Summary
אנו מתארים את הטכניקה פאף, שלפיו ריאגנטים תרופתי יכול להינתן במהלך ההקלטה תאים כל תיקון-קלאמפ, להאיר היבטים שונים של תכונות חיוניות להצלחתו.
Abstract
ניהול תרופתי הוא נפוץ בעת עריכת תיקון שלם-תא-הקלטה לפרוסות המוח קלאמפ. אחת השיטות הטובות ביותר של יישום סמים במהלך ההקלטה אלקטרופיזיולוגיות היא הטכניקה פאף, אשר יכול לשמש כדי לחקור את ההשפעה של ריאגנטים תרופתי על הפעילות העצבית במוח פרוסות. היתרון הגדול ביותר של יישום פאף הוא כי ריכוז התרופה סביב האתר הקלטה מגביר במהירות, ובכך למנוע הפחתת רגישות של קולטני ממברנה. שימוש מוצלח של יישום עלים כרוך תשומת-לב רבה הרכיבים הבאים: ריכוז התרופה, הפרמטרים של micropipette עלים, המרחק בין הקצה של micropipette עלים, נוירון מוקלט, וכן את משך הזמן ואת הלחץ נהיגה אצלם (פאונד לאינץ ' מרובע, psi). מאמר זה מתאר הליך שלב אחר שלב עבור הקלטה זרמים שלמים-תא המושרה על-ידי נשיפת גאמא אמינו בוטירית (GABA) אל נוירון פרוסת קליפת המוח הקדם חזיתית. ראוי לציין, ניתן להחיל את ההליך עם שינויים מזעריים באזורים אחרים במוח כגון ההיפוקמפוס סטריאטום את, תכשירים שונים, כגון תרביות תאים.
Introduction
הטכניקה תיקון-קלאמפ, כלי ראשי עבור חוקרים אותות חשמליים בנוירונים, פותחה בשנות ה-701,2. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שהיא מספקת ידע על טיפולים כמה ספציפית (למשל, תרופתי) רשאית לשנות פונקציות עצביים או ערוצים בזמן אמת3. תרופתי הערכה של תפקוד במהלך הקלטת בפרוסה במוח תאים כל דורש היישום של תרופות, כגון אגוניסטים או היריבים של רצפטורים ספציפיים, כדי הנוירונים מוקלטת. שיטה זו מאפשרת זיהוי שינויים עצביים להתרחש בעקבות בקשה של תרופה ספציפית, ובכך מוביל הבנה טובה יותר של מאפיינים פיזיולוגיים ופתולוגיים של נוירונים4. למרות ניהול תרופתי יכול להתבצע באמצעות גם זלוף5 או עלים6, האחרון הוא טכניקה מעולה. בפרט: (i) פחזנית יישומים במהירות מגביר סמים ריכוז סביב מוקלטת הנוירון לרמה כזאת הפחתת רגישות של קולטני ממברנה נמנעת; (ii) את עוצמת הקול של סמים נשענתי הוא נמוך ביותר, כך שקיימת השפעה מועטה על הפתרון אמבט, ולפיכך מפחית תופעות בלתי רצויות של הכימיקלים מנוהלת על פרוסות המוח; (iii) פרוטוקול עלים ניתן להגדיר ונשמר, ביצוע הניסוי ברמת דיוק גבוהה ביותר לשחזור; (iv) עלים יישום מייצג שימוש חסכוני אגוניסטים/antagonists, במיוחד כאלה ריאגנטים איפה יקר או קשה להשיג.
כאן, אנו נתמקד להקליט זרמים שלמים-תא המושרה על-ידי נשיפת גאבא פרוסות המוח בחריפות מוכן, הכנה זה יש את היתרון של מעגלים המוח יחסית שמור היטב. התנהלותינו פאף-induced זרמי מעכבות7 שמתואר במאמר זה. באמצעות צסיום (Cs+)-מבוסס פתרונות פנימי, והחזקת הנוירונים ב 0 mV, תציג לנו גאבא. פאף עורר זרמי postsynaptic מעכבות (eIPSCs) עם הפרטים הטכניים המתאימים. באמצעות מודל של העכבר של דיכאון הנגרם על ידי הזרקת ליפופוליסכריד (LPS)8, אנו מראים את eIPSC משרעת עורר על ידי שאיפה גאבא פוחת באופן משמעותי בפרוסות של הזרקת LPS עכברים לעומת הרכב שולט. הכוונה שלנו היא כי מאמר זה צריך להראות איך הטכניקה עלים ישימה באופן נרחב על מחקרים שמטרתם הערכת ההשפעה של כימיקלים, תרכובות או סמים על הפעילות העצבית במוח פרוסות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
דיור חיה ובהמה כל הניסויים נערכו בהתאם לנהלים אושרו על ידי ועדת האתיקה לחקר בעלי חיים באוניברסיטה רגילה סין דרום, על פי הנחיות חיה אכפת שהוקם על ידי המכון הלאומי של בריאות-
1. ההכנה של פתרונות
- להכין 500 מל סטנדרטי מלאכותי השדרתי (כלנית חדד) המכיל את הרכיבים שמתואר שלנו עבודה שפורסמה 7 כמפורט בטבלה 1.
- זכוכית נקי שימוש בקבוקונים עם מים יונים להכין פתרון חנה המבר טריים. יבש לפני השימוש כדי להוסיף NaH NaCl, אשלגן כלורי, ונקי שפכטלים עם מים יונים 2 PO 4, NaHCO 3, MgSO 4, D-גלוקוז, ולהוסיף את CaCl 2 לאחר נתקל מבעבע הפתרון עם 95% O 2 / 5% CO 2 התערובת ~ 20 דקות (כמו טבלה מפורטת ב 1) 500 מ של מים יונים. מערבבים עד להתמוססות מלאה.
- ודא חנה המבר אינו לגמרי נקה ללא משקעים כלשהם. ואז להתאים את ה-pH ל 7.2-7.4. בועה עם תערובת גז המורכבת של 95% O 2 ו- 5% CO 2 ~ 20 דק...
- להכין 250 מ של פתרון חיתוך פרוסה המכיל כימיקלים 7 המתוארות בטבלה 2.
- להוסיף אשלגן כלורי, MgCl 2, 2 PO NaH 4, NaHCO 3, choline·Cl, D-גלוקוז, להוסיף CaCl 2 אחרונה כמצוין ב 1.1.1, 250 מ של מים יונים, להתמוסס כפי שמתואר ב 1.1.1 ו 1.1.2.
- לאחר שמבעבע עם 95% O 2 / 5% CO 2, המקום הפתרון במקפיא למשך 15-20 דקות כך הפתרון חיתוך הופך קר כקרח, קפוא חלקית.
הערה: אנו משתמשים פתרון חיתוך זה בעת ביצוע פרוסות מהחודש 1-2-עכברים הישן; הנוסחה עשויים להיות שונים עבור עכברים שגילן עולה על 2 חודשים- - LPS להכין פתרון על ידי המסת בתוך תמיסת מלח ללא אנדוטוקסין מול סטרילי (0.9% NaCl). LPS הוא מנוהל intraperitoneally (0.5 מ ג/ק ג) ולהתחיל הקלטה שעתיים מאוחר יותר.
2. הכנה של פרוסת קליפת המוח הקדם חזיתית
- הפתרון חיתוך מוציאים מהמקפיא, homogenize כדי להשיג את הרפש. למקם את הפתרון על קרח, בועה כל הזמן עם 95% O 2 / 5% CO 2.
- באמצעות מספריים גדולים, חדה, במהירות לערוף עכבר כפי שמתואר 9, מיד לשים את הראש לתוך גביע מלא קפואים (0-4 ° C) חיתוך פתרון.
- העליון של הגולגולת לאורך הקו האמצעי בכיוון סימטרית-כדי-אפיים עם מספריים בסדר גזורה להסיר את החלקים הגולגולת לרוחב. מסירים את המוח עם מרית בסדר, ירידה אל תוך קר כקרח חיתוך פתרון.
הערה: השלבים 2.2-2.3 חייב להיעשות במהירות (אידיאלי < 1 דקות). - במקום את המוח על המכסה של צלחת פטרי 9 ס מ מלא קרח. יש לשטוף את המוח עם פתרון חיתוך קר כקרח. לחתוך את המוח ואת הריח הנורה עם סכין גילוח. מחזיק
- החל הדבק דבק מגע אל הדגימה vibratome. בזהירות המקום הרחוב המוח על המסירה של דבק, rostral לקצה, ואני מיד לטבול בתמיסה קרה כקרח חיתוך.
- להתאים בעל להב vibratome כדי זווית של 15° ביחס במישור האופקי ולהכין 350-מיקרומטר פרוסות המוח הילתית (תדר הרטט להב = 85 הרץ, מהירות = 0.1 מ מ/s).
- משתמש של פיפטה, העברת הפרוסות לחדר התאוששות מלאה כלנית חדד, דגירה עבור 1 h (RT) עם בעבוע מתמדת של 95% O 2 / 5% CO 2.
3. הקלטה תיקון שלם-תא
micropipettes- להפוך זכוכית בורוסיליקט עבור משתמשים כמו הקלטה אלקטרודות או פחזנית micropipettes על פי הנחיות ספציפיות במדריך מבצע פולר. הקלטה אלקטרודות, עצה התנגדויות הן בטווח 4-6 מ' Ω, בעוד עלים micropipettes יש עצה קטרים בטווח של 2-5 מיקרומטר.
- להוסיף חוסם ערוץ Na + (TTX, 1 מיקרומטר), רחוב Na + מהיר ערוץ ובכך פוטנציאל פעולה, כדי כלנית חדד, לשמור על קצב זרימה מתמדת של פתרון זה של 2-3 mL/min בתא ההקלטה, על ידי משאבת סחרור לתוך החדר שאיפה מזה. בועה של כלנית חדד עם 95% O 2 / 5% CO 2 כל הזמן כדי להבטיח את הכדאיות של הפרוסות.
- העברת פרוסה המוח אל החדר הקלטה באמצעות פיפטה פסטר ששונה עצה בסדר אשר נחתך כדי להתאים את גודל הפרוסה. לכסות את הפרוסה עם עוגן פרוסה פלטינה עם חוטי ניילון מקבילים במרווחים ≥ 2 מ מ לגזרים, להחזיק את הפרוסה על הרציף.
- למלא את micropipette הקלטה עם הפתרון הפנימי 7 (טבלה 3), ולמלא את micropipettes עלים עם GABA-10 מיקרומטר, 50 מיקרומטר, ו 100 מיקרומטר (מומס כלנית חדד), או חנה המבר כפקד הרכב.
- כדי למנוע סתימה עם פסולת, החל לחץ חיובי קל באמצעות מזרק 1 מ"ל לפני הטבעית האלקטרודה הקלטה ב חנה המבר. שימוש של micromanipulator תחת מיקרוסקופ (עדשה המטרה x 4), מקם את ההקלטה אלקטרודה ואת פאף micropipette כך הטיפים מופיעים במרכז של תמונת הוידיאו על המסך ( איור 1 א').
- להתאים את המוקד מיקרוסקופ (40 x עדשה המטרה) תוך כדי הנמכת בהדרגה את micropipette עלים ומניחים אותו מעל נוירון הקלטה בזווית של 45°. שמור על המרחק בין קצה micropipette עלים נוירון שנרשם בין 20-40 µm ( איור 1 B). לאט ובזהירות לגשת הנוירון עם האלקטרודה הקלטה ולאחר מכן שחרר את הלחץ. החלת יניקה חלש ולא קצרה דרך הצנרת מחובר למחזיק אלקטרודה ליצירת גושפנקה גיגה אוהם.
- שמור על המתח ב 0 mV. לאחר היווצרות החותם גיגה אוהם, לפצות על מהר ולאט קיבוליות באופן ידני או אוטומטי. לאחר מכן החל יניקה קצר וחזק דרך הצנרת הנ ל כדי להגיע למצב השלם-תא. מצב
- eIPSC רשומה במתח-קלאמפ. חלות לחץ דלק נמוך (חנקן, 4-6 psi) micropipette עלים באמצעות Picospritzer הנשלט על-ידי גנרטור שלב מתח מאסטר 8 כדי לספק יחיד או מזווג גאבא פחזניות ( איור 2).
- לשנות את המשך עלים כדי להשיג את התוצאות הטובות ביותר eIPSC ( איור 3) ולמדוד את eIPSC במודל דיכאון LPS-induced ( איור 4).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
הטכניקה עלים מאפשר לחוקרים לחקור את השפעת הסמים על קולטנים מסוימים על פני השטח של נוירון מסוים. במאמר זה, אנו מתמקדים זרמי מתווך על ידי קולטני GABA. איור 1 מציג את micropipettes הקלטה של עלים. כדי למנוע השפעה על נוירונים מוקלטות של הלחץ הפיזי שנוצר על ידי והגראס, חנה המבר ומשמשים פחזניות סוכרוז (איור 2א) כפקדים. התגובה המושרה על ידי שאיפה גאבא (שחור) יכול להיחסם על ידי מעכב קולטן GABA, כגון picrotoxin כמו שדווח10, ואילו התנאי בסיסית יכול להיות התאושש על ידי חנה המבר שטיפת-אאוט (כחול), כפי שמוצג באיור 2B. ראוי לציין, לא של חנה המבר ולא פולטת סוכרוז גורם לתגובה, רומז כי תגובות המושרה על ידי GABA פחזניות הן פיזיולוגיות, מתווכת על ידי קולטני GABA הממוקם על פני השטח של התא המוקלט. עקומות תגובת המינון ומשך עלים מוצגים באיור3.
LPS הוכח לשנות את הפעילות העצבית והתנהגות בעלי חיים, אך השפעתו על תגובות בתיווך קולטן GABA היה לא ידוע. כאשר אנו משווים את הזרם המושרה על ידי GABA פחזניות פרוסות המוח של הזרקת LPS ועכברים שליטה ברכב, אנו מבחינים amplitudes IPSC מופחתת באופן משמעותי עקב טיפול LPS (איור 4).
איור 1 . דיאגרמה של האלקטרודה micropipette הקלטה של עלים.
(א) המרחק בין עלים הקלטה micropipettes. (ב') את micropipette עלים (משמאל), האלקטרודה הקלטה (מימין) על פני השטח של פרוסה המוח. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2 . Picrotoxin המצור IPSC המושרה על ידי GABA עלים.
(א) נשיפת חנה המבר וסוכרוז (50 מיקרומטר) גורם ללא תגובה. (B) נשיפת 50 מיקרומטר גאבא המניע של IPSC (שחור) (פחזנית משך = 200 ms, 4-6 psi) בחנה המבר המכיל TTX (1 מיקרומטר), CNQX (20 מיקרומטר) ו AP5 (50 מיקרומטר) כדי לחסום את פוטנציאל פעולה ומעודכנים סינאפסות מתווך על ידי קולטנים אמפא ו- NMDA. IPSC GABA-induced חסומה על-ידי יישום אמבט של מעכב קולטן GABA, 100 picrotoxin מיקרומטר (אדום). IPSC שחזור לאחר שטיפת-אאוט של picrotoxin. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3 . עקומות תגובת המינון ומשך עלים.
(א) מדגם IPSCs המושרה על ידי 10, 50 ו- 100 מיקרומטר גאבא (פחזנית משך = ms 50, 4-6 psi). (B) עלים-משך התגובה עקומות. שחור, n = 11; . רד, n = 8; כחול, n = 10; להתאים פולינום. הנתונים מוצגים כאמצעי של ניסויים מרובים (8 ≤ n ≤11); קווי שגיאה מציינים ב- SEM. (ג) הזרמים חוזרים עורר על ידי GABA פחזניות (50 מיקרומטר) במרווחים הבין-עלים של s 1, 2 או 3 (פחזנית משך = ms 100, 4-6 psi). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 4 . eIPSC משרעת מצטמצם בעכברים הזרקת LPS לעומת הרכב שולט.
נשיפת גאבא המניע של משרעת IPSC מופחתת באופן משמעותי בהזרקת LPS לעומת שליטה נוירונים (תמיסת מלח, הרשות הפלסטינית ± 1.93 19.74/pF; LPS, הרשות הפלסטינית ± 1.30 14.10/pF; p = 0.02). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
| חומר | גר'/מול | ריכוז (מ מ) | משקל (g/L) |
| NaCl | 58.443 | 119 | 6.9547 |
| אשלגן כלורי | 74.551 | 2.5 | 0.1864 |
| 2PO NaH4 | 137.99 | 1 | 0.1380 |
| NaHCO3 | 84.007 | 26.2 | 2.2010 |
| MgSO4 | 120.366 | 1.3 | 0.1565 |
| D-גלוקוז | 198.17 | 11 | 2.1799 |
| CaCl2 | 110.98 | 2.5 | 0.2775 |
טבלה 1. חנה המבר הקלטה.
| חומר | גר'/מול | ריכוז (מ מ) | משקל (g/L) |
| אשלגן כלורי | 74.551 | 2.5 | 0.1864 |
| MgCl2 | 95.211 | 7 | 0.6665 |
| 2PO NaH4 | 137.99 | 1.25 | 0.1725 |
| NaHCO3 | 84.007 | 25 | 2.1002 |
| Choline· Cl | 139.63 | 115 | 16.0575 |
| D-גלוקוז | 198.17 | 7 | 1.3872 |
| CaCl2 | 110.98 | 0.5 | 0.0555 |
בטבלה 2. פתרון חיתוך פרוסה.
| חומר | גר'/מול | ריכוז (מ מ) | משקל (g/L) |
| Cs gluconate | 328.052 | 100 | 32.8052 |
| CsCl | 168.36 | 5 | 0.8418 |
| HEPES | 238.301 | 10 | 2.3830 |
| MgCl2 | 95.211 | 2 | 0.1904 |
| CaCl2 | 110.98 | 1 | 0.1110 |
| BAPTA | 476.43 |
בטבלה 3. פתרון פנימי עבור תיקון כל-תא הקלטות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
עלים היישום נעשה שימוש נרחב כדי להעריך את קולטן postsynaptic פונקציה3,4,7, אך דורש שליטה מדויקת ניסוי. נתאר כאן הליך לערב שלם-תא תיקון מחבר חובק למעקה, אשר מדגים ש-GABA-פאף המושרה IPSCs (קרי eIPSCs) פרוסות המוח הקדם חזיתית בקליפת המוח. התנגדותם של האלקטרודה הקלטה MΩ כ-5, בעוד הקוטר עצה של עלים micropipettes היא על 2-5 מיקרומטר. פאף לחץ הוא בין 4-6 psi: טווח זה הוא קריטי, כמו לחץ גבוה עלול לגרום נזקים עצביים, בזמן לחץ נמוך יכול לגרום לא מספיק הפעלה של קולטני GABA postsynaptic. המרחק האופקי קצה micropipette עלים נוירון הקליט הוא על 20-40 µm (הקוטר של נוירונים 1-2), הזווית בין השטח micropipette ופרוסות פאף הוא בערך 45°. קצה micropipette פאף היא אנכית 20-40 µm מעל הפרוסה (ציר z). משך עלים צריך להיות בטווח של 10-150 גב' בנסיבות לעיל, נשיפה של 10-50 מיקרומטר גאבא זירוז עצביים מענה הולם והמרביים eIPSC קינטי פרמטרים שהושג הם לשחזור. למרות הפרוטוקול המתוארים כאן מתמקדת על עלים ליישום תיקון פרוסה, הוא גם מתאים להקלטות בתרבויות עצביים, כפי שמוצג שלנו עבודה שפורסמה7.
אנו גם מראים פה eIPSCs כתוצאה מיישום לזווג-עלים של חומצת אמינו גלוטמט. פרוטוקולים לזווג...-הדופק היה בשימוש נרחב כדי להעריך את מאפייני presynaptic7,11, אבל אפשרי postsynaptic אפקטים, כגון שינויים קולטן עצבי קצב ואיגוד זיקה מחייבת, אשר עשויה להשפיע דופק לזווג יחסי, לא יכול להיקבע על ידי גירוי לזווג...-הדופק presynaptic. הפרוטוקול המתואר במאמר זה מספק דרך להבהיר שינויים postsynaptic בתגובה לגירויים לזווג ואפילו הדופק-הרכבת. הקטנת משרעת eIPSC של קליפת המוח הקדם חזיתית של עכברים הזרקת LPS עולה כי רמות מסולף או פעילות של קולטני GABA אולי ביסוד LPS-induced שינויים התנהגותיים.
למרות, כמו עם רוב טכניקות משלוח סמים, קשה לדעת את הריכוז גאבא המדויק להגיע לתא המטרה, שזה עדיין אפשרי לשמור על הריכוז של גאבא ברמות מסוימות בתוך הרקמה על ידי להיות עקבי עם הסוג של micropipettes להשתמש, ולא עם פרמטרים כאלה כמו פחזנית נסיעה בלחץ ומרחק. במקרה שלנו, שאמצעי האחסון של פתרון נשענתי על 1.1 µL ב-100 מילישניות משך. לפיכך, הנעוצה מאפשר מחקרים כמותיים כדי להיות שבוצעו7,12.
הכנת פרוסות המוח בריא של קליפת המוח הקדם חזיתית חריפה היא קריטית עבור אצלם הקלטה הליך נתאר, צריך לזכור את הנקודות הבאות. ראשית, לנתח את המוח, להפריד בין קליפת המוח הקדם חזיתית במהירות (< 1 דקות) ואז תשמור את הבלוק המוח בתמיסה קרה כקרח חיתוך עבור לא יותר מ- 1 דקות. בשלב הבא, בחוזקה להדביק בלוק המוח על המחזיק הדגימה vibratome, או אחרת הרחוב המוח עלול לצוף במהלך חלוקתה. המהירות ואת התדירות של vibratome להגדיר לייצר אפילו, פרוסות בריא. המאמץ חייבים להיעשות לנהל הכל מעל הליכים-0-4 ° C כדי למזער דעתנית עצביים.
ראוי לציין כי הפתרון חיתוך נתאר במאמר זה אמור לשמש לחודש 1-2-עכברים הישן. עבור עכברים בוגרים (דהיינו > 3 חודשים), הפתרון חיתוך יוחלף כמו שמתואר13. הטכניקה עלים החלים על מגוון של תיקון-קלאמפ ניסויים הכוללים טיפולי תרופתי, יכול לשמש גם כדי לבחון את ההשפעה של תרופות על הפעילות החשמלית של נוירונים כלשהו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
המחברים רוצה להודות הארגונים הבאים: הלאומי מדעי הטבע קרן של סין (31171018, 31171355), מדע, טכנולוגיה החלוקה של גואנג-דונג (2013KJCX0054), בסיס מדעי הטבע של בפרובינצית גואנג-דונג ( 2014A030313418, 2014A030313440), ואת גואנגג'ואו מדע, טכנולוגיה הלשכה (201607010320).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glass Borosilicate micropipettes | Shutter Instruments | BF150-86-10 | 1.50 mm outer diameter; 0.86 mm inner diameter |
| Micropipette Puller | Shutter Instruments | MODEL P-97 | Flaming/Brow Micropipette Puller |
| Micromanipulators | Shutter Instruments | MP-285 | |
| Computer controlled Amplifier | Molecular Devices | Multiclamp 700B | |
| Digital Acquisition system | Molecular Devices | Digidata 1440A | |
| Imaging Camera | Nikon | 2115001 | Inspection equipment |
| Microscopy | Nikon | Eclipse FN1 | |
| Master 8 | A.M.P.I. | Master-8 Pulse stimulator | |
| Vibratome Slicer | Leica | VT 1000S | |
| Razor blade | Gillette | 74-S | FLYING EAGLE |
| Video monitor | Panasonic | WV-BM 1410 | |
| 502 Glue | Deli | 7146 | Cyanoacrylate Glue |
| Peristaltic pump | Shanghai JIA PENG Corporation | BT100-1F | |
| Video Camera | Olympus America Medical | OLY-150 | |
| Transfer Pipets | Biologix | 30-0138A1 |
References
- Neher, E., Sakmann, B. Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature. 260 (5554), 799-802 (1976).
- Sakmann, B., Edwards, F., Konnerth, A., Takahashi, T. Patch clamp techniques used for studying synaptic transmission in slices of mammalian brain. Q J Exp Physiol. 74 (7), 1107-1118 (1989).
- Eyo, U. B., et al. Neuronal hyperactivity recruits microglial processes via neuronal NMDA receptors and microglial P2Y12 receptors after status epilepticus. J Neurosci. 34 (32), 10528-10540 (2014).
- Dickinson, G. D., Parker, I. Factors determining the recruitment of inositol trisphosphate receptor channels during calcium puffs. Biophys J. 105 (11), 2474-2484 (2013).
- Lee, J., et al. Columnar distribution of activity dependent gabaergic depolarization in sensorimotor cortical neurons. Mol Brain. 5, 33 (2012).
- Glykys, J., Mody, I. The main source of ambient GABA responsible for tonic inhibition in the mouse hippocampus. J Physiol. 582, (Pt 3) 1163-1178 (2007).
- Chen, M., et al. APP modulates KCC2 expression and function in hippocampal GABAergic inhibition. Elife. 6, (2017).
- Dunn, A. J., Swiergiel, A. H. Effects of interleukin-1 and endotoxin in the forced swim and tail suspension tests in mice. Pharmacol Biochem Behav. 81 (3), 688-693 (2005).
- Engel, D. Subcellular Patch-clamp Recordings from the Somatodendritic Domain of Nigral Dopamine Neurons. J Vis Exp. (117), (2016).
- Wondolowski, J., Frerking, M. Subunit-dependent postsynaptic expression of kainate receptors on hippocampal interneurons in area CA1. J Neurosci. 29 (2), 563-574 (2009).
- Yang, L., Wang, Z., Wang, B., Justice, N. J., Zheng, H. Amyloid precursor protein regulates Cav1.2 L-type calcium channel levels and function to influence GABAergic short-term plasticity. J Neurosci. 29 (50), 15660-15668 (2009).
- Huo, Q., et al. Prefrontal Cortical GABAergic Dysfunction Contributes to Aberrant UP-State Duration in APP Knockout Mice. Cereb Cortex. , (2016).
- Zhou, W. L., Gao, X. B., Picciotto, M. R. Acetylcholine Acts through Nicotinic Receptors to Enhance the Firing Rate of a Subset of Hypocretin Neurons in the Mouse Hypothalamus through Distinct Presynaptic and Postsynaptic Mechanisms. eNeuro. 2 (1), (2015).
