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Medicine

Re Arterialized Ratte teilweise Leber Transplantation mit einem in Vivo Schiff-orientierte 70 % Hepatektomie

Published: April 8, 2018 doi: 10.3791/56392
Automatic Translation
1, 2, 3, 3, 4, *1, *3
1Department of Surgery, The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, 2Reproductive Center, The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, 3Department of Transplantation, The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, 4Department of Surgery, Perelman School of Medicine at the University of Pennsylvania
* These authors contributed equally

Summary

Hier ist ein Protokoll mit neu arterialized Ratte teilweise Lebertransplantation vorgestellt. Insbesondere war 70 % Leber resezierten in Vivo durch eine aktualisierte Technik des Schiffes-orientierte Hepatektomie. Die leberarterie wurde in einer End-to-Side Weise rekonstruiert. Die Manschette Technik wurde modifiziert, um die Anastomose Infrahepatic Vena Cava verkürzen.

Abstract

Split Lebertransplantation und lebendigen Leber Spender Leber Transplantation entstanden in der Klinik, Leber Organe in effizienter Weise zu nutzen. Um den Mechanismus hinter dieser chirurgischen Verfahren besser verstehen zu können, wurde einem Rattenmodell teilweise Lebertransplantation (PLTx) für chirurgische Studien gegründet. Aufgrund der Komplexität des Modells Ratte PLTx ist ein Protokoll mit einer ausführlichen Beschreibung erforderlich. Ein Artikel berichtet zuvor ein Protokoll, in dem ex-Vivo Hepatektomie verwendet wurde, um 50 % Ratte PLTx zu erreichen. Im Gegensatz zu diesem Protokoll haben wir ein neu arterialized PLTx mit einem in Vivo 70 % Hepatektomie eingeführt. Die Ratte PLTx der mikrochirurgische Verfahren verfeinern wurde eine aktualisierte Schiff-orientierte Hepatektomie eingegliedert. Das Portal Venen und hepatische Arterien von der linken seitlichen Lappen und der mittlere Lappen waren individuell seziert und bis zur Entfernung der das Leberparenchym, dadurch verringert die Wahrscheinlichkeit von Blutungen in der Leber Überrest stumpf ligiert. Darüber hinaus wurde eine End-to-Side Schiff Anastomose zwischen der gemeinsamen leberarterie und die erweiterten richtige leberarterie eingeführt, um die hepatische Arterie wieder arterialize. Mithilfe dieser End-to-Side Schiff Anastomose Technik, wurde der Durchmesser der Anastomose erweitert, dadurch Verringerung der Schwierigkeit der Hand Naht und Aufrechterhaltung einer hohen Rate von Anastomosen Durchgängigkeit. Darüber hinaus wurde die Manschette Anastomose Infrahepatic Vena Cava leicht modifiziert. Ein Teil der umlaufenden Leberparenchym rund um die untere Hohlvene eines Empfängers blieb während Manschette Anastomose, die dreidimensionale Form der vaskulären Lumen beizubehalten. In diesem Abschnitt von Leberparenchym wurde entfernt, nach Abschluss der Anastomose. Mit dieser Modifikation wurde der Schritt mit der Platzierung der Aufenthalt Nähte verzichtet, damit weitere Verkürzung der Manschette Anastomose. Mithilfe dieses Protokolls Ratte PLTx wurden einer niedrigen Leberenzym-Ebene, eine intakte Leber lobuläre Architektur und eine hohe Überlebensrate nach Mikrochirurgie erreicht.

Introduction

Derzeit gibt es eine große Diskrepanz zwischen der Anzahl der gespendeten Organe Leber und die Zahl der Patienten, die eine gespendete Leber warten. Der Mangel an Organen Leber ist ein globales Problem. Um den Spenderkreis zu erweitern, split-Lebertransplantation (LTx) und Lebendspende LTx wurden entwickelt, um eine partielle Leber als Transplantat1verwenden.

Um den Mechanismus hinter teilweise Lebertransplantation (PLTx) weiter zu untersuchen, wurden die relevante Tiermodellen etablierten2,3,4,5. Ratte PLTx sollen in die Leber Lappen resezierten in Vivo und ex Vivo imitieren die Bedingungen des lebenden Spenders LTx und split LTx, bzw. beim Menschen. Veröffentlicht in der Journal of visualisiert Experiments Vortrag einen ein detailliertes Protokoll mit einer 50 %-Ratte PLTx mit einem ex-Vivo Hepatektomie5. Jedoch wurde eine Ratte PLTx mit einer in-Vivo -Hepatektomie in der visualisierten Literatur noch nicht berichtet.

Neben den Unterschied zwischen in Vivo und ex Vivo Hepatectomies spielt die Technik der Durchführung einer Hepatektomie selbst auch eine wichtige Rolle bei der Bestimmung, des Ergebnis der PLTx. derzeit in vielen chirurgischen Studien mit Ratten PTLx Modell, die Leber, die Lappen reseziert wurden nach der Platzierung einer einfache Verbindung an den Stiel der Leber Lappen2,3,6,7,8,9. Platzieren eine einfache Ligatur vor Resektion nicht geeignet für alle Leber Lappen ist, als verschiedene Leber Lappen haben Sie jedoch verschiedene Formen und Größen. Eine einfache Verbindung an der Basis der mittlere Lappen trägt ein hohes Risiko für verursacht eine Verengung der die untere Hohlvene, die schließlich den Abfluss der teilweisen Leber Transplantat10,11beeinträchtigen könnten. Daher ist eine Update-Hepatektomie-Technik basierend auf Erkenntnissen der Ratte hepatische Anatomie im Bereich der Ratte PTLx erforderlich.

Im Protokoll beschrieben in dieser Studie wurde eine aktualisierte Schiff-orientierte 70 % Hepatektomie in den Prozess der Ratte PLTx aufgenommen. Das Portal Venen und hepatische Arterien des linken seitlichen Lappen (LLL) und der mittlere Lappen (ML) wurden seziert und individuell bis zur Entfernung der das Leberparenchym unterteilt. Dann wurden die hepatischen Adern des LLL und ML ligiert durch piercing Nähte. Durch die Verwendung von einzelnen Verbindlichkeiten und mehrere piercing Nähte, anstatt eine einfache Verbindung, konnte der Rest stumpf des ML über die untere Hohlvene verteilt. Daher wurde die Einschnürung der Infrahepatic Vena Cava verursacht durch eine chirurgische Verbindung vermieden. Darüber hinaus Okklusion der Blutversorgung des LLL und ML von einzelnen grundsätzlich vor Entfernung von das Leberparenchym die Rate verringert von Blutungen bei den Überrest Leber stumpf, dadurch minimiert den Einfluss der Blutverlust auf die Experimente11.

Für Mikrochirurgen ist es eine große Herausforderung, die richtige leberarterie (PHA) eine Leber Transplantation wegen der extrem kleinen Durchmesser des Gefäßes zu rekonstruieren. Obwohl die Frage ob Re Arterialization in LTx wirklich notwendig ist noch unter Debatte12,13,14, wurden zahlreiche mikrochirurgische Techniken zur Rekonstruktion der leberarterie vorgeschlagenen14 . Hier stellen wir eine neuartige Technik für erneute Arterialization der Leber Transplantation, die gemeinsame leberarterie (CHA) anastomosiert erweiterten PHA auf End-to-Side Weise. Mithilfe dieser End-to-Side-Technik sind zwei hepatische Arterien mit einer Anastomose mit einem größeren Durchmesser verbunden. Je größer der Durchmesser der Anastomose ist, leichter Hand vernähen durchzuführen ist und je größer die Verbesserung der Durchgängigkeit der Anastomose wird.

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Protocol

Alle Verfahren folgt die Richtlinien der Nager Chirurgie von Wenzhou Medical Tier Hochschulpolitik und Welfare Committee 15genehmigt.

(1) Tiere

  1. Männliche Lewis-Ratten mit einem Gewicht von 250-350 g, als Spender und Empfänger zu verwenden.

2. operative Umgebung

  1. Führen Sie alle mikrochirurgische Verfahren unter einem Operationsmikroskop mit einer Vergrößerung von 7 X bis 20 X. Sterilisieren Sie alle chirurgischen Instrumente vor dem Einsatz im Betrieb.
    Hinweis: Der OP-Saal und OP-Tisch sind sauber aber nicht steril.

3. grundlegende mikrochirurgische Manöver

  1. Frei, sezieren, und das Schiff zu mobilisieren.
    1. Verwenden Sie zuerst gerade Mikro-Pinzetten, um das umliegende Gewebe auf dem Schiff zu heben.
    2. Zweite, wiederholt und sanft öffnen Sie und schließen Sie die Spitzen der gebogenen Mikro-Pinzetten, so, dass die feinen Spitzen können aufgeschnitten und schälen das umgebende Gewebe an der vorderen Wand des Schiffes.
    3. Drittens verwenden Sie gerade Mikro-Pinzetten, Klemmen und heben das Schiff um den hinteren Raum verfügbar zu machen. Verwenden Sie dann die Spitzen der gebogenen Mikro-Pinzetten, um das umliegende Gewebe an der hinteren Wand des Schiffes zu schälen. Schließlich sollte eine Glatze Schiff ohne jede umliegende Gewebe verbunden dargestellt werden.
  2. Teilen Sie oder verdoppeln verbinden Sie und teilen Sie eines Schiffes oder Gewebe.
    1. Zunächst binden Sie zwei Quadrat Knoten auf dem Schiff oder Gewebe mit zwei Mikro-Pinzetten-16. Zweitens, das Schiff oder das Gewebe zwischen den zwei Quadrat-Knoten mit Mikro-Schere abgeschnitten.

4. Vorbereitung der Manschette und biliären Stent

  1. Machen Sie die Manschetten der Pfortader und Hohlvene Infrahepatic mit 12-Gauge und 14er intravenöse Katheter, bzw. während der biliären Stent verwendet einen 22-Gauge intravenöse Katheter. Die Manschetten bestehen aus einem Körper und Griffteil. Verwenden Sie eine Fillister auf das Körperteil, um die Gefäßwand auf der Manschette (Abbildung 1) zu sichern.

(5) Anästhesie und Fixierung der Ratten

  1. Legen Sie vorsichtig die Lewis-Ratte in eine Induktion-Box mit 5 % Isofluran gemischt mit 0,5 L/min Sauerstoff Inhalation Anästhesie zu induzieren. Überwachen Sie die Atemfrequenz der Ratte, unerwarteten Tod durch eine Überdosis von Isofluran zu verhindern. Verringern Sie die Konzentration von Isofluran auf 2 %, Anästhesie beizubehalten, wenn die Ratte nicht auf Schmerzen Stimulation reagiert.
  2. Verschieben Sie die Ratte auf ein 30 x 30 cm Eiche Brett von einem sterilisierten chirurgischen Matte Handtuch abgedeckt, und legen Sie die Ratte in Rückenlage. Binden Sie die vier Gliedmaßen der Ratte mit medialen Band zu und anschließend befestigen Sie das Band mit vier Reißzwecken. Desinfizieren Sie die Haut mit 70 % Alkohol eine Zeit- und Iodophors dreimal.

6. Spender-Betrieb

  1. Das Operationsfeld auszusetzen
    1. Schneiden Sie eine kleine Quereinschnitt auf den Oberbauch, Transekt bilaterale minderwertigen epigastrischen Gefäße mit einer elektrischen Coagulator.
    2. Quereinschnitt in der Nähe der kostalen Marge auf den Oberbauch mit einer chirurgischen Schere zu verlängern.
    3. Umkehren und den Oberbauch Wand- und Xiphoid Prozeß, bzw. an der kranialen Seite befestigen.
    4. Bewegen Sie den Darm aus der Bauchhöhle mit zwei feuchten Baumwolltuch Stöcken. Decken Sie den Darm mit einem nassen Stück Gaze ab.
  2. Schneiden Sie die Bänder und Trimmen der Suprahepatic Vena Cava (SHVC)
    1. Schneiden Sie das Falciformal Ligament, koronare Ligament und dreieckige Ligamentum nacheinander.
    2. Die linke Zwerchfell Vene von der Membran mit Micro-Pinzette frei. Dann doppelt verbinden Sie es mit seidenen Fäden 6-0.
      Hinweis: Teilen Sie diese Vene in diesem Schritt nicht.
    3. Schneiden Sie das Gastrohepatic Ligament mit Mikro-Schere der minderwertigen caudatus Lappen und die Hepatoesophageal Ligament und Arterie zu befreien.
  3. Verschließen das Blut-Versorgungsmaterial des LLL und ML vor Resektion (Abbildung 2)
    1. Verwenden Sie zuerst gebogenen Pinzette vorsichtig die hintere Wand des gemeinsamen Stammes der PV sezieren, die liefert die LLL und linke mittlere Lappen (lml) aus dem Parenchym. Zweitens doppelte verbinden Sie und teilen Sie ihn mit den entsprechenden Gallengang und hepatischen Arterie zusammen.
    2. Sezieren Sie und teilen Sie das PV die RML sanft, weil diese Vene hält sich eng an das Leberparenchym.
      Hinweis: 14 X-Vergrößerung wird empfohlen. Verletzen Sie die PV des Rechts überlegene Lappens, in der Nähe der PV der RML nicht.
    3. Identifizieren Sie die leberarterie und Gallengang von der RML befindet sich zwischen der PVs die RML und Liebe mein Leben. Doppelte verbinden Sie und teilen Sie der leberarterie und Gallengang von der RML mit seidenen Fäden 6-0.
      Hinweis: Eine Änderung in der Farbe des LLL und ML von rot bis dunkel rot ist ein Indikator für erfolgreiche Okklusion der Blutversorgung. Gründliche Kenntnis der vaskulären Anatomie ist wichtig, zu identifizieren und die entsprechenden Gefäße seziert. Eine frühere Studie in Ratte deutlich dargestellt die hepatische Anatomie durch Korrosion wirft10.
  4. Operation der LLL
    1. Verbinden Sie den Stiel der LLL mit eine umlaufende 3-0 Seide Naht um die Durchblutung des linken seitlichen Lebervene zu verdecken. Mit Mikro-Schere, Schnitt die Leber unmittelbar oberhalb der Ligatur der Leber Masse entfernen.
  5. Operation der Liebe meines Lebens
    1. Klemmen Sie die linke mittlere Lebervene durch Moskito blutstillende Zange entlang der Median Fissur (Abbildung 3A). Entfernen Sie alle das Leberparenchym der Liebe meines Lebens unmittelbar oberhalb der Zange mit Mikro-Schere.
    2. Ort ein piercing Naht, die das Leberparenchym sofort unter die Zange um den linken hepatischen Median dringt Vene. Dann verknoten Sie Platz um es vor der Freigabe der Zange verbinden.
    3. Legen Sie ein weiteres zwei piercing Fäden unter die Zange um dem Rest der offenen Einschnitt der Liebe meines Lebens umgeben. Dann binden Sie zwei Quadrat Knoten um den Rest des Schnittes zu schließen. Lassen Sie die Mücke blutstillende Zange für Blutungen zu überprüfen.
  6. Operation RML (Abbildung 4)
    1. Platzieren Sie Moskito blutstillende Zange um die Basis der RML in einem Abstand von 0,5 cm bis SHVC (Abbildung 4 b) umgeben. Dann, Kreuz-Klemme der Basis mit der Mücke blutstillende Zange um rechts mittlere Lebervene zu verdecken.
    2. Mit Mikro-Schere, entfernen Sie alle das Leberparenchym RML entlang der Oberseite der Zange. Achten Sie darauf, sehr nah an der Oberfläche der Zange, verlassen einen schlicht und dünne stumpf des ML zu arbeiten.
    3. Ort der ersten piercing Naht Eindringen das Leberparenchym unter der Zange, umgeben von der mittleren Median hepatische Ader. Binden Sie dann, einen Kreuzknoten zum Verbinden der mittleren mittlere Lebervene. Legen Sie die zweite piercing Naht um die rechts mittlere Lebervene mit der gleichen Methode zu verbinden. Legen Sie ein weiteres zwei piercing Nähte in der Nähe der Rest der nach der Beschreibung in 6.5.2 Einschnitt.
  7. Trimmen der Infrahepatic Vena Cava (IHVC)
    1. Schneiden Sie das Retroperitoneum um die IHVC verfügbar zu machen. Verwenden Sie gebogene Mikro-Pinzetten, um IHVC und rechts renal Vene aus dem umgebenden Gewebe zu befreien. Sezieren und Verbinden der rechten Nebennieren Vene, die Kanalisation in die IHVC von hinten.
    2. Führen Sie eine richtige Nephrektomie nach Ligation rechts renal Vene und rechten Nierenarterie speichern genug vaskulären Länge um die Manschette auf der IHVC in einem späteren Schritt zu installieren.
  8. Installation des biliären Stents
    1. Choledochus (CBD) aus der ersten hepatische Hilum mit Mikro-Pinzette zu mobilisieren. Verbinden Sie die CBD am Kreuz-Punkt der Pylorus Ader und CBD mit einer 6-0 Seide Naht.
    2. Schneiden Sie einem Quereinschnitt an der vorderen Wand des CBD am proximalen Ende der Ligatur. Einfügen eines biliären Stents, ein 22-Gauge intravenöse Katheter in das Lumen der CBD über den Schnitt gemacht. Sichern des biliären Stents mit einem umlaufenden Seide Naht 6-0. Die CBD zwischen die zwei 6-0 seidenen Fäden Transekt.
  9. Trimmen der PV
    1. Verbinden Sie die Pylorus Vene mit einer 6-0 Seide Naht distal der PV. Als nächstes verbinden Sie die Pylorus Vene mit einer 7-0 Polypropylen Naht in der Nähe der PV. Die Pylorus Vene zwischen diesen beiden grundsätzlich Transekt. Doppelte verbinden und Teilen der Milz Ader auf die gleiche Weise.
      Hinweis: Verwenden Sie eine 7-0-Polypropylen-Naht, um das Schiff um einen kleineren Ligatur Knoten verglichen mit derjenigen der 6-0 seidenen Faden zu verbinden. Ein großer Knoten kann die Manschette Installation im letzten Schritt beeinträchtigen. Die Gefäßwand der Pylorus Vene und Milz Vene ist dünn, so sanfte Manipulationen während der Präparation unerlässlich sind. Ein zuvor veröffentlichter Artikel mit technischen Beschreibungen und Illustrationen zu sezieren und Teilung der Pylorus Vene und Milz Vene sollte vor Betrieb17gelesen werden.
  10. Trimmen der gemeinsame leberarterie (CHA)
    1. Sorgfältig die CHA und seine zwei Bifurkationen, die PHA und der Gastroduodenal Arterie (GDA), frei aus dem umgebenden Gewebe mit zwei Mikro-Pinzetten. Doppelte verbinden Sie die GDA mit 6-0 Seide Nähte an der Bifurkation der CHA, GDA.
  11. Heparinizing und Vorrichtung der Leber Transplantats
    1. Injizieren Sie 50 IE Heparin in 1 mL Kochsalzlösung über die Penis Vene. Warten Sie 5 min, systemische Heparinisierung zu erreichen.
    2. Kreuz-Klemme der PV IHVC und CHA mit drei gekrümmten Mikro-Serrefines zur hepatischen Blutfluss zu verdecken. Führen Sie einen kleinen Schnitt an der vorderen Wand der PV einen 22-Gauge-Katheter einfügen. Durchspülen der teilweisen Leber Transplantats mit Kochsalzlösung bei 4 ° C über den Katheter unter einem Druck von 20 CmH2O.
    3. Schnell öffnen Schnitt der Brusthöhle und intrathorakalen Vena Cava mit Chirurgische Schere, Blut und Perfusat abfließen. Hören Sie die Perfusion nicht auf, bis die Farbe der gesamten teilweise Leber Transplantation einheitlich gelb wird.
  12. Die partielle Leber Transplantation Prothesentyp
    1. Die linke Zwerchfell Vene zwischen zwei grundsätzlich (beschrieben in 6.2.2) mit Mikro-Schere Transekt.
    2. Als nächstes Transekt der SHVC in der Nähe der Membran um die vaskuläre Länge so lange wie möglich zu halten. Transekt PV auf der Ebene der Milz Ader mit Mikro-Schere. Die GDA zwischen der doppelten grundsätzlich unterteilen und Transekt CHA in der Nähe der Zöliakie Stamm.
    3. Transekt die Nebennieren Schiffe auf der distalen Seite des 6-0 in 6.7.2 Seide Ligatur gesetzt. Transekt IHVC auf der Ebene der linken Nieren Ader mit einer chirurgischen Schere.
    4. Verbrauchsteuern Sie und übertragen Sie die partielle Leber zu einem Rücken-Tabelle-Gericht (30 mm Kulturschale) gefüllt mit Kochsalzlösung bei 4 ° c

7. Rücken-Table-Operation (Graft-Vorbereitung)

  1. Installation der vaskulären Manschetten (Abbildung 5)
    1. Ziehen Sie die PV durch das Lumen der eine Stulpe mit einem 12-Gauge intravenöse Katheter mit Mikro-Pinzette aus. Vorübergehend befestigen Sie die Manschette Griff und PV zusammen mit einem Schiff Schelle. Evert PV Gefäßwand an die äußere Oberfläche der Manschette zu decken. Die Gefäßwand und Manschette in Position mit einer umlaufenden 6-0 Seide Naht zu sichern.
      Hinweis: Verdrehen Sie das Schiff nicht. Die Manschette Griff sollte in die Richtung von 12:00 gehalten werden.
    2. Nach den Beschreibungen in 7.1.1 IHVC Manschette zu installieren.
  2. Voreinstellung der zwei Aufenthalt Nähte auf der SHVC
    1. Eindringen die Gefäßwand der SHVC von außerhalb, im Inneren mit zwei 7-0 Polypropylen Nähte entlang der 03:00 und 09:00-Richtungen, beziehungsweise.
      Hinweis: Verknoten Sie nicht.
  3. Erhaltung der Prothese
    1. Tauchen Sie das teilweise Leber Transplantat in Kochsalzlösung bei 4 ° C für Erhaltung nach der Operation zurück-Tabelle.

8. Empfänger Betrieb

  1. Wiederholen Sie die Verfahren in 6.1-6.2 und 6,7, mit Ausnahme der richtige Nephrektomie in den Empfänger um das Operationsfeld freizulegen Transekt Bänder und schneiden Sie die Gefäße.
  2. Vorbereitung der IHVC, Gallengang, leberarterie und Pfortader in den Empfänger
    1. Erstens mobilisieren Sie Abschnitt IHVC unten rechts renal Vene. Zweitens verbinden der rechten Nebenniere Schiffe mit einer 6-0 Seide Naht. Drittens: mobilisieren der CBD aus der ersten hepatische Hilum mit Mikro-Pinzette.
      Hinweis: Nicht schneiden Sie das Fettgewebe um die CBD ab.
    2. Die CBD bei der ersten Gabelung in den hepatischen Hilum nach doppelter Unterbindung mit einer 6-0 Seide Naht Transekt. Dann Transekt der PHA mit Mikro-Schere im Anschluss an die doppelte Ligatur mit einer 6-0 Seide Naht. Den Abschnitt der PV aus der hepatischen Hilum Pylorus Ader zu mobilisieren.
  3. Die Rückseite der Leber zu mobilisieren
    1. Zurückziehen Sie den Empfänger auf der linken Seite mit zwei Baumwoll-Sticks Leber. Dann geschnitten Sie das Ligament im hinteren Teil der Leber von der SHVC an der rechten Nebenniere Vene wie in einem vorherigen visualisierte Artikel18beschrieben ab. Danach stellen Sie ein Gummiband durch den hinteren Raum der SHVC.
  4. Vorbereitung der Instrumente und Materialien in der Anhepatic phase
    1. Prüfen Sie die Verfügbarkeit aller die Instrumente und Materialien in der Anhepatic Phase, wie z. B. eine 5 mL Spritze mit einer gebogenen Nadel, Mikro-Schere, Mikro-Nadel Halterung, Mikro-Pinzetten, zwei Mikro-hämostatikum Pinzetten, zwei 7-0 Polypropylen Nähte und 6-0 Nahtmaterial Seide.
      Hinweis: Auf der Suche nach Materialien oder Instrumente kann die Anhepatic-Phase verlängern.
  5. Die Leber des Empfängers besteuert
    1. Kreuz-Clamp IHVC unmittelbar oberhalb der Nieren Ader mit einer Schiff-Klemme und die PV unmittelbar oberhalb der Pylorus Ader. Notieren Sie die Dauer der Anhepatic-Phase ab diesem Zeitpunkt bis zur Veröffentlichung der Klammer auf die PV.
    2. Reduzieren Sie sofort die Konzentration von Isofluran auf 0,5 %.
    3. Ziehen Sie die SHVC und die Membran durch die voreingestellten Gummiband nach unten. Klemmen Sie die Teile des Zwerchfells zusammen mit der intrathorakalen Vena Cava mit einer Bulldog-Klemme, Einhaltung eines Abstandes zwischen 0,5 cm und die SHVC.
      Hinweis: Die Lunge der Ratte nicht einspannen.
    4. Mit Mikro-Schere, Schnitt der Gefäßwand des SHVC sorgfältig entlang der oberen Kante des das Leberparenchym, die Gefäßwand so lange wie möglich zu halten.
    5. Transekt PV an der ersten Gabelung in den hepatischen Hilum mit Mikro-Schere. Dann Transekt der minderwertigen Vena Cava in das Parenchym des Rechts minderwertig Lappens, anstatt in der Gefäßwand, so dass das umlaufende Leberparenchym rund um die untere Hohlvene. Halten Sie sich die Schneide in der Recht minderwertig Lappen in einem Abstand von 4 mm der IHVC. Bewegen Sie nachdem die Schiffe vor die gesamte Leber aus der Bauchhöhle.
  6. Rekonstruktion der SHVC
    1. Ort der teilweisen Leber Transplantation in die Bauchhöhle Orthotopically. Durchbohren der Gefäßwand der SHVC von innen, außerhalb entlang Richtung 03:00 und 09:00 mit zwei voreingestellten Aufenthalt Nähte. Ziehen Sie die zwei Aufenthalt Nähte nach rechts und Links, nachdem sie zu einem Knoten mit ihren eigenen Enden gebunden sind.
    2. Durchbohren der SHVC Gefäßwand von außerhalb, innen in der Nähe der Knoten in Richtung 03:00, die Nadel des richtigen Aufenthalt Nahtmaterials in der vaskulären Lumen einzuführen.
    3. Der hintere Wand der SHVC durch eine laufende Naht innerhalb der vaskulären Lumen aus Richtung 03:00 bis 09:00 Richtung anastomosieren.
    4. An der Ecke von 09:00 Richtung durchbohren der Gefäßwand von innerhalb, außerhalb in der Nähe des Knotens, die Nadel aus der vaskulären Lumen einzuführen.
    5. Verwenden Sie diese Naht an die vordere Wand mit einer laufenden Naht außerhalb der vaskulären Lumen aus Richtung 09:00 bis 3 anastomosieren die Uhr Richtung. Schließlich binden die Naht mit seinem eigenen Ende 3 mal (Abbildung 6).
      Hinweis: Spritzen Sie 3 bis 5 mL Kochsalzlösung in das Lumen der rekonstruierten SHVC, Luftblasen vor der letzten 2-3 Stiche zu zwingen. Eine ausführlichere Beschreibung der SHVC Anastomose finden Sie im Artikel von Delriviere Et al. 19.
  7. Rekonstruktion der PV
    1. Legen Sie zwei 7-0 Polypropylen bleiben Nähte am Ende der PV des Empfängers nach der Beschreibung in 7.2. Ziehen Sie zwei Aufenthalt Nähte in die entgegengesetzte Richtung, die Gefäßwand zu verlängern. Befestigen Sie zwei Aufenthalt Nähte mit zwei Micro-Mosquito blutstillende Pinzette.
    2. Injizieren Sie etwa 1 mL Kochsalzlösung in die vaskuläre Lumen der PV in den Empfängerländern, Luftblasen zu zwingen. Einsetzen Sie schnell die Pfortader-Manschette in der vaskulären Lumen der PV in den Empfänger zu erzwingen, wenn es geöffnet ist, mit Mikro-Pinzetten. Sichern Sie die Manschette Anastomose mit einer umlaufenden 6-0 Seide Naht. Kreuz-Klemme der CHA.
  8. Reperfusion, Leber Transplantat
    1. Lassen Sie die Klammern an den SHVC und PV in der Folge zu die Leber Transplantation reperfuse. Notieren Sie die Zeit der Anhepatic-Phase. Suchen Sie nach Blutungen von der Anastomose. Erhöhen Sie die Konzentration von Isofluran auf 1-2 % nach der Reaktion der Ratte auf die Schmerz-Stimulation.
  9. Rekonstruktion der IHVC
    1. Spritzen Sie 1 mL Kochsalzlösung in die vaskuläre Lumen der IHVC in den Empfänger, die Blasen zu zwingen. Legen Sie die Manschette in zylindrischen Kreislauf Lumen der IHVC, gestützt durch das umlaufende Leberparenchym (Abbildung 7). Eine 6-0 Seide Naht durch den hinteren Raum der IHVC einzuführen. Sichern Sie schnell die Manschette Anastomose mit einer 6-0 Seide Naht.
    2. Lassen Sie die zwei Behälter Klemmen in IHVC die Perfusion neu starten. Das umgebende Leberparenchym sorgfältig über die umlaufende Seide Naht mit Mikro-Schere abschneiden.
  10. Rekonstruktion der hepatischen Arterie
    1. Eindringen die Gefäßwand der CHA in der Leber Transplantation von außerhalb, im Inneren mit zwei 11-0 Polypropylen Nähte in 03:00 und 09:00-Richtungen, beziehungsweise. Verdecken Sie die Durchblutung der CHA und GDA in den Empfänger mit zwei gebogenen Mikro-Serrefines.
    2. Transekt PHA des Empfängers an der Wurzel, die vaskuläre Lumen mit Mikro-Schere verfügbar zu machen. Vergrößern der vaskuläre Lumen der PHA im Rezipienten durch Schneidenteil der Gefäßwand längs, den Durchmesser der CHA in der Leber Transplantation unterzubringen.
    3. Anastomosieren Sie CHA der Leber Transplantat zu erweiterten PHA in einer End-to-Side Art und Weise mit der laufenden Nahttechniken für die SHVC Anastomose (8.6.2-8.6.7) beschrieben.
      Hinweis: Detaillierte Abbildungen der Artikel von Huang Et Al14entnehmen.
  11. Rekonstruktion der CBD
    1. Verschieben Sie den Darm zurück in die Bauchhöhle, den Abstand zwischen den beiden Enden des gallenganges zu reduzieren. Führen Sie eine Quereinschnitt an der vorderen Wand des gallenganges in den Empfänger.
    2. Herunterziehen des biliären Stents in der teilweisen Leber Transplantation in das Lumen des gallenganges in den Empfänger über den Quereinschnitt einzulegen. Den Stent mit einer 6-0 umlaufende Seide Naht zu sichern.
    3. Binden Sie die zwei 6-0 umlaufende Seide Nähte in den Gallengang zueinander, um die Spannung der Anastomose zu reduzieren.
  12. Schließen den Bauch
    1. Schließen Sie den Bauch in zwei Schichten mit 3: 0 Seide Naht im laufenden Naht Muster.

9. postoperative Behandlungen (Analgesie und Antibiotika)

  1. Behandeln Sie alle Empfänger mit Buprenorphin 0,1 mg/kg subkutan. Verwalten Sie Cefuroxim (16 mg/kg) subkutan neben dem Analgetikum. Bieten Sie Wasser aus dem Wasserhahn und standardlabor Tier Chow, die Ratten Ad Libitum.

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Representative Results

Insgesamt wurden 31 Fälle von Phänomen arterialized Ratte PLTx abgeschlossen unter Verwendung dieses Protokolls. Alle Empfänger überlebte bis zum Ende der Beobachtungszeit. Das Körpergewicht der Empfänger begann nach postoperativen Tag (POD) 4 zu erholen. Die Neigung des Körpergewichts war in der Nähe, die einer normalen Lewis Ratte nach POD 6 (Abbildung 8), die die Wiederherstellung des Empfängers indirekt impliziert. Histologisch, eine geringe Verbreitung des gallenganges wurde im Empfänger beobachtet, und die Leber lobuläre Architektur der Empfänger war intakt. Keine Nekrose oder offensichtliche sinusförmigen Dilatation beobachtet werden (Abbildung 9). Die Serumspiegel von Alanin-Aminotransferase (ALT) wurde innerhalb des normalen Bereichs um POD 30 (Abbildung 10). Keine Fälle von gelber Urin durch Gelbsucht verursacht wurden in diese Empfänger, die durch die Überprüfung des Käfigs Einstreu täglich angegeben wurde, unter Angabe der Durchgängigkeit des biliären Stents beobachtet. Die normale Serumspiegel von Bilirubin auf POD 30 weiter bestätigt die erfolgreiche Rekonstruktion der Gallenwege (Abbildung 11). Die Durchgängigkeit der hepatischen Arterie wurde von der PHA am proximalen Ende der Anastomose während Opfer zu überprüft. Blutungen aus der PHA verzeichneten alle Empfänger, impliziert die Durchgängigkeit der Anastomose. Alle diese Ergebnisse vorgeschlagen, dass die Leber Transplantationen gut funktioniert.

Die durchschnittliche Dauer der Anhepatic-Phase war 23,03 ± 2,3 min. Die Manschette Anastomose der PV nahm 4,68 ± 0,77 min, während die Manschette Anastomose von der IHVC nur 2,05 ± 0,71 min. im Vergleich mit der Manschette Anastomose der PV, die Manschette Anastomose von der IHVC den Schritt dauerte der Platzierung Aufenthalt Nähte gespeichert und dadurch weiter die Anas verkürzt Tomosis Zeit (Tabelle 1).

Zwei Fälle von Blutungen in den Überrest stumpf des ML bei 70 % Hepatektomie wurden unter den 31 Fälle von Schiff-orientierte Hepatektomie beobachtet. In einem vorangegangenen Experiment verzeichneten Blutungen in den Überrest stumpf des ML 8 von 18 Fälle von Parenchym-Erhaltung Schiff-orientierte Hepatektomie (Abbildung 12). Das Kampfergebnis einer niedrigeren Rate von Blutungen in der Leber Überrest stumpf des ML nach der Verwendung von Schiff-orientierte 70 % Hepatektomie.

Figure 1
Abbildung 1 . Die Manschetten und biliären Stent.
(A, C) Die Größe der Manschetten. (B) die Fillister auf der Manschette. (D) das Körperteil und Griffteil der Manschette. (E) (a) IHVC Manschette; (b) PV-Manschette. (F) biliären Stent. Maßstabsleiste = 5 mm. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 2
Abbildung 2 . Um die Blutversorgung der LLL und ML verdecken.
(A) Der gemeinsame Stamm der PV, leberarterie und Galle Luftkanal von der LLL und Liebe mein Leben.
(B) Die Verfärbung der LLL und Liebe mein Leben nach den gemeinsamen Stamm vor.
(C) Die Pfortader von der RML.
(D) Alle PVs, hepatische Arterien und Gallenwege der LLL und die ML waren durchtrennten.
Maßstabsleiste = 5 mm. Abkürzungen: LLL Links seitlichen Lappen, ML mittlere Lappen, liebe mein Leben linke mittlere Lappen, RML rechts mittlere Lappen, RSL rechts überlegene Lappen, RIL Recht minderwertig Lappen, SCL überlegene caudatus Lappen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 3
Abbildung 3 . Auf den linken mittlere Lappen zu resezieren.
(A) resezieren der Leber Masse der Liebe meines Lebens unmittelbar oberhalb der Zange.
(B) Platz drei piercing Nähte auf den Einschnitt. (Image 1)
Maßstabsleiste = 5 mm. Abkürzungen: RML rechts mittlere Lappen, RSL direkt überlegen Lappen, RIL Recht minderwertig Lappen, SCL überlegene caudatus Lappen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 4
Abbildung 4 . Auf den Rechts mittleren Lappen (RML) resezieren.
(A) Die Basis der RML.
(B) Moskito Blutstillung Zange um die Basis der RML zu platzieren.
(C) Resezieren Sie das Leberparenchym RML unmittelbar oberhalb der Zange.
(D) Lassen Sie eine schlichte und dünne Schicht des Gewebes Überrest Leber auf die SHVC.
Maßstabsleiste = 5 mm. Abkürzungen: ML mittlere Lappen, RSL rechts überlegene Lappen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 5
Abbildung 5 . Um die Manschette zu installieren.
(A) die PV durchziehen das Lumen einer Stulpe.
(B) befestigen Sie die Manschette Griff und PV zusammen durch eine Schiff-Klemmschelle.
(C) Evert PV Gefäßwand an die äußere Oberfläche der Manschette zu decken.
(D) der Gefäßwand und die Manschette in Position zu sichern.
Maßstabsleiste = 5 mm. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 6
Abbildung 6 . Um die SHVC zu rekonstruieren.
(A & B) Ziehen Sie zwei Aufenthalt Nähte nach rechts und Links, beziehungsweise.
(C) der hintere Wand der SHVC durch eine laufende Naht in der vaskulären Lumen anastomosieren.
(D) die vordere Wand des SHVC aus der vaskulären Lumen anastomosieren.
Maßstabsleiste = 5 mm. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 7
Abbildung 7 . Die IHVC rekonstruieren.
(A) eine zylindrische vaskulären Lumen der IHVC in den Empfänger.
(B) die Manschette Anastomose von der IHVC zu sichern.
(C) start der Reperfusion.
(D) der umgebenden Leberparenchym oberhalb der umlaufenden Seiden Faden abschneiden.
Maßstabsleiste = 5 mm. Abkürzungen: PV Pfortader, IHVC minderwertigen Infrahepatic Vena Cava, RIL rechten unteren Lobus. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 8
Abbildung 8 . Postoperative Körper Gewicht Erholung.
Das Körpergewicht der Empfänger begann nach dem 4. postoperativen Tag zu erholen. Die Neigung des Körpergewichts war in der Nähe, die einer normalen Lewis Ratte nach postoperativen Tag 6, die indirekt die Erholung des Empfängers impliziert.

Figure 9
Abbildung 9 . Histologie der Leber Transplantat nach 30 Tage.
In Histologie eine geringe Verbreitung des gallenganges wurde im Empfänger beobachtet, und die Leber lobuläre Architektur der Empfänger war intakt. Keine Nekrose oder offensichtliche sinusförmigen Dilatation wurde (400 X) beobachtet. Maßstabsleiste = 20 Umm Klicken Sie bitte hier, um eine größere Version dieser Figur.

Figure 10
Abbildung 10 . Serumspiegel von alt
Die Serumspiegel von ALT war im Normalbereich auf POD 30. (**, P < 0,05).

Figure 11
Abbildung 11 . Serumspiegel von Bilirubin.
Die Serumspiegel von Bilirubin auf POD 30 war vergleichbar mit dem einer normalen Ratte Lewis (P > 0.05).

Figure 12
Abbildung 12 . Preise der verschiedenen Methoden der Hepatektomie Blutungen.
Eine niedrigere Rate von Blutungen in der Leber Überrest stumpf des ML wurde die Methode mit der Schiff-orientierte 70 % Hepatektomie beobachtet.

Verfahren Entfernung der Leber SHVC Anastomose PV-Anastomose IHVC Anastomose Anhepatic Zeit
Zeit (Minuten) 2.62±0.46 15.73±2.05 4.68±0.77 2.05±0.71 23.03±2.30
Daten wurden in Mean±SD ausgedrückt.

Tabelle 1. Zeit der einzelnen Eingriffe in Anhepatic phase

Table 2
Tabelle 2: Unterschied zwischen zwei visualisierten Protokollen der Ratte PLTx. Klicken Sie bitte hier, um eine größere Version dieser Tabelle zu sehen.


Ergänzende Materialien

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Discussion

Ratte PLTx ist eine ausgefeilte mikrochirurgische Verfahren mit einem Trainingsprogramm, das hohe Kosten und lange Dauer20ist. Die Komplexität der Ratte PLTx Protokoll hat verhindert, dass die Forscher mit diesem Tiermodell. Im Vergleich zu Full-Size-Ratte LTx, präsentiert Ratte PLTx der Mikrochirurg nicht nur vor der Herausforderung eine Transplantationsverfahren, sondern auch mit der Herausforderung der Leber Resektion in ein kleines Tier. Daher ist ein visualisierte mikrochirurgische Protokoll beschreibt die ganze Prozedur im Detail unerlässlich für den Aufbau dieser komplexen Modells. Ein zuvor visualisierter Artikel von Nagai Et Al. berichtet überreichte ein Protokoll von 50 % teilweise orthotopen LTx hepatische arterielle Rekonstruktion in Ratten5 (Tabelle 2). Dieses Protokoll verwendet, ein ex-Vivo -Hepatektomie, klinisch ähnlich dem Verfahren der LTx aufgeteilt.

Im Vergleich mit Split resects LTx, lebenden Spender LTx teilweise Leber Transplantat aus lebenden Spenders anstatt Aufteilung der Leber in den Rücken-Tisch-Betrieb. Die Resektion in Vivo Leber führen zu mehr chirurgischen Manipulationen, länger Portale Hypertension und noch mehr warmen Ischämie Verletzungen der teilweisen Leber Transplantation. Daher Ratte mehrere PLTx Modelle unter Verwendung von in Vivo Hepatektomie in einschlägigen Studien6,8,21,22etabliert haben. Viele Protokolle beinhalten Resektion der Leber Lappen nach einfachen Ligatur am Stiel oder Sockel2,3,6,8,21,23. Allerdings sind verschiedene Leber Lappen in verschiedenen Formen. Die ML der Ratte hat eine Breite, Semi-umgibt die Vena Cava10,24stützen. Platzieren eine einfache Verbindung an der Unterseite des ML leicht verengt die minderwertigen Vena. Zur Vermeidung von der Verengung der Vena Cava entwickelt Madrahimov Et Al. ein Parenchym-Erhaltung Schiff-orientierte Hepatektomie um die ML in 2 Schritten zu entfernen, nach vier piercing Nähte in das Parenchym verlassen den Rest stumpf des ML flach gemacht wurden, 10. jedoch die PVs der Leber durch das piercing Nähte ligiert Lappen in das Parenchym versteckt waren. Blutungen in den Überrest stumpf, verursacht durch fehlende oder kleine Äste der PV zu verletzen konnte nicht vollständig vermieden werden 11sein. In unserem Protokoll wurden die entsprechenden PVs und hepatische Arterien weiter zuerst seziert. Dann wurde das Blut-Versorgungsmaterial der resezierten Leber Lappen individuell durch grundsätzlich vor der Resektion verschlossen. Daher war die Rate von Blutungen bei der Überrest stumpf gesenkt mit unserem Protokoll (Abbildung 10). Die Technik des Legens der vier piercing Nähte in den Stumpf des ML wurde auch in unserem Protokoll eingesetzt, um die hepatischen Adern aber nicht die PV und hepatische Arterien zu verbinden. Mit diesen grundsätzlich mit mehreren piercing Nähte und eine schrittweise Resektion blieb die flache Form der Überrest Leber stumpf, die vermieden der Einschnürung der Vena Cava.

Für den Wiederaufbau IHVC wurde eine leichte Modifikation der Manschette Anastomose von Kamada Et Al. beschrieben 25. der minderwertigen Vena Cava des Empfängers war durchtrennten im Parenchym des Rechts minderwertig Lappens, anstatt auf dem IHVC Schiff, die eine umlaufende Leberparenchym rund um die untere Hohlvene zu verlassen. Das Leberparenchym rund um die untere Hohlvene half eine zylindrische Form der vaskulären Ende der IHVC des Empfängers und keine flache Form beizubehalten. Daher wurde das Lumen der IHVC natürlich ohne die Hilfe von Aufenthalt Nähte und Zange eröffnet. Diese Modifikation half den Schritt der Platzierung Aufenthalt Nähte und erleichtert das einführen der IHVC Manschette in der vaskulären Lumen des Empfängers. Darüber hinaus verlängert diese Modifikation die vaskuläre Länge des IHVC, wodurch sich die Spannung zwischen den beiden Enden in die Manschette Anastomose.

Mit dem Vorteil der schnellen vaskulären Anastomose wird die zwei-Manschette-Technik häufig in der Ratte orthotopen LTx für anastomosierenden PV und IHVC verwendet. Miyata Et Al. schlug sogar vor, ein Protokoll mit einer drei-Manschette Technik um PV, IHVC und SHVC anastomosieren. Die Manschette Technik hat jedoch auch seine Nachteile. Erstens kann keine Manschette mit einer festen Größe passen die Größe des entsprechenden Schiffes. Darüber hinaus stört die Manschette Technik Blutfluss, was zu einer höheren Inzidenz von Thrombosen und Fremdkörperreaktion auf der Manschette26. SHVC, ein Hauptschiff bei der Ratte zeigt hohe Durchblutung. Einschnürung oder Thrombose in diesem Gefäß kann schwere postoperative Komplikationen verursachen. Daher wählen wir in unserem PLTx-Protokoll, die Hand-Naht-Technik verwenden, um die SHVC zu rekonstruieren, welche für die Anpassung der Anastomose so nah wie möglich an die physischen Einstellung ermöglicht. Qualitativ hochwertige SHVC Anastomose abgeschlossen von der Hand-Naht-Technik erfordert jedoch hohe mikrochirurgische Geschick. Carrel Triangulation Technik empfehlenswert für Anfänger für Schiffe 27unten. Mithilfe dieser Technik werden drei Aufenthalt Nähte in regelmäßigen Abständen um den Umfang der SHVC platziert. Die 3D Form der SHVC bleibt durch zurückziehen, dass diese drei Nähte entlang drei Richtungen, bleiben die SHVC von Stenose während Anastomose verhindert werden kann.

Re Arterialization der Leber Transplantation ist ein umstrittenes Thema. Unserer Meinung nach Re Arterialization ist nicht der entscheidende Schritt dafür eine hohe Überlebensrate des Empfängers, aber es könnte sein, dass der entscheidende Schritt zur Gewährleistung einer qualitativ hochwertigen Leber Transplantats. In der traditionellen Protokoll der Ratte LTx unter Einbeziehung der zwei-Manschette-Technik wurde der hepatische Arterie nicht rekonstruiert, wie die mangelnde Durchblutung der hepatischen Arterie keinen Einfluss auf das Ergebnis der Ratte LTx12. Darüber hinaus wurde eine frühere Studie auf Maus LTx durchgeführt, um die Untersuchung der Wirkung von Re Arterialization auf langfristige Transplantat-überleben, histologischen Veränderungen, ischämischen Leberschäden und frühen immunologische Aktivierung Bahnen13. Die Forscher stellten fest, dass die erneute Arterialization der Leber Transplantationen keinen großen Einfluss auf die Überlebensrate oder dem Grad der immunologischen Aktivierung haben. Jedoch schlägt eine aktuelle Studie von Huang Et Al. berichtet, dass re Arterialization wichtig für die Verwertung von Leberparenchym Hepatektomie, vor allem mit der Obstruktion der Abfluss28ausgesetzt ist. Non-Arterialization von der teilweisen Leber Transplantation verschärfte Leberschäden und verzögert die Erholung von fokale Nekrose. Re Arterialization die partielle Leber Transplantation wird daher empfohlen. Wie hier dargestellt, war eine End-Anastomose-Technik verwendet, um die hepatische Arterie zu rekonstruieren, welche zuvor von einem unserer Autoren 14beschrieben wurde. Der Vorteil dieser Technik ist die Wahl auf zwei Dicke Arterien, CHA und GDA, anstatt die dünne PHA, die reduziert der Schwierigkeit des wieder Aufbauens der leberarterie und unterhält eine hohe Rate der Durchgängigkeit der Anastomose anastomosieren.

Die klassische Ratte LTx Protokoll vorgeschlagen von Kamada Et Al. schlägt die Anhepatic Phase zu kontrollieren, so dass es weniger als 26 min. als kein Tier überlebt, wenn die Anhepatic-Phase länger als 26 min.25 dauerte. Unsere Erfahrung steht im Einklang mit diesem Vorschlag, obwohl wir vorher mehrere überleben Fälle mit einer Anhepatic Phase länger als 26 min. beobachtet. Unserer Meinung nach hat eine stabile Anhepatic-Phase Vorrang vor einer kürzeren Phase des Anhepatic in der chirurgischen Forschung. In unserer Gruppe ist die Anhepatic Phase, innerhalb einer bestimmten Zeit exakt gesteuert. Die Anhepatic-Phase wird nicht gestoppt, bis die voreingestellte Anhepatic Zeit erreicht ist, obwohl die Anastomose des SHVC und der PV viel früher abgeschlossen werden konnte. Allerdings wird in ein Ausbildungs-Projekt, eine kürzere Anhepatic Phase gefördert.

Obwohl viele Verbesserungen zu verkürzen die Trainingsphase und vermeiden unnötige Operationen vorgenommen wurden, sind Ratten LTx und PLTx noch komplexe mikrochirurgische Operationen20. Daher ist neben ein visualisiertes Protokoll ein schrittweise Ausbildung-Protokoll basiert auf dem Plan--Check-Aktion-Zyklus wichtig für eine hohe Überlebensrate und Betrieb hohe Qualität zu erreichen. Unsere erste Erfahrungen im Umgang mit diesem Trainingsprotokoll ergab, dass 40-73 Operationen erforderlich, um die Ratte orthotopen LTx zu meistern waren. Eine zusätzliche, 9-13 Operationen erforderlich waren, um die Ratte zu meistern, neu arterialized PLTx. Das Trainingsprotokoll vorgeschlagen von Czigány Et Al. behauptet, dass 50-60 LTxs ausreichen, um der orthotopen LTx und PLTx29zu meistern sind.

In unserem Plan--Check-Aktion Trainingsprotokoll muss Qualitätskontrolle bei jedem Training Schritt und bei jeder einzelnen Manipulation betont werden, vor allem in einem komplexen Modell. Eine hohe Überlebensrate ist nicht gleichbedeutend mit einem qualitativ hochwertigen Verfahren. In die repräsentativen Ergebnisse wurden mehrere Kriterien für die Beurteilung der Qualität von der Mikrochirurgie aufgeführt, einschließlich der Histologie, Leberenzym, Körper Gewicht Erholung, Gelbsucht (Serum Bilirubin und gelben Urin), Dauer der Anhepatic-Phase "und" Durchgängigkeit von der hepatischen Arterie. Hoher Qualität ist nur erreicht, wenn alle Kriterien erfüllt sind.

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Disclosures

Alle Autoren haben keine widerstreitenden Interessen offenzulegen.

Acknowledgments

Diese Forschung wurde vom National Natural Science Foundation of China (Grant Nr. 81501382) und Zhejiang Provincial Natural Science Foundation of China (Grant Nr. gefördert. LQ13H100003 und LQ16H100002).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Surgical microscope Möller-Wedel, Germany 654359
Light source OSRAM (China) Lighting Co., Ltd 64627
Isoflurane Vaporizer MIDMARK Corporation VIP3000
Isoflurane Baxter Healthcare Corporation 40032609 For Inhalation anesthesia
Normal Saline Zhejiang Tianrui Pharmaceutical Co., Ltd. 716092103
Povidone Iodine Solution HANGZHOU MINSHENG PHARMACEUTICAL H33021567 For disinfection
Hemostatic forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd J31020
Surgical scissors Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd JC2116
Needle-holder Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd J32030
Dressing Forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd J42020
Mosquito hemostatic forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd W40340 For liver resection; For retracting the stay sutures. 
Micro-scissors Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd WA1040
Micro needle-holder Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd WA2060
Curved micro typing forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd WA3061
straight micro typing forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd WA3060
Micro hemostatic forceps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd WA3020
Bulldog clamp Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd XEC350
Vessel clamps Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd W40160
Micro Serrefine-curved  Fine Science Tools, Inc 18055-05
Dacryosyrinx Shi Zhuo medical instruments Co., Ltd. 5# curve Use as the curved needle for forcing out the air bubbles in the vascular lumen
Sterilized gauze swabs Fuqing Health & Integral Medical 20230R
5mL syringe Zhejiang Yusheng Medical Instrument Co.,Ltd 811932416
18G needles Shanghai Kindly Enterprise Development Group Co., Ltd 01-014 For fixing the upper abdomen wall
Intima II 22G intraveous catheter Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. 383207y For making biliary stent; For infusing perfusate
7-0 polypropylene sutures Ningbo Medical Needle Co., Ltd 151026 For SHVC anastomsis
6-0 silk suture Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd 2650182 For ligation
Culture dish (100mm) Corning Incorporated 430165 used in back table for storage ice. The back table dish was placed on it. 
Culture dish (30 mm) Corning Incorporated 3296 As a vessel for organ preservation
Angiocath 12G intravenous catheter Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. 382277 For making a IHVC cuff
Angiocath 14G intravenous catheter Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. 382269 For making a PV cuff
Buprenorphine (hydrochloride) Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Pharmaceutical Co., Ltd H12020275 For analgesic
Cefuroxime sodium for injection Esseti FarmaceuticiS.r.l H20160013 As an antibiotics

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Medizin Ausgabe 134 Lebertransplantation Hepatektomie Re Arterialization Ratte hepatische Schiff teilweise Leber Transplantat Schiff orientierte Manschette Anastomose
Re Arterialized Ratte teilweise Leber Transplantation mit einem <em>in Vivo</em> Schiff-orientierte 70 % Hepatektomie
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Chen, X., Yu, R., Xu, Z., Zhang , Y., Liu, C., Chen, B., Jin, H. Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy. J. Vis. Exp. (134), e56392, doi:10.3791/56392 (2018).

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