القطن. سيتم إيقاف نزيف طفيف بعد عدة ثوان قبل هذا الإجراء. وغرض الخطوة 4، 6 لتسهيل عمليات المتابعة لإزالة بعض العضلات والدهون ومنفصلة بسهولة في المخروط العضلات المدار لفضح العصب البصري على طول اتجاه العصب البصري في عمق المداري.
خطوات أهم أجزاء من البروتوكول الحالي على 5.1-5.6. المهم لا للتلف المفرج حول رأس العصب البصري. وينبغي أن ترانسيكتيد العصب البصري جزئيا على الأقل 1.5-2.0 ملم من الجزء الخلفي العين، لتجنب أي ضرر للشريان العيون التي تخترق العصب داخل 1 مم العين وإمدادات الدم إلى الشبكية الداخلية. والغرض من القطع المستقيمة الجانبية تحقيق أفضل من التعرض للعصب البصري المستقيمة الجانبية على نطاق واسع، وكتل من الواضح أنه يرى العصب البصري. وفي الوقت نفسه، لتجنب إزالة العيون الشريان الذي يقترن مع غمد سحائي (الشكل 5)، من الضروري أن فصل وفصل دوراً حول العصب البصري ودراسة نمط غمد سحائي، الأوعية الدموية استخدام الملقط لتدوير الغمد بلطف. وبالإضافة إلى ذلك، ينبغي تحديد منطقة خالية من الأوعية الدموية، مما يسمح قطع طولية في غمد سحائي. كما أنها ضرورية للحفاظ على مسافة عمل صغيرة من الجزء الخلفي العين، وتفادي الجزء من بلده دوراً التي يرتبط ارتباطاً وثيقا بالشريان العيون. الشبكية يكون عادة شفافاً، ويمكن ترسيمها وضوح الأوعية الدموية. في حالة تلف الدم الشبكية، تحولت شبكية العين، مما يؤدي إلى مظهر حليبي أبيض ندفا. قاعة الزجاجي للعين والعدسة ستصبح عادة غائم كذلك، مع حجم العين انخفضت على مر الزمن. في هذه الدراسة، أكدت الصور قبل الجراحة وبعد الجراحة للنظارة أي ضرر لإمدادات الدم النظارة في النموذج بعد تطبيق الخطوات المذكورة أعلاه.
وعلاوة على ذلك، مطلوب رعاية خاصة في عدة خطوات من هذا الطراز. عند استخدام ملقط مسنن منحنى حاد أو غيرها من الأدوات الجراحية لفضح العصب البصري، الجراح ينبغي تجنب القوة المفرطة، كما أنها قد تتلف العصب البصري، ومقلة العين أو الشريان العيون، مما أدى إلى إصابة الأولية والاسكيميه الشبكية. وبالإضافة إلى ذلك، الأوعية الدموية المحيطة بالعين وينبغي أن لا يكون معطوباً، لتجنب النزيف المستمر، مما قد يؤدي إلى فشل النمذجة. سي المستخدمة في هذه التجربة يتطلب الاستخدام الدقيق. عندما يتم وضع العصب البصري داخل الاخدود الصك، العصب البصري وسطح مخدد تحتاج إلى أحكام تركيبها لضمان اتساق جيد والتكرار لكل نموذج الحيوان. مع الممارسة، يمكن أن تكتمل العملية الجراحية الكامل خلال 15-20 دقيقة في العين، بعد أن أجريت تخفيضات الدخول الأولى.
وانغ وآخرون ونشرت 19 نموذج حيوان مشابهة للعصب البصري الجزئي ترانسيكشن المنشأة باستخدام أمبوتاتور كمية عصب البصري. العمليات الجراحية وتشمل: 1) قطع أربا كانتوس الخارجي، تعليق وتحديد بالبيبرال الفعليتين للرئيس؛ استكشاف العصب البصري 2)، وترانسيكتينج الجزء متفوقة من العصب البصري باستخدام أمبوتاتور؛ و 3) خياطة الملتحمة والجلد. على الرغم من أن العملية الجراحية كانت بسيطة نسبيا، تمت مصادفة المشاكل التالية أثناء العملية. على الرغم من أن شق كانتوس الأفقي يمكن أن يعرض مساحة معينة للعملية، هناك حاجة لا مفر منها على امتداد مقلة العين باستمرار من أجل فضح غمد العصب البصري خلف المقلة، لا سيما عند الجراحين المطلوب لفضح خلف المقلة أطول غمد العصب البصري لتيسير المزيد من العزلة غمد؛ كانت القوة لتمتد مقلة العين أكبر، الذي من المحتمل أن يسبب الضرر المباشر الجر مقلة العين والعصب البصري. لا اهتمام خاص بالأوعية الدموية التي قد قطع جنبا إلى جنب مع غمد العصب البصري، والأضرار التي لحقت الأوعية الدموية من المرجح أن يؤدي إلى إنشاء نموذج الفاشلة. الإجراءات الرئيسية لنموذج الضرر الثانوي الموصوف في هذه الورقة: منطوق جديد يقترب من الجدار المداري الأفقي من مقلة العين الوصول مباشرة إلى العصب البصري خلف المقلة محاطة بمخروط العضلات المداري، تجنب الإصابة الأولية إلى مقلة العين والعصب البصري، عندما سحب أسفل أو نحو الجانب الأفقي الآنف من مقلة العين. هذا النهج منطوق جديد يزيد من المساحة لعملية جراحية خلال النمذجة، وتمكن من السهل عزل غمد سحائي، الذي يرتبط ارتباطاً وثيقا بالشريان العيون، قبل ترانسيكشن جزئي للعصب البصري. وأجرى ترانسيكشن جزئي في العصب البصري مع أداة جراحية الذاتي مصممة، التي فعالة من حيث التكلفة وقابلة لإعادة الاستخدام، تقليل التكلفة الإجمالية للنمذجة. هيكل المداري للفئران تختلف عن غيرها من الثدييات، مع المدار الأقرب إلى كانثوس ولا يوجد هيكل عظمى، ولكن مغطاة بالعضلات. أن النهج الجراحية يمكن أن تصل إلى الجزء الخلفي من مقلة العين دون الحاجة إلى تدمير العظام المداري والسمحاق. عن طريق تطهير صارمة قبل الجراحة والاتقاء بالمضادات الحيوية بعد العملية الجراحية، خفضت إلى حد كبير العدوى والتهاب وذمة.
الذاتي المصممة الجراحية مساعد
أنشئ نموذج فأر ترانسيكتيون العصب البصري جزئية استخدام الصك مساعد الجراحية الذاتي المصممة، وملامحها الرئيسية كما يلي. أنها يمكن أن تساعد في ترانسيكتيون الكمية الجزئية للعصب البصري يتعرض إلى حافة مخدد، أيضا ضمان الاتساق ترانسيكتيون بين الحيوانات المختلفة. ونحن اختبار والتحقق من التكرار لإنشاء نموذج مع سي. معامل الحد الأقصى للاختلاف كان 1.85 في المائة، متوسط قيمة 0.67 في المائة ±0. 44%. هذه النتائج تشير إلى أن سي يمكن استخدامها لإنشاء نماذج ترانسيكشن جزئي في العصب البصري، مع إمكانية تكرار نتائج مرضية والأمم المتحدة 20إيفورميتي.
العرض للسطح مخدد وتصميم نصف دائرة السطح الداخلي للاخدود يمكن أثرا أكثر ثابتة على العصب البصري، وتجعل سطح مخدد وإرفاق العصب البصري أكثر أحكاما، أيضا تقليل الأخطاء التجريبية وردود الفعل السلبية. حافة مخدد يسمح توفير حماية أفضل للعصب البصري في groove خلال هذه العملية التي لا ضرر في العصب البصري في groove، بغض النظر عن الحدة القاطع. ميزة أخرى من حافة مخدد هو سحق الوقاية من الإصابات أثناء ترانسيكشن العصب البصري.
ومن المناسب للتشغيل في الفضاء العميق والضيق. على الرغم من أن تم توسيع النهج الجديد من المنطوق، الطريق ما زالت عميقة، والقطب باليد والقسم المشترك يمكن استخدامها لوضع الرأس مخدد بسهولة تحت غمد العصب البصري لإجراء عمليات المتابعة. عندما يتم استخدام الأداة للتشغيل، يمكن استخدام مجموعة واسعة من قطع ترانسيكتيون، مثل تلميح إبرة ز 26. يمكن تحديد حتى سكين ياقوت مسبار جراحية تجنب كدمة وسحق الإصابات الناجمة عن المقص. يمكن إجراء السطوح الاخدود في أعماق رأسية مختلفة لإكمال قطع العصب البصري بدرجات متفاوتة.
مقارنة مع أمبوتاتور وانغ et al. سي لديها هيكل أبسط. وبالإضافة إلى ذلك، خطوة قطع أكثر ملاءمة استخدام سي، مع تحسين الاتساق والتكرار لنموذج الحيوان. وأخيراً، مجموعة الأدوات المطبقة للقطع سي أيضا أوسع. وفي الختام، قد سي، الأمر الذي يجعل شقوق الكمية وموحدة للعصب، بمثابة أداة فعالة لإنشاء نماذج الفئران لتقييم ترانسيكشن العصب البصري.
خصائص النموذج ترانسيكشن العصب البصري الجزئي الفئران
نموذج ترانسيكشن العصب البصري الجزئي مفيد لتقييم تنكس الثانوية في رجكس. ميزة محتملة في هذا النموذج هو القدرة على فصل الأولية من انحطاط الثانوية بدقة في الموقع، سواء في العصب البصري والشبكية. الأعصاب البصرية المركزية والبطني كانوا أكثر عرضه للإصابة الثانوية بعد ترانسيكشن الجزئي (حوالي 1/3 إلى 1/2) للعصب البصري الظهرية (الشكل 6). في شبكية العين، ينبغي أن يستند الموقع الإقليمي للإصابات الأولية والثانوية من رجكس إلى طبوغرافية العصب البصري تناظر رجكس الشبكية بعد ترانسيكتيون الجزئي. إذا تم تقسيم كامل شبكية الفئران إلى الظهرية (العليا) وأجزاء (أدنى) البطني، الإصابات الثانوية والأولية موجودة في كلا الجزأين. ومع ذلك، استناداً إلى العلاقة بين رجكس على الشبكية ومحور عصبي العصب البصري، الموت حكومة كمبوديا الملكية في الشبكية البطني ينبغي أن تكون يعزى أساسا إلى الضرر الثانوي (الشكل 3). 12 , 22 , 23 مزايا هذا النموذج ما يلي: أداة بسيطة وسهلة للعمل مع الإجراءات القياسية؛ أي تأثير على العيون السفن؛ إمكانية تكرار نتائج جيدة والاستقرار. يمكن استخدام هذا الأسلوب ترانسفيكت رجكس من هذا النهج المنطوق توفيرا للمساحة بتطبيق الكشف التدخل القصير (سيرناس)، البلازميدات، وجدعه النواقل الفيروسية للعصب البصري الجزئي؛ وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أن توضع الكواشف على السيجارة جزئي في العصب البصري لمعالجة انتقائية أو وضع العلامات من رجكس.
وتتعايش الإصابات الإجمالية والابتدائي والثانوي من رجكس بعد ترانسيكشن جزئي في العصب البصري في هذا النموذج الحيواني، مع حدود واضحة في الشبكية بين أنواع إصابة اثنين. وبالرغم من أن رابطة العصب البصري محاور عصبية وموقع حكومة كمبوديا الملكية على الشبكية يحتاج مزيدا من التحقيق لتمييز أدق، هذا النهج المنطوق الفضاء لإنقاذ يوسع نطاق تطبيق النموذج ويسمح للباحثين لاستكشاف آليات الإصابة الثانوية في رجكس بطريقة جديدة.
Disclosures
أن تعلن جميع المؤلفين أن لديهم لا يوجد أي تعارض في المصالح.
Acknowledgments
هذا العمل كان تدعمه "بكين مؤسسة العلوم الطبيعية" (7152038)، أموال البحوث الأساسية للجامعات المركزية لجامعة جنوب وسط (2016zzts162) والعلم مؤسسة من عير العين مستشفى مجموعة الأبحاث (رقم المنحة AF156D11). وأخيراً، شكرا يان فانتشينج "شو يي بينغ" لما قدموه من دعم خلال السنوات.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animal Aneathesia Ventilator System | MIDMARK | Matrx VMR | |
| Isoflurane | RWD Life Science Co. | R510-22 | |
| Surgical Microscope | Leica AG, Heerbrugg, Switzerland | M620 F20 | |
| Tobramycin Eye ointment | Alcon | H20110312 | |
| Fluorogold | Biotium | 80014 | |
| Iris scissors | 66vision Co. | 54026 | |
| Vannas spring scissor | 66vision Co. | 54137B | |
| Sharp-serrated forceps/0.12mm toothed forceps | 66vision Co. | 53329A | |
| Sharp-curved forceps | 66vision Co. | 53324A | |
| Sapphire surgical probe | 66vision Co. | 50205TA | |
| 26G needle tip | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co. | 3151474 | |
| 10 μl Hamilton Syringe | Hamilton Co. | 80030 | |
| 5-0 non-absorbable suture | Johnson & Johnson International Co. | W580 | |
| Chlorhexidine | Sigma-Aldrich | 282227 | |
| Stereotaxie apparatus | RWD Life Science Co. | 68026 | |
| Retinal Imaging System | OptoProbe Ltd. | OPTO-RIS | |
| RetCamII wide field imaging system | Clarity Medical Systems,Inc. | RetCamII | |
| Fluorescence microscope | Leica Microsystems Inc. | DM6000 |
References
- Stoica, B. A., Faden, A. I. Cell death mechanisms and modulation in traumatic brain injury. Neurotherapeutics. 7 (1), 3-12 (2010).
- Hausmann, O. N. Post-traumatic inflammation following spinal cord injury. Spinal Cord. 41 (7), 369-378 (2003).
- Oyinbo, C. A. Secondary injury mechanisms in traumatic spinal cord injury: a nugget of this multiply cascade. Acta Neurobiol Exp (Wars). 71 (2), 281-299 (2011).
- Guimaraes, J. S., et al. Mechanisms of secondary degeneration in the central nervous system during acute neural disorders and white matter damage. Rev Neurol. 48 (6), 304-310 (2009).
- Stewart, S. S., Appel, S. H. Trophic factors in neurologic disease. Annu Rev Med. 39, 193-201 (1988).
- Brubaker, R. F. Delayed functional loss in glaucoma. LII Edward Jackson Memorial Lecture. Am J Ophthalmol. 121 (5), 473-483 (1996).
- Yoles, E., Schwartz, M. Degeneration of spared axons following partial white matter lesion: implications for optic nerve neuropathies. Exp Neurol. 153 (1), 1-7 (1998).
- Nickells, R. W. From ocular hypertension to ganglion cell death: a theoretical sequence of events leading to glaucoma. Can J Ophthalmol. 42 (2), 278-287 (2007).
- Doucette, L. P., Rasnitsyn, A., Seifi, M., Walter, M. A. The interactions of genes, age, and environment in glaucoma pathogenesis. Surv Ophthalmol. 60 (4), 310-326 (2015).
- Osborne, N. N., Melena, J., Chidlow, G., Wood, J. P. A hypothesis to explain ganglion cell death caused by vascular insults at the optic nerve head: possible implication for the treatment of glaucoma. Br J Ophthalmol. 85 (10), 1252-1259 (2001).
- Rokicki, W., Dorecka, M., Romaniuk, W. Retinal ganglion cells death in glaucoma--mechanism and potential treatment. Part II. Klin Oczna. 109 (7-9), 353-355 (2007).
- Levkovitch-Verbin, H., et al. A model to study differences between primary and secondary degeneration of retinal ganglion cells in rats by partial optic nerve transection. Invest Ophthalmol Vis Sci. 44 (8), 3388-3393 (2003).
- Magharious, M. M., D'Onofrio, P. M., Koeberle, P. D. Optic nerve transection: a model of adult neuron apoptosis in the central nervous system. J Vis Exp. (51), (2011).
- Yoles, E., et al. GM1 reduces injury-induced metabolic deficits and degeneration in the rat optic nerve. Invest Ophthalmol Vis Sci. 33 (13), 3586-3591 (1992).
- Fisher, J., et al. Vaccination for neuroprotection in the mouse optic nerve: implications for optic neuropathies. J Neurosci. 21 (1), 136-142 (2001).
- Levkovitch-Verbin, H., et al. RGC death in mice after optic nerve crush injury: oxidative stress and neuroprotection. Invest Ophthalmol Vis Sci. 41 (13), 4169-4174 (2000).
- Li, Y., et al. VEGF-B inhibits apoptosis via VEGFR-1-mediated suppression of the expression of BH3-only protein genes in mice and rats. J Clin Invest. 118 (3), 913-923 (2008).
- Tang, Z., et al. Survival effect of PDGF-CC rescues neurons from apoptosis in both brain and retina by regulating GSK3beta phosphorylation. J Exp Med. 207 (4), 867-880 (2010).
- Wang, X., Li, Y., He, Y., Liang, H. S., Liu, E. Z. A novel animal model of partial optic nerve transection established using an optic nerve quantitative amputator. PLoS One. 7 (9), e44360 (2012).
- Yan, F. C., Li, S. N., Liu, K. G., Lu, Q. J., Wang, N. L. The establishment of a rat partial optic nerve transection model and assessment of its reproducibility. Ophthalmology in China. 22 (1), 34-37 (2013).
- Fitzgerald, M., et al. Secondary degeneration of the optic nerve following partial transection: the benefits of lomerizine. Exp Neurol. 216 (1), 219-230 (2009).
- Fitzgerald, M., et al. Near infrared light reduces oxidative stress and preserves function in CNS tissue vulnerable to secondary degeneration following partial transection of the optic nerve. J Neurotrauma. 27 (11), 2107-2119 (2010).
- Li, H., et al. Lycium barbarum (wolfberry) reduces secondary degeneration and oxidative stress, and inhibits JNK pathway in retina after partial optic nerve transection. PLoS One. 8 (7), 68881 (2013).
