Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

العلاج التجديدي بخلية سوبراتشورويدال أوتوجرافت في الجافة المرتبطة بالسن البقعي: تقرير أولى في فيفو

doi: 10.3791/56469 Published: February 12, 2018

Summary

والهدف من هذه الدراسة تقييم ما إذا كان يمكن تحسين الاختلاس سوبراتشورويدال الخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية المدرجة في كسر الأوعية الدموية stromal والصفائح الدموية المستمدة من البلازما الغنية بالصفائح الدموية "تقنية ترميم الشبكية ليمولي" البصر و استجابات حساسية الشبكية في العينين المتأثرة بالجفاف المرتبطة بالسن البقعي.

Abstract

هذه الدراسة تهدف إلى بحث ما إذا كان يمكن تحسين طعم سوبراتشورويدال من خلايا ذاتي أفضل تصحيح البصر (بكفا) والردود على ميكروبيريميتري (بلدي) في عيون تتأثر الجافة المرتبطة بالسن تنكس القرنية (AMD) على مر الزمن من خلال إنتاج وإفراز عوامل النمو (GFs) في الأنسجة المحيطة. وانتدب المرضى عشوائياً لكل فريق الدراسة. جميع المرضى الذين تم تشخيص مع أية أم دي الجاف وبكفا مساوية أو أكبر من 1 اللوغاريتم من زاوية الحد الأدنى من القرار (لوجمار). طعم ذاتي سوبراتشورويدال بتقنية ترميم الشبكية (لررت) ليمولي أجريت في المجموعة أ، التي شملت عيون 11 من 11 مريضا. وكان يؤديها التقنية غرس adipocytes، الخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية التي تم الحصول عليها من كسر الأوعية الدموية stromal، والصفائح الدموية من البلازما الغنية بالصفائح الدموية في الفضاء سوبراتشورويدال. واستخدمت المجموعة باء، بما في ذلك 14 عيون 14 مريضا، على العكس من ذلك، كمجموعة مراقبة. لكل مريض، وكان التحقق من التشخيص [كنفوكل] منظار ليزر المسح الضوئي والتصوير المقطعي التماسك الضوئية المجال الطيفي (SD--أكتوبر). في المجموعة أ، بكفا تحسين 0.581 إلى 0.504 في غضون 90 يوما، ولوجمار 0.376 في غضون 180 يوما (+32.20 ٪) بعد. وعلاوة على ذلك، زاد بلدي اختبار 11.44 dB إلى 12.59 dB في غضون 180 يوما. أنواع الخلايا المختلفة المطعمة خلف المشيمية كانت قادرة على ضمان إفراز فرنك غيني المستمر في تدفق تشورويدال. ونتيجة لذلك، تشير النتائج إلى أنه يمكن زيادة الحدة البصرية (خامسا) في المجموعة المطعمة أكثر في السيطرة على المجموعة بعد ستة أشهر.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

العلاج الخلية، تتكون من حقن الخلايا الجذعية/السلف في منطقة المصاب لعلاج أمراض مزمنة متعددة، النظمية أو المحلية الانتباه الوثيق في العقد الماضي1. وقد درست منذ التسعينات، عوامل النمو (GFs) لدورها العلاجي يحتمل أن تكون في ضمور الشبكية2. وفي الواقع، يمكن أن تنتج العديد من الخلايا البشرية إحصاءات المالية الحكومية، التي هي بروتينات معينة قادرة على منع أو إبطاء المبرمج، أي، وموت الخلايا3المبرمجة.

ومن المعروف أن الجافة المرتبطة بالسن البقعي (AMD) وهو مرض شبكية ضامر التي ينطوي فيها موت الخلايا تدريجيا ولا رجعة فيه على الضرر اللاحق بطبقة مستقبله، وبالتالي فقدان الوظيفة البصرية المركزية4. أية أم دي هي السبب الرئيسي للعمى في الأشخاص أكثر من 55 عاماً عمر في البلدان المتقدمة النمو وتمثل 80 في المائة من جميع تنكسات البقعي، الذي يفتقر إلى علاج فعال حتى الآن.

وقد أظهرت دراسات عديدة أن هناك مصادر مختلفة يمكن من خلالها الحصول على ذاتي إحصاءات المالية الحكومية. وهذه تشمل أنواع مختلفة من الخلايا، بما في ذلك الخلايا الدهنية stromal المستمدة من الدهون المداري والصفائح الدموية المستمدة من البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP) والخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية (أدسكس) وشملت في كسر الأوعية الدموية stromal (SVF) من الأنسجة الدهنية5 ،،من67. مجموعة فرنك غيني الحالية يضمن نيوروينهانسيمينت الشبكية، والبحث الذي أجراه فيلاتوف، ميدوري، بيلايز، وأثبت ليمولي أن زرع الدهون الذاتي (الخلف) هو فعال8،،من910.

وعلاوة على ذلك، أظهرت دراسة سابقة تحسينات كبيرة في البيانات اليكتروريتينوجرام (ERG)، سجلت وظيفة سوبراتشورويدال ذاتي الاختلاس، في العيون الجافة المتضررة من أية أم دي11. والتضمين الأنسجة المطعمة جراحيا في الفضاء سوبراتشورويدال paracrine إفراز خلايا الشبكية، تأخير على المبرمج6،،من712. نظراً لسمك الطبقة الخارجية النووية، أظهرت دراسة نسيجية شبكية خنازير غينيا أن إحصاءات المالية الحكومية يمكن أن يكون تأثير التغذوية على الشبكية. ولذلك، استخدام إحصاءات المالية الحكومية المباشرة أو غير المباشرة يمكن أن يحتمل أن يحقق فوائد العلاجية من خلال علاقة متوازنة بين مستحثات الجزيئية ومثبطات6،،من712.

والغرض من هذا الأسلوب تقييم ما إذا كان يمكن تحسين الاختلاس سوبراتشورويدال من adipocytes، أدسكس في صندوق التبرعات الخاص والحزب الثوري أفضل تصحيح البصر (بكفا) والردود ميكروبيريميتري (بلدي) في العيون الجافة المتضررة من AMD. تهدف هذه الدراسة إلى إثبات التأثير العلاجي من أوتوجرافت على أساس إنتاجها فرنك غيني، وفقا للأدبيات المذكورة6،7،،من1213.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

تمت الموافقة على البروتوكول دراسة لجنة الأخلاقيات التابعة لأكاديمية الرؤية المنخفضة وجميع المواضيع وقعت موافقة مكتوبة وفقا "إعلان هلسنكي". وتلقى هذه الدراسة البحثية الموافقة الأخلاقية من لوفبورو جامعتي شيفيلد.

ملاحظة: معايير اشتمال واستبعاد الجافة المرتبطة بالسن البقعي المرضى لتلقي سوبراتشورويدال ذاتي الاختلاس بتقنية استعادة ليمولي الشبكية (لررت) يرد في الجدول 1.

1-تشخيص المرضى الجافة المرتبطة بالسن البقعي

  1. التأكد من التشخيص مع منظار ليزر المسح [كنفوكل]، والتنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر، ولي.
  2. تقييم بكفا كل مجموعة للآن وقرب المسافة. خامسا التدبير لرؤية القريب (مقرب) في النقاط (Pts). قياس بكفا الوقت 0 (T0) 90 (T90)، و 180 يوما (T180) مقارنة بالعلاج المبكر اعتلال الشبكية السكري دراسة الخرائط (ادترس) في 4 أمتار في لوجمار.
  3. سجل ميسوبيك الظلامية، الكهربائية، ونشاط الخلية فوتوبيك، أو أرج فلاش، وفقا للمعايير التي حددها "المجتمع الدولي" للكهربية السريرية للرؤية (إيسسيف)11في عام 2009.

2-أنيسثيتيزيشن

ملاحظة: معيار الذهب في التخدير أثناء لررت تخدير موضعي، معززة بتسلل sub الحفرة تينون البنج والتخدير. وفي حالات محددة، التخدير العام المفضل.

  1. الحصول على القرنية والتخدير مايوجد بتطبيق المخدرات الموضعية الموضعية نفوس dropwise 15-20 دقيقة قبل الجراحة مع يدوكائين في 4% وروبيفاكيني % 1.
  2. حقن التخدير بتسلل مباشرة إلى sub-مايوجد وممنوع في سوبتينون.
  3. استخدام تسلل المحلية على حد سواء في منطقة البطن، قبل أن يتم استخراج الأنسجة الدهنية، وفي sub-مايوجد وممنوع الفرعي الحفرة تينون، 12 مم من ليمبوس. اعتماد مخدر موضعي كاربوكيني أو ماركين مختلطة مع أدرينالين 1,200 وحدة دولية.
  4. يقدم التخدير الموضعية عن طريق المخدر، التي يمكن القيام بها بشكل صحيح باستخدام شيفتشنكو كالمسكنات مخدرة عن طريق بولي الصغيرة المتكررة. عموما الجرعة 0.025 ملغ شيفتشنكو مع 1 مغ الميدازولام الواحدة بلعه.

3-ليمولي الشبكية استعادة تقنية إعداد

ملاحظة: يمثل هذا الأسلوب البديل التدخل في بيلايز الذي هو زرع الدهون الذاتي المداري في سوبسكليرال مساحة1،،من67،12. يمكن أن تنتج الخلايا جراحيا المطعمة العديد من إحصاءات المالية الحكومية مع خصائص نيوروتروفيك وأنجيوتروفيك في الأنسجة المحيطة، المشيمية والشبكية18،19،،من2021،22 ،،من2324،25. في لررت، يتم تقليل المسافة بين خلايا ذاتي المطعمة والمشيميه عن طريق سكليريكتومي العميق، وهو توسيع منطقة الاتصال بين ساق والمشيميه لتعزيز إفراز الخلية ذاتي paracrine إلى تدفق تشورويدال9، ،من 1014.

  1. إجراء التعقيم السليم لكل عين قبل الجراحة مع تطعيم الخلوية بين المشيمية والصلبة، وإجراء استدعاء الأسلوب إعادة الشبكية ليمولي (لررت)15،،من1617.
  2. Graft أدسكس، التي حصلت عليها كولمان et al. وتقنية لورانس (الشكل 1) من الدهون في منطقة البطن، في صندوق التبرعات الخاص في الفضاء سوفراتشورويدال15،،من1617.
  3. بيديكلي الدهنية ارتشاح مع الصفائح الدموية المستمدة من جل الحزب الثوري التي تم الحصول عليها من خلال الخطوات التالية.
  4. الطرد المركزي الدم6،12 وجمع البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP). الحافز تحبب الصفائح الدموية يسبب الإفراج عن فرنك غيني في6،بيديكلي الدهنية12.

4-المواصفات واستراتيجية

ملاحظة: يتم جمع الأنسجة الدهنية وتنقيته من الطبقة تحت الجلد البطني من المرضى، وفقا للورانس وكولمان تقنية17(جدول المواد).

  1. يدوياً حصاد 10 مل أنسجة الدهنية من طبقة تحت الجلد البطني لكل مريض، باستخدام قنية كليلة 3 مم متصلاً بحقنه تأمين، طبقاً للورانس وكولمان تقنية17 (الأرقام 2A/2B).
  2. فصل التبرعات نقية من الأنسجة الدهنية من الدم، والدهون، والنفط، والسائل بالطرد المركزي لمدة 5 دقائق في س 1,500 ز عند 20 درجة مئوية (الشكل 2-ج). صندوق التبرعات الخاص غنية جداً من أدسكس17.
  3. جمع 8 مل دم المحيطي البشري بإبرة ز 22 وفي أنبوب مستقل لإعداد الحزب الثوري.
  4. الطرد المركزي الدم التي تم جمعها لمدة 5 دقائق في 1,500 س ز عند 20 درجة مئوية (الشكل 2د). في لررت، نتيجة التغييرات التي تلت ذلك في البقاء على قيد الحياة أفضل من الاختلاس الدهون الذاتي، انتشار آخر، التي تفضل زيادة التروية تشورويدال، وتحوير أكثر شمولاً لعمل تلك العوامل التي هي يفرز فقط من الدهون7، 11،17.
  5. بناء على جيب سوبراتشورويدال (مزيد من التفاصيل في الخطوة 4، خاصة 4.4 و 4.5) لاستيعاب الاختلاس التي تم الحصول عليها من الدهون المداري وتشبع حجم المتبقي من هذا الجيب بمزيج أدسكس من صندوق التبرعات الخاص والحزب الثوري، التي تم الحصول عليها وفقا لورانس و تقنية كولمان17.

5-سوبراتشورويدال أوتوجرافت من لررت (تقنية ترميم الشبكية ليمولي): إجراء العمليات الجراحية والتفاصيل التقنية

  1. مذيع الصلبة العينية مع خياطة الحرير 6-0، قرب ليمبوس أدنى الزمانية.
  2. فتح مساحة سبكونجنكتيفال وسوبتينونيان في 11 مم من ليمبوس أدنى الزماني، استخدام مقص منحنى وستكوت تينيتومي 5.5 ".
  3. إدراج ضام مايوجد بازيل ليمولي في هذا الفضاء لجعل حقل جراحية سكليرال.
  4. استخدام سكين هلال 5 مم زاوية مجسم مشطوف الحواف، قبل قطع رفرف على الجانب في الصلبة العينية في 8 مم، من ليمبوس. المفصلي رفرف دائماً شعاعي، وإلى اليسار من الجراح.
  5. في رباعي أدنى الزمانية، في 8 مم من ليمبوس، فتح باب scleral عميقة حوالي 5 مم على الجانب من المفصلات شعاعي باستخدام سكين الهلال الزاوية مجسم مشطوف الحواف أعلى. القيام سكليريكتومي في عمق كاف لعرض لون الاردواز المشيمية.
  6. خلق فجوة بإزالة operculum قليلاً في الجزء القاصي من رفرف، بغية تسهيل الدورة الدموية في أوتوجرافت سوبراتشورويدال اللاحقة.
  7. استخراج مع الملقط العيون الدهون المداري من فجوة أعلاه عضلة مائلة أقل شأنا. تأكد من الدهون المستخرجة من vascularized بما فيه الكفاية للسماح له بالبقاء على قيد الحياة بعد أن غرس.
  8. بلطف ضع رفرف الدهون الذاتي على سرير تشورويدال وخياطة مع ألياف بوليجلاكتين 6/0 تشورويدال عند الحافة القريبة من الباب.
  9. خياطة رفرف سكليرال تجنب الضغط على بيديكلي الدهون أو على سفنها المغذيات.
  10. التسلل ستروما بيديكلي الدهون مع 1 مل جل الحزب الثوري (التي تم الحصول عليها بالطرد المركزي للمواد الدموية، وفصل المكونات، والصفائح الدموية تحبب26) باستخدام قنية زاوية (30 °) 30 غ.
  11. إعداد جانبي الملتحمة خياطة الجروح. ثم، قم بإزالة ضام مايوجد.
  12. خياطة الملتحمة، استخدام الألياف بوليجلاكتين 6/0.
  13. قبل أن اختتم كلمتي، اترك مساحة لإدراج في الفضاء سوبسكليرال، بين رفرف والمشيميه في أوتوجرافت تشورويدال، أنبوب بلاستيك مرنة صغيرة مع الفساد الدهون الذاتي.
  14. تشبع المساحة المتبقية بين الاختلاس الدهون الذاتي والمشيميه، واللوحات سكليرال مع 0.5 سم مكعب من صندوق التبرعات الخاص (ريتش أدسكس)، معدّة مسبقاً في الخطوة 3، 2، من أنبوب بلاستيكي مرن صغير، إدراجها في جيب سكليرال.
  15. بعد تشبع المساحة المتبقية، أغلق خياطة الجروح.
  16. بعد الجراحة، وإدارة ثلاثة أيام علاج بالمضادات الحيوية مع الأزيتروميسين 500 مغ. كما توفر العلاج بقطرة العين مع مجموعة المضادات الحيوية والمنشطات، مثل الكلورامفينيكول والبيتاميتازون، لحوالي 15-20 يوما.
    ملاحظة: أوتوجرافت التي تتألف من الخلايا الدهنية، أدسكس من صندوق التبرعات الخاص، والحزب الثوري الآن حصل26. تقليل المسافة بين خلايا ذاتي المطعمة والمشيميه من سكليريكتومي العميقة لتحفيز إفراز paracrine خلايا ذاتي في تدفق تشورويدال. لنفس الغرض، قم بتوسيع مجال الاتصال بين ساق والمشيميه.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

استخدام الإجراء المعروضة هنا، مجموعتين من المرضى الجافة المتضررة من AMD، مع بكفا مساوية أو أكبر من 1 اللوغاريتم من زاوية الحد الأدنى من القرار (لوجمار)، التحق بالدراسة. المجموعة ألف، بما في ذلك عيون 11 11 مريضا، سوبراتشورويدال تلقي ذاتي الاختلاس التي ليمولي الشبكية استعادة تقنية (لررت)، بينما في المجموعة باء، بما في ذلك 14 عيون 14 مريضا، واستخدمت كمجموعة مراقبة.

الطالب اختبار t واختبار مربع شي استخدمت للمقارنة، على التوالي، يعني توزيع العمر والجنس بين مجموعات الدراسة اثنين (الجدول 2). تم إجراء التحليلات الإحصائية والبيانات التصور قبل وبعد جراحة لررت.

الرتبي-مان-ويتني موقعة رتبة أجرى اختبار تحديد ما إذا كانت الاختلافات ما قبل وبعد العلاج كبيرة. وطبق هذا اختبار الفرضية الإحصائية غير حدودي لمقارنة عينتين يتوقف عند السكان لا يمكن أن يفترض أن توزع عادة، كما هو الحال في هذه القضية. وقيست قيم خامسا في كل خطوة من التحليل. وكان تعيين دلالة إحصائية في قيمة p <0.05.

تم فحص عيون الإحدى عشرة (6 الحق و 5 عيون الأيسر) من المرضى 11 (7 من الذكور و 4 من الإناث) مع التشخيص السريري لأية أم دي الجاف في هذه الدراسة. سن المريض تتراوح بين 62 و 84 سنة، مع عصر يعني 71.5 سنة (SD ± 3.8).

ويقدم الجدول 2 نظرة عامة من الملامح السريرية للمرضى الذين عولجوا لررت، ومتوسط القيم المسجلة في 0 (T0) و 90 (T90)، و 180 يوما (T180) بعد عملية جراحية. كانت دوماً عن الآثار الضارة لضمان أقصى درجات الأمان. سجلت قيم المتوسط الحسابي للضغط داخل مقلة العين في 0 (T0) و 90 (T90)، و 180 يوما (T180) بعد عملية جراحية لم يسجل أي تغيير كبير.

وكانت النتائج بعد الجراحة لررت على النحو التالي:
في المجموعة أ، بكفا تغير من 0.581 (T0) تأهيلي 0.504 في غضون 90 يوما (T90)، ولوجمار 0.376 في 180 يوما (T180) مع زيادة كبيرة بنسبة % 35.20 (ف < 0.01). في عنصر تحكم في المجموعة باء، بما في ذلك 14 عيون المرضى 14, 7 من الذكور والإناث 7، مع متوسط سن 80.4، SD ± 2.3، بكفا تغير من 0.573 (T0) إلى 0.587 (T90)، وإلى لوجمار 0.601 (T180) بمتوسط غير ذي انخفاض 4.72 في المائة (الجدول 2) (الشكل 3 ). في المجموعة أ، بلدي اختبار زاد إلى حد كبير من 11.44 dB (T0) إلى 12.59 dB (T180) (+9.58%) (الشكل 4)، في حين لم يطرأ أي تحسن كبير في القيم بعد العملية الجراحية في المجموعة باء.

Figure 1
الشكل 1 : تمثيل للفساد الذاتي سوبراتشورويدال. عوامل النمو (GFs) التي تنتجها الخلايا الدهنية، البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP)، والخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية (أدسكس) الوصول إلى أنسجة تشورويدال والشبكية من خلال ظهارة صباغ الشبكية (RPE). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
الشكل 2 : الإجراءات التقنية- القنية والانسحاب اللاحقة من الأنسجة الدهنية من منطقة البطن (لوحة أ). ينقل القنية الشحمي بتطلع خفيفة يسفط الخلايا الدهنية في التجويف الخاص به (فريق ب). بعد الطرد المركزي، وهناك ثلاثة-طبقات أنسجة الدهنية: زيت (الطبقة العالية) والدهون متجانسة (الطبقة المتوسطة)، والدم السائل (الطبقة السفلي) (لوحة ج). مراقبة الأنبوب مع الدم مباشرة بعد استخدام الطرد المركزي. وهناك ثلاث طبقات: الصفائح الدموية الفقيرة البلازما (تعادل القوة الشرائية)، والصفائح الدموية الغنية البلازما (PRP) والكريات الحمراء (لوحة D). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 3
الشكل 3 : أفضل تصحيح البصر (بكفا) في الجافة المرتبطة بالسن البقعي (AMD)- تغيير في المجموعة أ بعد سوبراتشورويدال ذاتي الاختلاس بتقنية ترميم الشبكية (لررت) ليمولي، وفي السيطرة على المجموعة (الاختيار)، تقاس في أيام مرة 0 (T0) و 90 (T90)، و 180 (T180). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 4
الشكل 4 : ميكروبيريميتري (بلدي) في مريض مجموعة ألف الجافة المرتبطة بالسن البقعي (AMD) ستة أشهر بعد ليمولي الشبكية استعادة تقنية (لررت). لي زيادة من 11.44 dB (T0) إلى 12.59 dB (T180) (+9.58 ٪). لون مقياس من 0 إلى 36 في قاعدة البيانات. تثبيت الاستقرار: مستقرة وغير مستقرة نسبيا وغير مستقرة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

معايير الاشتمال معايير الاستبعاد
مواضيع قوقازي أخطاء الانكسارية مع ما يعادل كروية > د 6
المشاركين يحصلون على تغذية جيدة علامات AMD الاحتقانية بالتنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر، واتحاد كرة القدم
التشخيص بالتنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر، وأفريقيا والمحيط الهندي واتحاد كرة القدم اضطرابات العين: CT، GL, على, النائب, VM, CRD، إلخ.
خامسا قابلة للقياس الصدمة العين
بكفا إيه وان لوجمار الأمراض الجهازية: مرض التصلب العصبي المتعدد؛ شعبة المشتريات؛ مارك ألماني؛ RD؛ عالية الدقة؛ التهاب الأوعية الدموية
IOP العادي ارتفاع ضغط الدم والسرطان وغيره من الأمراض الجهازية
مناطق تخزين جيدة اكسترافوفيل
لوجمار: لوغاريتم زاوية الحد الأدنى من القرار؛ SD--أكتوبر: التماسك الضوئية المجال الطيفي التصوير المقطعي؛ AFI: أوتوفلوريسسينسي التصوير؛ اتحاد كرة القدم: فلوريسسين الأوعية؛ خامسا: البصر؛ IOP: ضغط العين؛ دال: ديوبتر؛ الأشعة المقطعية: إعتام عدسة العين؛ GL: الزرق؛ على: التهاب العصب البصري؛ النائب: تجعد القرنية؛ VM: أغشية نيوفاسكولار؛ CRD: تشوريوريتينال المرض؛ مرض التصلب العصبي المتعدد: التصلب المتعدد؛ PD: مرض باركنسون؛ مارك ألماني: السكري؛ RD: أمراض الكلي؛ HD: أمراض الكبد.

الجدول 1: معايير اشتمال واستبعاد للمرضى الجافة المرتبطة بالسن البقعي (AMD).

معلمات لررت (n = 11) عنصر التحكم (n = 14)
العمر (متوسط) 71.5 ±3.8SD 80.4 ±2.3SD
العمر (مجموعة) 62-84 73-79
الجنس F:4 M:7 F:7 M:7
T0 بكفا لوجمار 0.581 لوجمار 0.573
(متوسط)
T0 بكفا (مجموعة) 0.301-1.0 0.0-1.0
T90 بكفا (متوسط) لوجمار 0.504 لوجمار 0.587
T90 بكفا (مجموعة) 0.222-1 0.0-1
T180 بكفا (متوسط) لوجمار 0.376 لوجمار 0.601
T180 بكفا (مجموعة) 0.046-0.699 0.0-1.0
النسبة المئوية 35.19 4.72
تغيير
قيمة p < 0.01 > 0.5
العمر بالسنوات؛ n = المرضى والضوابط؛ SD = الانحراف المعياري؛ F = أنثى؛ M = أنثى؛ بكفا = أفضل تصحيح البصر في لوجمار؛ T0 = الأساس قبل الجراحة أوتوجرافت؛ T90 = أوتوجرافت الجراحية بعد 90 يوما؛ T180 = أوتوجرافت الجراحية بعد 180 يوما.

الجدول 2: الملامح السريرية للمرضى التي درست في هذه الدراسة- متوسط القيم المسجلة قبل (T0) 90 (T90)، و 180 يوما (T180) بعد خلية أوتوجرافت بتقنية ترميم الشبكية (لررت) ليمولي في جميع المرضى.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

وكان الغرض الأساسي من هذه الدراسة لتقييم ما إذا كان يمكن أن يحسن الاختلاس سوبراتشورويدال من adipocytes، أدسكس في صندوق التبرعات الخاص، والحزب الثوري خامسا وحساسية الشبكية في العيون الجافة المتضررة من AMD مع مرور الوقت. وكان الهدف الرئيسي آخر لإثبات الآثار العلاجية الممكنة لهذه الخلايا، تستند إلى الكتابات الأخيرة، حيث اقترحت العديد من الدراسات الإكلينيكية أن العلاج القائم على GF يمكن أن تكون مفيدة للعناية بالمرضى في العديد من الأمراض.

وفي الواقع، أظهرت بعض الدراسات أن الخلايا الجذعية pluripotent المستحث البشرية ذاتي (اللجنة التوجيهية) يمكن أن تمثل مصدرا خلوية للابتزاز، تهدف إلى تجديد صبغة الشبكية ظهارة (RPE) في الأنسجة والعلاج البديل لأية أم دي18، 19-أوراق هذه الخلية يتم إنشاؤها كالاستقطاب أحادي الطبقة يمكن أن تعبر عن علامات RPE نموذجية ويحمل إفراز فرنك غيني، وإظهار القدرة فاجوسيتوتيك، فضلا عن أنماط التعبير الجيني مماثلة لتلك التي الأصلي RPE18،19 . عند زرع الأعضاء، أظهرت أوراق خلية اللجنة التوجيهية-RPE ذاتي الرئيسيات غير البشرية ليست محصنة ضد الرفض ولا ورم تشكيل18،19.

تقدم هذه الدراسة بعض الخصائص المختلفة. قمنا بتحليل مباشرة في جفاف العين البشرية المتضررة من AMD ما إذا كانت الخلية أوتوجرافت سوبراتشورويدال يمكن تحسين الأداء البصري.

وعلاوة على ذلك، ثبت الاختلاس سوفراتشورويدال من خلايا ذاتي وفقا لررت دائماً أن تكون آمنة. ابدأ سجلنا neovascularization الفرعي الشبكية، وذمة بقعيه، انفصال الشبكية، أو أخرى مشاكل الشبكية في السنة الأولى ما بعد التدخل. من ناحية أخرى، الإجراءات الجراحية غير ملائمة يمكن أن يؤدي نظرياً إلى ثقب المشيمية مع نزيف اللاحقة، لكن في ابحاثنا تضررت لا العين. ومع ذلك، من الممكن قد نزف sub-مايوجد هو إعادة استيعاب عادة في غضون بضعة أيام، ولم يقدم مرة أخرى كمضاعفات.

الدراسات الأخيرة قدمت دليلاً كافياً على حدوث زيادة كبيرة في الظلامية أرج القيم، بكفا وبلدي، في 90 و 180 يوما آخر الفساد الذاتي. ومع ذلك، كانت الزيادة أكبر إذا كان متوسط سمك الشبكية (RTA) المسجلة بالتنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر أعلى11،26. ويعتقد أن الخلايا المطعمة جراحيا يمكن إنتاج إحصاءات المالية الحكومية في الأنسجة المحيطة بها، المشيمية والشبكية، وأن لديهم خصائص نيوروتروفيك وأنجيوتروفيك، مثل عامل النمو تنتجها الخلايا الليفية الأساسية (بفجف)، عامل نمو الأوعية الدموية غشائي (VEGF) ، عامل المستمدة من ظهارة صباغ (بدف)، انترلوكين (إيل) وعامل تحفيز مستعمرة بلعم (م-CSF)، وعامل تحفيز مستعمرة بلعم المحببات (GM-CSF) وعامل نمو المشيمة (PlGF)، بينما تنتج الصفائح الدموية المستمدة من الصفائح الدموية تنمو إلخ6،،من712،،من1321 عاملاً (PDGF)، المشتقة من الصفيحات الأوعية عامل (PDAF)،

ويعتقد موضع الابتزاز قرب المشيمية السماح إحصاءات المالية الحكومية المنتجة لإدخال تدفق تشورويدال، للوصول إلى الخلية غشائي الخلايا مستقبلات، الرؤى، مولر، فوتوريسيبتورس، وأخيراً للتفاعل معها. في لررت، العناصر المطعمة ذاتي مفيدة، كل بطريقتها الخاصة، للتجديد. إنتاج الخلايا الدهنية بفجف، عامل نمو البشرة (لو)، مثل الأنسولين عامل النمو-1 (منتدى إدارة الإنترنت-1)، وايل، وتحويل عامل النمو بيتا (TGF-β)، بدف، والاديبونكتين21. إنتاج أدسكس بفجف، فيجف، M-CSF، GM-CSF، بلجف، TGF-β، تتمثل عامل النمو (هجف)، منتدى إدارة الإنترنت-1، وايل، وأنجيوجينين6،7. الصفائح الدموية تنتج PDGF، منتدى إدارة الإنترنت-1، TGF-β، VEGF، بفجف، ولو، PDAF، و6،ثرومبوسبوندين (ملعقة صغيرة)12.

بعض عوامل تعزيز التجدد بطانية، وبعض حفز انتشار آخر، وبالتالي تفضل الدهون الذاتي وبقاء adipocyte، بينما تمنع الآخرين نيوفاسكولار العمليات22،،من2324. بدف وبفجف لصالح بقاء مستقبله، بينما لو تمارس عملها على الخلايا مولر بتحريك النسخ بفجف الذاتية وحفز أدسكس أن تزيد عن25،نشاط افرازي27. على الرغم من أن إحصاءات المالية الحكومية التي يفرزها عادة في الرؤى، وهذا لا يحدث في maculopathy ضامر نتيجة للتعقيد RPE/تشوريوكابيلاريس. ويساهم إفراز Paracrine فرنك غيني بخلايا الفساد تفضل بقاء مستقبله وتشوريوكابيلاريس28. وعلاوة على ذلك، M-CSF، GM-CSF، وتكون لها آثار مضادة للالتهابات و chemotactic على الضامة، التي تشارك في القضاء على الخلية إينتراريتينال الحطام، دالة التي يتم تنفيذها من الناحية الفسيولوجية بالرؤى29،30إيل.

يمكن أن تضمن أنواع الخلايا المطعمة وراء المشيمية إفراز فرنك غيني المستمر في تدفق تشورويدال. يمكن الوصول إلى خلايا الشبكية من المشيمية إحصاءات المالية الحكومية وتتفاعل مع مستقبلات الغشاء بهم وأخيراً تنشيط طريقا داخل الخلايا. وتوحي البيانات المقدمة أن لررت يمكن أن تزيد التروية تشورويدال ومستقبله تروفيسم ليس فقط من خلال التفاعلات مستقبلات بفجف، ولكن أيضا من خلال تحفيز خلايا مولر والرؤى و photoreceptors الشبكية. نتيجة لذلك يمكن أن يفسر التغييرات التعبير الجيني والتأثير النهائي أنتيابوبتوتيك في نيوروينهانسيمينت. هذه الآلية الخلوية يكمن وراء القدرة على زيادة الأداء البصري، كما أبرز النتائج السريرية في المجموعة المطعمة. وباختصار، يمكن أن يكون لررت مفيدة للحفاظ على الدالة البصرية من المرضى المتضررين AMD الجافة في الأجل الطويل.

بيد وكما أظهرنا في دراسات سابقة، أرج مخروط قضبان وقضبان أرج إظهار علاقة هامة للغاية مع هيئة الطرق والمواصلات، في حين أن هذا ليس هو حال مخروط أرج. وهذا يمكن تفسيره بكون وظيفة منتظمة تظهر للخطر، على الرغم من أن حجم القرنية في أية أم دي الجاف وتواصل تكون منتظمة، على الأقل في المراحل الأولى26. تروفيسم الشبكية المتبقية التي تقاس بهيئة الطرق والمواصلات في علم الأمراض، وهذا يمكن أن معيار تشخيصية للعلاج لررت، منذ نتائج أفضل تكون أكثر شيوعاً في المرضى الذين يعانون من هيئة الطرق والمواصلات مساوية أو أكبر من 250 ميكرون26. يمكن أن يؤدي مجموعة فرنك غيني المتاحة في نيوروينهانسيمينت، القدر الذي يتناسب مع وجود مناطق مع سيلولاريتي أكبر، كما هو مسجل من قبل النشاط الكهربائي26. في مرحلة لاحقة، لن يعطي cellularity الأنسجة الفقيرة التأثير العلاجي هو سعى بعد الإجراء، بسبب التفاعلات مستقبلات غشاء فرنك غيني الشحيحة.

الخطوات التالية في هذا البحث سيتطلب توظيف عدد أكبر من المواضيع مع خامسا زيادة وتثبيت المركزية بتقييم جميع التجارب لا غنى عنها بحاجة إلى تأكيد أن هذه التقنية صالحة ودراسة آثار البيوكيميائية إحصائيا. ويمكن القول أن الزيادة في تروفيسم الخلية وينعكس في نشاط الخلية البصرية، تقاس موضوعيا أرج وبكفا بي11. يمكن توفير العلاج على أساس فرنك غيني هو علاج حديثة وانتقائية وآمنة ومعقولة في طب العيون من الأمراض.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

قدمت في عام 2015 آرفو، 3 أيار/مايو-7-دنفر، أول أكسيد الكربون--الولايات المتحدة الأمريكية.

Acknowledgments

المؤلفين قد لا شكر وتقدير.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Blunt cannula, 3 mm.  Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.  RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge  RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0 IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope  Nidek Inc, Fremont, CA Nidek F10 
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany  SD-OCT 
Maia 100809 Microperimetry  CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system, C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy  Retimax for ERG 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Daftarian, N., Kiani, S., Zahabi, A. Regenerative therapy for retinal disorders. J. Ophthalmic Vis. Res. 5, 250-264 (2010).
  2. Thanos, C., Emerich, D. Delivery of neurotrophic factors and therapeutic proteins for retinal diseases. Expert. Opin. Biol. Ther. 5, 1443-1452 (2005).
  3. Cao, W., et al. In vivo protection of photoreceptors from light damage by pigment epithelium-derived factor. Inv. Ophthalmol. Vis. Sci. 42, 1646-1652 (2001).
  4. Bhutto, I., Lutty, G. Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex. Mol. Aspects Med. 33, (4), 295-317 (2012).
  5. McHarg, S., Brace, N., Bishop, P. N., Clark, S. J. Enrichment of Bruch's membrane from human donor eyes. J. Vis. Exp. (105), (2015).
  6. Kevy, S. V., et al. Preparation of growth factor enriched autologous platelet gel. Transactions of the Society for Biomaterials 27th Annual Meeting. St. Paul, Minnesota, USA. April 24-29 (2001).
  7. Schaffler, A., Buchler, C. Concise review: adipose tissue-derived stromal cells-basic and clinical implications for novel cell-based therapies. Stem Cells. 25, 818-882 (2007).
  8. Filatov, V. P. Tissue therapy. Med. Gen. Fr. 11, 3-5 (1951).
  9. Pelaez, O. Retinitis pigmentosa. Cuban experience. Editorial Cientifico Técnica. La Habana, Cuba. (1997).
  10. Meduri, R., et al. Effect of basic fibroblast growth factor on the retinal degeneration of B6(A)- Rperd12/J (retinitis pigmentosa) mouse: a morphologic and ultrastructure study. ARVO 2007 Annual Meeting. Fort Lauderdale. May 6-10 (2007).
  11. Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Morales, M. U., Nebbioso, M., Limoli, C. Preliminary Study on Electrophysiological Changes After Cellular Autograft in Age-Related Macular Degeneration. Medicine. 93, (29), 355 (2014).
  12. Tischler, M. Platelet rich plasma: The use of autologous growth factors to enhance bone and soft tissue grafts. N. Y. State Dent. J. 68, 22 (2002).
  13. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, (12), 4279-4295 (2002).
  14. Lin, K. J., et al. Topical administration of orbital fat-derived stem cells promotes corneal tissue regeneration. Stem Cell Res. Ther. 4, (3), 72 (2013).
  15. Limoli, P. The retinal cell-neurorigeneration. Principles, applications and perspectives. The growth factors. FGE Reg. Canelli (AT). 159-206 (2014).
  16. Coleman, W. P., et al. Guidelines of care for liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 45, 438-447 (2001).
  17. Lawrence, N., Coleman, W. P. Liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 47, 105-108 (2002).
  18. Kamao, H., et al. Characterization of human induced pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelium cell sheets aiming for clinical application. Stem Cell Reports. 23, (2), 205-218 (2014).
  19. Dang, Y., Zhang, C., Zhu, Y. Stem cell therapies for age-related macular degeneration: the past, present, and future. Clin. Interv. Aging. 10, 255-264 (2015).
  20. Nebbioso, M., Livani, M. L., Steigerwalt, R. D., Panetta, V., Rispoli, E. Retina in rheumatic diseases: Standard full field and multifocal electroretinography in hydroxychloroquine. Clin. Exp. Optom. 94, (3), 276-283 (2011).
  21. Wang, P., Mariman, E., Renes, J., Keijer, J. The secretory function of adipocytes in the physiology of white adipose tissue. J. Cell. Physiol. 216, 3-13 (2008).
  22. Chen, G., et al. VEGF-Mediated Proliferation of Human Adipose Tissue-Derived Stem Cells. PloS One. 8, 73673 (2013).
  23. Bagchi, M., et al. Vascular endothelial growth factor is important for brown adipose tissue development and maintenance. FASEB J. 27, 3257-3271 (2013).
  24. Carron, J. A., et al. Cultured human retinal pigment epithelial cells differentially express thrombospondin-1, -2, -3,and -4. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 32, 1137-1142 (2000).
  25. Kim, S. Y., et al. Expression of pigment epithelium-derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in sickle cell retina and choroid. Exp. Eye Res. 77, 433-445 (2003).
  26. Limoli, P. G., Limoli, C., Vingolo, E. M., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Cell surgery and growth factors in dry age-related macular degeneration: visual prognosis and morphological study. Oncotarget. 7, (30), 46913-46923 (2016).
  27. Ueki, Y., Reh, T. A. EGF stimulates Müller glial proliferation via a BMP-dependent mechanism. Glia. 61, 778-789 (2013).
  28. Kozlowski, M. R. RPE cell senescence: A key contributor to age-related macular degeneration. Med. Hypotheses. 78, 505-510 (2012).
  29. Schneider, A., et al. The hematopoietic factor G-CSF is a neuronal ligand that counteracts programmed cell death and drives neurogenesis. J. Clin. Invest. 115, 2083-2098 (2015).
  30. Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat. Neurosci. 9, 843-852 (2006).
العلاج التجديدي بخلية سوبراتشورويدال أوتوجرافت في الجافة المرتبطة بالسن البقعي: تقرير أولى <em>في فيفو</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).More

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter