Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

משובי טיפול על ידי תא Suprachoroidal בשתל ב ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש: דוח ראשוני In Vivo

Published: February 12, 2018 doi: 10.3791/56469
Automatic Translation
1, 2, 1, 3, 4
1Low Vision Research Centre of Milan, 2Department of Ophthalmology, A. Fiorini Hospital, Sapienza University of Rome, 3Glaucoma and Low Vision Study Center, Department of General Surgery and Organ Transplants, University of Bologna, 4Department of Sense Organs, Faculty of Medicine and Odontology, Sapienza University of Rome

Summary

מטרת מחקר זה היא להעריך האם השתל suprachoroidal של שומן, נגזר תאי גזע הכלולים השבר בכלי הדם סטרומה, טסיות נגזר טסית דם עשיר פלזמה בטכניקת שיקום רשתית Limoli יכול לשפר את חדות הראייה, תגובות רגישות הרשתית בעיניים מושפע ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש.

Abstract

מחקר זה נועד לבחון אם שתל suprachoroidal של תאים עצמיים יכול לשפר בצורה הטובה ביותר המתוקן חדות ראייה (BCVA) ואת התגובות microperimetry (שלי) בעיניים מושפע יבש הקשורות לגיל ניוון מקולרי (AMD) לאורך זמן באמצעות ייצור והפרשת גורמי גדילה (GFs) על הרקמה שמסביב. המטופלים חולקו באופן אקראי לקבוצת הלימוד כל אחד. כל החולים אובחנו עם AMD יבש ועם BCVA שווה או גדול מ- 1 לוגריתם של הזווית המינימלית של רזולוציה (logMAR). שתל אוטולוגי suprachoroidal על ידי טכניקת השחזור רשתית Limoli (LRRT) בוצע על קבוצה א' שכלל 11 עיניים מ- 11 מטופלים. הטכניקה בוצעה על ידי השתלת adipocytes, נגזר שומן בתאי גזע המתקבל על סטרומה השבר בכלי הדם, וכן טסיות של טסיות דם עשיר פלזמה במרחב suprachoroidal. לעומת זאת, קבוצה B, כולל העיניים 14 מתוך 14 חולים, שימש כקבוצת בקרה. עבור כל מטופל, האבחנה אומתה על ידי קונאפוקלית ophthalmoscope לייזר סריקה ו טומוגרפיה ספקטרלי תחום-אופטית קוהרנטית (SD-אוקטובר). קבוצה a, BCVA משופרת על ידי 0.581 כדי 0.504-90 יום, 0.376 logMAR-180 ימים (+32.20%) במשככי. יתר על כן, המבחן שלי עלה ב- dB 11.44 ל 12.59 dB ב 180 ימים. סוגי תאים שונים הושתל מאחורי דמית הצליחו להבטיח קבוע הפרשת GF בזרם חיבור. כתוצאה מכך, התוצאות מצביעות על כי חדות חזותית (וי אי) בקבוצה המושתל יכול להגביר יותר מאשר בקבוצת הביקורת לאחר שישה חודשים.

Introduction

טיפול בתאי, המורכב הזרקה מקומית או מערכתית של גזע/ובתאים באזור הפגוע לטיפול בהפרעות כרוניות מרובות, מה משך תשומת לב בעשור האחרון1. מאז שנות ה-90, גורמי גדילה (GFs) נחקרו על תפקידו טיפולית פוטנציאל ניוון רשתית2. למעשה, תאים אנושיים רבים יכול לייצר GFs, שהינם חלבונים ספציפיים מסוגלים לחסום או להאט אפופטוזיס, כלומר, מוות מתוכנת של תאים3.

זה ידוע כי יבש הקשורות לגיל ניוון מקולרי (AMD) הוא מחלה ברשתית מנוונת איפה מוות תאי הדרגתית ובלתי הפיכה כרוכה פגיעה בשכבת קולט אור, וכתוצאה מכך איבוד תפקיד הראייה המרכזית4. AMD היא הגורם המוביל לעיוורון בקרב אנשים מעל גיל 55 המדינות המפותחות, חשבונות עבור 80% של כל degenerations מקולרי, שחסרה טיפול יעיל עד כה.

מספר מחקרים הראו כי ישנם מקורות שונים שמהם ניתן להשיג GFs עצמיים. אלה מהווים לסוגי תאים שונים, לרבות אדיפוז סטרומה תאים שמקורם שומן מסלולית טסיות נגזר טסית דם עשיר פלזמה (PRP), נגזר שומן בתאי גזע (ADSCs) כלול השבר בכלי הדם סטרומה (SVF) של רקמת שומן5 6, ,7. בערכה GF הנוכחית מבטיחה neuroenhancement ברשתית, מחקר שנערך על ידי Filatov, Meduri, פלאז ולאחר Limoli הוכיחה כי השתלת שומן עצמיים (AFT) הוא יעיל8,9,10.

יתר על כן, מחקר קודם הראה שיפור משמעותי בנתונים electroretinogram (ארג), הקליט שתל אוטולוגי של suprachoroidal פוסט, יובש בעיניים מושפעות AMD11. הרקמה בניתוח המושתל בחלל suprachoroidal מאופנן הפרשה paracrine של תאים ברשתית, עיכוב שלהם אפופטוזיס6,7,12. בהתחשב עובי השכבה החיצונית גרעינית, בחינה היסטולוגית של הרשתית של שרקנים הראו כי GFs יכולת השפעה עם מחלות על הרשתית. לכן, השימוש ישיר או עקיף של GFs יכול להביא פוטנציאל היתרונות הטיפוליים באמצעות יחס מאוזן בין מולקולרי inducers מעכבי6,7,12.

המטרה של שיטה זו היא להעריך השתל suprachoroidal של adipocytes, ADSCs SVF ו PRP יכול לשפר את הטוב מתוקן חדות ראייה (BCVA) ותגובות microperimetry (שלי) בעיניים מושפעות AMD יבש. מחקר זה נועד להפגין את האפקט הטיפולי של בשתל על בסיס הייצור GF שלה, על פי הספרות מצוטט6,7,12,13.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

פרוטוקול המחקר אושרה על ידי ועדת האתיקה של האקדמיה ראייה נמוכים, בכל המקצועות חתם על הסכמה בכתב על פי הצהרת הלסינקי. זה מחקר קיבלה אישור מוסרי פתח תקווה וגם אוניברסיטאות שפילד.

הערה: הקריטריונים והדרה של חולי ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש לקבל שתל אוטולוגי של suprachoroidal על ידי טכניקת השחזור רשתית Limoli (LRRT) מתוארת בטבלה1.

1. אבחון של חולי ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש

  1. לברר את האבחנה עם קונאפוקלית סריקת לייזר ophthalmoscope, SD-אוקטובר שלי.
  2. הערך BCVA של כל קבוצה עבור ומרחוק מרחק. מדד VA החזון ליד (תקריב) בנקודות (נק). BCVA בזמן 0 (T0), 90 (T90), וכולן 180 ימים (T180) לעומת לימוד רטינופתיה סוכרתית טיפול מוקדם (EDTRS) תרשימים 4 מטרים logMAR.
  3. Mesopic scotopic, חשמליות הרשומה, פעילות התאים photopic, או ארג פלאש, על-פי בסטנדרטים שנקבעו בשנת 2009 על ידי האגודה הבינלאומית קליניים אלקטרופיזיולוגיה של חזון (ISCEV)11.

2. ההרדמה

הערה: תקן הזהב בהרדמה במהלך LRRT היא הרדמה מקומי, מחוזקת על-ידי sub-לגלף קוצים של הסתננות של הרדמה וטשטוש. במקרים מסוימים, הרדמה כללית היא עדיפה.

  1. להשיג את הקרנית, הרדמה conjunctival על-ידי החלת הרדמה מקומית אקטואלי החדירו dropwise 15-20 דקות לפני הניתוח עם לידוקאין ב 4%, ropivacaine-1%.
  2. להזריק הרדמה על-ידי הסתננות ישירות לתוך sub-conjunctival של subtenon רווחים.
  3. השתמש חדירה מקומי באזור הבטן, לפני ובינות לרקמה מופק, והן את תת-conjunctival ו- sub-לגלף קוצים של הרווחים, 12 מ מ לימבוס. לאמץ הרדמה מקומית של carbocaine או marcain מעורבב עם 1200 IU אפינפרין.
  4. לספק הרגעה פוסט ניתוחית דרך ההרדמה, אשר יכול להתבצע כראוי באמצעות פנטניל כמו משכך כאבים נרקוטיים דרך boli קטנות חוזרות ונשנות. המינון הוא בדרך כלל 0.025 mg פנטניל עם 1 מ ג של midazolam לכל בולוס.

3. Limoli רשתית שיקום טכניקת הכנה

הערה: טכניקה זו מייצגת משתנה של ההתערבות של פלאז שבו השומן autologous מסלולית מושתלים ב subscleral שטח1,6,7,12. תאי המושתל בניתוח יכול לייצר GFs רבים עם neurotrophic ו- angiotrophic הרקמה הסובבת, דמית העין ולאחר רשתית18,19,20,21,22 ,23,24,25. LRRT, המרחק בין תאים עצמיים המושתל דמית העין הוא מופחת על-ידי sclerectomy עמוק, ועל איזור המגע בין גבעול דמית העין היא מורחבת כדי לקדם את הפרשה תא עצמיים paracrine לתוך זרימת חיבור9, 10,14.

  1. ביצוע חיטוי נאות של כל עין לפני הניתוח עם הרכבה הסלולר בין דמית העין ו בסקלרה, הליך שנקרא בטכניקת שיקום רשתית Limoli (LRRT)15,16,17.
  2. להשתיל את ADSCs, מתקבל על ידי קולמן. et al. , הטכניקה של לורנס (איור 1) של שומן בבטן, ב SVF16,1715,שטח sovrachoroidal.
  3. Pedicle אדיפוז לחדור עם טסיות נגזר ג'ל PRP מושגת באמצעות השלבים הבאים.
  4. צנטריפוגה6,דם12 ולאסוף טסיות דם עשיר פלזמה (PRP). הגירוי degranulation טסיות גורמת לשחרור GF pedicle אדיפוז6,12.

4. פרטים טכניים ואסטרטגיה

הערה: רקמת השומן נאסף, מטוהרים מן השכבה התת עורית בטן של המטופלים, על פי ה לורנס וקולמן טכניקה17(טבלה של חומרים).

  1. באופן ידני קציר 10 מ"ל של רקמות שומן מן השכבה התת עורית הבטן של כל מטופל, השימוש בצינורית בוטה של 3 מ מ מחובר מזרק נעילה, על פי ה לורנס וקולמן טכניקה17 (דמויות 2A/2B).
  2. הפרד SVF טהור של רקמת שומן בדם, שמן, שמן, נוזל על ידי צנטריפוגה למשך 5 דקות ב g 1,500 x ב- 20 ° C (איור 2C). SVF הוא עשיר מאוד של ADSCs17.
  3. לאסוף 8 מ"ל של דם היקפיים אנושי עם מחט 22 גר', בשפופרת נפרד להכנה PRP.
  4. Centrifuge הדם שנאספו במשך 5 דקות ב g x 1,500 ב- 20 ° C (איור 2D). ב- LRRT, התוצאה שינויים שהתפתח יותר ההישרדות של השתל שומן עצמיים, התפשטות ADSC, אשר מעדיף זלוף חיבור מוגברת, ו של אפנון מקיף יותר של הפעולה של גורמים אלו המופרשים רק שומן7, 11,17.
  5. לבנות את הכיס suprachoroidal (פרטים נוספים בשלב 4, 4.4 מסוים ואת 4.5) כדי להכיל את השתל המתקבל שומן מסלולית וירווה נפח שיורית זו כיס בתערובת של ADSCs לבין SVF PRP, שהושג על-פי לורנס ו קולמן טכניקה17.

5. Suprachoroidal בשתל מאת LRRT (טכניקת השחזור Limoli רשתית): הליך כירורגי, פרטים טכניים

  1. לעגן את sclera 6-0 בתפר משי, ליד לימבוס נחות-טמפורלית.
  2. תפתח את החלל מתחת ללחמית ו- subtenonian ב- 11 מ מ לימבוס נחות-זמנית, באמצעות 5.5" מספריים מעוגלים ווסטקוט Tenetomy.
  3. הכנס את המדחק conjunctival Limoli-באזיל במרחב הזה כדי להפוך לשדה כירורגי scleral.
  4. מראש באמצעות סכין סהרון 5 מ מ זווית שיקוע, לחתוך דש בצד בסקלרה-8 מ מ, מ לימבוס. הציר דש היא תמיד רדיאלי, בצד שמאל של המנתח.
  5. ברביע נחות-טמפורלית, ב- 8 מ מ לימבוס, לפתוח דלת scleral עמוק של-5 מ"מ בצד על ידי ציר רדיאלי באמצעות עם הסכין חרמש, המשופעת בזווית למעלה. לבצע את sclerectomy בעומק נאותה כדי להציג את צבע צפחה דמית.
  6. ליצור פער על-ידי הסרת operculum קטן בחלקו האחורי של הכנף, על מנת להקל על זרימת הדם בשתל suprachoroidal הבאים.
  7. לחלץ עם מלקחיים ophthalmological השומן מסלולית מפרצה מעל השריר המלוכסן נחות. ודא שהשומן שחולצו vascularized הוא מספיק כדי לאפשר לו לשרוד לאחר ההשתלה שלו.
  8. הנח בעדינות הכנף שומן עצמיים על המיטה חיבור ו התפר עם חיבור סיבי polyglactin 6/0 בקצה הפרוקסימלית של הדלת.
  9. תפר הכנף scleral כדי להימנע דחיסה pedicle השמן או על הקערות התזונתי.
  10. לחדור stroma של pedicle שמן עם 1 מ ל ג'ל PRP (מתקבל על ידי צנטריפוגה של החומר בדם, ההפרדה של רכיב, ושל טסיות degranulation26) באמצעות בצינורית זוויתי (30 מעלות) של 30 גרם.
  11. להכין את הצדדים של הלחמית התפר. לאחר מכן, הסר את המדחק conjunctival.
  12. תפר הלחמית, באמצעות סיבים polyglactin 6/0.
  13. לפני הסגירה, השאר רווח כדי להוסיף לתוך המרחב subscleral, בין הכנף, דמית בשתל חיבור, צינורית קטנה פלסטיק גמיש עם השתל שומן עצמיים.
  14. להרוות את החלל שיורית בין השתלת שומן עצמיים, דמית העין, scleral מדפים עם 0.5 cc SVF (עשיר של ADSCs), שהוכנו בעבר שלב 3.2, על ידי צינורית פלסטיק גמיש קטנה, מוכנס לתוך הכיס scleral.
  15. לאחר קולח המרחב שיורית, סגור את התפר.
  16. לאחר הניתוח, לנהל שלושה ימים של טיפול אנטיביוטי עם 500 מ ג azithromycin. בנוסף, מספקים העין ושחרור טיפול בשילוב אנטיביוטיקה, סטרואידים, כגון כלורמפניקול ו- Betamethasone, בערך 15-20 ימים.
    הערה: בשתל מורכב של תאי שומן, ADSCs מתוך SVF ולאחר PRP עכשיו התקבל26. לצמצם את המרחק בין תאים עצמיים המושתל דמית העין מאת sclerectomy עמוק כדי לעורר הפרשת paracrine תאים עצמיים לזרם חיבור. לאותה מטרה, הרחב את שטח המגע בין גבעול דמית העין.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

באמצעות ההליך המובאת כאן, שתי קבוצות המטופלים יבש מושפעות AMD, עם BCVA השווה או גדול מ- 1 לוגריתם של הזווית המינימלית של רזולוציה (logMAR), נרשמו המחקר. קבוצה A, כולל העיניים 11 מתוך 11 חולים, שתל אוטולוגי suprachoroidal שהתקבלו על-ידי Limoli רשתית שיקום טכניקה (LRRT), ואילו קבוצה ב', כולל 14 עיני 14 חולים, שימש כקבוצת בקרה.

מבחן t של סטודנט במבחן מרובע צ'י שימשו כדי להשוות, בהתאמה, הגיל הממוצע והמין בין קבוצות המחקר שני (טבלה 2). ניתוחים סטטיסטיים, ויזואליזציה של נתונים בוצעו לפני ואחרי ניתוח LRRT.

מבחן דרגה חתום Wilcoxon-מאן-ויטני בוצע כדי לקבוע אם ההבדלים מראש, שלאחר הטיפול היו משמעותיים. זו מבחן השערות ללא פרמטרי הוחל כדי להשוות בין שני מדגמים תלויים כאשר האוכלוסייה אי אפשר להניח יחולקו בדרך כלל, כמו במקרה זה. ערכים VA נמדדו בכל שלב של הניתוח. מובהקות סטטיסטית נקבע על ערך p <0.05.

11 עיני (6 צודק, 5 שמאל עיניים) לחולים 11 (7 זכר ו 4 נשים) לקביעת אבחנה קלינית של AMD יבש נבדק במחקר זה. גיל החולה נע בין 62 אל 84 שנים, עם עידן מתכוון 71.5 שנים (± 3.8 SD).

בטבלה 2 מספק מבט אחד מהפרופילים קליני של חולים שטופלו LRRT, ואת ערכי ממוצע שנרשם ב 0 (T0), 90 (T90) ו- 180 (T180) ימים לאחר הניתוח. תופעות לוואי דווחו תמיד כדי להבטיח בטיחות מרבית. ערכי הממוצע של לחץ תוך-עיני להקליט 0 (T0), 90 (T90) ו- 180 יום (T180) לאחר ניתוח איננה מתעדת כל שינוי משמעותי.

תוצאות לאחר הניתוח LRRT היו כדלקמן:
קבוצה a, BCVA משתנה מ- 0.581 (T0) preoperatively 0.504-90 יום (T90), logMAR 0.376-180 ימים (T180) עם עלייה משמעותית של 35.20% (p < 0.01). בשליטה קבוצה ב', כולל 14 עיני 14 חולים, 7 זכרים ונקבות 7, עם והגיל הממוצע של שנים 80.4, SD ± 2.3, BCVA משתנה מ- 0.573 (T0) כדי 0.587 (T90), ולהקטין את 0.601 logMAR (T180) עם ממוצע שאינו משמעותי 4.72% (טבלה 2) (איור 3 ). קבוצה a, המבחן שלי גדלה באופן משמעותי מ dB 11.44 (T0) אל 12.59 dB (T180) (+9.58%) (איור 4), ואילו היה שיפור משמעותי בערכים לאחר הניתוח בקבוצה B.

Figure 1
איור 1 : ייצוג שתל אוטולוגי suprachoroidal. גורמי גדילה (GFs) המיוצר על ידי תאי אדיפוז, טסיות דם עשיר פלזמה (PRP), ולהגיע נגזר שומן בתאי גזע (ADSCs) ברקמות חיבור של הרשתית דרך אפיתל הפיגמנט ברשתית (RPE). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2 : הליך טכני. בצינורית ומשיכה עוקבות של רקמת שומן מאזור הבטן (לוח א'). הצינורית עוברת השומן התת עורית עם שאיפה קלה על ידי כ רפה בעברית תאי שומן לתוך לומן משלו (לוח ב'). לאחר צנטריפוגה, ישנן שלוש-שכבות של רקמת שומן: שמן (שכבה גבוהה), שומן הומוגנית (שכבת ביניים), נוזל הדם (שכבה נמוכה יותר) (לוח C). לבחון את הצינור עם דם מיד לאחר צנטריפוגה. שלוש שכבות: פלזמה המסכן טסיות (PPP), טסיות דם עשיר פלזמה (PRP) ואריתרוציטים (לוח D). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3 : מחירי תוקנה חדות ראייה (BCVA) ביבש הקשורות לגיל ניוון מקולרי (AMD). שינוי קבוצה A לאחר שתל אוטולוגי של suprachoroidal על ידי טכניקת השחזור רשתית Limoli (LRRT), וכן קבוצת הביקורת (בדוק), נמדד הזמן 0 (T0), 90 (T90) ו- 180 (T180) ימים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4 : Microperimetry (שלי) לחולה בקבוצת א יבש הקשורות לגיל ניוון מקולרי (AMD) שישה חודשים לאחר בטכניקת שיקום רשתית Limoli (LRRT). שלי גדל מ 11.44 dB (T0) כדי 12.59 dB (T180) (+9.58%). צבע סולם שבין 0 ל- 36 ב- dB. קיבוע יציבות: יציב, יציב יחסית, לא יציב. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

קריטריוני ההכללה ההשתלה?
נושאים קווקזי שגיאות השבירה עם המקבילה כדורית > ד 6
המשתתפים ניזונים היטב סימנים של AMD exudative על ידי SD-אוקטובר ו פא
אבחון על ידי SD-אוקטובר, אפי, פא הפרעות עינית: CT, GL, על, MP, VM, CRD, וכו '.
מדיד VA טראומה עינית
BCVA ≥1 logMAR מחלות מערכתיות: MS; המשטרה; DM; רואד; HD; דלקת כלי דם
IOP נורמלי יתר לחץ דם, סרטן ומחלות מערכתיות אחרות
אזורי אחסון extrafoveal
LogMAR: לוגריתם של הזווית המינימלית של רזולוציה; SD-אוקטובר: טומוגרפיה ספקטרלי תחום-אופטית קוהרנטית; אפי: autofluorescence הדמיה; פא: מסתמים fluorescein; VA: חדות ראייה; IOP: לחץ תוך-עיני; D: diopters; CT: קטרקט; GL: גלאוקומה; על: לדלקת בעצה הראייה; MP: כיווץ מקולרי; VM: קרום neovascular; CRD: מחלת chorioretinal; MS: טרשת נפוצה; המשטרה: מחלת פרקינסון; מיט: סוכרת; RD: מחלות כליות; HD: מחלות הכבד.

טבלה 1: קריטריונים והדרה לחולים יבש הקשורות לגיל ניוון מקולרי (AMD).

פרמטרים LRRT (n = 11) שליטה (n = 14)
גיל (ממוצע) 71.5 ±3.8SD 80.4 ±2.3SD
גיל (טווח) 62 - 84 73 - 79
סקס F:4 M:7 F:7 M:7
BCVA T0 0.581 logMAR 0.573 logMAR
(ממוצע)
BCVA T0 (טווח) 0.301 - 1.0 0.0 - 1.0
BCVA T90 (ממוצע) 0.504 logMAR 0.587 logMAR
BCVA T90 (טווח) 0.222 - 1 0.0 - 1
BCVA T180 (ממוצע) 0.376 logMAR 0.601 logMAR
BCVA T180 (טווח) 0.046 - 0.699 0.0 - 1.0
אחוז 35.19 4.72
שינוי
ערך p < 0.01 > 0.5
גיל ב שנים; n = החולים בקרות; SD = סטיית תקן; F = נקבה; M = זכר; BCVA = הטוב המתוקן חדות הראייה ב logMAR; T0 = בסיסית לפני הניתוח בשתל; T90 = 90 יום כירורגי פוסט בשתל; T180 = בשתל פוסט ניתוחי 180 ימים.

בטבלה 2: פרופילים קליניים מהחולים שנבדקו במחקר. ממוצע הערכים שהוקלט לפני (T0), 90 (T90), ו- 180 ימים (T180) לאחר בשתל התא על ידי טכניקת השחזור רשתית Limoli (LRRT) בחולים כל.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

המטרה העיקרית של מחקר זה היה להעריך השתל suprachoroidal של adipocytes, ADSCs SVF ולאחר PRP יכול לשפר VA ורגישות הרשתית בעיניים מושפעות AMD יבש לאורך זמן. המטרה העיקרית נוספת הייתה להפגין תופעות טיפוליות אפשריות של תאים אלה, בהתבסס על הספרות האחרונות, מאז פרה מספר מחקרים הראו כי טיפול מבוסס-GF יכול להיות שימושי עבור הטיפול הרפואי במחלות מספר.

למעשה, מחקרים הראו עצמיים האנושי המושרה גזע pluripotent (iPSC) יכול לייצג מקור הסלולר עבור השתל, מכוון הפיגמנט ברשתית אפיתל (RPE) התחדשות רקמות טיפול החלפת AMD18, 19. גליונות תאים אלה נוצרים כמו טפט אשר יכול לבטא סמני RPE טיפוסי ולהציג מקוטב GF הפרשת, מראה יכולת phagocytotic, כמו גם גנים דפוסים דומים לאלה של יליד RPE18,19 . לאחר ההשתלה, פרימטים אנושיות עצמיים iPSC-RPE תא גליונות הראה גם המערכת החיסונית דחייה או גידול היווצרות18,19.

המחקר הנוכחי מציג כמה מאפיינים שונים. ניתחנו ישירות העיניים האנושיות מושפעות AMD יבשה אם התא בשתל suprachoroidal יכול לשפר ביצועים ויזואליים.

חוץ מזה, sovrachoroidal שתל של תאים עצמיים על פי LRRT הוכיחה תמיד כדי להיות בטוחים. אנחנו אף פעם לא רשומים כורוידאלית תת רשתית, בצקת מקולרית, הרשתיות, או בעיות אחרות ברשתית במהלך השנה הראשונה לפרסם התערבות. מצד שני, ניתוחים לא הולם יכול תיאורטית להוביל לחירור של דמית עם דימום שלאחר מכן, אך במחקר שלנו עין לא נגרם נזק. עם זאת, ניתן לקבל דימום תת-conjunctival הוא נספג מחדש בדרך כלל תוך מספר ימים, אינו מציג שוב כמו סיבוך.

המחקרים האחרונים סיפקו ראיות המלמדות על עלייה משמעותית בערכים ארג scotopic, BCVA, שלי, 90, 180 ימים פוסט שתל אוטולוגי. עם זאת, העלייה היה גדול אם הממוצע עובי הרשתית (RTA) שהוקלט על ידי SD-אוקטובר11,גבוה26. הוא האמין כי תאי המושתל בניתוח יכול לייצר GFs שמסביב רקמות, דמית העין ולאחר רשתית, ויש להם מאפיינים neurotrophic, angiotrophic, כגון בסיסי פיברובלסט גורם גידול (bFGF), כלי הדם צמיחה אנדותל (VEGF) , פיגמנט-אפיתל-derived factor (PEDF), אינטרלויקין (IL), פקטור המושבה-מגרה מקרופאג (M-CSF), פקטור המושבה-מגרה גרנולוציט-מקרופאג (GM-CSF) ו פקטורי גדילה היפרדות (PlGF), בעוד טסיות לייצר נגזר טסית לגדול פקטור דם (PDGF), נגזר טסית אנגיוגנזה פקטור (PDAF), ועוד6,7,12,13,21

מיקום השתל ליד דמית העין הוא האמין כדי לאפשר את GFs המיוצר להזין את זרימת חיבור, כדי להגיע תא אנדותל רצפטורים, RPEs, מולר תאים, photoreceptors, ולבסוף לתקשר איתם. ב- LRRT, האלמנטים המושתל אוטולוגי שימושיים, כל אחד בדרכו, ההתחדשות. תאי השומן לייצר bFGF, גורם הגדילה באפידרמיס (EGF), פקטורי גדילה דמויי אינסולין 1 (IGF-1), איל, גורם הצמיחה הפיכת β (TGF-β), PEDF, אדיפונקטין21. ADSCs לייצר bFGF, VEGF, M-CSF, GM-CSF, PlGF, TGF-β, גורם הגדילה hepatocyte (דבורה שחר), IGF-1, IL, ו6,angiogenin7. טסיות הדם לייצר PDGF, IGF-1, TGF-β, VEGF, bFGF, EGF, PDAF ו6,thrombospondin (כפית)12.

כמה גורמים לקדם התחדשות אנדותל, ולעורר כמה התפשטות ADSC, וכך העדפה השומן autologous והן adipocyte הישרדות, בעוד אחרים לעכב neovascular תהליכים22,23,24. PEDF ו- bFGF טובה הישרדות קולט אור, ואילו EGF מפעילה פעולתה על תאים מולר על ידי מפעילה שעתוק bFGF אנדוגני ועירור ADSCs להגדיל פעילות הפרשה שלהם,25,27. למרות GFs המופרשים בדרך כלל RPEs, זה אינו מתרחש ב maculopathy מנוונת כתוצאה RPE/choriocapillaris מורכבים. הפרשת Paracrine GF על ידי השתלת תאים תורמת העדפה הישרדות קולט אור, choriocapillaris28. יתר על כן, M-CSF, GM-CSF, ו IL יש השפעות אנטי דלקתיות, chemotactic על מקרופאגים, אשר מעורבים חיסול של שאריות תאים intraretinal, פונקציה פיזיולוגית מתבצעת על ידי RPEs29,30.

סוגי תאים הושתל מאחורי דמית העין יכול להבטיח קבוע הפרשת GF בזרם חיבור. GFs יכול מגיעים אל תאי הרשתית דמית אינטראקציה עם קולטני ממברנה שלהם, ולבסוף להפעיל על מסלול תאיים. הנתונים שהוצגו מראים כי LRRT יכול להגביר זלוף חיבור ו- trophism קולט אור לא רק דרך אינטראקציות קולטן bFGF, אלא גם באמצעות גירוי על ידי תאים מולר, RPEs ו photoreceptors ברשתית. כתוצאה מכך, שינויים בביטוי הגנים ועל ההשפעה antiapoptotic הסופי יכול להסביר את neuroenhancement. מנגנון הסלולר זה ביסוד את היכולת לשפר את הביצועים חזותי, כפי שמודגש על הממצאים הקליניים בקבוצה המושתל. לסיכום, LRRT יכול להיות שימושי לשמר את הפונקציה חזותי של חולים מושפעות AMD יבש בטווח הארוך.

אולם, כפי הראו במחקרים קודמים, ארג קונוס-רוד רוד ארג מראים מתאם משמעותי ביותר עם RTA, בזמן זה לא המקרה של חרוט ארג. זו יכולה להיות מוסברת על ידי העובדה כי הפונקציה fovea מופיע לסיכון, למרות אמצעי האחסון מקולרי ב- AMD יבש ממשיך להיות קבוע, לפחות בשלבים הראשונים26. בפתולוגיה זו, trophism ברשתית שיורית נמדדת RTA יכול להיות קריטריון prognostic לטיפול LRRT, מאז תוצאות טובות יותר שכיחים יותר אצל חולים עם RTA שווה או גדול מ מיקרומטר 25026. ערכת GF זמין יכול לגרום neuroenhancement, היקף אשר הוא יחסי לנוכחות של אזורים עם יותר cellularity, כפי שנרשם על ידי פעילות חשמלית26. בשלב מאוחר יותר, cellularity רקמות המסכן לא תוותר השפעה טיפולית במקרה זה הוא ביקש לאחר ההליך, עקב הגומלין נדיר של קולטן GF-הממברנה.

השלבים הבאים של מחקר זה יחייב הגיוס של מספר גדול יותר של נושאים עם וי אי גדול, קיבוע המרכזית על-ידי הערכת סטטיסטית כל הבדיקות חיוני הדרוש כדי לוודא הטכניקה חוקית לחקור את ההשפעות הביוכימי. אפשר לטעון כי הגדלת תא trophism באה לידי ביטוי לפעילות תא חזותי, נמדדת באופן אובייקטיבי ארג, BCVA ושלי11. GF מבוסס טיפול יכול לספק טיפול עדכניים, סלקטיבי, בטוח, סביר במחלות ophthalmologic.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

הציג-2015 ארוו, מאי 3-7-דנוור - ארה ב.

Acknowledgments

המחברים לא תודות לך

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Blunt cannula, 3 mm.  Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.  RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge  RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0 IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope  Nidek Inc, Fremont, CA Nidek F10 
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany  SD-OCT 
Maia 100809 Microperimetry  CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system, C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy  Retimax for ERG 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Daftarian, N., Kiani, S., Zahabi, A. Regenerative therapy for retinal disorders. J. Ophthalmic Vis. Res. 5, 250-264 (2010).
  2. Thanos, C., Emerich, D. Delivery of neurotrophic factors and therapeutic proteins for retinal diseases. Expert. Opin. Biol. Ther. 5, 1443-1452 (2005).
  3. Cao, W., et al. In vivo protection of photoreceptors from light damage by pigment epithelium-derived factor. Inv. Ophthalmol. Vis. Sci. 42, 1646-1652 (2001).
  4. Bhutto, I., Lutty, G. Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex. Mol. Aspects Med. 33 (4), 295-317 (2012).
  5. McHarg, S., Brace, N., Bishop, P. N., Clark, S. J. Enrichment of Bruch's membrane from human donor eyes. J. Vis. Exp. (105), (2015).
  6. Kevy, S. V., et al. Preparation of growth factor enriched autologous platelet gel. Transactions of the Society for Biomaterials 27th Annual Meeting. , St. Paul, Minnesota, USA. April 24-29 (2001).
  7. Schaffler, A., Buchler, C. Concise review: adipose tissue-derived stromal cells-basic and clinical implications for novel cell-based therapies. Stem Cells. 25, 818-882 (2007).
  8. Filatov, V. P. Tissue therapy. Med. Gen. Fr. 11, 3-5 (1951).
  9. Pelaez, O. Retinitis pigmentosa. Cuban experience. , Editorial Cientifico Técnica. La Habana, Cuba. (1997).
  10. Meduri, R., et al. Effect of basic fibroblast growth factor on the retinal degeneration of B6(A)- Rperd12/J (retinitis pigmentosa) mouse: a morphologic and ultrastructure study. ARVO 2007 Annual Meeting. , Fort Lauderdale. May 6-10 (2007).
  11. Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Morales, M. U., Nebbioso, M., Limoli, C. Preliminary Study on Electrophysiological Changes After Cellular Autograft in Age-Related Macular Degeneration. Medicine. 93 (29), 355 (2014).
  12. Tischler, M. Platelet rich plasma: The use of autologous growth factors to enhance bone and soft tissue grafts. N. Y. State Dent. J. 68, 22 (2002).
  13. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).
  14. Lin, K. J., et al. Topical administration of orbital fat-derived stem cells promotes corneal tissue regeneration. Stem Cell Res. Ther. 4 (3), 72 (2013).
  15. Limoli, P. The retinal cell-neurorigeneration. Principles, applications and perspectives. The growth factors. , FGE Reg. Canelli (AT). 159-206 (2014).
  16. Coleman, W. P., et al. Guidelines of care for liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 45, 438-447 (2001).
  17. Lawrence, N., Coleman, W. P. Liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 47, 105-108 (2002).
  18. Kamao, H., et al. Characterization of human induced pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelium cell sheets aiming for clinical application. Stem Cell Reports. 23 (2), 205-218 (2014).
  19. Dang, Y., Zhang, C., Zhu, Y. Stem cell therapies for age-related macular degeneration: the past, present, and future. Clin. Interv. Aging. 10, 255-264 (2015).
  20. Nebbioso, M., Livani, M. L., Steigerwalt, R. D., Panetta, V., Rispoli, E. Retina in rheumatic diseases: Standard full field and multifocal electroretinography in hydroxychloroquine. Clin. Exp. Optom. 94 (3), 276-283 (2011).
  21. Wang, P., Mariman, E., Renes, J., Keijer, J. The secretory function of adipocytes in the physiology of white adipose tissue. J. Cell. Physiol. 216, 3-13 (2008).
  22. Chen, G., et al. VEGF-Mediated Proliferation of Human Adipose Tissue-Derived Stem Cells. PloS One. 8, 73673 (2013).
  23. Bagchi, M., et al. Vascular endothelial growth factor is important for brown adipose tissue development and maintenance. FASEB J. 27, 3257-3271 (2013).
  24. Carron, J. A., et al. Cultured human retinal pigment epithelial cells differentially express thrombospondin-1, -2, -3,and -4. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 32, 1137-1142 (2000).
  25. Kim, S. Y., et al. Expression of pigment epithelium-derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in sickle cell retina and choroid. Exp. Eye Res. 77, 433-445 (2003).
  26. Limoli, P. G., Limoli, C., Vingolo, E. M., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Cell surgery and growth factors in dry age-related macular degeneration: visual prognosis and morphological study. Oncotarget. 7 (30), 46913-46923 (2016).
  27. Ueki, Y., Reh, T. A. EGF stimulates Müller glial proliferation via a BMP-dependent mechanism. Glia. 61, 778-789 (2013).
  28. Kozlowski, M. R. RPE cell senescence: A key contributor to age-related macular degeneration. Med. Hypotheses. 78, 505-510 (2012).
  29. Schneider, A., et al. The hematopoietic factor G-CSF is a neuronal ligand that counteracts programmed cell death and drives neurogenesis. J. Clin. Invest. 115, 2083-2098 (2015).
  30. Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat. Neurosci. 9, 843-852 (2006).

Tags

רפואה גיליון 132 הקשורות לגיל ניוון מקולרי מחירי תיקון חדות ראייה (BCVA) תא עצמיים להשתיל Electroretinogram גורם הגדילה (GF) טכניקת השחזור רשתית Limoli (LRRT) Microperimetry טיפול משובי Suprachoroidal בשתל
משובי טיפול על ידי תא Suprachoroidal בשתל ב ניוון מקולרי הקשור לגיל יבש: דוח ראשוני <em>In Vivo</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Limoli, P. G., Vingolo, E. M.,… More

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter