Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

Bedömning av effekterna av hormonstörande föreningar på utvecklingen av Vertebrate neurala nätverk-funktion som använder multi elektrod matriser

doi: 10.3791/56300 Published: April 26, 2018

Summary

Exponering för miljögifter kan akut påverka utvecklingsländer embryon. Hormonstörande kemikalier såsom bisphenols är kända för att påverka nervsystemet. Här beskriver vi ett protokoll som använder en neuronala nätverk i vitro ryggradsdjur (chick embryo) modell för att studera de funktionella effekterna av toxin exponering på tidiga embryon.

Abstract

BIS-fenoler, t ex bis-fenol A (BPA) och bis-fenol-S (BPS), polymeriserande agenter som ofta används i tillverkningen av plaster och många vardagliga produkter. De klassificeras som endokrina störningar föreningar (EDC) med estradiol-liknande egenskaper. Långvarig exponering för hormonstörande ämnen, även vid låga doser, har kopplats till olika hälsa defekter inklusive cancer, beteendestörningar och infertilitet, med större sårbarhet under tidig utvecklingsmässiga perioder. För att studera effekterna av BPA på utvecklingen av nervcellernas funktion, använde vi en in vitro- neuronala nätverk härrör från tidigt chick embryonala hjärnan som modell. Vi hittade att exponering för BPA påverkade utvecklingen av nätverksaktivitet, särskilt tillsatta aktivitet och synkronisering. En förändring i nätverksaktivitet är den avgörande länken mellan det molekylära målet av en drog eller sammansatta och dess effekt på beteendemässiga resultatet. Multi elektrod arrayer blir alltmer användbara verktyg för att studera effekterna av droger på nätverket aktivitet in vitro. Det finns flera system på marknaden och, även om det finns variationer i antalet elektroder, typ och kvalitet av den elektrod arrayen och analys programvara, grundläggande principer, och uppgifterna samlats in är detsamma över den olika system. För närvarande begränsad till analys av tvådimensionella in vitro- kulturer, men dessa MEA system förbättras om du vill aktivera i vivo nätverksaktivitet i hjärnan skivor. Här, ger vi ett detaljerat protokoll för embryonala exponering och inspelning neuronala nätverksaktivitet och synchrony, tillsammans med representativa resultat.

Introduction

4, 4 '-isopropylidendifenol, vanligen avses som bisfenol-A eller BPA, är en antioxidant tillsats finns i ett brett utbud av polykarbonat och epoxi harts baserad produkter alltifrån termiskt papper, CD-skivor, och shatter proof glas, på insidan beläggning av dryck burkar. Även om BPA har varit känt att vara en endokrina störningar agent som härmar östrogen1, har studier på dess skadeverkningar på grund av vardagliga casual exponering för BPA mestadels kommit under de senaste 10 – 15 åren. Konsekvenserna av även låga nivåer av BPA exponering är mest djupgående i tidig utvecklingsmässiga perioder, inklusive under embryogenes genom exponering av mödrar2,3. In utero exponering av kvinnliga embryon för hormonstörande kemikalier har också kopplats till ökad mottaglighet från vaginal till breast cancer4,5. Djurstudier har visat att exponering för BPA leder till atypiska hjärnans struktur och funktionella avvikelser manifesteras i beteende6. Användning av BPA i nappflaskor har följaktligen förbjudits av mest tillsynsmyndigheter i Europa och Nordamerika, inklusive FDA. För att följa bestämmelser, har många tillverkare gått över till 4, 4'-sulfonyldiphenol eller bisfenol-S (BPS). Bygger på det faktum att BPA och BPS är strukturella analoger och att senaste rapporterna visade jämförbar styrka av BPS i östrogena transkription7, är det viktigt att studera toxiciteten av denna sammansatta släkting till BPA.

Här beskriver vi ett protokoll för att testa effekterna av BPA (och andra hormonstörande ämnen) på nätverk av nervceller som använder en vertebrate modell, chick embryot. In vitro kulturer av nervceller bildar synaptiska kontakter och generera handlingspänningar (även kallad spikar). Tillsatta aktiviteten av dessa kulturer kan registreras med hjälp av multi elektrod array (MEA) system. Spikar anses vara synkront när de inträffar inom 5 ms av varandra. Inledande slumpmässigt tillsatta aktivitet som så småningom synkroniserar är en nyckelfunktion för att utveckla neuronala nätverk8,9. Synchrony kan mätas med olika metoder och flera algoritmer beskrivs i litteraturen9,10,11. I våra analyser använder vi en algoritm som utvecklats av Paiva och medarbetare12 som är integrerad i inspelningsprogrammet som driver MEA förvärvsystemet. Robust tillsatta aktiviteten av embryonala chick nervceller ger en prototyp för att studera effekten av BPA på neurala nätverk aktivitet13. Använda flera elektrod-matriser för att spela in tillsatta aktivitet, observerat vi att BPA exponering hämmar utvecklingen av neuronala tillsatta synchrony9,14. Här ger vi en detaljerad metod för att studera BPA exponering på chick embryo neuroner i kultur tillsammans med representativa resultat på utvecklingen av neuronala tillsatta synchrony i chick embryonala kulturer.

Protocol

Protokollet anges nedan har standardiserats för att testa effekterna av BPA exponering under (tidigt) embryogenes, och kan ändras för användning med BPS, BPF eller andra EDC i chick embryonala nervceller.

Detta protokoll följer de institutionella av Delaware State University och NIH riktlinjer för aviär embryon. Protokollet är också i bekräftelse med DSU'S material och kemikaliesäkerhet riktlinjer.

1. väsentliga Setup

  1. Lös BPA (m.w. 228.29) i 10% etanol (v/v) i vatten för att göra en 1 mM stamlösning (0,23 mg per mL 10% etanol). Se efterföljande spädningarna (0.1 µM, 0,5 µM, 1 µM, 5 µM och 10 µM) i neurobasal medium.
    Försiktighet: BPA är en miljömässig toxin och försiktighet bör iakttas vid hantering av pulver.
  2. Inkubera chick ägg i ett kommersiellt tillgängliga bordsskiva ägg inkubator vid 37 ° C. Inkubera ägg i 7 dagar för E7 embryon.
  3. Förbereda basenhet Sterilize erforderligt antal MEAs genom blötläggning i 70% etanol för 3 till 4 h och skölj sedan tre gånger i cirka 10 mL sterilt destillerat vatten i BSLII huven.
    Obs: MEAs innehåller 64 nanoporösa platina elektroder ordnade i en 8 x 8 rutnät. Elektroden diameter är 30 µm och avståndet mellan elektroderna är 200 µm. Använd inte Denaturerad etanol för sterilisering i MEAs som detta kommer att leda till korrosion av MEA.
  4. Placera MEAs inuti en steril behållare med lock (för att upprätthålla sterila förhållanden) och flytta till en bordsskiva inkubator. Grädda i minst 6 timmar vid 55 ° C. Detta steg är avgörande för korrekt sterilisering och temperaturen bör inte överstiga 60 ° C. Att upprätthålla sterilitet, flytta den maträtt som innehåller MEAs till BSLII huven för lagring tills vidare användning.
    Obs: Vi använder en ugn säker glas ugnsform med plastlock och ytan sterilisera det med 70% etanol och plats i BSLII huven för torkning.
  5. Alikvot extracellulära matrix ECM lösningen. Tina injektionsflaskan vid 4 ° C över natten och frysa 100 µL portioner vid-20 ° C.
    Obs: ECM levereras fryst. ECM bör inte väckas till rumstemperatur tills det att belägga eftersom det polymerizes vid rumstemperatur och, när polymeriserat, är det omöjligt att pälsen. ECM utan tillväxtfaktorer föredras att förhindra ytterligare effekter på grund av okända faktorer.
  6. Sterilisera alla dissektion instrument (Dumont #5 pincett, böjd pincett, liten sax och våren sax) och självtätande material belagd dissektion rätter med 70% etanol och låt dem torka i dissektion huven.

2. chick embryonala Neuron kultur och nätverksaktiviteten

  1. Ta bort en injektionsflaska på dagen för plätering, ECM från-20 ° C frysen, spraya med 70% etanol och placera på isen. Späd till 25% genom att lägga till 300 µL kallt neurobasal medium släpper BSLII huva.
  2. Pipetteman använder en P200 och tillsätt 100 µL av 25% ECM till mitten av MEA utan att röra vid elektroderna och ta bort omedelbart lämna en tunn hinna på ytan. Täcka MEA och placera i CO2 inkubator (37 ° C och 5% CO2) tills det att plattan nervceller.
  3. Sterilisera det yttre skalet av ett E7 ägg (embryonala dag 7, inkuberas vid 37 ° C i 7 dagar) med 70% etanol. Halshugga embryot till en Sylgard botten dissektion maträtt som innehåller kall sterila Hanks balanserad salter lösning (HBSS) utan kalcium. Skär runt ögonen och ta bort ögonglober. Med hjälp av DuMont #5 fina pincett och våren sax gör ett snitt på ventrala sida och ta bort de yttre skikten av huden att exponera i framhjärnan och optisk tectum. Skala och ta bort pial membranet försiktigt. Överför framhjärnan till en annan petriskål och skär den i små bitar av ca 2 mm med våren sax.
    Obs: Bör inte något blodkärl är knutna till framhjärnan efter avlägsnande av pial membranet. Om tillgängligt, är det att föredra att utföra dissektion i en steril dissektion huva, även om vi har fått ganska bra resultat när dissektion utförs utanför en huva så länge de instrument och dissektion område är ordentligt steriliserade med 70% etanol .
  4. Med sterila pipett samla bitar av framhjärnan i en 15 mL centrifugrör och avlägsna så mycket av HBSS som möjligt efter att låta bitar av framhjärnan sjunka till botten av centrifugröret.
  5. Tillsätt 1 mL 0,05% Trypsin/EDTA (pre värmas till 37 ° C) och inkubera vid 37 ° C i 15 minuter.
  6. Använder en Pasteur-pipett, försiktigt bort trypsin utan att störa bitar av vävnad och tillsätt 1 mL neurobasal medium. Låt bitar av vävnad sjunka till botten och ta bort medlet. Upprepa denna tvätt en gång till. Detta steg är att tvätta bort den trypsin/EDTA.
  7. Tillsätt 2 mL av neurobasal medium och börja triturating. Trituration innebär att ta en steril eld polerade Pasteur-pipett och passerar vävnaden genom det flera gånger försiktigt tills inga fler bitar av vävnad ses. Om några bitar kvar efter upprepade passerar, bara lämna dem att bosätta sig till botten.
    Obs: Undvik skumbildning medan triturating - om skum bilda, stoppa och ta bort genom aspiration.
  8. Späd den åter suspenderade celler 1:10 med neurobasal medium och räkna viabla celler med hjälp av Trypan blått färgämne och en hemocytometer. Blanda 50 µL utspädda cellerna med 50 µL av Trypan blå lösning i ett 0,5 mL centrifugrör. Tillsätt 10 µL till hemacytometer efter utsläppande på täckglaset och räkna de ljusa tydliga celler (blå celler är döda och bör inte räknas).
    Obs: Typiska cell nummer från en enda E7 fiberoptiska tectum intervall mellan 1 och 5 x 107 celler/mL.
  9. Tavla den dissocierade cellerna på ECM belagda MEAs på en densitet på 2 200 celler/kvadrat mm. För våra MEA system innebär detta att cirka 130 000 celler per MEA. Lägg till neurobasal medium för att få volym i MEA till 1 mL och placera MEAs i CO2 inkubatorn över natten för cell fastsättning och neurite förlängning (figur 1).
    Obs: För åtgärder på olika områden och elektrod nummer, annan cell tätheter kan dömas - i allmänhet högre cell densiteten resulterar i större nätverksaktivitet, men också leder till kortare levda kulturer.
  10. Nästa dag, lägga till BPA till en slutlig koncentration på 10 µM i neurobasal medium från 1 mM lager gjorde i steg 1,1 till behandlade MEA. Till kontrollen MEA, Tillsätt samma volym av 10% etanol i (v/v) vattenlösning.
  11. Ersätt tillbringade medium med neurobasal medium innehållande 10 µM BPA varannan dag fram till 7 dagar i vitro (7DIV) och varje dag därefter, när nätverket aktivitet ökar.
    Obs: Som nätverksaktivitet ökar, metabolisk aktivitet ökar och media ändringar behöver vara mer frekventa. Låt inte mediet av orange.

3. inspelning neuronala nätverksaktivitet

  1. På dagen för förvärvet, utbyta odlingssubstratet med färska neurobasal medium och returnera MEAs till CO2 inkubatorn i minst 2 h innan inspelning. Starta inspelningsprogrammet och Ställ in temperaturen på MEA till 37 ° C genom att klicka på ikonen temperatur (kompletterande diagram 3.1a-b).
    Obs: Inspelning kan börja så tidigt som dag 3 av plätering och kan fortsätta så länge kulturerna lever.
  2. Ställ in parametrarna för förvärvet genom att högerklicka på ikonen ”Musa” (under strömmar i panelen vänster fönster) och välj ”Lägg till behandling” och ”Spike Detector” och klicka på OK i popup-fönstret. ”Spike detektor (6 x STD)” visas under filnamnet (kompletterande figur 3.2a-b).
  3. Nästa rätt klick på Spike detektorn, välja ”Lägg till bearbetning” och ”Burst Detector” och klicka på OK i popup-fönstret. ”Burst detektor” (ISI) kommer att visas under ikonen Muse (kompletterande figur 3.3-b).
  4. Nästa rätt klick på Burst detektor, välja ”Lägg till bearbetning” och ”neurala statistik Compiler”. Se till att filhuvudet, aggregerade väl statistik och Synchrony är markerade i pop up fönster. Klicka på OK. ”Statistik Compiler” kommer att visas nedan (kompletterande figur 3.4a-b).
    Obs: Detta anger adaptiv tröskel passage (6 x STD filter), mellan spike intervallet 100 ms med ett minsta antal spikar på 5, medelvärdet bränning kurs upptäckt 10 s med en synchrony parameter på 20 ms, och den minsta spik på 0.083333 spikar per minut.
  5. Ställa in schemalagda inspelningen för inspelningstiden för 5 minuter (300.000 ms) genom att klicka på klockikonen i botten. Detta uppnås genom att ändra informationen i avsnittet inställning att spela in 5.1-minuterstrafik och registrera i 5 minuter. Detta kommer att inledas omedelbart och kommer att köras en gång (kompletterande diagram 3.5).
  6. Se till att temperaturen i MEA har nått 37 ° C innan du flyttar MEA. Ta bort MEA ur ruvmaskinen, placera den på inspelningsenheten och låsa ner MEA. Starta inspelningen nätverksaktivitet genom att klicka på startposten i avsnittet schemalagd inspelning eller inspelningssymbolen i fönstret ”fil Play”. En inspelningslängd på 5 minuter (300.000 ms) är vanligtvis tillräckligt, men längre inspelningar av upp till 10 minuter kan erhållas.
  7. Efter inspelningen tillbaka MEA till inkubatorn.
    Obs: Måste vara försiktig att upprätthålla sterilitet och minimera tiden MEA är utanför inkubatorn.

4. dataanalys

  1. Analys av rådata kan göras offline använder inspelningsprogrammet. Klicka på den fil rycka ned menyn och öppna inspelning. Välj filen rådata ska analyseras. Repris de råa inspelningarna för att fånga de tillsatta parametrarna som krävs.
  2. Genomsnittligt antal av spikar, Spike detektor med modulen och för att erhålla Synchrony Index, använda modulen Neural statistik kompilator.
  3. Ladda Spike detektor, Burst detektor och statistik Compiler moduler som innan (avsnitt 3).
  4. Från de nedrullningsbara menyerna inom detektorns Spike, brast detektor och statistik Compiler modulen windows, Välj Spike lista, brast nätverkslistan och avancerad statistik, respektive.
  5. Klicka på inspelningsknappen för att starta inspelningen datafilen som kommer att skapa en CSV-fil i mappen riktad. Parametrarna spike - det totala antalet spikar och den sömnapparater Index - kommer att registreras i CSV-filen.
    Obs: realtid analys medan du spelar in rådata rekommenderas inte eftersom detta kunde förbrukar processortid och dataresurser.

Representative Results

Vi undersökte effekten av BPA den sömnapparater utveckling i chick embryo neuronala kulturer. Synkronisering av tillsatta aktivitet är en indikator på den normala utvecklingen av neuronala nätverk in vitro. När två spikar uppstår inom 5 ms av varandra, betraktas de synkrona. In vitro neuronala kulturer inledningsvis Visa slumpmässiga tillsatta aktivitet — spikar uppstår slumpmässigt och intervallen mellan spike Visa en normalfördelning. Som kulturerna mogna, tillsatta aktiviteten blir mer synkroniseras och Inter spike intervallen är konstant. Synkron tillsatta aktivitet av en kultur var quantitated av cross-korrelation analys av spike gånger använda inspelning programvara12 för att härleda en Synchrony Index (SI). Vi hittade att BPA exponering påverkar nätverket aktivitet utveckling genom att minska tillsatta aktivitet och den sömnapparater indexet (figur 2en och 2b). Sammanfattningsvis har vi visat att de skadliga effekterna av BPA exponering på ett embryo effekter dess utveckling, inklusive nervcellernas funktion som kan bedömas genom synchrony utveckling i chick nervceller i kultur.

Figure 1
Figur 1: Schematisk av protokollet som skildrar hur du från dissektion av chick framhjärnan dissociation, plätering och inspelning av nätverksaktivitet. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2: (A) det genomsnittliga antalet spikar är betydligt lägre i BPA behandlas E7 chick framhjärnan kulturer jämfört med kontroll kulturer. Genomsnittligt antal spikar extraherades använder inspelningsprogrammet. Medel (kontroll, 14,890 ± 949.0, N = 15 och BPA, 5,624 ± 465,9, N = 22) var signifikant (oparat t-test, p < 0,0001). (B) den genomsnittliga synchrony indexet (SI) är betydligt lägre i BPA behandlas E7 chick framhjärnan kulturer jämfört med kontroll kulturer. SI extraherades använder modulen Neural statistik kompilator inom inspelningsprogrammet. De SI-medel (kontroll, 0.5159 ± 0.06547 N = 15 och BPA, 0.1140 ± 0.01840 N = 22) var signifikant (oparat t-test, p < 0,0001). Felstaplar visar standardavvikelsen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Discussion

Faser av snabb tillväxt och utveckling såsom embryogenes är särskilt känsliga för de skadliga effekterna av olika hormonstörande ämnen inklusive BPA. Vi tillhandahåller detaljerade protokoll för att studera effekterna av BPA exponering i en in vitro- ryggradsdjur neuronala nätverksmodell. Använder det här protokollet, etablerat vi att BPA sänker andelen spike samt synchrony index i de framkallande neuronala nätverk (figur 2a-b).

Vår metod var att studera BPA exponering under tidig embryogenes och kan enkelt anpassas för att studera effekterna av andra hormonstörande ämnen. Embryonala neuronala kulturer från ungen är relativt lätt att fastställa jämfört andra ryggradsdjur modeller, inklusive råtta eller mus. Dessutom finns det inget krav på ett separat djur rum — en enkel inkubator på en arbetsbänk är tillräckligt att utföra dessa analyser. Vi beskriver användningen av ett multi elektrod system (MEA) för att bedöma effekten av EDC, BPA, på nätverksaktivitet. De protokoll som beskrivs här kan tillämpas på andra system. En viktig aspekt av detta protokoll är upprätthållande av sterilitet. Detta inkluderar dissekering av embryot under sterila förhållanden — sterilisera instrument med 70% etanol och användning av sterila Hanks balanserad salter lösning är tillräcklig. När data samlas in under en period av veckor, är det viktigt att upprätthålla steril hantering av de multilaterala miljöavtal. De neuronala kulturer när etablerat kan vara odlade långsiktiga - upp till tre månader — och således är användbara för att studera långsiktiga exponering för hormonstörande ämnen och andra föreningar på neuronala nätverk. En annan viktig aspekt av detta protokoll är tiden från dissektion till bordläggningen. Den optimala tiden är 30 min, inklusive inkubering av vävnaden med trypsin. Ju längre den tid det tar, desto sämre överlevnad av cellerna.

Här beskriver vi ett grundläggande protokoll som kan tillämpas för bedömningen av någon kemikalie eller läkemedel som påverkar beteende och neurala funktion. Här har vi använt en cell densiteten av 2.200 celler per mm2. men detta kan ändras och andra cell tätheter kan användas. I allmänhet har vi funnit att ökar cell densiteten ökar nätverksaktivitet - fler spikar på kortare tid. Metoden beskrivs, även om det är mycket användbart i bedömningen av verkningarna av kemikalier på nätverksaktivitet har begränsningar. En av de största begränsningarna för metoden är att dessa in vitro-kulturer är tvådimensionell inte kanske återspeglar den tredimensionella arkitekturen av vertebrate hjärnan. Detta kan lösas med hjälp av segment inspelningar. Ett annat alternativ är att tillämpa behandlingarna på det växande chick embryot av innebär i ett litet fönster skära på den breda änden av ägget15, dissekerar hjärnan i slutet av behandlingsregim, göra tjock sektioner på en vibratome och placera på MEA för inspelning nätverksaktivitet.

Våra protokoll är betydande eftersom det möjliggör granskning av effekten av hormonstörande ämnen på utvecklingen av nätverksaktivitet och erbjuder utforskandet av mekanistiska grund för effekterna av dessa kemikalier.

Disclosures

Författarna förklarar att de har inga konkurrerande intressen.

Acknowledgments

Denna studie stöds av NSF (HBCU-UP forskning inledande Award, HRD 1401426 och EPSCoR EPS-0814251) och NIH (COBRE 1P20GM103653-01A1). K.S. stöds av ett stipendium från den Delaware INBRE-III 6404.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
#5 foreceps Fine Science Tools 11251-10
Axion Muse MEA Axion Biosystems M64-GL1-30Pt200 Will be called MEA system in manuscript
Axis Software Axion Biosystems Will be called recording software in the manuscript
BPA Sigma-Aldrich 239658-250g
curved forceps Fine Science Tools 11272-50
EtOH Sigma-Aldrich 64-17-5
Fertilized chicken eggs from any local farm or Spafas
HBSS Fisher 14170112
Hemacytometer Fisher  02-671-6
Matrigel Growth Factor Reduced, Phenol Red-Free BD Biosciences 356231 Will be called Extra Cellular Matrix (ECM) in the manuscript
Neurobasal medium BrainBits Nb4-500
Neuroexplorer statistical software Nex Technologies Neuroexplorer version 5
Pasteur pipettes Fisher  13-678-20A
spring scissors Fine Science Tools 15514-12
Sylgard bottom dissection dishes Living Systems Instrumentaion DD-90-S-BLK-3PK
Trypan Blue dye Fisher 15-250-061
Trypsin-EDTA Fisher 15400054

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Anahara, R., Yoshida, M., Toyama, Y., Maekawa, M., Masayuki, K., Ishino, F., Toshimori, K., et al. Estrogen agonists, 17 beta-estradiol, bisphenol A, and diethylstilbestrol, decrease cortactin expression in the mouse testis. Arch. of Histol. Cytol. 69, (2), 101-107 (2006).
  2. Dodds, C. Synthetic oestrogens. Br. Med. Bull. 11, (2), 131-134 (1955).
  3. Grignard, E., Lapenna, S., Bremer, S. Weak estrogenic transcriptional activities of Bisphenol A and Bisphenol S. Toxicology In Vitro. 26, (5), 727-731 (2012).
  4. Herbst, A. L., Ulfelder, H., Poskanzer, D. C. Adenocarcinoma of the vagina: association of maternal stilbestrol therapy with tumor appearance in young women. New Eng. J. Med. 284, 878-881 (1971).
  5. Jenkins, S., Raghuraman, N., Eltoum, I., Carpenter, M., Russo, J., Lamartiniere, C. A. Oral exposure to bisphenol A increases dimethylbenzanthracene-induced mammary cancer in rats. Environ Health Persp. 117, (6), 910-915 (2009).
  6. Okada, A., Kai, O. Effects of estradiol-17beta and bisphenol A administered chronically to mice throughout pregnancy and lactation on the male pups' reproductive system. Asian J Androl. 10, (2), 271-276 (2008).
  7. Palanza, P., Gioiosa, L., Vom Saal, F. S., Parmigiani, S. Effects of developmental exposure to bisphenol A on brain and behavior in mice. Environ. Res. 108, (2), 150-157 (2008).
  8. Mimoto, A., Fujii, M., Usami, M., Shimamura, M., Hirabayashi, N., Kaneko, T., et al. Identification of an estrogenic hormone receptor in Caenorhabditis elegans. Biochem. Biophys. Res. Commun. 364, (4), 883-888 (2007).
  9. Allard, P., Colaiacovo, M. Bisphenol A impairs the double-strand break repair machinery in the germLine and causes chromosome abnormalities. Proceedings Natl. Acad. Sci. 107, (47), 20405-20410 (2010).
  10. Mersha, M. D., Patel, B. M., Patel, D., Richardson, B. N., Dhillon, H. S. Effects of BPA and BPS exposure limited to early embryogenesis persist to impair non-associative learning in adults. Behav. Brain Funct. : BBF. 11, 27 (2015).
  11. Chen, Y., Shu, L., Qiu, Z., Lee, D. Y., Settle, S. J., et al. Exposure to the BPA-Substitute Bisphenol S Causes Unique Alterations of GermLine Function. PLOS Genetics. 12, (7), 1006223 (2016).
  12. Shein Idelson, M., Ben-Jacob, E., Hanein, Y. Innate Synchronous Oscillations in Freely-Organized Small Neuronal Circuits. PLoS ONE. 5, (12), 14443 (2010).
  13. Baltz, T., Herzog, A., Voigt, T. Slow Oscillating Population Activity in Developing Cortical Networks: Models and Experimental Results. J. Neurophysiol. 106, (3), 1500-1514 (2011).
  14. Pettmann, B., Louis, J. C., Sensenbrenner, M. Morphological and Biochemical Maturation of Neurones Cultured in the Absence of Glial Cells. Nature. 281, (5730), 378-380 (1979).
  15. Zhang, H., Wu, C. Y., Wang, W., Harrington, M. A. Interneuronal Synapses Formed by Motor Neurons Appear to Be Glutamatergic. NeuroReport. 22, (16), 809-813 (2011).
  16. Paiva, A. R. C., Park, I., Príncipe, J. C. A Comparison of Binless Spike Train Measures. Neural Comp. and Appl. 19, (3), 405-419 (2010).
  17. Cretu, A., Fotos, J. S., Little, B. W., Galileo, D. S. Human and Rat Glioma Growth, Invasion, and Vascularization in a Novel Chick Embryo Brain Tumor Model. Clin Exp Metastasis. 22, 225-236 (2005).
  18. Chiappalone, M., et al. Dissociated cortical networks show spontaneously correlated activity patterns during in vitro development. Brain Res. 93, (2006).
  19. Li, X., et al. Long-term recording on multi-electrode array reveals degraded inhibitory connection in neuronal network development. Biosens Bioelectron. 22, (7), 1538-1543 (2007).
Bedömning av effekterna av hormonstörande föreningar på utvecklingen av Vertebrate neurala nätverk-funktion som använder multi elektrod matriser
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Sanchez, K. R., Mersha, M. D., Dhillon, H. S., Temburni, M. K. Assessment of the Effects of Endocrine Disrupting Compounds on the Development of Vertebrate Neural Network Function Using Multi-electrode Arrays. J. Vis. Exp. (134), e56300, doi:10.3791/56300 (2018).More

Sanchez, K. R., Mersha, M. D., Dhillon, H. S., Temburni, M. K. Assessment of the Effects of Endocrine Disrupting Compounds on the Development of Vertebrate Neural Network Function Using Multi-electrode Arrays. J. Vis. Exp. (134), e56300, doi:10.3791/56300 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter