Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Regenerativ Therapy av Suprachoroidal celle Autograft i tørr aldersrelatert makuladegenerasjon: Foreløpig i Vivo rapport

Published: February 12, 2018 doi: 10.3791/56469
Automatic Translation
1, 2, 1, 3, 4
1Low Vision Research Centre of Milan, 2Department of Ophthalmology, A. Fiorini Hospital, Sapienza University of Rome, 3Glaucoma and Low Vision Study Center, Department of General Surgery and Organ Transplants, University of Bologna, 4Department of Sense Organs, Faculty of Medicine and Odontology, Sapienza University of Rome

Summary

Målet med denne studien er å vurdere om suprachoroidal graftet liggende under adipose-avledet stilk celler i pancreatic og blodplater utledet fra blodplater-rich plasma av Limoli Retinal restaurering teknikken kan forbedre synsskarphet og netthinnen følsomhet svar i øynene av tørr aldersrelatert makuladegenerasjon.

Abstract

Denne studien er rettet mot å undersøke om en suprachoroidal pode autologous celler kan forbedre best korrigert visuell skarphet (BCVA) og Svar å microperimetry (min) i øynene av tørr alder-relaterte Macular degenerasjon (AMD) over tid gjennom den produksjon og sekresjon av vekstfaktorer (GFs) på omkringliggende vev. Pasienter ble randomisert til hver studiegruppe. Alle pasienter ble diagnostisert med tørr AMD og BCVA lik eller større enn 1 logaritmen til minimum vinkelen på oppløsning (logMAR). En suprachoroidal autologous graft av Limoli Retinal restaurering teknikk (LRRT) ble utført på gruppe A, som inkluderte 11 øyne fra 11 pasienter. Teknikken ble utført av implanting adipocytter, liggende under adipose-avledet stilk celler Hentet fra pancreatic og blodplater fra blodplater-rich plasma i feltet suprachoroidal. Derimot ble gruppe B, inkludert 14 øynene til 14 pasienter, brukt som en kontrollgruppe. For hver pasient, ble diagnose bekreftet av AC confocal skanning laser oftalmoskop og spectral domene-optical coherence tomografi (SD-oktober). I gruppe A, BCVA forbedret med 0.581 til 0.504 på 90 dager og 0.376 logMAR på 180 dager (+32.20%) postoperatively. Videre min test økt med 11.44 dB til 12.59 dB på 180 dager. De forskjellige celletyper podet bak akkord kunne sikre konstant GF sekresjon i choroidal flyt. Følgelig resultatene indikerer at visuell skarphet (VA) i gruppen podet kan øke mer enn i kontrollgruppen etter seks måneder.

Introduction

Cellen terapi, bestående av systemisk eller lokale injeksjon av stammen/stamfar celler i den skadde området å behandle flere kroniske sykdommer, har trukket nøye i det siste tiår1. Siden 1990 har vekstfaktorer (GFs) blitt studert for sine potensielt terapeutiske rolle i Netthinne atrofi2. Faktisk kan mange menneskelige celler produsere GFs, som er spesifikke proteiner som kan blokkere eller tregere apoptose, dvs, programmert død celler3.

Det er kjent at tørr age-makuladegenerasjon (AMD) er en atrofier retinal sykdom der gradvis og irreversibel celledød innebærer skade photoreceptor laget og dermed tap av sentrale visuelle funksjon4. AMD er den ledende årsaken til blindhet hos personer over 55 år i utviklede land og 80% av alle macula degenerations, mangler en effektiv behandling ennå.

Flere studier har vist at det er ulike kilder som autolog GFs kan oppnås. Dette omfatter ulike celletyper, inkludert adipose stromal celler avledet fra orbital fett, blodplater utledet fra blodplater-rich plasma (PRP) og liggende under adipose-avledet stilk celler (ADSCs) inkludert i pancreatic (sendinger) av fettvev5 ,6,7. Gjeldende GF sett sikrer retinal neuroenhancement og forskning utført av Filatov, Meduri, Peláez, og Limoli har vist at autolog fett transplantasjon (AKTERUT) er effektiv8,9,10.

Dessuten, en tidligere studie viste betydelige forbedringer i electroretinogram (ERG) data, registrert innlegget suprachoroidal autologous graft, i tørre AMD-berørte øyne11. Kirurgisk podet vevet inn suprachoroidal modulert paracrine utskillelsen av netthinnen celler, forsinke deres apoptose6,7,12. Vurderer ytre kjernefysiske lagtykkelse, histologiske undersøkelse av netthinnen av marsvin har vist at GFs kan ha en trophic effekt på netthinnen. Direkte eller indirekte bruk av GFs kan derfor potensielt gi terapeutiske fordelene gjennom et balansert forhold mellom molekylær indusere og hemmere6,7,12.

Formålet med denne metoden er å vurdere om suprachoroidal graftet av adipocytter, ADSCs i sendinger og PRP kan forbedre best korrigert synsskarphet (BCVA) og microperimetry (min) svar i tørre AMD-berørte øyne. Denne studien har som mål å demonstrere den terapeutiske effekten av autograft på grunnlag av GF produksjonen, ifølge den siterte litteratur6,7,12,13.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Studien protokollen ble godkjent av den etiske komiteen av lav visjon Academy og alle fag signert en skriftlig samtykke i henhold til Helsinki erklæringen. Denne forskningen studien har fått etiske godkjennelse fra både Loughborough og Sheffield universiteter.

Merk: Inkludering og ekskludering kriteriene for tørr aldersrelatert makuladegenerasjon pasienter å motta suprachoroidal autologous pode av Limoli Retinal restaurering teknikk (LRRT) er beskrevet i tabell 1.

1. diagnose av tørr aldersrelatert makuladegenerasjon pasienter

  1. Fastslå diagnosen med AC confocal skanning laser oftalmoskop, SD-oktober og min.
  2. Evaluere hver gruppe BCVA for langt og nær avstand. Mål VA for nær visjon (close-up) poeng (Pts). Måle BCVA gangen 0 (T0), 90 (T90), og 180 dager (T180) forhold til tidlig behandling diabetisk retinopati studie (EDTRS) diagrammer på 4 meter ved logMAR.
  3. Spille inn elektriske scotopic, mesopic, og photopic celle aktivitet eller flash ERG i henhold til standarder satt i 2009 av International Society for klinisk elektrofysiologi av syn (ISCEV)11.

2. anesthetization

Merk: Gullstandarden i anestesi under LRRT er aktuelle anestesi, forsterket av sub-tenon infiltrasjon av bedøvelse og beroligende. I spesielle tilfeller er generell anestesi foretrukket.

  1. Få hornhinnen og conjunctival anestesi ved å bruke aktuelle lokale anesthetics innpodet dropwise 15-20 min før operasjonen med lidokain på 4% og ropivacaine på 1%.
  2. Injisere anestesi ved infiltrasjon direkte i sub-conjunctival og subtenon's mellomrom.
  3. Bruk lokale infiltrasjon både i mageregionen, før fettvev er pakket ut, og i sub-conjunctival og sub-tenon områder, 12 mm fra limbus. Vedta lokalbedøvelse carbocaine eller marcain blandet med 1200 IU adrenalin.
  4. Gi intraoperativ sedasjon gjennom anesthetic, som kan utføres riktig med fentanyl som et narkotisk smertestillende gjennom gjentatte liten boli. Doseringen er vanligvis 0.025 mg fentanyl med 1 mg av midazolam per bolus.

3. Limoli Retinal restaurering teknikk forberedelse

Merk: Denne teknikken representerer en variant av Pelaezs intervensjon som orbital autologous fett er transplantert i subscleral plass1,6,7,12. Kirurgisk podet cellene kan produsere mange GFs med nevrotropisk og angiotrophic egenskaper i omkringliggende vev, akkord og netthinnen18,19,20,21,22 ,23,24,25. I LRRT, avstanden mellom podet autologous celler og akkord er redusert med dype sclerectomy og kontakt området mellom stilken og akkord er utvidet for å fremme paracrine autologous cellen utskillelsen i choroidal flyt9, 10,14.

  1. Utføre riktig desinfeksjon av hvert øye før operasjonen med cellular pode mellom akkord og sclera, en prosedyre som kalles Limoli Retinal restaurering teknikk (LRRT)15,16,17.
  2. Sy ADSCs, innhentet av Coleman et al. og Lawrence teknikk (figur 1) fra fett, i sendinger i sovrachoroidal verdensrommet15,16,17.
  3. Infiltrere adipose pedicle med blodplater avledet fra PRP gel innhentet gjennom følgende trinn.
  4. Sentrifuge blod6,12 og samle blodplater-rich plasma (PRP). Stimulans til blodplater omfatter degranulering forårsaker GF utgivelsen i adipose pedicle6,12.

4. tekniske spesifikasjoner og strategi

Merk: Fettvev samles og renset fra det abdominal subcutaneous lag av pasienter, ifølge de Lawrence og Coleman teknikk17(Tabell for materiale).

  1. Manuelt harvest 10 mL av fettvev fra det abdominal subcutaneous lag av hver enkelt pasient, ved hjelp av en 3 mm sløv kanyle tilkoblet en låsing sprøyte, ifølge de Lawrence og Coleman teknikk17 (tall 2A/2B).
  2. Skille ren sendinger av fettvev fra blod, fett, olje og væske med sentrifugering i 5 min på 1500 x g ved 20 ° C (figur 2C). Sendinger er svært rikt ADSCs17.
  3. Samle 8 mL av menneskelig perifert blod med en 22 G nål og i et separat rør for PRP forberedelse.
  4. Sentrifuge samlet blodet for 5 min på 1500 x g ved 20 ° C (figur 2D). I LRRT, den påfølgende endringer resultere i bedre overlevelse av autologous fett graften, ADSC spredning, noe som favoriserer økt choroidal perfusjon, og en mer omfattende modulering av handlingen av de faktorene som utskilles bare av fett7, 11,17.
  5. Bygge suprachoroidal lommen (flere detaljer i trinn 4, bestemt 4.4 og 4.5) for å imøtekomme graftet fra orbital fett og Mette residualvolum av denne lomme med en blanding av ADSCs fra sendinger og PRP, innhentet etter Lawrence og Coleman teknikk17.

5. Suprachoroidal Autograft av LRRT (Limoli Retinal restaurering Technique): kirurgisk prosedyre og tekniske detaljer

  1. Anchor sclera med 6-0 silke Sutur, nær den mindreverdige-temporal limbus.
  2. Åpne Subkonjunktival og subtenonian plass på 11 mm fra den mindreverdige-temporal limbus, bruke 5.5" Westcott Tenetomy buet saks.
  3. Sett inn Limoli-Basile conjunctival festepunkt her å gjøre en Innbukking kirurgiske feltet.
  4. Bruk en 5 mm halvmåne kniv vinklet skråkant, pre-kutt en klaff på siden i sklera på 8 mm, fra limbus. Klaff hengselet er alltid radial og til venstre for kirurgen.
  5. I dårligere-temporal kvadranten, på 8 mm fra limbus, åpne en dypt Innbukking dør på cirka 5 mm på siden av radial hengsel ved hjelp av en halvmåne kniv, vinklet skråkant opp. Utføre sclerectomy på en tilstrekkelig dybde vise skifer fargen på akkord.
  6. Opprette et gap ved å fjerne litt bløtdyr i den distale del av klaff, for å lette blodsirkulasjonen i den påfølgende suprachoroidal autograft.
  7. Ekstra med ophthalmological tang orbital fettet fra en avstand over mindreverdige skrå muskelen. Kontroller at utdraget fettet er tilstrekkelig Stangeriaceae slik at den kan overleve etter sin implantasjon.
  8. Forsiktig plassere autologous fett klaffen på choroidal seng og Sutur choroidal 6/0 polyglactin fiber på den proksimale enden av døren.
  9. Sutur Innbukking klaff for å unngå komprimering på fett pedicle eller sin nærings fartøy.
  10. Infiltrere stroma av fett pedicle med 1 mL av PRP gel (innhentet av sentrifugering av blod, separasjon av komponenten og blodplater omfatter degranulering26) bruker en 30 G vinklet (30 °) kanyle.
  11. Forberede sidene av Konjunktiva suture. Deretter Fjern conjunctival festepunkt.
  12. Sutur Konjunktiva, bruker 6/0 polyglactin fiber.
  13. Før stengetid, la du kan sette inn i feltet subscleral, mellom klaffen, akkord og den choroidal autograft, en liten fleksible plast røret med autologous fett graftet.
  14. Mette gjenværende plassen mellom autologous fett pode, akkord og Innbukking klaffer med 0,5 cc sendinger (rik på ADSCs), tidligere utarbeidet i trinn 3.2, for en liten fleksible plast røret, inn Innbukking lomme.
  15. Lukk suture etter fylle den gjenværende plassen.
  16. Etter operasjonen, administrere tre dager antibiotika terapi med 500 mg azithromycin. Også gi øye-slipp terapi en antibiotika og steroider kombinasjon, som Chloramphenicol og Betamethasone, ca 15-20 dager.
    Merk: En autograft laget av fett celler, ADSCs fra sendinger, og PRP nå er innhentet26. Reduser avstanden mellom podet autologous celler og akkord av dype sclerectomy å stimulere paracrine utskillelsen av autologous celler til choroidal strømmen. På samme måte, utvide kontakt mellom stilken og akkord.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Ved hjelp av prosedyren som presenteres her, ble to grupper av tørr AMD-berørte pasienter med BCVA lik eller større enn 1 logaritmen til minimum vinkelen på oppløsning (logMAR), inkludert i studien. Gruppe A, inkludert 11 øynene til 11 pasienter, mottatt suprachoroidal autologous pode av Limoli Retinal restaurering teknikk (LRRT), mens gruppe B, inkludert 14 øynene til 14 pasienter, ble brukt som en kontrollgruppe.

Student t-test og chi kvadrat test ble brukt til å sammenligne, henholdsvis betyr alder og kjønn fordeling mellom to studie (tabell 2). Statistiske analyser og datavisualisering ble utført før og etter LRRT kirurgi.

En Diversified-Mann-Whitney signert rank test ble utført for å avgjøre om før og etter behandling forskjellene var betydelig. Denne ikke-parametriske statistiske hypotesen testen ble brukt til å sammenligne to avhengige prøver når befolkningen ikke kan antas å være normalt distribuert, som i dette tilfellet. VA verdier ble målt på hvert trinn i analysen. Statistisk betydning ble satt på en p -verdi <0,05.

Elleve øynene (6 rett og 5 venstre øyne) til 11 pasienter (7 mannlige og 4 kvinnelige) med den kliniske diagnosen tørr AMD ble undersøkt i denne studien. Pasientens alder varierte fra 62 til 84 år, med en gjennomsnittsalder på 71.5 år (± 3.8 SD).

Tabell 2 gir en oversikt over kliniske profiler av pasienter behandlet med LRRT, og de gjennomsnittlige verdiene på 0 (T0), 90 (T90) og 180 (T180) dager etter operasjonen. Bivirkninger rapportert alltid garantere maksimal sikkerhet. Mean verdier intraokulært press innspilt på 0 (T0), 90 (T90) og 180 (T180) dager etter at kirurgi ikke registrere noen betydelig endring.

Resultater etter LRRT kirurgi var som følger:
I gruppe A, BCVA endret fra 0.581 (T0) preoperatively 0.504 på 90 dager (T90) og 0.376 logMAR på 180 dager (T180) med en betydelig økning av 35.20% (p < 0,01). Kontroll gruppe B, inkludert 14 øynene til 14 pasienter, 7 menn og 7 kvinner, med en gjennomsnittsalder på 80,4 år, SD ± 2.3, BCVA endret fra 0.573 (T0) til 0.587 (T90), og å 0.601 logMAR (T180) med en ikke betydning gjennomsnitt nedgang 4,72% (tabell 2) (Figur 3 ). I gruppe A, min test økt betydelig fra 11.44 dB (T0) til 12.59 dB (T180) (+9.58%) (Figur 4), mens det var ingen betydelig forbedring i postoperativ verdier i gruppen B.

Figure 1
Figur 1 : Representasjon av suprachoroidal autologous pode. Vekstfaktorer (GFs) produsert av adipose celler, blodplater-rich plasma (PRP), og liggende under adipose-avledet stilk celler (ADSCs) nå choroidal og netthinnens vev gjennom netthinnens pigment epitel (RPE). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2 : Maleteknikk. Kanyle og påfølgende tilbaketrekking av fettvev fra mageområdet (Panel A). Kanyle flytter subkutant fett med mild aspirasjon aspirating fett celler i sin egen lumen (Panel B). Etter sentrifugering, finnes det tre lag av fettvev: olje (høy lag), homogen fett (middels lag) og blod væske (nederste lag) (Panel C). Observere røret med blod umiddelbart etter sentrifugering. Det er tre lag: blodplater dårlig plasma (PPP), blodplater rik plasma (PRP) og erytrocytter (Panel D). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3 : Beste korrigert synsskarphet (BCVA) i tørr age-makuladegenerasjon (AMD). Endre gruppe A etter suprachoroidal autologous pode av Limoli Retinal restaurering teknikk (LRRT) og kontrollgruppen (sjekk), målt i tid 0 (T0), 90 (T90) og 180 (T180) dager. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 4
Figur 4 : Microperimetry (min) i en pasient av A. Tørr aldersrelatert makuladegenerasjon (AMD) seks måneder etter Limoli Retinal restaurering teknikk (LRRT). MIN økt fra 11.44 dB (T0) til 12.59 dB (T180) (+9.58%). Fargeskala fra 0 til 36 i dB. Fiksering stabilitet: stabil, relativt ustabil, ustabil. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Inklusjonskriterier Utelukkelse kriterier
Kaukasisk fag Refraktiv feil med sfærisk tilsvarende > 6 D
Godt næret deltakere Tegn på exudative AMD av SD-oktober og FA
Diagnose av SD-oktober, AFI og FA Okulære lidelser: CT, GL, ON, MP, VM, CRD, etc.
Målbare VA Okulære traumer
BCVA ≥1 logMAR Systemiske sykdommer: MS; PD; DM; RD; HD; vaskulitt
Normal IOP Hypertensjon, kreft og andre systemiske sykdommer
God extrafoveal lagringsområder
LogMAR: logaritmen til minimum vinkelen på oppløsning. SD-oktober: spectral domene-optical coherence tomografi; AFI: autofluorescence imaging; FA: fluorescein angiography; VA: synsskarphet; IOP: intraokulært trykk; D: diopter; CT: cataract; GL: glaukom; PÅ: optisk nevritt; MP: macula pucker; VM: neovascular membraner; CRD: chorioretinal sykdom; MS: multippel sklerose; PD: Parkinsons sykdom; DM: diabetes mellitus; ES: nyre sykdommer; HD: hepatic sykdommer.

Tabell 1: Inkludering og ekskludering kriterier for tørr age-makuladegenerasjon (AMD) pasienter.

PARAMETERE LRRT (n = 11) Kontroll (n = 14)
Alder (gjennomsnitt) 71.5 ±3.8SD 80,4 ±2.3SD
Alder (varierer) 62 - 84 73 - 79
sex F: 4 M:7 F:7 M:7
BCVA T0 0.581 logMAR 0.573 logMAR
(gjennomsnitt)
BCVA T0 (varierer) 0.301 - 1.0 0,0 - 1.0
BCVA T90 (gjennomsnitt) 0.504 logMAR 0.587 logMAR
BCVA T90 (varierer) 0.222 - 1 0,0 - 1
BCVA T180 (gjennomsnitt) 0.376 logMAR 0.601 logMAR
BCVA T180 (utvalg) 0.046 - 0.699 0,0 - 1.0
Prosent 35.19 4,72
endre
p-verdi < 0,01 > 0,5
Alder i år; n = pasienter og kontroller. SD = standardavvik; F = kvinne. M = menn BCVA = best korrigert synsskarphet i logMAR; T0 = opprinnelig før operasjon autograft; T90 = 90 dager innlegg kirurgiske autograft; T180 = 180 dager innlegg kirurgiske autograft.

Tabell 2: klinisk profiler av pasienter undersøkt i studien. Gjennomsnittlige verdier registrert før (T0), 90 (T90) og 180 (T180) dager etter celle autograft av Limoli Retinal restaurering teknikk (LRRT) i alle pasienter.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Hovedformålet med denne studien var å vurdere om suprachoroidal graftet av adipocytter, ADSCs i sendinger, og PRP kan forbedre VA og retinal følsomhet i tørre AMD-berørte øyne over tid. Et annet viktigste målet var å demonstrere mulig terapeutiske effekter av disse cellene, basert på den nyeste litteraturen, siden flere prekliniske studier har antydet at GF-basert terapi kan være nyttig for pasientbehandlingen i flere sykdommer.

Faktisk noen studier har vist at autologous menneskelige indusert pluripotent stamceller (iPSC) kan representere en cellulære kilden til graftet, rettet mot netthinnens pigment epitel (RPE) gjenfødelse vev erstatning terapi for AMD18, 19. disse celle ark genereres som en monolayer som kunne uttrykke typisk RPE indikatorer og utstillingen polarisert GF sekresjon, viser phagocytotic evne, samt genuttrykk mønster ligner de av innfødte RPE18,19 . På transplantasjon viste autologous ikke-menneskelige primas iPSC-RPE celle ark verken uimottakelig avvisning eller tumor formasjon18,19.

Studien presenterer noen forskjellige egenskaper. Vi analyserte direkte i tørr AMD-berørte menneskelige øyne om suprachoroidal autograft cellen kan forbedre visuelle ytelsen.

Dessuten sovrachoroidal pode autologous celleområde etter LRRT har alltid vist seg for å være trygg. Vi har aldri registrert sub retinal neovascularization, macular ødem, Netthinneavløsning, eller andre retinal problemer i første-års post intervensjon. På den annen side, upassende kirurgiske prosedyrer kan teoretisk sett føre til perforering av akkord med påfølgende blødning, men i vår forskning ikke ble skadet. Det er imidlertid mulig å ha sub-conjunctival blødning som er vanligvis reabsorbed innen få dager og viser ikke igjen som en komplikasjon.

Nyere studier har gitt rikelig bevis for en betydelig økning i scotopic ERG verdier, BCVA og min, 90 og 180 dager legge autologous pode. Økningen ble imidlertid større hvis retinal tykkelse gjennomsnittet (RTA) registrert av SD-oktober var høyere11,26. Det antas at kirurgisk podet cellene kan produsere GFs i omkringliggende vev, akkord og netthinnen, og at de har nevrotropisk og angiotrophic egenskaper, for eksempel grunnleggende fibroblast vekst faktor (bFGF), vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) , pigment-epitel-avledet faktor (PEDF), interleukin (IL), macrophage koloni-stimulerende faktor (M-CSF), granulocytt-macrophage koloni-stimulerende faktor (GM-CSF) og placental vekstfaktor (PlGF), mens blodplater produsere blodplater-avledet vokse faktor (PDGF), blodplater-avledet angiogenese faktor (PDAF), etc.,6,,7,,12,,13,,21

Pode plassering nær akkord antas å tillate de produsert GFs inn choroidal strømmen, for å nå den endothelial cellen reseptorer, RPEs, Muller celler, fotoreseptorer, og til slutt interaktive. I LRRT, autologous podet elementene er nyttig, hver på sin måte, for gjenfødelse. Fettceller produsere bFGF, epidermal vekstfaktor (EGF), insulin-lignende vekstfaktor-1 (IGF-1), IL, transformere vekstfaktor β (TGF-β), PEDF og adiponectin21. ADSCs produserer bFGF, VEGF, M-CSF, GM-CSF, PlGF, TGF-β, hepatocyte vekstfaktor (HGF), IGF-1, IL og angiogenin6,7. Blodplater produsere PDGF, IGF-1, TGF-β, VEGF, bFGF, EGF, PDAF og thrombospondin (TSP)6,12.

Noen faktorer fremme endothelial gjenfødelse, og noen stimulere ADSC spredning, dermed favoriserer både autologous fett og adipocyte overlevelse, mens andre hemme neovascular prosesser22,23,24. PEDF og bFGF fordel photoreceptor overlevelse, mens EGF utøver sin handling på Müller celler av utløser endogene bFGF transkripsjon og stimulere ADSCs for å øke deres sekretoriske aktivitet25,27. Om GFs er vanligvis skilles ut av RPEs, forekommer dette ikke i atrofier maculopathy som følge av RPE/choriocapillaris kompleks. Paracrine GF sekresjon av pode celler bidrar til favoriserer photoreceptor og choriocapillaris overlevelse28. Videre M-CSF, GM-CSF, og IL har anti-inflammatorisk og chemotactic virkninger på makrofager, som er involvert i eliminering av intraretinal celle rusk, en funksjon som er fysiologisk utført av RPEs29,30.

I celletyper podet bak akkord kan sikre konstant GF sekresjon i choroidal flyt. GFs kan komme fra akkord til netthinnen celler, samhandle med sine membran reseptorer og til slutt aktivere en intracellulær veien. De presenterte dataene tyder på at LRRT kan øke choroidal perfusjon og photoreceptor trophism ikke bare gjennom bFGF-reseptor interaksjoner, men også gjennom stimulering av Müller celler, RPEs og retinal fotoreseptorer. Resultatet kan gene expression endringer og siste antiapoptotic effekten forklare neuroenhancement. Denne mobilnettet mekanismen ligger under muligheten til å øke visuell ytelse, som fremhevet i de kliniske funnene i gruppen podet. I sammendraget, kan LRRT være nyttig å bevare funksjonen visuelle tørr AMD-berørte pasienter på lang sikt.

Men som vi har vist i tidligere studier, viser kjegle-rod ERG og rod ERG en svært signifikant sammenheng med RTA, dette er ikke tilfelle av membran ERG. Dette kan forklares ved at fovea funksjonen vises usikkert, selv om macula volumene i tørr AMD fortsetter å være regelmessig, minst i de innledende stadier26. I patologi, kan gjenværende retinal trophism målt ved RTA være et prognostiske kriterium for LRRT behandling, siden bedre resultater er hyppigere hos pasienter med RTA lik eller større enn 250 µm26. Tilgjengelige GF settet kan føre neuroenhancement, omfanget av som er proporsjonal med tilstedeværelse av områder med større cellularity, som er registrert av elektrisk aktivitet26. På et senere tidspunkt, ville dårlig vev cellularity ikke gi den terapeutiske effekten som søkt etter fremgangsmåten, på grunn av knappe GF-membran reseptor interaksjoner.

De neste trinnene i denne forskningen krever rekruttering av et større antall emner med større VA og sentrale fiksering av statistisk vurdere alle uunnværlig tester for å bekrefte at teknikken er gyldig og studere biokjemiske virkningene. Det kan hevdes at økningen i celle trophism gjenspeiles i cellen visuelle aktivitet, målt objektivt ERG, BCVA og min11. GF-basert terapi kunne skaffe en oppdatert, selektiv, trygt og rimelig behandling i ophthalmologic sykdommer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Presentert på ARVO 2015, mai 3-7-Denver, CO - USA.

Acknowledgments

Forfatterne har ingen takk.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Blunt cannula, 3 mm.  Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.  RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge  RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0 IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope  Nidek Inc, Fremont, CA Nidek F10 
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany  SD-OCT 
Maia 100809 Microperimetry  CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system, C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy  Retimax for ERG 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Daftarian, N., Kiani, S., Zahabi, A. Regenerative therapy for retinal disorders. J. Ophthalmic Vis. Res. 5, 250-264 (2010).
  2. Thanos, C., Emerich, D. Delivery of neurotrophic factors and therapeutic proteins for retinal diseases. Expert. Opin. Biol. Ther. 5, 1443-1452 (2005).
  3. Cao, W., et al. In vivo protection of photoreceptors from light damage by pigment epithelium-derived factor. Inv. Ophthalmol. Vis. Sci. 42, 1646-1652 (2001).
  4. Bhutto, I., Lutty, G. Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex. Mol. Aspects Med. 33 (4), 295-317 (2012).
  5. McHarg, S., Brace, N., Bishop, P. N., Clark, S. J. Enrichment of Bruch's membrane from human donor eyes. J. Vis. Exp. (105), (2015).
  6. Kevy, S. V., et al. Preparation of growth factor enriched autologous platelet gel. Transactions of the Society for Biomaterials 27th Annual Meeting. , St. Paul, Minnesota, USA. April 24-29 (2001).
  7. Schaffler, A., Buchler, C. Concise review: adipose tissue-derived stromal cells-basic and clinical implications for novel cell-based therapies. Stem Cells. 25, 818-882 (2007).
  8. Filatov, V. P. Tissue therapy. Med. Gen. Fr. 11, 3-5 (1951).
  9. Pelaez, O. Retinitis pigmentosa. Cuban experience. , Editorial Cientifico Técnica. La Habana, Cuba. (1997).
  10. Meduri, R., et al. Effect of basic fibroblast growth factor on the retinal degeneration of B6(A)- Rperd12/J (retinitis pigmentosa) mouse: a morphologic and ultrastructure study. ARVO 2007 Annual Meeting. , Fort Lauderdale. May 6-10 (2007).
  11. Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Morales, M. U., Nebbioso, M., Limoli, C. Preliminary Study on Electrophysiological Changes After Cellular Autograft in Age-Related Macular Degeneration. Medicine. 93 (29), 355 (2014).
  12. Tischler, M. Platelet rich plasma: The use of autologous growth factors to enhance bone and soft tissue grafts. N. Y. State Dent. J. 68, 22 (2002).
  13. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).
  14. Lin, K. J., et al. Topical administration of orbital fat-derived stem cells promotes corneal tissue regeneration. Stem Cell Res. Ther. 4 (3), 72 (2013).
  15. Limoli, P. The retinal cell-neurorigeneration. Principles, applications and perspectives. The growth factors. , FGE Reg. Canelli (AT). 159-206 (2014).
  16. Coleman, W. P., et al. Guidelines of care for liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 45, 438-447 (2001).
  17. Lawrence, N., Coleman, W. P. Liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 47, 105-108 (2002).
  18. Kamao, H., et al. Characterization of human induced pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelium cell sheets aiming for clinical application. Stem Cell Reports. 23 (2), 205-218 (2014).
  19. Dang, Y., Zhang, C., Zhu, Y. Stem cell therapies for age-related macular degeneration: the past, present, and future. Clin. Interv. Aging. 10, 255-264 (2015).
  20. Nebbioso, M., Livani, M. L., Steigerwalt, R. D., Panetta, V., Rispoli, E. Retina in rheumatic diseases: Standard full field and multifocal electroretinography in hydroxychloroquine. Clin. Exp. Optom. 94 (3), 276-283 (2011).
  21. Wang, P., Mariman, E., Renes, J., Keijer, J. The secretory function of adipocytes in the physiology of white adipose tissue. J. Cell. Physiol. 216, 3-13 (2008).
  22. Chen, G., et al. VEGF-Mediated Proliferation of Human Adipose Tissue-Derived Stem Cells. PloS One. 8, 73673 (2013).
  23. Bagchi, M., et al. Vascular endothelial growth factor is important for brown adipose tissue development and maintenance. FASEB J. 27, 3257-3271 (2013).
  24. Carron, J. A., et al. Cultured human retinal pigment epithelial cells differentially express thrombospondin-1, -2, -3,and -4. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 32, 1137-1142 (2000).
  25. Kim, S. Y., et al. Expression of pigment epithelium-derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in sickle cell retina and choroid. Exp. Eye Res. 77, 433-445 (2003).
  26. Limoli, P. G., Limoli, C., Vingolo, E. M., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Cell surgery and growth factors in dry age-related macular degeneration: visual prognosis and morphological study. Oncotarget. 7 (30), 46913-46923 (2016).
  27. Ueki, Y., Reh, T. A. EGF stimulates Müller glial proliferation via a BMP-dependent mechanism. Glia. 61, 778-789 (2013).
  28. Kozlowski, M. R. RPE cell senescence: A key contributor to age-related macular degeneration. Med. Hypotheses. 78, 505-510 (2012).
  29. Schneider, A., et al. The hematopoietic factor G-CSF is a neuronal ligand that counteracts programmed cell death and drives neurogenesis. J. Clin. Invest. 115, 2083-2098 (2015).
  30. Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat. Neurosci. 9, 843-852 (2006).

Tags

Medisin problemet 132 alder makuladegenerasjon Best korrigert synsskarphet (BCVA) Autologous cellen pode Electroretinogram vekst faktor (GF) Limoli Retinal restaurering teknikk (LRRT) Microperimetry regenerativ therapy Suprachoroidal autograft
Regenerativ Therapy av Suprachoroidal celle Autograft i tørr aldersrelatert makuladegenerasjon: Foreløpig <em>i Vivo</em> rapport
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Limoli, P. G., Vingolo, E. M.,… More

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter