Summary
بروتوكول لتطبيق العلاج البلازما جرعة منخفضة الضغط الجوي على إصابات SH-SY5Y الناجمة عن الحرمان الجلوكوز محصن.
Abstract
جيت البلازما الضغط الجوي (أبي) جذبت انتباه العديد من الباحثين من تخصصات متعددة في السنوات الأخيرة نظراً لانبعاثاته وتشمل أنواع متعددة من الأنواع النيتروجين التفاعلي (RNS) والأكسجين التفاعلية (روس). وقد أظهرت الدراسة السابقة تأثير cytoprotective أبي ضد الإصابات الناجمة عن الإجهاد التأكسدي. الهدف من هذه الدراسة تقديم بروتوكول علاج مفصلة في المختبر فيما يتعلق بالتطبيقات محصن من الهليوم عبيس عن الضرر الناجم عن الحرمان الجلوكوز في الخلايا SH-SY5Y. وأبقى على خط الخلية البشرية المستمدة من نيوروبلاستوما SH-SY5Y في المتوسط RPMI 1640 تستكمل مع مصل العجل الجنين 15%. ثم تم تغيير المتوسطة الثقافة إلى RPMI 1640 دون السكر قبل العلاج أبي. بعد ح 1 احتضان في حاضنة خلية، تقرر بقاء الخلية باستخدام خلية العد طقم 8. وأظهرت النتائج أنه، مقارنة بمجموعة الحرمان الجلوكوز، الخلايا تعامل مع أبي عرضت بقاء الخلية زيادة كبيرة بطريقة تعتمد على الجرعة، مع 8 s/جيدا ولاحظ كجرعة أمثل. وفي الوقت نفسه، كان تدفق الهليوم أي تأثير على الأضرار الناجمة عن الحرمان خلية الجلوكوز. نتائجنا أشارت إلى أنه يمكن استخدام أبي كأسلوب علاج للأمراض في الجهاز العصبي المركزي تتصل بالحرمان الجلوكوز محتملة. يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول كتطبيق cytoprotective للخلايا الأخرى ذوي العاهات المختلفة، لكن ينبغي تعديل خلية ثقافة وظروف العلاج أبي، وجرعة العلاج يجب أن تكون منخفضة نسبيا.
Introduction
الدماغ الكبار حصرا تقريبا يستخدم الجلوكوز كركيزة استقلاب الطاقة تحت ظروف فيزيولوجية طبيعية. دماغ الإنسان يشكل 2% فقط من وزن الجسم ولكنه يستهلك حوالي 25% من مجموع الجلوكوز داخل الجسم1. أنه تم توثيقه جيدا أن خلل استقلاب الجلوكوز أحد التغيرات الباثولوجية الرئيسية أثناء السكتة الدماغية، وأمراض الأعصاب المختلفة، بما في ذلك مرض الزهايمر (AD) ومرض هنتنغتون (HD)، ومرض باركنسون (PD) 2،3. نقص الجلوكوز والإقبال على ضعف تحمل الجلوكوز أو الفسفرة يمكن أن تؤثر تأثيراً مباشرا على إنتاج ATP وكذلك الحث على موت الخلايا العصبية، التي قد تزيد من خطر خلل الخلايا العصبية، مما يوحي بأن الحفاظ على بقاء الخلية أو تأخير الإصابة الخلية بعد الجلوكوز الحرمان قد يكون نهجاً معقولاً لعلاج هذه الأمراض. التحقيق في آثار محصن عن طريق التحوير الجلوكوز، مع التركيز على العوامل المضادة للالتهابات، أيون قناة المغيرون، الزبالين الراديكالية الحرة، وعوامل نيوروتروفيك، كانت إلخ للفائدة. ومع ذلك، لم ترجمة لهذه النهج محصن من مقاعد البدلاء للممارسة السريرية ناجحة4.
الضغط الجوي طائرات البلازما (عبيس) هي نوع جديد من تكنولوجيا تصريف الغاز الغلاف الجوي درجات الحرارة المنخفضة التي جذبت انتباه العديد من الباحثين من تخصصات متعددة في السنوات الأخيرة. أبجس وقد استخدمت على مدى عقود في مختلف التطبيقات الطبية مثل علاج سرطان الخلية، المنظمة البكتيرية، تخثر الدم، والتئام الجروح، وطب الفم، إلخ5،6، بسبب انبعاثاته أنواع متعددة للنيتروجين التفاعلي الأنواع (RNS) والأكسجين التفاعلية (روس) (الشكل 1)7. تطبيقات الطب الحيوي البلازما السابقة ركزت أساسا على الإجهاد التأكسدي و/أو نيتراتيفي في البكتيريا والخلايا والأنسجة8. ومع ذلك، يمكن أبي أيضا "سيف ذو حدين" أن RNS وروس جزيئات الإشارات داخل الخلايا الهامة المتصلة بالعديد من العمليات الفسيولوجية والفيزيولوجية المرضية9. أكسيد النيتروز (لا) يتحكم في مجموعة واسعة من العمليات البيولوجية وتقوم بدور مزدوج في الجسم البشري، ولا سيما في الجهاز العصبي المركزي (CNS). وأظهرت انخفاض مستويات لا أنشطتها محصن على حد سواء في المختبر و في فيفو عبر مسارات الإشارات متعددة10. دراستنا السابقة ذكرت أولاً أن الهليوم أبي الناجمة عن أي إنتاج متورط في أثر أبي محصن ضد الإصابات الناجمة عن الإجهاد التأكسدي11. ومع ذلك، لم تبلغ آثار عبيس على إصابات أخرى. ولذلك، الهدف من هذه الدراسة تقديم بروتوكولا علاج في المختبر فيما يتعلق بالتطبيقات محصن من الهليوم أبي عن الضرر الناجم عن الحرمان الجلوكوز في الخلايا SH-SY5Y. يختلف عن الدراسات السابقة، لدينا بروتوكول تستخدم المعالجة بالبلازما الجرعات المنخفضة لتطبيقات محصن دون العواقب الإصابات المفرطة المستحثة بالبلازما، مشيراً إلى أنه يمكن استخدام العلاج أبي يحتمل أن تكون كرواية "لا المخدرات المانحين "للبحث في المستقبل، وحتى بالنسبة للترجمة السريرية. كما اقترح هذا البروتوكول لاستخدامها كتطبيق cytoprotective لأنواع الخلايا الأخرى ذوي العاهات المختلفة، ولكن ظروف العلاج أبج يجب أن تكون إعادة تعديلها وجرعة العلاج يجب أن تكون منخفضة نسبيا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1-إعداد الجهاز أبج
تنبيه: الرجاء مراجعة صحائف بيانات السلامة المادية ذات الصلة (MSDS) قبل الاستخدام. الرجاء استخدام ممارسات السلامة المناسبة عند إجراء جميع التجارب، بما في ذلك استخدام غطاء الدخان ومعدات الحماية الشخصية (سلامة النظارات، وقفازات واقية، ومعطف مختبر، إلخ). يتطلب البروتوكول قياسي خلية معالجة تقنيات (تعقيم، استرداد خلية، خلية باساجينج، تجميد الخلايا، وتلطيخ الخلايا، إلخ).
- اختيار أنبوب كوارتز مع قطرها داخلي 1 مم وسلس قطر خارجي من 3 مم. في المقاطع العرضية في كلا طرفي إحباط الصقل باستخدام-
- استخدام إبرة الفولاذ المقاوم للصدأ مطلية يبلغ قطرها 1.0 مم كعاليه الجهد الكهربائي. طحن في تلميح إلى نصف قطر انحناء 0.05 مم. فوهة
- التفاف رقائق الألومنيوم (2 مم في العرض) حول أنبوب الكوارتز في 1 سم من أنبوبة الكوارتز. إصلاح نقطة إبرة الفولاذ المقاوم للصدأ في 1 سم من الطرف الآخر من رقائق الألومنيوم. استخدم الطوق رقائق الألومنيوم كمسري الجهد المنخفض-
2. الحصول على طائرات
- لتوفير إشارة التيار متردد، وتوصيل مكبر للصوت السلطة الفولت العالي مولد الإشارات الدالة التي تعمل كإمدادات طاقة. لتسجيل في الطول الموجي للجهد المطبق على مسرى الجهد العالي، تواصل واحدة من نهاية التحقيق الفولت العالي للذبذبات الرقمية وتوصيل الطرف الآخر للإمداد بالطاقة. لحماية الدارة، استخدم ك 2 Ω المقاوم كمقاوم واقية. الاتصال الدائرة كما هو مبين في الشكل 2-
تنبيه: لا تلمس خطوط الجهد العالي- - باستمرار تمرير الهليوم (حجم الكسر، 99.999%) عبر أنبوب الكوارتز والتحكم في معدل تدفق الغاز في مستقرة قياسية 1.4 لتر في الدقيقة (حركة تحرير السودان)-
ملاحظة: نحن لا نستخدم عامل تصفية قبل علاج الثقافات الخلية. حجم جزء صغير من الهليوم التي استخدمت في التجربة 99.999%، ومعظم الكائنات الحية الدقيقة لا يمكن أن يعيش في ظل هذه الظروف- - تشغيل الطاقة الذبذبات ومولد الإشارات، ومضخم قدرة عالية الجهد. قم بتدوير مقبض ضبط التردد إلى 5 كيلو هرتز. تدريجيا بزيادة الجهد إلى قيمة الذروة إلى الذروة من 6 كيلو فولت-
ملاحظة: jet طويل بما يكفي (3 سم تقريبا) عندما تكون قيمة الذروة إلى الذروة من الجهد المطبق في الإبرة حوالي 6 كيلو فولت.
3. إعداد "الخلايا" SH-SY5Y
المتوسطة- خط الخلية البشرية المستمدة من نيوروبلاستوما تنمو SH-SY5Y في 25 سم 2 قارورة في RPMI 1640 تستكمل مع 15% مصل العجل الجنين (FBS). الحفاظ على الخلايا في حاضنة هوميديفيد التي تحتوي على 5% أول أكسيد الكربون الجوي 2 و 95% في 37 درجة مئوية.
- عندما الخلايا التوصل إلى التقاء 85%، بعناية نضح وسائل الإعلام الثقافة وإضافة 1 مل 0.25% التربسين + 0.1% أدتا إلى الخلايا.
- بعد 15 ثانية حضانة في درجة حرارة الغرفة، بعناية نضح التربسين وإضافة 2 مل 1640 RPMI التي تحتوي على 15% FBS لتحييد.
- بلطف "الماصة؛" صعودا وهبوطاً، غسل أسفل البئر، حتى أحادي الطبقة SH-SY5Y يتم فصل تماما.
- عد الخلايا عن طريق هيموسيتوميتير وضبط تركيز الخلية إلى 2 × 10 5 خلايا/مل بإضافة RPMI 1640 متوسطة + 15% FBS، ومن ثم نقل 100 ميليلتر من تعليق خلية لكل بئر من صفيحة 96-جيدا-
- تسمح للخلايا لنعلق على 12 ح في حاضنة خلية قبل العلاج أبي-
4. معاملة SH-SY5Y أبي
- ضبط المسافة بين الفوهة الكوارتز الأنبوب ومنهاج العمل حيث سيتم وضع لوحة 96-جيدا إلى 3 سم. التأكد من أن الحزم يمكن لمس سطح المتوسطة الثقافة.
ملاحظة: لا تقاس المسافة من الجزء السفلي من اللوحة. أولاً ضبطه إلى 3 سم بين فوهة أنبوب الكوارتز ومنصة تستخدم لوضع لوحة 96-جيدا- - قبل العلاج أبي، وتغيير المتوسطة الثقافة في كل بئر ما عدا الآبار التحكم إلى RPMI 1640 دون المتوسطة الجلوكوز.
- وضع اللوحة تحت فوهة أبي والتأكد من أن الطائرات يمكن إطلاق النار عمودياً في كل بئر- S
- علاج الخلايا في آبار منفصلة مع أبي ل 0, 1 ثانية، 2 ق، 4 ق، 8 s، و 12 س.
ملاحظة: يتم إنشاء أبي بالإشعاعات المؤينة الهليوم ( الشكل 1). تعامل الخلايا أصيب بالحرمان الجلوكوز بواسطة 4 s وتدفق الهليوم s 8 للقضاء على آثار الهليوم على الخلايا. يجب أن يتم تنفيذ جميع العلاجات في ثلاث نسخ.
5. خلية "تحليل الجدوى"
ملاحظة: لا تقم بتغيير وسيلة في هذه الخطوة.
- بعد العلاج أبي، واحتضان الخلايا ح 1 في حاضنة خلية.
- إضافة 10 ميليلتر لخلية العد كيت-8 (CCK-8) إلى حل لكل بئر.
- احتضان الخلايا في 37 درجة مئوية ل 4 h.
ملاحظة: خط الخلية SH-SY5Y حساس ل ظروف الحرمان الجلوكوز 12. بقاء الخلية ينخفض إلى ما يقرب من 50 ٪ بعد ح 1 الجلوكوز الحرمان، الذي هو شرط بقاء الخلية المثلى للدراسات الدوائية. CCK-8 لا سيتوتوكسيسيتي للخلايا والخلايا هي المحتضنة مع كاشف CCK-8 لآخر ح 4 في ظروف الحرمان الجلوكوز بعد العلاج أبي للتحقق من سلامة الخلية. بعد ح 8 الجلوكوز الحرمان والمعاملة أبي، إلى حد كبير خفض تأثير وقائي من أبي لمدة الطويلة من الحرمان الجلوكوز أدى إلى أضرار جسيمة للخلايا SH-SY5Y. لم يكن هناك دليل من الخلايا الحية بعد 24 ساعة الجلوكوز الحرمان 11- - قياس امتصاص 450 نانومتر مع قارئ ميكروسكوبية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
يتم التعبير عن البيانات ك ± يعني SD على الأقل ثلاث تجارب مستقلة. تم تحليل نتائج المجموعة للتباين باستخدام ANOVA. أجريت جميع التحليلات باستخدام برمجيات التحليل الإحصائي المنشور وف < 0.05 كانت العتبة لدلالة إحصائية.
وتم قياس جدوى خلية بعد ح 4 من حضانة CCK-8. كما هو موضح في الشكل 3، الحرمان الجلوكوز تخفيض صلاحية الخلايا SH-SY5Y إلى 44.1 ± 2.6% مقارنة بمجموعة المراقبة (الخلايا المستزرعة عادة في المتوسط RPMI 1640 التي تحتوي على 15% FBS). علاج أبي زيادة كبيرة في بقاء الخلية بطريقة تعتمد على الجرعة الجرعة مثلى من 8 s/جيدا، والتوصل إلى بقاء الخلية على 62.27 ± 3، 1%. وقد تدفق الغاز أي تأثير على الأضرار الناجمة عن الحرمان خلية الجلوكوز (الجدول 1).
رقم 1: ردود فعل RNS نموذجية وروس في الانبعاثات أبي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: التخطيطي للإعداد التجريبية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: تأثير وقائي من أبي على الضرر الناجم عن الحرمان الجلوكوز خلايا SH-SY5Y- الخلايا تعامل مع أبي وتعرضوا للحرمان الجلوكوز ح 1، بعدها تقرر بقاء الخلية باستخدام مقايسة CCK-8. تمثل أشرطة الخطأ يعني ± التنمية المستدامة. * * * ف < 0.001 مقابل المراقبة؛ #P < 0.05 و ##P < 0.01 مقابل مجموعة الحرمان الجلوكوز (n = 3). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| المجموعات | بقاء الخلية (التحكم %) | |||
| عنصر التحكم | 100 ± 3.7% | |||
| الحرمان الجلوكوز | 44.1 ± 2.6% * * * | |||
| العلاج أبي + الحرمان الجلوكوز | 1 s | 49.3 ± 2.8% | ||
| 2 s | 53.0 ± 2.7% | |||
| 4 s | 60.4 ± 2.3%# | |||
| 8 s | 62.3 ± 3.1%# | |||
| 12 s | 51.3 ± 2.7% | |||
| أنه تدفق + الحرمان الجلوكوز | 4 s | 45.4 ± 2.4% | ||
| 8 s | 44.1 ± 3.1% | |||
الجدول 1: البيانات بقاء نسبة من ش SY5Y الخلايا بعد الحرمان الجلوكوز مع أو بدون علاج أبي- ف < 0.001 مقابل المراقبة؛ #P < 0.05 و ##P < 0.01 مقابل مجموعة الحرمان الجلوكوز (n = 3).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ش-SY5Y الخلايا خط خلية المستمدة من نيوروبلاستوما بشرية وتستخدم على نطاق واسع كنموذج خلية مناسبة للدراسات في المختبر بشأن السمية العصبية أو نيوروبروتيكشن12. وكان خط الخلية SH-SY5Y حساسة لظروف الحرمان الجلوكوز. بقاء الخلية انخفضت إلى ما يقرب من 50 ٪ بعد ح 1 الجلوكوز الحرمان، الذي هو شرط بقاء الخلية المثلى للدراسات الدوائية. وعلاوة على ذلك، كاشف CCK-8 وقد لا سيتوتوكسيسيتي للخلايا والخلايا كانت المحتضنة مع كاشف CCK-8 لآخر ح 4 في ظروف الحرمان الجلوكوز بعد العلاج أبي للتحقق من سلامة الخلية. في الدراسة الحالية، ونحن نقدم بروتوكول علاج مفصلة في المختبر فيما يتعلق بالتطبيقات محصن من أبج على الضرر الناجم عن الحرمان الجلوكوز خلايا SH-SY5Y.
التعديلات واستكشاف الأخطاء وإصلاحها
يمكن أن تكون فترة حضانة CCK-8 أقصر إذا تغير اللون في كل جيد إلى حد كبير. ولكن إذا كان كثافة الخلية SH-SY5Y أقل من 1 × 104 خلايا كل بئر، الخلايا سيكون ميتا بعد الجلوكوز الحرمان والمعاملة أبي. من المستحسن أيضا للحد من معدل تدفق الغاز، مع ضمان أن شعاع البلازما يمكن لمس سطح المتوسطة الثقافة. أبي يمكن أن تستخدم أيضا كعامل cytoprotective لسائر خطوط الخلايا العصبية ذات الصلة (HT-22، 2A العصبية أو الخلايا العصبية الأولية حتى) ذوي العاهات المختلفة (نقص، والأكسدة، إلخ)، ولكن ينبغي أن تكون خلية ثقافة وظروف العلاج أبي عدلت، وجرعة العلاج يجب أن تكون منخفضة نسبيا. لقد حاولنا في تقليل المسافة في هذه المعلمة جيل أبي، ووجدنا أن الطائرة النفاثة البلازما يمكن أن تؤثر تأثيراً مباشرا على مرفق الخلايا SH-SY5Y الذي يمكن أن يسفر عن إصابات الخلية (بسهولة تم فصل الخلايا SH-SY5Y من دولته ملتصقة). ونحن نعتقد أن المسافة العلاج ينبغي أن تستند إلى خصائص الخلية والتسامح إلى معاملة البلازما النفاثة.
القيود المفروضة على هذه التقنية
البروتوكول الحالي تركز فقط على في المختبر محصن تأثير أبي على السكر إصابة الحرمان SH-SY5Y الخلايا. وقد أظهرت الأبحاث السابقة أن استنشاق البلازما يمكن تحسين وظائف القلب في نموذج13احتشاء عضلة القلب الفئران. لا يزال يلزم المزيد من العمل للتحقيق في طريقة العلاج في فيفو لحماية الدماغ.
أهمية فيما يتعلق بالأساليب القائمة
البحوث السابقة بشأن الطب بلازما تدفع المزيد من الاهتمام لقدرات المنظمة في البكتيريا والخلايا السرطانية والأنسجة بسبب الإجهاد التأكسدي و/أو نيتراتيفي الناجمة عن العلاج أبي14. استخدام بروتوكول لدينا العلاج البلازما جرعة منخفضة للتطبيقات محصن دون العواقب الإصابات المفرطة المستحثة بالبلازما، مما يشير إلى أن العلاج أبي يمكن أن تستخدم كرواية "أي دواء المانحين" يحتمل أن تكون للبحث في المستقبل، وحتى لترجمة السريرية.
الخطوات الحاسمة في إطار البروتوكول
أن الخطوة الأكثر أهمية في هذا البروتوكول هو للتأكد من أن جرعة العلاج أبي منخفضة نسبيا، منذ أكثر من العلاج مع أبي سوف تؤدي إلى تفاقم الإصابات الخلية والحث على موت الخلايا مباشرة. خطوة حاسمة أخرى للتحكم في مدة الحرمان الجلوكوز أو سوف تموت الخلايا وتأثير cytoprotective أبي سيخفض إلى حد كبير. الهيليوم النقي، بدلاً من الهليوم مختلطة مع كمية صغيرة من س2 أو الهواء، واستخدمت. عندما يتم استخدام الهليوم مختلطة مع كمية صغيرة من س2 أو الهواء، ستزيد كمية روس في البلازما. من الصعب جداً إجراء تشخيص عند حدوث تفاعلات كيميائية معقدة البلازما.
التطبيقات المستقبلية
كما أنها جديرة بالاهتمام ملاحظة أن تطبق المعاملة أبي بعد الاستقراء حرمان الجلوكوز في الخلايا SH-SY5Y، مما يشير إلى أنه يمكن استخدام أبي كأسلوب علاج للأمراض المرتبطة بالحرمان الجلوكوز في الجهاز العصبي المركزي، يحتمل أن تكون لا سيما السكتة الدماغية. ولذلك، من الضروري للدراسات المستقبلية تقييم ظروف العلاج أثر محصن أبي وحدها وفي تركيبة مع غيرهم من أعوان محصن في فترات مختلفة بعد الحرمان الجلوكوز على السواء.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وقد أعلنت لا تضارب في المصالح فيما يتعلق بهذه الورقة.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل صندوق الابتكار من معهد بكين للجراحة العصبية (2014-11)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 11475019 و 81271286) ومؤسسة العلوم الطبيعية بكين (رقم 7152027).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| SH-SY5Y cell line | China Center for Type Culture Collection | 3111C0001CCC000026 | |
| RPMI 1640 medium | Thermo Scientific | 21875091 | stored at 4 °C |
| RPMI 1640 medium no glucose | Thermo Scientific | 11879020 | stored at 4 °C |
| fetal calf serum | Thermo Scientific | 16000044 | stored at -20 °C |
| tripsin-EDTA solution | Solarbio | T1300 | stored at 4 °C |
| 96 wells plate | corning | 3599 | |
| Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | Dojindo Laboratories | CK04 | stored at 4 °C |
| microplate reader | Tecan | M200 Pro | for measuring the absorbance at 450 nm |
| High – voltage Power Amplifier | Trek | PD06087 | for amplifing the power |
| Function Signal Generator | MaZe Electronics Science&Technology | AT30120 | for providing the specific signal |
| High – Voltage Probe | Tektronix | P6015A | for detecting high voltage |
| Digital Oscilloscope | Tektronix | DPO4104B | for displaying the signal |
References
- Yang, S. H., et al. Alternative mitochondrial electron transfer for the treatment of neurodegenerative diseases and cancers: Methylene blue connects the dots. Prog. Neurobiol. , (2015).
- Bhat, A. H., et al. Oxidative stress, mitochondrial dysfunction and neurodegenerative diseases; a mechanistic insight. Biomed. Pharmacother. 74, 101-110 (2015).
- Bullon, P., Newman, H. N., Battino, M. Obesity, diabetes mellitus, atherosclerosis and chronic periodontitis: a shared pathology via oxidative stress and mitochondrial dysfunction? Periodontol. 2000. 64 (1), 139-153 (2014).
- Sutherland, B. A., et al. Neuroprotection for ischaemic stroke: translation from the bench to the bedside. International Journal of Stroke. 7 (5), 407-418 (2012).
- Yan, D., et al. Principles of using Cold Atmospheric Plasma Stimulated Media for Cancer Treatment. Scientific Reports. 5 (5), 18339 (2015).
- Lu, X., Laroussi, M., Puech, V. On atmospheric-pressure non-equilibrium plasma jets and plasma bullets. Plasma Sources Science & Technology. 21 (3), 034005 (2012).
- Lu, X., et al. Reactive species in non-equilibrium atmospheric-pressure plasmas: Generation, transport, and biological effects. Phys. Rep. 630, 1-84 (2016).
- Lu, X., Naidis, G. V., Laroussi, M., Ostrikov, K. Guided ionization waves: Theory and experiments. Phys. Rep. 540 (3), 123-166 (2014).
- Di, M. S., Reed, T. T., Venditti, P., Victor, V. M. Role of ROS and RNS Sources in Physiological and Pathological Conditions. Oxid. Med. Cell Longev. 2016 (22), 1245049 (2016).
- Contestabile, A., Ciani, E. Role of nitric oxide in the regulation of neuronal proliferation, survival and differentiation. Neurochemistry International. 45 (6), 903-914 (2004).
- Yan, X., et al. Protective effect of atmospheric pressure plasma on oxidative stress-induced neuronal injuries: an in vitro study. J. Phys. D: Appl. Phys. 50 (9), 095401 (2017).
- Xie, H. R., Hu, L. S., Li, G. Y. SH-SY5Y human neuroblastoma cell line: in vitro cell model of dopaminergic neurons in Parkinson's disease. Chin. Med. J. 123 (8), 1086-1092 (2010).
- Tsutsui, C., et al. Treatment of cardiac disease by inhalation of atmospheric pressure plasma. Japanese Journal of Applied Physics. 53 (6), 060309 (2014).
- Graves, D. B. Low temperature plasma biomedicine: A tutorial review. Physics of Plasmas. 21 (8), 104-117 (2014).
