Summary
Wir beschreiben die Blätterteig-Technik, durch die pharmakologische Reagenzien können während der gesamten Zelle Patch-Clamp-Aufnahme verabreicht werden, und verschiedene Aspekte der Funktionen, die für den Erfolg entscheidend sind.
Abstract
Pharmakologische Verwaltung wird häufig verwendet, wenn Sie ganze Zelle Patch-Clamp in Hirnschnitten Aufnahme durchführen. Eine der besten Methoden der Zulassungsantrag bei der elektrophysiologischen Aufnahme ist der Blätterteig-Technik, die verwendet werden kann, um die Wirkung der pharmakologischen Reagenzien auf neuronalen Aktivitäten im Gehirnscheiben zu studieren. Der größte Vorteil der Blätterteig-Anwendung ist, dass die Wirkstoffkonzentration rund um den Ort der Aufnahme schnell erhöht und verhindert so die Desensibilisierung von Membranrezeptoren. Erfolgreichen Einsatz von Blätterteig Anwendung beinhaltet besondere Aufmerksamkeit auf die folgenden Elemente: die Konzentration des Medikaments, die Parameter der Blätterteig Mikropipette, der Abstand zwischen der Spitze des einen Blätterteig Mikropipette und das Neuron aufgenommen und die Dauer und Druck der Zug fahren (Pfund pro Quadratzoll, Psi). Dieser Artikel beschreibt ein schrittweises Verfahren zur Erfassung der ganzen Zelle Ströme induziert durch Gamma - Aminobuttersäure (GABA) auf ein Neuron eine präfrontalen kortikalen Scheibe schnaufend. Insbesondere kann das gleiche Verfahren mit geringfügigen Änderungen, andere Hirnareale wie Hippocampus und das Striatum und verschiedene Präparate, wie z. B. Zellkulturen angewendet werden.
Introduction
Die Patch-Clamp-Technik, ein wichtiges Werkzeug für die Untersuchung von elektrischen Signale in Neuronen, wurde in den 1970er Jahren1,2entwickelt. Ein großer Vorteil dieser Technik ist, dass sie wissen wie bestimmte Behandlungen bietet (z. B. pharmakologische) neuronale Funktionen oder Kanäle in Echtzeit3verändern kann. Pharmakologische Bewertung der neuronalen Funktion während der gesamten-Zelle in einer Gehirn-Scheibe Aufzeichnung erfordert die Anwendung von Medikamenten, wie z. B. Agonisten oder Antagonisten von spezifischen Rezeptoren, die Neuronen aufgenommen wird. Diese Methode ermöglicht die Identifikation von neuronalen Veränderungen, die auftreten, nach der Anwendung eines bestimmten Medikaments, führt zu einem besseren Verständnis der physiologischen und pathologischen Eigenschaften der Neuronen-4. Obwohl pharmakologische Verwaltung über entweder Perfusion5 oder Blätterteig6durchgeführt werden kann, ist letzteres die überlegene Technik. Insbesondere: (i) Blätterteig Anwendung rasch erhöht Medikament Konzentration um das aufgezeichnete Neuron auf ein Niveau, so dass Desensibilisierung der Membranrezeptoren verhindert wird; (Ii) das Volumen der Droge aufgeblasen ist äußerst gering, so dass es kaum Auswirkungen auf die Bad-Lösung, die daher Nebenwirkungen der verabreichten Chemikalien auf Gehirnscheiben reduziert; (Iii) das Blätterteig-Protokoll kann eingestellt und gespeichert, so dass das Experiment sehr genau reproduzierbar; (iv) Blätterteig Anwendung steht für sparsamen Umgang mit Agonisten/Antagonisten, besonders wo solche Reagenzien sind teuer oder schwer zu erlangen.
Hier konzentrieren wir uns auf die ganze Zelle Ströme induziert durch schnaufend GABA in akut bereit Gehirnscheiben, ein Präparat, das hat den Vorteil, relativ gut erhaltene Hirnschaltkreisen Aufnahme. Wie führen wir Blätterteig-induzierte hemmenden Strömungen7 werden in diesem Artikel beschrieben werden. Mithilfe von Cäsium (Cs+)-interne Lösungen, und halten die Neuronen bei 0 mV, präsentieren wir GABA-Blätterteig hervorgerufen inhibitorischen postsynaptischen Ströme (eIPSCs) mit entsprechenden technischen Details. Mit einem Maus-Modell der Depression induziert durch Lipopolysaccharid (LPS) Injektion8, wir zeigen, dass die eIPSC ist Amplitude, hervorgerufen durch einen GABA-Zug in Scheiben von LPS injiziert Mäusen im Vergleich zu Kontrollen Fahrzeug deutlich reduziert. Unsere Absicht ist, dass dieser Artikel zeigen sollte, wie die Blätterteig-Technik ist überall anwendbar, Studien zur Bewertung der Wirkung von Chemikalien, Verbindungen oder Drogen auf neuronalen Aktivitäten im Gehirnscheiben.
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Protocol
Tierhaltung und alle Tierarten, die Experimente wurden nach Verfahren genehmigt von der Ethikkommission für Tierversuche an South China Normal University, nach den Richtlinien für Animal Care vom National Institute of Gesundheit.
1. Vorbereitung der Lösungen
- bereiten 500 mL standard künstliche Liquor cerebrospinalis (ACFS) mit den Komponenten in unseren veröffentlichten Werk 7 beschrieben, wie in Tabelle 1 aufgeführt.
- Verwendung sauberes Glas Becher mit entionisiertem Wasser, eine frische ACFS Lösung vorzubereiten. Spachteln mit entionisiertem Wasser reinigen und trocknen, bevor Sie mit NaCl, KCl, NaH hinzufügen 2 PO 4, Nahco3 3, MgSO 4, D-Glucose, und fügen Sie das CaCl 2 nach haben sprudelte die Lösung mit 95 % O 2 / 5 % CO 2 Mischung für ~ 20 min (wie in Tabelle 1) bis 500 mL entionisiertem Wasser. Rühren, bis Sie vollständig aufgelöst.
- Stellen Sie sicher der ACFS völlig ist klar, ohne jede Niederschlag. Dann stellen Sie den pH-Wert auf 7.2-7.4. Blase mit einem Gasgemisch bestehend aus 95 % O 2 und 5 % CO 2 für ~ 20 min.
- 250 mL Slice Cutting-Lösung mit den Chemikalien 7 in Tabelle 2 beschrieben vorbereiten.
- KCl, MgCl 2, NaH 2 PO 4, Nahco3 3, Choline·Cl, D-Glucose hinzufügen und fügen Sie das CaCl 2 zuletzt gemäß 1.1.1 bis 250 mL entionisiertem Wasser und auflösen wie in 1.1.1 und 1.1.2 beschrieben.
- Nach sprudeln mit 95 % O 2 / 5 % CO 2, stellen die Lösung in eine Tiefkühltruhe für 15-20 min, so dass die Cutting-Lösung wird eiskalt und teilweise gefrorenen.
Hinweis: Wir verwenden diese Cutting-Lösung bei der Scheiben von 1-2 Monate-alten Mäusen; die Formel für Mäuse, die älter als 2 Monate abweichen. - Bereiten LPS Lösung durch Auflösen in sterilen Endotoxin-freie isotonische Kochsalzlösung (0,9 % NaCl). LPS ist intraperitoneal verabreicht (0,5 mg/kg) und mit der Aufnahme 2 h später.
2. Vorbereitung des präfrontalen Cortex Slice
- Cutting-Lösung aus dem Gefrierschrank nehmen und homogenisieren um ein Matsch zu erhalten. Legen Sie die Lösung auf dem Eis und Blase ständig mit 95 % O 2 / 5 % CO 2.
- Mit großen, scharfen Schere, schnell eine Maus als beschriebenen 9 enthaupten und sofort legte den Kopf in ein Becherglas gefüllt mit eiskalten (0-4 ° C) Schneidlösung.
- Schneiden Sie die Spitze des Schädels entlang der Mittellinie in Richtung kaudalen Nasal mit einer feinen Schere und die seitlichen Schädel Teile zu entfernen. Entfernen Sie das Gehirn mit einem feinen Spachtel und Drop ins eiskalte Schneidlösung.
Hinweis: Schritte 2.2-2.3 erfolgen schnell (im Idealfall < 1 min). - Legen Sie das Gehirn auf den Deckel einer 9 cm Petrischale mit Eis gefüllt. Spülen Sie das Gehirn mit eiskalten Schneidlösung. Das Kleinhirn und der Riechkolben mit einer Rasierklinge abgeschnitten.
- Anwenden Cyanacrylat-Klebstoff auf die Probe Inhaber einer Vibratome. Legen Sie vorsichtig den Gehirn-Block auf den Tropfen Klebstoff, rostral Seite nach oben, und sofort eintauchen in eiskaltes Schneidlösung.
- Einstellen den Klingenhalter Vibratome in einem Winkel von 15° mit Bezug auf die horizontale Ebene und bereiten 350 µm koronalen Gehirnscheiben (Klinge Schwingungsfrequenz = 85 Hz, Geschwindigkeit = 0,1 mm/s).
- Mit einer Pipette, die Scheiben in die Erholung-Kammer voller ACFS, Transfer inkubieren 1 h (bei RT) mit konstanten sprudeln von 95 % O 2 / 5 % CO 2.
3. Ganze Zelle Patch Aufnahme
- machen Glas Borosilikat Mikropipetten für als Aufnahme Elektroden verwenden oder Blätterteig Mikropipetten nach den vorgegebenen Richtlinien der Puller-Betriebsanleitung. Für die Aufzeichnung von Elektroden, Tipp Widerstände sind im Bereich von 4-6 M Ω, während Blätterteig Mikropipetten Spitze Durchmesser im Bereich von 2 bis 5 µm haben.
- Na +-Kanal-Blocker (TTX, 1 µM), Block schnell Na + Kanal und damit Aktionspotentiale zu ACFS hinzufügen und Verwalten von konstantem Volumenstrom dieser Lösung von 2-3 mL/min in der Kammer Aufnahme durch peristaltische Pumpe in die Kammer und streben aus ihm heraus. Blase der ACFS mit 95 % O 2 / 5 % CO 2 ständig um die Lebensfähigkeit der Scheiben gewährleisten.
- Übertragen eine Gehirn-Scheibe in der Aufnahme-Kammer mit einer modifizierten Pasteurpipette deren feiner Spitze geschnitten wurde, um die Scheibe Größe passen. Decken Sie die Scheibe mit einem Platin Slice-Anker mit parallel Nylonfäden Abstand ≥ 2 mm auseinander, die Scheibe auf der Plattform zu halten.
- Füllen Sie die Aufnahme Mikropipette mit internen Lösung 7 (Tabelle 3), und füllen Sie die Blätterteig Mikropipetten mit GABA bei 10 µM, 50 µM und 100 µM (aufgelöst in ACFS) oder ACFS als Fahrzeugkontrolle.
- Gegen Verstopfung mit Schutt, üben Sie leichten positive Druck mit eine 1 mL Spritze vor die Aufnahme Elektrode in der ACFS eintauchen. Mit einem Mikromanipulator unter dem Mikroskop (4 X Objektiv), die Aufnahme Elektrode und Blätterteig Mikropipette so positionieren, dass die Spitzen in der Mitte des video-Bildes auf dem Monitor ( Abbildung 1 A) erscheinen.
- Stellen Sie den Mikroskop-Fokus (40 X Objektiv) schrittweise Senkung der Blätterteig Mikropipette und legen Sie es über das Neuron Aufnahmen in einem Winkel von 45°. Halten Sie den Abstand zwischen der Spitze des Blätterteig Mikropipette und das Neuron, aufgenommen zwischen 20-40 µm ( Abbildung 1 B). Nähern Sie langsam und vorsichtig das Neuron mit der Aufnahme-Elektrode und lassen Sie dann den positiven-Luftdruck. Eine schwache und kurze Absaugung durch den Schlauch angeschlossen, der Elektrodenhalter erstelle ich ein Giga-Ohm-Siegel bewerben.
- Pflegen die Spannung auf 0 mV. Nach Bildung der Giga-Ohm-Dichtung schnell kompensieren Sie und verlangsamen Sie Kapazität zu, manuell oder automatisch. Dann bewerben Sie sich eine kurze und starke Absaugung durch die Schläuche erwähnt, um in den gesamten Zelle Modus bekommen.
- Datensatz eIPSC in Voltage-Clamp-Modus. Die Blätterteig-Mikropipette mit einer Picospritzer durch einen Master 8 Schritt Generatorspannung gesteuert, einzeln oder paarweise GABA Puffs ( Abbildung 2) liefern niedrigen Gasdruck (Stickstoff, 4-6 Psi) zuweisen.
- Ändern die Blätterteig-Dauer um das beste eIPSC erzielen ( Abbildung 3) und Messen Sie die eIPSC in die LPS-induzierte Depression-Modell ( Abbildung 4).
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Representative Results
Die Blätterteig-Technik erlaubt Forschern, die Wirkung von Medikamenten auf bestimmte Rezeptoren auf der Oberfläche eines bestimmten Neurons zu studieren. In diesem Artikel konzentrieren wir uns auf Strömungen durch GABA-Rezeptoren vermittelt. Abbildung 1 zeigt die Blätterteig und Aufnahme Mikropipetten. Keine Auswirkungen auf die aufgezeichneten Neuronen des physischen Drucks zu beseitigen durch das Blätterteig ACFS generiert und Saccharose Puffs (Abb. 2A) dienen als Kontrollen. Die Reaktion induziert durch eine GABA-Blätterteig (schwarz) kann durch ein GABA-Rezeptor-Hemmer, z. B. Picrotoxin als gemeldeten10, blockiert werden, während durch ACFS auswaschen (blau), der Ausgangszustand wiederhergestellt werden kann, wie in Abbildung 2Bdargestellt. Insbesondere induziert eine ACFS weder eine Rauchwolke Saccharose eine Antwort darauf hindeutet, dass Reaktionen induziert durch GABA Puffs physiologische sind und sind durch GABA Rezeptoren auf der Oberfläche der aufgezeichneten Zelle vermittelt. Die Dosis und Blätterteig Wirkungs-Kurven sind in Abbildung 3dargestellt.
LPS hat gezeigt, dass neuronale Aktivitäten und das Verhalten der Tiere verändern, aber seine Wirkung auf GABA-Rezeptor-vermittelten Reaktionen war nicht bekannt. Wenn wir Ströme induziert durch GABA Puffs in Hirnschnitten von LPS injiziert und Fahrzeug-Kontroll-Mäusen vergleichen, beobachten wir deutlich reduzierte IPSC Amplituden durch LPS Behandlung (Abbildung 4).
Abbildung 1 . Schematische Darstellung der Blätterteig Mikropipette und Aufnahme-Elektrode.
(A) der Abstand zwischen den Blätterteig und Aufnahme Mikropipetten. (B) der Blätterteig Mikropipette (links) und der Aufnahme-Elektrode (rechts) auf der Oberfläche einer Gehirn-Scheibe. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2 . Picrotoxin Blockade des IPSC induziert durch GABA Blätterteig.
(A) schnaufend ACFS und Saccharose (50 µM) induziert keine Antwort. (B) schnaufend 50 µM GABA induziert ein IPSC (schwarz) (Blätterteig-Dauer = 200 ms, 4-6 Psi) in ACFS mit TTX (1 µM), CNQX (20 µM) und AP5 (50 µM), Aktionspotentiale und erregenden Strom zu blockieren von AMPA und NMDA-Rezeptoren vermittelt. Die GABA-induzierte IPSC wehrt Bad Anwendung ein GABA-Rezeptor-Hemmer, 100 µM Picrotoxin (rot). Die IPSC erholt sich nach dem Auswaschen des Picrotoxin. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3 . Dosis und Blätterteig Wirkungs-Kurven.
(A) Probe IPSCs induziert durch 10, 50 und 100 µM GABA (Blätterteig-Dauer = 50 ms, 4-6 Psi). (B) Blätterteig-Dauer Wirkungs-Kurven. Schwarz, n = 11; rot, n = 8; blau, n = 10; Polynom passen. Daten erscheinen als Mittel von mehreren Experimenten (8 ≤ n ≤11); Fehlerbalken zeigen SEM (C) sich wiederholende Ströme hervorgerufen durch GABA (50 µM) Puffs in Inter Blätterteig Abständen von 1, 2 oder 3 s (Blätterteig-Dauer = 100 ms, 4-6 Psi). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4 . eIPSC Amplitude sinkt bei LPS injiziert Mäusen im Vergleich zu Fahrzeug Kontrollen.
Schnaufend GABA induziert eine deutlich reduzierte IPSC-Amplitude in LPS injiziert vs. Kontrolle Neuronen (Kochsalzlösung, 19.74 ± 1,93 pA/pF; LPS, 14,10 ± 1,30 pA/pF; p = 0,02). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
| Substanz | g/mol | Konzentration (mM) | Gewicht (g/L) |
| NaCl | 58.443 | 119 | 6.9547 |
| KCl | 74.551 | 2.5 | 0.1864 |
| NaH2PO4 | 137.99 | 1 | 0.1380 |
| Nahco33 | 84.007 | 26.2 | 2.2010 |
| MgSO4 | 120.366 | 1.3 | 0.1565 |
| D-glucose | 198.17 | 11 | 2.1799 |
| CaCl2 | 110.98 | 2.5 | 0.2775 |
Tabelle 1. Aufnahme ACFS.
| Substanz | g/mol | Konzentration (mM) | Gewicht (g/L) |
| KCl | 74.551 | 2.5 | 0.1864 |
| MgCl2 | 95.211 | 7 | 0.6665 |
| NaH2PO4 | 137.99 | 1.25 | 0.1725 |
| Nahco33 | 84.007 | 25 | 2.1002 |
| Choline· CL | 139.63 | 115 | 16.0575 |
| D-glucose | 198.17 | 7 | 1.3872 |
| CaCl2 | 110.98 | 0,5 | 0.0555 |
Tabelle 2. Slice Cutting-Lösung.
| Substanz | g/mol | Konzentration (mM) | Gewicht (g/L) |
| CS-Gluconat | 328.052 | 100 | 32.8052 |
| CsCl | 168.36 | 5 | 0.8418 |
| HEPES | 238.301 | 10 | 2.3830 |
| MgCl2 | 95.211 | 2 | 0.1904 |
| CaCl2 | 110.98 | 1 | 0.1110 |
| BAPTA | 476.43 |
Tabelle 3. Interne Lösung für die gesamte Zelle Patch Aufnahmen.
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Discussion
Blätterteig-Anwendung ist weit verbreitet, postsynaptischen Rezeptor-Funktion3,4,7zu bewerten, sondern erfordert eine präzise Steuerung in jedem Experiment. Wir beschreiben hier ein Verfahrens unter Beteiligung ganz-Zell-Patch zu spannen, was beweist, dass GABA-Blätterteig IPSCs (z.B. eIPSCs) im präfrontalen kortikalen Gehirnscheiben induziert. Der Widerstand der Elektrode Aufnahme beträgt ca. 5 MΩ, während der Kopfkreis des Blätterteig Mikropipetten über 2 bis 5 µm. Blätterteig Druck ist zwischen 4-6 Psi: dieser Bereich ist kritisch, da ein höherer Druck neuronalen Schäden verursachen, während ein niedriger Druck kann dazu führen unzureichende Aktivierung von postsynaptischen GABA-Rezeptoren. Der horizontale Abstand von der Spitze des Blätterteig Mikropipette, das Neuron aufgezeichnet ist über 20-40 µm (Durchmesser von 1-2 Neuronen) und der Winkel zwischen der Blätterteig Mikropipette und Scheibe Oberfläche beträgt ca. 45°. Die Spitze der Blätterteig Mikropipette ist vertikal 20-40 µm oberhalb des Schnitts (z-Achse). Die Blätterteig-Dauer sollte im Bereich von 10-150 Ms. unter den obengenannten Bedingungen Puffs von 10-50 µM GABA induzieren eine angemessene neuronale Reaktion und die eIPSC Amplitude und kinetische Parameter erhalten sind reproduzierbar. Obwohl das Protokoll hier konzentriert sich auf Blätterteig Anwendung zu einem Slice-Patch beschrieben, ist es auch geeignet für Aufnahmen in neuronalen Kulturen, wie in unseren veröffentlichten Werk7dargestellt.
Wir zeigen auch hier eIPSCs gepaart Blätterteig Anwendung von GABA. Gepaart-Puls-Protokolle haben am meisten benutzt gewesen, auszuwertende präsynaptischen Eigenschaften7,11, aber mögliche postsynaptischen Auswirkungen, z. B. Änderungen der Neurotransmitter-Rezeptor-Rate und verbindliche Bindungsaffinität, die beeinflussen könnten gepaart-Puls-Verhältnisse werden nicht durch präsynaptischen gepaart-Puls-Stimulation bestimmt. In diesem Artikel beschriebene Protokoll bietet eine Möglichkeit zum postsynaptischen Veränderungen in Reaktion auf Reize gekoppelt und sogar Impulsfolge aufzuklären. Der Rückgang der eIPSC Amplitude im präfrontalen Cortex von LPS injizierten Mäusen legt nahe, dass veränderte Ebenen oder Aktivität von GABA-Rezeptoren LPS-induzierte Verhaltensänderungen zugrunde liegen könnte.
Obwohl als bei den meisten Drogen Lieferung Techniken, es schwierig zu wissen, die genaue GABA-Konzentration die Zielzelle zu erreichen ist, ist es noch möglich, um die Konzentration von GABA auf bestimmten Ebenen im Gewebe durch konsequent mit der Art der Mikropipetten verwendet, und mit solchen Parametern wie Blätterteig-Laufwerk Druck und Abstand. In unserem Fall ist das Volumen der Lösung aufgeblasen ca. 1,1 µL bei 100 ms Dauer. Schnaufend ermöglicht die quantitative Studien durchgeführten7,12.
Die Zubereitung von gesunden Hirnschnitten von akuten präfrontalen Kortex ist entscheidend für den Blätterteig Aufnahme Verfahren wir beschreiben und folgende Punkte bedacht werden sollten. Zuerst das Gehirn sezieren und präfrontalen Kortex schnell zu trennen (< 1 min) und dann die Gehirn-Block im eiskalten Schneidlösung für nicht mehr als 1 min halten. Als nächstes fest kleben die Gehirn-Block auf der Probenhalter der Vibratome, oder sonst die Gehirn-Block kann beim Schneiden schweben. Die Geschwindigkeit und die Häufigkeit der Vibratome sollte festgelegt werden, zu generieren, gesunde Scheiben. Anstrengungen zur Durchführung alle obigen Verfahren bei 0-4 ° C, neuronale Erregbarkeit zu minimieren.
Es ist erwähnenswert, dass die Cutting-Lösung, die wir in diesem Artikel beschreiben für 1-2 Monate verwendet werden soll-alten Mäusen. Für ältere Mäuse (d. h. > 3 Monate), die Schneidelösung als beschriebenen13ausgetauscht werden. Die Blätterteig-Technik gilt für eine Reihe von Patch-Clamp-Experimenten mit pharmakologischen Behandlungen und kann auch verwendet werden, um die Wirkung von Medikamenten auf die elektrische Aktivität der alle Neuronen zu testen.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Die Autoren möchten die folgenden Organisationen danken: National Natural Science Foundation of China (31171018, 31171355), der Wissenschaft und Technik Abteilung Guangdong (2013KJCX0054), der naturwissenschaftlichen Grundlage der Provinz Guangdong ( 2014A030313418, 2014A030313440), Guangzhou Wissenschaft und Technologie Bureau (201607010320).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glass Borosilicate micropipettes | Shutter Instruments | BF150-86-10 | 1.50 mm outer diameter; 0.86 mm inner diameter |
| Micropipette Puller | Shutter Instruments | MODEL P-97 | Flaming/Brow Micropipette Puller |
| Micromanipulators | Shutter Instruments | MP-285 | |
| Computer controlled Amplifier | Molecular Devices | Multiclamp 700B | |
| Digital Acquisition system | Molecular Devices | Digidata 1440A | |
| Imaging Camera | Nikon | 2115001 | Inspection equipment |
| Microscopy | Nikon | Eclipse FN1 | |
| Master 8 | A.M.P.I. | Master-8 Pulse stimulator | |
| Vibratome Slicer | Leica | VT 1000S | |
| Razor blade | Gillette | 74-S | FLYING EAGLE |
| Video monitor | Panasonic | WV-BM 1410 | |
| 502 Glue | Deli | 7146 | Cyanoacrylate Glue |
| Peristaltic pump | Shanghai JIA PENG Corporation | BT100-1F | |
| Video Camera | Olympus America Medical | OLY-150 | |
| Transfer Pipets | Biologix | 30-0138A1 |
References
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