Summary
Ein Protokoll zur Charakterisierung der chemischen Zusammensetzung der Ausatmungsluft in Echtzeit mithilfe von sekundären Nanoelectrospray Ionisation gekoppelt an hochauflösende Massenspektrometrie nachgewiesen wird.
Abstract
Ausgeatmete flüchtige organische Verbindungen (VOC) haben großes Interesse geweckt, da sie als Biomarker für die Diagnose von Krankheiten und Exposition der Umwelt in eine nicht-invasive Weise dienen können. In dieser Arbeit präsentieren wir ein Protokoll zur Charakterisierung der ausgeatmeten VOC in Echtzeit mithilfe von sekundären Nanoelectrospray Ionisation mit hochauflösenden Massenspektrometrie (Sec-NanoESI-HRMS) gekoppelt. Die hausgemachten Sec-NanoESI-Quelle wurde bereitwillig basierend auf einer kommerziellen NanoESI Quelle eingerichtet. Hunderte von Gipfeln im Hintergrund subtrahiert Massenspektren der Ausatmungsluft beobachtet wurden, und die Massengenauigkeit Werte -4.0-13,5 ppm und-20.3-1,3 ppm in den positiven und negativen Ionen-Erkennung Modi, beziehungsweise. Die Gipfel wurden mit präzise elementare Zusammensetzung nach der genauen Masse und Isotopen Muster zugewiesen. Weniger als 30 s dient zur Messung einer Ausatmung, und es dauert ca. 7 min. für sechs replizierten Messungen.
Introduction
Mit der schnellen Entwicklung der modernen analytischen Techniken wurden Hunderte von flüchtigen organischen Verbindungen (VOC) in der Ausatmungsluft1identifiziert. Diese flüchtigen organischen Verbindungen ergeben sich meist aus alveoläre Luft (~ 350 mL für einen gesunden Erwachsenen) und anatomischen Totraum Luft (~ 150 mL)2, die vom Körper Stoffwechsel3,4,5,6,7 betroffen sind ,8 und Umweltverschmutzung9, beziehungsweise. Infolgedessen wenn identifiziert, sind diese flüchtigen organischen Verbindungen vielversprechend als Biomarker für die Diagnose von Krankheiten und Exposition der Umwelt in eine nicht-invasive Weise verwendet werden.
Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GC-MS) ist die am weitesten verbreitete Technik zur qualitativen und quantitativen Analyse der ausgeatmeten VOC2, haben direkte MS-Techniken, die für Echtzeit-Atem-Analyse entwickelt wurden, die Vorteile der hohe zeitliche Auflösung und einfache Pre-Probenvorbereitung. Direkte MS Techniken wie Proton Transfer Reaktion MS (PTR-MS)10, ausgewählte Ion Strömungsrohr MS (SIFT-MS)11, sekundäre Electrospray Ionisierung MS (SESI-MS)12,13 (auch benannt als mineralgewinnenden Elektrospray Ionisation MS, EESI-MS14,15), Spur atmosphärische Gas Analyzer (TAGA)16 und Plasma Ionisierung MS (PI-MS)17 wurden untersucht den letzten Jahren.
Unter den direkten MS-Techniken ist SESI bekannt als eine universelle weiche Ionisierung Technik19,20,21; und die Quelle ist leicht angepasst und mit verschiedenen Arten von Massenspektrometer, z.B., Time Flight Massenspektrometer8,15gekoppelt werden, Ionenfallen mass Spectrometer14 und Orbitrap Massenspektrometer12 ,18. Bis jetzt, SESI-MS erfolgreich eingesetzt bei der Diagnose von Erkrankungen der Atemwege22, zirkadianen Rhythmus3,6,23, Pharmakokinetik7,8, Messung und Stoffwechselwege4usw.offenbart. Vor kurzem ist eine kommerzielle SESI Quelle verfügbar geworden.
In dieser Studie wurde eine einfache und kompakte sekundäre Nanoelectrospray Ionisierung Quelle (Sec-NanoESI) eingerichtet und mit einem hochauflösenden Massenspektrometer gekoppelt. Echtzeit-Messungen der ausgeatmeten VOC in Atem wurden vorgestellt.
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Protocol
Achtung: Bitte konsultieren Sie alle relevanten Sicherheitsdatenblätter (SDB) vor dem Gebrauch. Bitte verwenden Sie geeigneter persönlicher Schutzausrüstung, z.B., Kittel, Handschuhe, Schutzbrille, voller Länge Hosen und geschlossene Schuhe).
1. richten Sie die Sec-NanoESI-Quelle
- Sec-NanoESI aufbauen nach dem SESI-Verfahren, d.h., das Atem Gas eingeführt, um eine Electrospray Plume schneiden und ionisiert durch die geladenen Tröpfchen (Abbildung 1). Die Quellen, gebaut in den einzelnen Labors abhängen an der Schnittstelle zwischen dem Massenspektrometer verwendet24,25. Hier richten Sie die Sec-NanoESI-Quelle, basierend auf einer kommerziellen NanoESI Quelle (Abbildung 2) und implementieren Sie, um ein Benchtop Quadrupol Orbitrap Massenspektrometer.
Hinweis: Der Hauptteil der Quelle ist eine kubische Edelstahl-Kammer (Länge 25 mm, Innendurchmesser 13 mm) (Abb. 2 b) mit einem Einlass (I.D. 4 mm) in die Kammer die NanoESI Kapillare einzuführen. Die Kammer ist also nicht vollständig verschlossen (Abb. 2 b). - Installieren Sie zwei Edelstahlrohre (O.D 5 mm, Länge 8 mm, I.D. 3 mm) auf jeder Seite der Kammer für Gas-Lieferung.
- Statten Sie zwei Quarz-Fenster (I.D. 14 mm) auf der Ober- und Unterseite der Kammer, die Position der Spitze des NanoESI Kapillare und NanoESI Spray mit Augen oder ein digitales Mikroskop zu überprüfen.
- Schweißen Sie die Kammer der Sweep-Kegel des Massenspektrometers.
Hinweis: Das Design wechselt je nach bestimmten Geometrie der Atmosphärendruck Schnittstelle des Massenspektrometers in einzelnen Labors verwendet.
2. Instrument Optimierung
- Das Massenspektrometer in beiden positiven und negativen Ionen-Erkennung Modi nach Herstellerangaben zu kalibrieren. Durch die Anwendung Kalibrierung, werden Massenspektrometer Parameter, wie Objektiv Potenziale und Erkennung Bedingungen optimiert, um gute Empfindlichkeit und Peakform bei einem festgelegten Auflösungswert geben. Die Massenauflösung 70000 wird hier verwendet.
- Führen Sie vollständige Q Exactive Kalibrierungen mithilfe der kommerziellen ESI-Quelle; jedoch kann mit jedem kompatiblen Quellen, einschließlich kundenspezifische Masse Kalibrierung erfolgen.
- Stellen Sie die Temperatur der Ionen-Rohrweiche (ITT) die Massenspektrometer > 100 ° c. Obwohl die höchste Temperatur bei 350 ° C eingestellt werden kann, kann es die Zersetzung von einigen Verbindungen führen. 150 ° C ist somit in diesem Experiment verwendet.
Hinweis: Für das Massenspektrometer mit einer Probenahme-Öffnung statt ITT, wird die Temperatur der Probenahme-Öffnung > 100 ° c eingestellt - Wählen Sie für die ESI Lösungsmittel und Flow Rate das geeignete ESI Lösungsmittel auf der Grundlage der Eigenschaften des Lösungsmittels (z.B., Polarität und Volatilität) und gezielte Verbindungen (z.B. Proton Affinität). Eine Mischung aus Wasser und Methanol in verschiedenen Verhältnissen wurde allgemein als ESI Lösungsmittel25eingesetzt. In diesem Experiment verwenden Wasser mit 0,1 % (V/V) Ameisensäure, für hohe Ionisierung Effizienz wurde diese Lösungsmittel13,19,23gemeldet. Einstellen die Durchflussmenge des ESI Lösungsmittel im Bereich von 0-1,5 μl/min und 200 nL/min.
Hinweis: Degas ESI Lösungsmittel für 30 min vor Gebrauch. - Sec-NanoESI Quelle Parameter, vor allem NanoESI Spannung und Kapillare QuickInfo für NanoESI zu optimieren. Die Spannung häufig reicht von 2,0 bis 4,5 kV. Einsatz 2,5 kV hier.
Hinweis: Höhere ESI Spannung anliegt als die Strömung erhöht. Der Abstand zwischen der Spitze und der Massenspektrometer-Öffnung ist von 1 bis 5 mm einstellbar. Nach der Optimierung sollte die normalisierten Intensitätsstufe (NL) in ein Massenspektrum beobachtet > 1 x 106 und die Variation der gesamten Ion Chromatogramm (TIC) soll < 10 % in beiden Modi positiven und negativen Ionen-Erkennung. Das Massenspektrum und TIC ergeben sich im Massenbereich von m/Z 50-750. - Reines Gas auf die Quelle anwenden. Dies ist ein optionaler Schritt, mit dem Ziel zu verringern den Einfluss von flüchtigen organischen Verbindungen aus der Raumluft. Hochreine Stickstoff (N2, 99,99 %) oder reiner Luft eingesetzt werden. Mit der Anwesenheit von reinem Gas sollte die NL in ein Massenspektrum beobachtet > 1 x 105 und die Variation der TIC < 10 % in beiden positiven und negativen Ionen-Erkennung Modi werden sollte. Hochreine N2 ist hier verwendet und bei 0,8 L/min geliefert.
Hinweis: Die insgesamt Strömungsgeschwindigkeit des reinen Gas- und Atem Gas sollte höher als der Volumenstrom durch die Öffnung des Massenspektrometers.
3. Messung der Ausatmungsluft
- Atmen Sie die Luft in Innenräumen und führen Sie einen normalen ausatmen, atmen Sie die Luft in der Lunge bei konstantem Volumenstrom. Überwachen Sie die Ausatmung Durchflussmenge durch ein Manometer oder ein Durchflussmesser für das Thema sichtbar. Verwenden Sie Teflon (PTFE) Schlauch, um der Atem Gas23zu liefern.
- Um die Kondensation von Wasserdampf im Inneren der Rohre zu vermeiden, erhitzen Sie das Rohr bei einer Temperatur von 80-100 oC7,23,27 oder verwenden Sie ein Nafion Trockner28,29. In diesem Experiment zum Thema ausgeatmet bei 0,4 L/min durch ein Durchflussmesser kontrolliert.
- Verbinden Sie den Einlass des Durchflussmessers auf einem Nafion Rohr (Länge 60 cm), der Wasserdampf in der Ausatmungsluft entfernen und schließen den Auslass des Durchflussmessers mit einem PTFE-Schläuche (Länge 13 cm, I.D. 4 mm). Es dauert < 30 s für eine Messung nach Ausatmung.
- Führen Sie 4-6 replizierten Messungen28,29.
- Um verwirrende Effekte zu minimieren, haben Sie Teilnehmer aus Essen, trinken und putzen ihre Zähne mindestens 30 min vor den Messungen23.
Hinweis: Um den Einfluss von flüchtigen organischen Verbindungen aus der Raumluft zu minimieren, wurde es berichtet, reines Gas anstelle von Raumluft26zu inhalieren. Wenn ein Nafion-Schläuche verwendet wird, können einige polaren Verbindungen verloren gehen. - Während der Messung immer mal übersteigt die Ionen-Intensität die linearen Nachweisgrenze des Instruments oder nicht. Die Sättigung des Signals führen zu einem Artefakt-Gipfel, die praktisch nicht aus der Siedlung in der Probe führt. Durch Einatmen durch die Nase, würde Teil des ambient VOC und Partikel entfernt werden; Es ist jedoch bemerkenswert, dass Verbindungen in die Nasengänge auch erkannt werden können.
(4) erhalten Sie ein Atem-Fingerabdruck und eine Zeit Spur einer Verbindung
- Erhalten Sie Chromatogramme und Massenspektren. Software (z. B. Xcalibur) Rekord Chromatogramme und Massenspektren zu verwenden. Denn dies direkte MS Analyse ist und keine chromatographische Trennung erfolgt, total Ion Chromatogramm (TIC) eigentlich die Zeit Spuren aller Signale, die in den Massenspektren erkannt zeigt und die extrahierten Ion Chromatogramm (EIC) die Zeit Spur zeigt ein angegebene Verbindung.
Hinweis: Für andere kommerzielle Massenspektrometer der Chromatogramme und Massenspektren von der entsprechenden Datenerfassungs-Software erhalten. - Erhalten Sie einen Fingerabdruck der Ausatmungsluft durch Auswahl einer Reihe von Scans in der TIC, wenn Ausatmungsluft gemessen wird. Erhalten Sie ein Massenspektrum, durchschnittlich diese Scans von der Software darstellt.
- Hintergrund-Gipfel aus dem Atem-Fingerabdruck zu beseitigen, verwenden Sie das Subtrahieren Hintergrund-Tool in der Software. Entnehmen Sie bitte der Bedienungsanleitung des Herstellers. Kurz gesagt, wählen Sie die gleiche Anzahl von Scans, wenn keine Atemprobe eingeführt wird, und subtrahieren Sie Hintergrund Massenspektrum aus dem Atem-Fingerabdruck.
Hinweis: Bei dieser Methode ist die Schwelle, die Funktionen in der Atem-Fingerabdruck zu identifizieren als dreimal die Standardabweichung der das Hintergrundsignal definiert. Für andere kommerzielle Massenspektrometer kann Hintergrundabzug durch die entsprechenden Datenerfassungs-Software durchgeführt werden.
- Hintergrund-Gipfel aus dem Atem-Fingerabdruck zu beseitigen, verwenden Sie das Subtrahieren Hintergrund-Tool in der Software. Entnehmen Sie bitte der Bedienungsanleitung des Herstellers. Kurz gesagt, wählen Sie die gleiche Anzahl von Scans, wenn keine Atemprobe eingeführt wird, und subtrahieren Sie Hintergrund Massenspektrum aus dem Atem-Fingerabdruck.
- Erhalten Sie eine Zeit Spur einer bestimmten Verbindung. Wählen Sie die Spitze einer gezielten Verbindung in den Atem Fingerabdruck und die Zeit, die Spur der Verbindung anschließend von der Software erworben wird.
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Representative Results
Abbildung 3 zeigt die Atem-Fingerabdrücke im Massenbereich von m/Z 50-750 unter sowohl positive als auch negative Ionen-Erkennung-Modus aufgezeichnet. 291 Gipfel (Peak-Intensität > 5.0x104) und 173 Gipfel (Peak-Intensität > 3.0x104) wurden im Hintergrund subtrahiert Atem Fingerabdrücke in den positiven und negativen Ionen-Erkennung-Modi bzw. beobachtet. Um Spitzen in den Massenspektren zu identifizieren, siehe Vorveröffentlichungen für Details12,18,24,29. Kurz gesagt, wurden flüchtige Stoffwechselprodukte und flüchtigen organischen Verbindungen aus Raumluft entdeckt. Zum Beispiel ergibt sich der Peak bei m/Z 74.0606 (Abbildung 3a) aus ausgeatmeten N, N-Dimethylformamid oder Aminoactone nach menschlichen Metabolom Datenbank (Morbiditätsmuster); Peaks bei m/Z 462.1447 und m/Z 536.1638 (Abbildung 3a) entstammen der Addukte ausgeatmete Ammoniak und Polysiloxane (Labor Verunreinigungen)12. Die typische Massengenauigkeit Werte in positive und negative Ionen-Erkennung Modi sind -4.0-13,5 ppm und-20.3-1,3 ppm bzw.. Abbildung 4 zeigt die Zeit Spur von Indol, eine typische endogene Verbindung, die durch sechs replizierten Messungen der Ausatmungsluft aus einem Fach erkannt wird. Es dauert weniger als 7 Minuten für alle sechs Messungen.
Abbildung 1. Schaltplan für SESI-MS-Analyse von flüchtigen organischen Verbindungen in der Ausatmungsluft. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2. (a) ein schematisches Diagramm und (b) ein Foto von der Sec-NanoESI-Quelle, die in diesem Experiment verwendet. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3. Hintergrund subtrahiert Atem Fingerabdrücke erhielt Positive (a) und (b) negative Ionen-Erkennung Modi im Massenbereich von m/Z 50-750. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4. Zeit-Spur von Indol durch sechs replizierten Messungen der Ausatmungsluft aus ein Thema erkannt. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
Bau der Sec-NanoESI-Quelle basiert auf einer kommerziellen NanoESI-Quelle, ist die Ionisation Effizienz höher als bei der Verwendung einer ESI-Quelle-30. Darüber hinaus die Ionisation Effizienz wird weiter verbessert in einer geschlossenen Kammer, da es den Prozess isoliert aus der Luft ambient Hintergrund und zur gleichen Zeit erleichtert die Vermischung zwischen der Gasprobe und der Spray-Plume. Durch die Verwendung einer Sec-NanoESI, weniger Parameter optimiert werden müssen im Vergleich zu einer ESI-Quelle, um Installation, Anwendung und Wartung zu erleichtern.
Wenn kein Signal beobachtet oder Empfindlichkeit erheblich verringert bei der Atem Analyse von Sec-NanoESI-MS, sollte man die Position der Kapillare Spritzdüse und auch die Bildung von Wassertropfen an der Spitze der Kapillare überprüfen. Richten Sie die Spitze mit der Öffnung des Massenspektrometers. Ändern Sie die Spray-Kapillare zu einem neuen wenn die Spray-Kapillare verstopft ist oder die Spitze ist verseucht. Andernfalls überprüfen Sie, ob die ITT des Instruments blockiert oder verschmutzt ist. Ersetzen oder die ITT bei Bedarf zu reinigen. Schalten Sie ESI Spannung vor dem Einchecken des Sprays Kapillare. Stellen Sie die Temperatur von ITT bei Raumtemperatur ein und warten Sie, bis die Temperatur sinkt.
SESI-HRMS nachgewiesen wurde eine empfindliche und selektive Technik für Echtzeit-Atem Analyse4,6,12sein. In den letzten Jahren wurde diese Technik erfolgreich eingesetzt zur Messung circadian Variation3,6, Überwachung Pharmakokinetik7,8, identifizierende Stoffwechselwege5, etc. . In letzter Zeit, haben Aminosäuren im menschlichen Atem erfolgreich von SESI-MS zum ersten Mal beziffert die bemerkenswerte Fortschritte bei der quantitativen Analyse5ist. Mit weiteren Untersuchungen SESI-HRMS konnte sich als nützlich und effizient nicht-invasive klinische Methode etablieren.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde von National Natural Science Foundation of China (Nr. 91543117) finanziell unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ultrapure water | Merck Millipore, USA | MPGP04001 | Resistance >18.2 MΩ·cm |
| Formic acid | Sigma-Aldrich, USA | F0507 | Corrosive to the respiratory tract. |
| Nitrogen gas | Guangzhou Shiyuan Gas Co. Ltd., China | N.A.a | Purity >99.99% |
| Q Exactive hybrid quadrupole-orbitrap mass spectrometer | Thermo Scientific, USA | 02634L(S/N) | Beware of high voltage and high temperature |
| NanoESI source | Thermo Scientific, USA | ES002373(S/N); ES071(P/N) | Beware of high voltage and high temperature |
| Nano LC pump | Thermo Scientific, USA | 5041.0010A(P/N) | / |
| Xcalibur software (Version 3.0) | Thermo Scientific, USA | BRE0008596 | / |
| Dino-Lite Digital Microscope | Tech Video System (SuZhou) Co.Ltd., China | CQ401833R(S/N) | / |
| Nafion tubing | Perma Pure LLC, USA | ME60 | / |
| PTFE tubing (I.D. 4 mm) | Dongguan Hongfu Insulating Material Co. Ltd., China | N.A. | Beware of the possible loss of polar compounds |
| Mass flow controller | Line-Tech, Korea | M15122007 (S/N) | / |
| Flow meter | Yuyao Industrial Automation Meter Factory, China | 40784 | / |
| aN.A.: not available. |
References
- De Lacy Costello, B., et al. A review of the volatiles from the healthy human body. J. Breath Res. 8 (1), 014001-014030 (2014).
- Phillips, M., Greenberg, J. Ion-trap detection of volatile organic compounds in alveolar breath. Clin. Chem. 38 (1), 60-65 (1992).
- Martínez-Lozano Sinues, P., et al. Circadian variation of the human metabolome captured by real-time breath analysis. PLoS One. 9 (12), 0114422-0114438 (2014).
- Garcia-Gomez, D., et al. Secondary electrospray ionization coupled to high-resolution mass spectrometry reveals tryptophan pathway metabolites in exhaled human breath. Chem. Common. 52 (55), 8526-8528 (2016).
- Garcia-Gomez, D., et al. Real-time quantification of amino acids in the exhalome by secondary electrospray ionization-mass spectrometry: A proof-of-principle Study. Clin. Chem. 62 (9), 1230-1237 (2016).
- Martínez-Lozano Sinues, P., Kohler, M., Brown, S. A., Zenobia, R., Dallmann, R. Gauging circadian variation in ketamine metabolism by real-time breath analysis. Chem. Common. 53 (14), 2264-2267 (2017).
- Gamez, G., et al. Real-time, in vivo monitoring and pharmacokinetics of valproic acid via a novel biomarker in exhaled breath. Chem. Common. 47 (17), 4884-4886 (2011).
- Li, X., et al. Drug pharmacokinetics determined by real-time analysis of mouse breath. Angew. Chem. Int. Ed. 54 (27), 7815-7818 (2015).
- Amorim, L. L. A., Cardeal, Z. L. Breath air analysis and its use as a biomarker in biological monitoring of occupational and environmental exposure to chemical agents. J. Chromatogr. B. 853 (1-2), 1-9 (2007).
- Bajtarevic, A., et al. Noninvasive detection of lung cancer by analysis of exhaled breath. BMC Cancer. 9, 348 (2009).
- Smith, D., Wang, T. S., Pysanenko, A., Španěl, P. A selected ion flow tube mass spectrometry study of ammonia in mouth- and nose-exhaled breath and in the oral cavity. Rapid Commun. Mass Spectrom. 22 (6), 783-789 (2008).
- Li, X., Huang, L., Zhu, H., Zhou, Z. Direct human breath analysis by secondary nano-electrospray ionization ultrahigh resolution mass spectrometry: Importance of high mass resolution and mass accuracy. Rapid Commun. Mass Spectrom. 31 (3), 301-308 (2017).
- Martínez-Lozano, P., Fernandez de la Mora, J. Electrospray ionization of volatiles in breath. Int. J. Mass Spectrom. 265 (1), 68-72 (2007).
- Zeng, Q., et al. Detection of creatinine in exhaled breath of humans with chronic kidney disease by extractive electrospray ionization mass spectrometry. J. Breath Res. 10 (1), 016008-016015 (2016).
- Chen, H. W., Wortmann, A., Zhang, W. H., Zenobi, R. Rapid in vivo fingerprinting of nonvolatile compounds in breath by extractive electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry. Angew. Chem. Int. Ed. 46 (4), 580-583 (2007).
- Benoi, F. M., Davldson, W. R., Lovett, A. M., Nacson, S., Ngo, A. Breath analysis by atmospheric pressure ionization mass spectrometry. Anal. Chem. 55 (4), 805-807 (1983).
- Bregy, L., Martínez-Lozano Sinues, P., Nudnova, M. M., Zenobi, R. Real-time breath analysis with active capillary plasma ionization-ambient mass spectrometry. J. Breath Res. 8 (2), 027102-027110 (2014).
- Gaugg, M. T., et al. Expanding metabolite coverage of real-time breath analysis by coupling a universal secondary electrospray ionization source and high resolution mass spectrometry-a pilot study on tobacco smokers. J. Breath Res. 10 (1), 016010-016020 (2016).
- Martínez-Lozano, P., Zingaro, L., Finiguerra, A., Cristoni, S. Secondary electrospray ionization-mass spectrometry: breath study on a control group. J. Breath Res. 5 (1), 016002-016012 (2011).
- Martínez-Lozano Sinues, P., Zenobi, R., Kohler, M. Analysis of the exhalome a diagnostic tool of the future. Chest. 144 (3), 746-749 (2013).
- Martínez-Lozano Sinues, P., Fernandez de la Mora, J. Direct analysis of fatty acid vapors in breath by electrospray ionization and atmospheric pressure Ionization-Mass Spectrometry. Anal. Chem. 80 (21), 8210-8215 (2008).
- Martínez-Lozano Sinues, P., et al. Breath analysis in real time by mass spectrometry in chronic obstructive pulmonary disease. Respiration. 87 (4), 301-310 (2014).
- Martínez-Lozano Sinues, P., Kohler, M., Zenobi, R. Monitoring diurnal changes in exhaled human breath. Anal. Chem. 85 (1), 369-373 (2013).
- Chen, H. W., Zenobi, R. Neutral desorption sampling of biological surfaces for rapid chemical characterization by extractive electropray ionization mass spectrometry. Nat. Protoc. 3 (9), 1467-1475 (2008).
- Li, X., Hu, B., Ding, J., Chen, H. W. Rapid characterization of complex viscous samples at molecular levels by neutral desorption extractive electrospray ionization mass spectrometry. Nat. Protoc. 7 (6), 1010-1025 (2011).
- Gordon, S. M., Szidon, J. P., Krotoszynski, B. K., Gibbons, R. D., O'Neill, H. J. Volatile organic compounds in exhaled air from patients with lung cancer. Clin. Chem. 31 (8), 1278-1282 (1985).
- Ding, J. H., et al. Development of extractive electrospray ionization ion trap mass spectrometry in vivo breath analysis. Analyst. 134 (10), 2040-2050 (2009).
- Basum, G., Dahnke, H., Halmer, D., Hering, P., Mürtz, M. Online recording of ethane trances in human breath via infrared laser spectroscopy. J. Appl. Physiol. 95 (6), 2583-2590 (2003).
- Tøien, Ø Automated open flow respirometry in continuous and long-term measurements: design and principles. J. Appl. Physiol. 114 (8), 1094-1107 (2013).
- Huang, L., Li, X., Xu, M., Huang, Z. X., Zhou, Z. Identification of relatively high molecular weight compounds in human breath using secondary nano electrospray ionization ultrahigh resolution mass spectrometry. Chem. J. Chinese U. 38 (5), 752-757 (2017).
