Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

البناء وتقييم نموذج عظام النهايات كالفاريال مورين بالتعرض للجسيمات كوكرمو في تخفيف العقيم

doi: 10.3791/56276 Published: February 17, 2018
* These authors contributed equally

Summary

ويصف هذه المخطوطة نموذج عظام النهايات كالفاريال مورين بالتعرض للجسيمات كوكرمو، الذي يشكل نموذجا حيوان مثالي لتقييم التفاعلات بين الجسيمات البلى وخلايا مختلفة في تخفيف العقيم.

Abstract

عظام النهايات الناجمة عن الجسيمات ارتداء سببا رئيسيا لتخفيف العقيم في تقويم مفاصل الفشل، ولكن الآلية الأساسية التي لا تزال غير واضحة. سبب طويلة المتابعات اللازمة للكشف وحدوث متفرقة، أنه يمثل تحديا لتقييم المرضية الناجمة عن أوفبارتيكلي عظام النهايات في الحالات السريرية. ومن ثم فالنماذج الحيوانية المثلى المطلوبة لإجراء المزيد من الدراسات. نموذج عظام النهايات كالفاريال المنشأة بالتعرض للجسيمات كوكرمو مورين أداة فعالة وصالحة لتقييم التفاعلات بين الجزيئات والخلايا المختلفة في تخفيف العقيم. في هذا النموذج، التي حصل عليها التيار المباشر ثلاث قطب كهربائي عالية الفراغ جسيمات كوكرمو أولاً وحراكه في مخزنة الفوسفات المحلول الملحي بتركيز 50 ملغ/مل. ثم طبقت منتصف كالفاريا موريني 50 ميليلتر من تعليق الناتجة بعد فصل السمحاق الجمجمة بحادة تسلخ. وبعد أسبوعين، كانت التضحية بالفئران، وكانت تحصد كالفاريا العينات؛ وأجريت التقييمات الكمية والنوعية التي توضع وتلطيخ ويوزين والجزئي المقطعي. وتشمل مواطن القوة في هذا النموذج البساطة الداخلي، والتقييم الكمي لفقدان العظام، وسرعة التنمية عظام النهايات والاستخدام المحتمل المحورة وراثيا أو نماذج بالضربة القاضية، وتكلفة منخفضة نسبيا. ومع ذلك، لا يمكن هذا النموذج التي ستستخدم لتقييم القوة الميكانيكية والآثار المزمنة للجسيمات في تخفيف العقيم. نموذج عظام النهايات كالفاريال مورين الناتجة عن التعرض للجسيمات كوكرمو أداة مثالية لتقييم التفاعلات بين الجسيمات ملابس ومختلف الخلايا، مثلاً، الضامة، الليفية، وخلايا الاوستيوبلاستس والأكلة، في تخفيف العقيم.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

تخفيف العقيم هو السبب الأكثر شيوعاً لتقويم مفاصل الورك الكلي (ثا) والفشل (تكا) تقويم مفاصل الركبة، الأمر الذي يتطلب مراجعة الجراحة1. ومع ذلك، لا تزال إليه الكامنة غير واضح2. مطلوب متابعة طويلة لاكتشاف عظام النهايات الناجمة عن الجسيمات، التي حدوث أمر نادر الحدوث؛ ولذلك فإنه يمثل تحديا لاستكشاف ما المرضية في الحالات السريرية. ومن ثم تتطلب المزيد من الدراسات التي تركز على آليات معقدة من الخلايا والأنسجة وكل التجارب في فيفو في ارتداء نماذج عظام النهايات الناجمة عن الجسيمات وفحوصات في المختبر في الخلايا المتصلة بالعظام التوازن3. نموذج حيوانية صالحة المهم في الكشف عن آثار الجسيمات ملابس على فقدان العظام، تقديم أدلة للهاتف الخلوي فحوصات إضافية.

نموذج عظام النهايات كالفاريال موريني شيدت قبل التعرض للجسيمات كوكرمو طريقة فعالة وصالحة لتقييم التفاعلات بين الجزيئات والخلايا المختلفة في تخفيف العقيم. في هذا النموذج، تسبب الجسيمات كوكرمو كالفاريال عظام النهايات بتحريض السيتوكينات الالتهابية في الضامة وتفعيل الآكلة، ويحول دون انتشار osteoblast وتعزيز osteoblast المبرمج.

إلا أنها تستغرق أسبوعين لإقامة هذا النموذج. يمكن تصور عظام النهايات والكمية التي توضع وتلطيخ (H & E) ويوزين والصغير يحسب التصوير المقطعي (الصغرى-CT)2. وبالإضافة إلى ذلك، أن هذا النموذج قد ماوس نسبيا منخفضة التكلفة، ومحوره وراثيا والضربة القاضية نماذج يمكن استخدامها لفحص عدد كبير من المركبات في مختلف الجرعات3.

إجراءات إنشاء وتقييم هذا النموذج بسيط. أولاً، كانت الجسيمات كوكرمو التي حصل عليها التيار المباشر ثلاث قطب كهربائي عالية-الفراغ وحراكه في مخزنة الفوسفات المالحة (PBS) بتركيز 50 ملغ/مل. ثم طبقت منتصف كالفاريا مورين 50 ميليلتر من تعليق الناتجة بعد فصل السمحاق الجمجمة بحادة تسلخ. كانت التضحية الفئران بعد أسبوعين، وكانت تحصد كالفاريا العينات؛ أجريت التحاليل النوعية والكمية التي ح & ه تلطيخ أندميكرو-قيراط

نموذج عظام النهايات كالفاريال مورين التي شيدت قبل التعرض للجسيمات كوكرمو أداة مثالية لتقييم التفاعلات بين الجسيمات كوكرمو وخلايا مختلفة، مثل الضامة والخلايا الليفية، وخلايا الاوستيوبلاستس والأكلة، في تخفيف العقيم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) من جامعة نانجينغ.

1. إعداد الجسيمات كوكرمو

  1. الحصول على جسيمات كوكرمو باستخدام تيار المباشر ثلاث قطب كهربائي عالية-فراغ ملفقة4. سبيكة "كوكرمو مكان" في الصك تحت فراغ السلطة الفلسطينية-3 10، 0.04 الأرجون الآلام والكروب الذهنية والهيدروجين 3:2 (v/v)، و 650 ألف الكاثود الحالية.
  2. قياس أقطار جسيمات كوكرمو.
    1. أضف 1 مغ جسيمات كوكرمو إلى 1.5 مل إيثانول اللامائى.
    2. ريسوسبيند جسيمات كوكرمو في الإيثانول اللامائى اهتزاز الموجات فوق الصوتية في 28 كيلو هرتز و 600 واط لمدة 5 دقائق.
    3. تطبيق قطره واحدة (حوالي 20 ميليلتر) تعليق الناتجة في الجدول الهدف من انتقال الإلكترون المجهر (TEM). التقاط سلسلة من الصور ال 200 كيلو فولت تسريع الجهد و 0.24 نانومتر القرار.
    4. استخدام البرامج المتوفرة لحساب توزيع حجم الجسيمات وقطرها يعني في تيم ميكروجرافس.
  3. تطهير اندوتوكسينس
    1. اﻷوتوكﻻف 50 جرام جسيمات لمدة 15 دقيقة في 121 درجة مئوية و 15 رطل/بوصة مربعة.
    2. الكشف عن اندوتوكسينس قبل مقايسة ليمولوس أميبوسيتي ليستي (ال) كمية (< 0.25% واعتبر الاتحاد الأوروبي/مل للإشارة إلى غياب الذيفان)5.
  4. ريسوسبيند الجسيمات في مخزنة الفوسفات المالحة (PBS) بتركيز 50 ملغ/مل كحل الأسهم6.

2-بناء نموذج عظام النهايات كالفاريال

  1. تخدير 6 الأسبوع القديمة C57BL/j6 إلى الفئران (ستة الفئران في كل مجموعة) ويثبينتوباربيتال (50 مغ/كغ). استخدم اختبار قرصه لتقييم مستوى التخدير. منع جفاف العينين مع المحلول الملحي العادي.
  2. وضع الفئران في موقف المعرضة. إزالة الفراء على الجمجمة مع آلة حلاقة وتطهير الجلد باستخدام كرات القطن الطبي الذي يحتوي على الإيثانول 75%.
  3. للتعريب نقطة، تحديد نقطتين، بما في ذلك نقاط في المنتصف بين اثنين من عيون وآذان، على التوالي. تحديد الخط الفاصل بين اثنين النقاط المذكورة أعلاه، ثم جداً الجلد على طول الخط المذكور أعلاه مع المقص (الشكل 1A).
  4. إزالة سمحاق الجمجمة من كالفاريا مع مشرط (الشكل 1B)6.
  5. خياطة الجلد في كلا طرفي مع خياطة توقف بسيطة.
  6. جعل خط خياطة خلال منتصف الشق دون الغزل. أمسك طرفي خط خياطة الجروح.
  7. تضمين 50 ميليلتر من تعليق الجسيمات كوكرمو (50 ملغ/مل، في برنامج تلفزيوني) في وسط كالفارياس (الشكل 1)2.
  8. عقده غرزة الماضي داخل خياطة توقف بسيطة (الشكل 1).
  9. الحفاظ على الفئران لمدة أسبوعين 2.

3-التقييم النموذجي كالفاريال عظام النهايات الصغرى-ط م المسح الضوئي

  1. التضحية الفئران مع ثاني أكسيد الكربون. قطع رأس الفئران في الطائرة الأفقي. إزالة أنسجة المخ داخل، والجلد والفراء خارج. حصاد كالفارياس لإجراء مزيد من التجارب.
  2. بلطف تطهير جميع الأنسجة اللينة في كالفاريا مع ملاقط. إصلاح كالفارياس تم مسحها في بارافورمالدهيد 4% في 4 درجات مئوية عن 24 h. تزج كالفارياس في برنامج تلفزيوني 24 ح قبل الصغرى-ط م المسح الضوئي.
  3. تحليل كالفارياس الفئران المقطعية الصغرى ذات الدقة العالية في حل متساوي القياس من 18 ميكرون وإعدادات الطاقة الأشعة السينية من 45 كيلو فولت و 550 اماه.
  4. القيام بالتعمير ثلاثية الأبعاد للبيانات المقطعية الصغرى مع البرنامج.
  5. التحليل الكمي والنوعي.
    1. أولاً، حدد منطقة مربعة حول خياطة خط الوسط كالمنطقة للفائدة.
    2. وثانيا، قياس كثافة المعادن في العظام (BMD)، والعظام إلى مجموع حجم وحدة التخزين (BV والتلفزيون) وعدد ترابيكولار (Tb.N) وسمك ترابيكولار (Tb.Th)، ترابيكولار الفصل/التباعد (Tb.Sp) والنسبة المئوية لمجموع المسامية مع البرامج المقدمة للصغير-قيراط
    3. وثالثاً، مقارنة ثلاث مجموعات لقياسات مختلفة بواسطة ANOVA أحادي الاتجاه. بالنسبة المخصصة بعد تحليل التباين، تطبيق الأسلوب بونفيروني2.

4-تقييم نموذج عظام النهايات كالفاريال تلطيخ ح & ه

  1. ديكالسيفي كالفاريا عينات في 15% الإثيلين diamine حمض tetraacetic (يدتا)-برنامج تلفزيوني في 4 درجات مئوية. تغيير الحل ديكالسيفيكيشن كل يوم لمدة 3 أسابيع.
  2. تضمين نماذج ديكالسيفيد في البارافين 2 سم × 1 سم × 1 سم مكعب، وشريحة منهم إلى 2 ميكرومتر مقاطع في المنطقة ترسب الجسيمات.
  3. وصمة عار الأقسام مع توضع وكما سبق ذكره ثم7.
  4. التقاط ميكروجرافس باثومورفيسم عموما بالفحص المجهري الخفيفة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

كانت الجسيمات كوكرمو النانو المنتجة داخليا حوالي 50 نانومتر (الخطأ المعياري ل 3.56) في القطر، كما كمياً بال (الشكل 2). بعد التعرض للماوس كالفارياس للجسيمات كوكرمو، الحيوانات (n = 6 كل مجموعة) واستمرت لمدة أسبوعين. خلال الأسبوعين الماضيين، شق كالفاريال وقد شفيت تماما، وقد تقع خياطة الجروح. أي عدوى محلية أو نقابية أيار يؤثر على تقييم فقدان العظام. بعد التضحية بالماوس، كانت تحصد عينات كالفاريا. ثم بلطف تطهير جميع الأنسجة اللينة، واستخدمت الأشعة المقطعية الصغرى التحديد الكمي لفقدان العظام. ولوحظ فقدان العظام كبيرة من صور إعادة البناء ثلاثي الأبعاد والصور الفوتوغرافية الاكليلية الممثل في المقطع العرضي، في الفئران تعامل مع جزيئات كوكرمو (الشكل 3). العظام الكثافة المعدنية (BMD)، والعظام إلى مجموع حجم وحدة التخزين (BV والتلفزيون) وعدد ترابيكولار (Tb.N)، وسمك ترابيكولار (Tb.Th) كانت انخفاضا كبيرا، بينما مجموع المسامية و trabecular الفصل/التباعد (Tb.Sp) قد زادت كثيرا في كوكرمو المجموعة مقارنة مع المجموعات عملية التحكم والشام (الشكل 4). استخدم اختبار t student تقييم الفروق بين المجموعات، و p < 0.05 اعتبرت يعتد به إحصائيا. وعلاوة على ذلك، ح & ه تلوين الأقسام كالفاريا أكد فقدان العظام في الفئران تعامل مع جزيئات كوكرمو (الشكل 5).

Figure 1
الشكل 1 : التخطيطي من طراز الماوس عظام النهايات الناجمة عن الجسيمات (PIO). الجانب الأيسر يظهر موضع الماوس في النمذجة. (أ) نقطة التعريب. تحديد نقاط في المنتصف بين اثنين من عيون وآذان، على التوالي، والجلد على طول الخط الفاصل بين لهم جداً. (ب) كشف وإزالة سمحاق الجمجمة من كالفاريا. (ج) تعليق الجسيمات "تضمين كوكرمو" في وسط كالفاريا. (د) خياطة الجلد بخياطة توقف بسيطة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
الشكل 2 : نقل الميكروسكوب الإلكتروني المسح الضوئي لجزيئات كوكرمو. (أ) صور المجهر الإلكتروني انتقال الممثل من الجسيمات كوكرمو. (ب) التحديد الكمي توزيع حجم الجسيمات جسيمات كوكرمو مع البرنامج. يمثل كل شريط وتيرة تطبيع إلى العدد الكلي للجزيئات. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 3
الشكل 3 : التحليل الجزئي-CT مع التعمير 3 الأبعاد للعينات المأخوذة من الفئران التحكم وتلك تعامل مع برنامج تلفزيوني (الشام العملية) وجسيمات كوكرمو. خط أبيض أفقي يشير إلى موقع الصورة المقطع العرضي. يشير السهم الأبيض إلى فقدان العظام في المجموعة زرع كوكرمو. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 4
الشكل 4 : تحليل كمي للصور المقطعية الصغرى بعد إعادة البناء ثلاثي الأبعاد- التحديد الكمي للعظام الكثافة المعدنية (BMD) (A)، حجم وحدة التخزين إلى مجموع العظام (BV والتلفزيون) (ب)النسبة المئوية لمجموع المسامية (ج)، وعدد ترابيكولار (Tb.N) (د)، وسمك ترابيكولار (Tb.Th) (ه)، وترابيكولار الفصل/التباعد (Tb.Sp) (و) و في خطأ mean±standard. استخدم اختبار t student تقييم الفروق بين الجماعات، مع ف < 0.05 نظرت يعتد به إحصائيا. * *، ف < 0.01؛ ، ف < 0.001. n = 6 الفئران في كل مجموعة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 5
الشكل 5 : صور الممثل من ح & ه تلطيخ عينات كالفاريا (10 ×) من الفئران التحكم وتلك التي تعامل مع برنامج تلفزيوني (الشام العملية) والجسيمات كوكرمو. يشير السهم الأحمر إلى عظام النهايات. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

هناك طريقتان الرئيسي لارتداء الناجمة عن الجسيمات عظام النهايات في الفئران: عظام النهايات كالفاريال ونموذج الهواء-الحقيبة. في طراز إير-الحقيبة، المنشأة جوية-حقيبة التي تم إنشاؤها تحت الجلد هو أولاً، متبوعاً بارتداء الجسيمات مقدمة وغرس في أنسجة العظام8. يحاكي الجدار الحقيبة السمحاق في تخفيف العقيم. ومع ذلك، غرس العظام نونفاسكولار مع لا النشاط البيولوجي، مما يجعل من الصعب تقييم التفاعل المباشر بين الجسيمات ونسيج العظام. نموذج عظام النهايات كالفاريال مزايا عديدة على نظيره الجوية-الحقيبة. أولاً، والجسيمات ارتداء يتعرض مباشرة كالفاريا، مما يجعل من الممكن لتقييم التفاعلات بين الجسيمات البلى والعظام التوازن، بما في ذلك ارتشاف العظام، و osteoblast، اوستيوكلاست وبلعم الأنشطة9،10 . وثانيا، القياسات الكمية لفقدان العظام متوفرة، مما يسمح تقييم مختلف النهج الوراثية المحتملة والعوامل البيولوجية في منع فقدان العظام11. وثالثاً، فمن الممكن لتقييم العلاقة بين ارتداء الجسيمات وفقدان العظام في مختلف الخلفيات الوراثية، بما في ذلك المعدلة وراثيا والجينات خروج المغلوب الفئران12،13. رابعا، يمكن استخدامه لفحص عدد كبير من المركبات بجرعات مختلفة. بيد أن معدل نجاح نموذج عظام النهايات تراديتيونالكالفاريال منخفض نسبيا، واستخدام هيستومورفوميتري العظام لقياس عظام النهايات يجعل النتائج أقل موضوعية1.

لتحسين معدل نجاح النموذج وتقديم نتائج أكثر موضوعية، أدخلت عدة تعديلات. أولاً، استخدمت لتعزيز التفاعلات بين كالفاريا وارتداء الجسيمات جسيمات نانوية. وفي الواقع، تتعزز التفاعلات بين جسيمات نانوية وكالفاريا مقارنة مع جزيئات سبائك تجارياً، مع متوسط قطرها 1.5 ميكرومتر14،15. ثانيا، كان تحدد منطقة2 سم 1.0 في كالفاريا لتحقيق التعرض كافية كالفاريا. ثالثا، استخدمت الإعمار الصغرى-الأشعة المقطعية وثلاثية الأبعاد لقياس فقدان العظام.

وهناك العديد من القيود في النموذج الحالي. معدات أولاً، المقطعية الصغرى للفئران ليست متاحة على نطاق واسع للباحثين والفنيين مطلوبة من أجل إعادة البناء ثلاثي الأبعاد والمسح. وثانيا، جسيمات نانوية كوكرمو المستخدمة في النموذج الحالي غير متوفرة تجارياً، وإنتاجها يعتمد على الدعم من فنيين علوم المواد. وثالثاً، هذا النموذج لا تمثل التأثيرات المزمنة للجزيئات في كتلة العظام، ويفتقر إلى العوامل غير البيولوجية المتصلة بعظام النهايات، مثل ضغط السائل متذبذبة أو قوي ميكانيكية. يمكن زيادة فعالية النموذج إلى حد كبير مع مساعدة جسيمات نانوية وما يكفي من التعرض كالفاريا. يمكن تحديده كمياً فقدان العظام، والحصول على بيانات أكثر موضوعية مع مايكرو-قيراط

نموذج عظام النهايات كالفاريال مورين المنشأة بالتعرض للجسيمات كوكرمو أداة مثالية لتقييم التفاعلات بين الجسيمات كوكرمو وخلايا مختلفة مثل الضامة، والخلايا الليفية، وخلايا الاوستيوبلاستس والأكلة في تخفيف العقيم. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يكون اختبار سلسلة من الأدوية لما لها من الآثار على تخفيف العقيم باستخدام هذا النموذج.

وهناك العديد من الخطوات الحاسمة لهذا الإجراء. الأول هو تطبيق كوكرمو جسيمات نانوية يبلغ متوسط قطرها 50 نانومتر. وثانيا، تم التعرض كافية كالفاريا. منطقة2 سم 1.0 في كالفاريا ما فيه الكفاية في هذا النموذج، وينبغي أن تشريح السمحاق في كالفاريا عناية وتماماً. يكثف تشريح واضحة من السمحاق التفاعلات بين الجسيمات وكالفاريا. ثالثا، من الممكن قياس كمي لفقدان العظام بالأشعة المقطعية الصغرى. القياسات الكمية لفقدان العظام من التعمير الأبعاد الثلاثة، مثل BMD وتلفزيون/بي، Tb.N، Tb.Th، Tb.Sp والنسبة المئوية لمجموع المسامية، تجعل من السهل التمييز بين الاختلافات فقدان العظام في العلاجات المختلفة، وتقديم أدلة دامغة من عظام النهايات مقارنة مع هيستومورفوميتري العظام التقليدية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgments

هذه الدراسة كانت تدعمها مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية (81572111) والعلوم الطبية والتكنولوجيا مشروع مؤسسة من مقاطعة جيانغسو (BL2012002)، مشروع البحوث العلمية نانجينغ (201402007)، العلوم الطبيعية مؤسسة من مقاطعة جيانغسو (BK20161385)، ومؤسسة خاصة من الرابطة الصينية طبيب (2015COS0810).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
CoCrMo alloy from prosthesis Waldemar Link GmbH & Co GEMINI MK II Raw material to obtain CoCrMo nanoparticles
Fabricated high-vacuum three-electrode direct current College of Materials Science & Engineering , Nanjing University of Technology Self designed machine
6 week old male C57BL/6J mice Model animal research center of Nanjing University N000013
100% Ethanol Nanjing Reagent C0691514023 Solvent of CoCrMo nanoparticles for transmission electron microscope scanning
1.5 ml Microcentrifuge tubes Taizhou Weierkang Medical Supplies co., LTD W603
Microanalytical balance Shenzhen Qun long Instrument Equipment Co,. LTD EX125DZH
Ultrasonic shaker Shanghai Yuhao scientific instrument co., LTD YH-200DH To suspend CoCrMo nanoparticles
Transmission Electron Microscope FEI Tecnai G20
SimplePCI software Compix Inc. 6.6 version To calculate the mean diameter and particle size distribution.
High-handed sterilization pan QIULONGYIQI KYQL-100DS To decontaminate endotoxin
Limulus Amebocyte Lysate (LAL) Assay Charles River R13025 To detect endotoxin 
15 ml Microcentrifuge tubes Taizhou Suyi Medical B122
Phosphate-buffered saline Boster Biological Technology AR0030 Solvent of CoCrMo nanoparticles stock solution
Pentobarbital Sodium Sigma P3761 To anesthetize mice
Normal saline SACKLER SR8572EP-15 To prevent drying of mice eyes
75% Ethanol Nanjing Reagent C0691560275 Disinfection
Medical cotton ball Shuitao 1278298933 Disinfection
Shaver Kemei KM-3018 To shave the fur
Scissor RWD LIFE SCIENCE S12005-10 To incise skin
Suture RWD LIFE SCIENCE F34001-01 To suture skin
Needle holder RWD LIFE SCIENCE F33001-01 To suture skin
Needle RWD LIFE SCIENCE R14003-12 To suture skin
Vessel forceps RWD LIFE SCIENCE F22003-09 To suture skin
Scalpel RWD LIFE SCIENCE S31010-01 To harvest calvaria
Tweezers RWD LIFE SCIENCE F12006-10 To harvest calvaria
100 µL pipettes Eppendorf 3120000240 To embed particles suspension in the calvatias
100 µL pipette tips AXYGEN T-200-Y To embed particles suspension in the calvatias
5 ml Microtubes Taizhou Weierkang Medical Supplies co., LTD W621
4% Paraformaldehyde Servicebio G1101 Fixation
Micro Computed Tomography  SkyScan SkyScan1176
Ethylene Diamine Tetraacetic Acid Servicebio G1105 Decalcification
Paraffin Servicebio #0001
Paraffin slicing machine Leica RM2125RTS
Glass slide Servicebio G6004
Cover glass Servicebio 200
HE staining kit Servicebio #1-5 HE staining
Light microscope Nikon E200

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dong, L., et al. Antisense oligonucleotide targeting TNF-alpha can suppress Co-Cr-Mo particle-induced osteolysis. J Orthop Res. 26, (8), 1114-1120 (2008).
  2. Deng, Z., et al. SIRT1 protects osteoblasts against particle-induced inflammatory responses and apoptosis in aseptic prosthesis loosening. Acta Biomater. 49, 541-554 (2017).
  3. Langlois, J., Hamadouche, M. New animal models of wear-particle osteolysis. Int Orthop. 35, (2), 245-251 (2011).
  4. Wang, P., Zhao, F. X., Zhang, Z. Z. Preparation of ultrafine zinc powders by DC arc plasma evaporation method. Chinese Journal of Nonferrous Metals. 21, (9), 2236-2241 (2011).
  5. Wang, Z., et al. The fibroblast expression of RANKL in CoCrMo-particle-induced osteolysis is mediated by ER stress and XBP1s. Acta Biomater. 24, 352-360 (2015).
  6. Wang, Z., et al. Autophagy mediated CoCrMo particle-induced peri-implant osteolysis by promoting osteoblast apoptosis. Autophagy. 11, (12), 2358-2369 (2015).
  7. Wang, R., et al. Particle-induced osteolysis mediated by endoplasmic reticulum stress in prosthesis loosening. Biomaterials. 34, (11), 2611-2623 (2013).
  8. Yang, S. Y., et al. Adeno-associated virus-mediated osteoprotegerin gene transfer protects against particulate polyethylene-induced osteolysis in a murine model. Arthritis Rheum. 46, (9), 2514-2523 (2002).
  9. Liu, N., et al. Autophagy mediated TiAl(6)V(4) particle-induced peri-implant osteolysis by promoting expression of TNF-alpha. Biochem Biophys Res Commun. 473, (1), 133-139 (2016).
  10. Wang, Z., et al. ER Stress Mediates TiAl6V4 Particle-Induced Peri-Implant Osteolysis by Promoting RANKL Expression in Fibroblasts. PLoS One. 10, (9), e0137774 (2015).
  11. Wang, Z., et al. TiAl6V4 particles promote osteoclast formation via autophagy-mediated downregulation of interferon-beta in osteocytes. Acta Biomater. 48, 489-498 (2017).
  12. Chen, S., et al. Lycorine suppresses RANKL-induced osteoclastogenesis in vitro and prevents ovariectomy-induced osteoporosis and titanium particle-induced osteolysis in vivo. Sci Rep. 5, 12853 (2015).
  13. Neuerburg, C., et al. The role of calcitonin receptor signalling in polyethylene particle-induced osteolysis. Acta Biomater. 14, 125-132 (2015).
  14. Catelas, I., Jacobs, J. J. Biologic activity of wear particles. Instr Course Lect. 59, 3-16 (2010).
  15. Liu, A., et al. The biological response to nanometre-sized polymer particles. Acta Biomater. 23, 38-51 (2015).
البناء وتقييم نموذج عظام النهايات كالفاريال مورين بالتعرض للجسيمات كوكرمو في تخفيف العقيم
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Jiang, H., Wang, Y., Deng, Z., Jin, J., Meng, J., Chen, S., Wang, J., Qiu, Y., Guo, T., Zhao, J. Construction and Evaluation of a Murine Calvarial Osteolysis Model by Exposure to CoCrMo Particles in Aseptic Loosening. J. Vis. Exp. (132), e56276, doi:10.3791/56276 (2018).More

Jiang, H., Wang, Y., Deng, Z., Jin, J., Meng, J., Chen, S., Wang, J., Qiu, Y., Guo, T., Zhao, J. Construction and Evaluation of a Murine Calvarial Osteolysis Model by Exposure to CoCrMo Particles in Aseptic Loosening. J. Vis. Exp. (132), e56276, doi:10.3791/56276 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter