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Medicine

शुष्क आयु से संबंधित धब्बेदार अध: पतन में Suprachoroidal कोशिका भ्रष्टाचार द्वारा अपक्षयी चिकित्सा- Vivo में प्रारंभिक रिपोर्ट

doi: 10.3791/56469 Published: February 12, 2018

Summary

इस अध्ययन का लक्ष्य है कि वसा-व्युत्पन्न स्टेम कोशिकाओं के suprachoroidal भ्रष्टाचार stromal संवहनी अंश और प्लेटलेट युक्त प्लाज्मा से Limoli रेटिना बहाली तकनीक द्वारा व्युत्पंन में शामिल दृश्य तीक्ष्णता सुधार कर सकते हैं का आकलन करने के लिए है और सूखी उंर से संबंधित धब्बेदार अध-पतन से प्रभावित आंखों में रेटिना संवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं ।

Abstract

इस अध्ययन ऑटोलॉगस कोशिकाओं के एक suprachoroidal भ्रष्टाचार सबसे अच्छा सुधार कर सकते हैं कि क्या जांच के उद्देश्य से है दृश्य तीक्ष्णता (BCVA) और सूखी उम्र से प्रभावित आँखों में microperimetry (मेरे) के लिए प्रतिक्रियाओं से संबंधित धब्बेदार अध (AMD) के माध्यम से समय पर उत्पादन और आसपास के ऊतकों पर विकास कारकों (GFs) के स्राव । मरीजों को बेतरतीब ढंग से प्रत्येक स्टडी ग्रुप को सौंपा गया । सभी रोगियों के साथ सूखी AMD का निदान किया गया और BCVA के बराबर या अधिक से अधिक 1 लघुगणक रिज़ॉल्यूशन (logMAR) के न्यूनतम कोण की. एक suprachoroidal ऑटोलॉगस Limoli रेटिना बहाली तकनीक (LRRT) द्वारा भ्रष्टाचार समूह एक है, जो 11 रोगियों से 11 आंखें शामिल पर किया गया था । तकनीक प्रत्यारोपित adipocytes, वसा-व्युत्पंन स्टेम stromal संवहनी अंश से प्राप्त कोशिकाओं, और प्लेटलेट युक्त प्लाज्मा से suprachoroidal अंतरिक्ष में प्रदर्शन किया गया । इसके विपरीत 14 रोगियों की 14 आंखों सहित ग्रुप बी का प्रयोग नियंत्रण समूह के रूप में किया गया । प्रत्येक रोगी के लिए, निदान फोकल स्कैनिंग लेजर ophthalmoscope और वर्णक्रमीय डोमेन-ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (एसडी-अक्टूबर) द्वारा सत्यापित किया गया था । समूह A में, BCVA को ०.५८१ से ०.५०४ तक ९० दिनों में और ०.३७६ logMAR को १८० दिन (+ ३२.२०%) इसके अलावा, मेरे परीक्षण १८० दिन में १२.५९ db के लिए ११.४४ db से वृद्धि हुई । विभिन्न प्रकार की कोशिका धमनियां के पीछे भ्रष्टाचारी धमनियां प्रवाह में लगातार GF स्राव सुनिश्चित करने में सक्षम थे । नतीजतन, परिणाम संकेत मिलता है कि भ्रष्टाचारी समूह में दृश्य तीक्ष्णता (VA) छह महीने के बाद नियंत्रण समूह की तुलना में अधिक बढ़ सकता है ।

Introduction

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कोशिका चिकित्सा, की प्रणालीगत या घायल क्षेत्र में स्टेम/जनक कोशिकाओं के स्थानीय इंजेक्शन से मिलकर कई पुराने विकारों के इलाज के लिए, पिछले दशक में करीब ध्यान आकर्षित किया है1। 1990 के दशक के बाद से, विकास कारकों (GFs) रेटिना शोष में उनके संभावित चिकित्सकीय भूमिका के लिए अध्ययन किया गया है2. वास्तव में, कई मानव कोशिकाओं GFs, जो विशिष्ट प्रोटीन है कि ब्लॉक या नीचे apoptosis, यानी, कोशिकाओं के क्रमादेशित मौत3को धीमा करने में सक्षम हैं उत्पादन कर सकते हैं ।

यह ज्ञात है कि शुष्क उंर से संबंधित धब्बेदार अध (AMD) एक एट्रोफिक रेटिना रोग जहां क्रमिक और अपरिवर्तनीय कोशिका मृत्यु photoreceptor परत को चोट शामिल है और, नतीजतन, केंद्रीय दृश्य समारोह के नुकसान4। AMD विकसित देशों में ५५ वर्ष से अधिक आयु के लोगों में दृष्टिहीनता का प्रमुख कारण है और सभी धब्बेदार अध-पतन, जो तारीख को एक प्रभावी उपचार की कमी के ८०% के लिए खातों ।

कई अध्ययनों से पता चला है कि वहां विभिंन स्रोतों से जो ऑटोलॉगस GFs प्राप्त किया जा सकता है । ये विभिंन प्रकार के सेल शामिल हैं, वसा stromal कोशिकाओं से व्युत्पंन कक्षीय वसा, प्लेटलेट से व्युत्पंन प्लेटलेट युक्त प्लाज्मा (पीआरपी), और वसा-व्युत्पन्न स्टेम सेल (ADSCs) stromal ऊतक के SVF संवहनी अंश (वसा) में शामिल किया गया है5 ,6,7. वर्तमान GF सेट रेटिना neuroenhancement सुनिश्चित करता है, और Filatov, Meduri, Pelaez, और Limoli द्वारा किए गए अनुसंधान का प्रदर्शन किया है कि ऑटोलॉगस वसा ट्रांसप्लांटेशन (पिछाड़ी) प्रभावी है8,9,10

इसके अलावा, एक पूर्व अध्ययन electroretinogram में महत्वपूर्ण सुधार दिखाया (एर्ग) डेटा, suprachoroidal ऑटोलॉगस भ्रष्टाचार के बाद दर्ज की, शुष्क AMD में प्रभावित आंखें11। suprachoroidal अंतरिक्ष में शल्य-भ्रष्टाचारी ऊतक रेटिना कोशिकाओं के paracrine स्राव संग्राहक, उनके apoptosis6,7,12देरी । बाहरी परमाणु परत मोटाई पर विचार, गिनी सूअरों के रेटिना की ऊतकवैज्ञानिक परीक्षा पता चला है कि GFs रेटिना पर एक पौष्टिकता प्रभाव हो सकता है. इसलिए, GFs के प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष उपयोग संभावित रूप से आणविक उत्प्रेरण और अवरोधकों के बीच एक संतुलित संबंध के माध्यम से चिकित्सीय लाभ ले सकते हैं6,7,12.

इस विधि का उद्देश्य है कि adipocytes के suprachoroidal भ्रष्टाचार, SVF और पीआरपी में ADSCs सबसे अच्छा सही दृश्य तीक्ष्णता (BCVA) और microperimetry (मेरी) प्रतिक्रियाओं में सुधार कर सकते है का आकलन है सूखी AMD-प्रभावित आंखों । इस अध्ययन के लिए अपनी प्रेमिका के उत्पादन के आधार पर भ्रष्टाचार के उपचारात्मक प्रभाव प्रदर्शित करना है, उद्धृत साहित्य6,7,12,13के अनुसार ।

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Protocol

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अध्ययन प्रोटोकॉल कम विजन अकादमी की एथिक्स कमेटी द्वारा अनुमोदित किया गया था और सभी विषयों हेलसिंकी घोषणा के अनुसार एक लिखित सहमति पर हस्ताक्षर किए । इस शोध अध्ययन में Loughborough और शेफील्ड दोनों विश्वविद्यालयों से नैतिक अनुमोदन प्राप्त हुआ है.

नोट: शामिल किए जाने और शुष्क आयु से संबंधित धब्बेदार पीढ़ी के रोगियों के बहिष्करण के मानदंड Limoli रेटिना बहाली तकनीक (LRRT) द्वारा suprachoroidal ऑटोलॉगस भ्रष्टाचार प्राप्त करने के लिए तालिका 1में वर्णित है ।

1. शुष्क आयु से संबंधित धब्बेदार अध-पतन रोगियों का निदान

  1. फोकल स्कैनिंग लेजर ophthalmoscope के साथ निदान का पता लगाने, एसडी अक्टूबर, और मेरे.
  2. दूर और निकट दूरी के लिए प्रत्येक समूह के BCVA का मूल्यांकन करें । अंक (अंक) में निकट दृष्टि (क्लोज़ अप) के लिए VA उपाय । समय पर BCVA उपाय 0 (टी0), ९० (T90), और १८० दिन (T180) जल्दी उपचार मधुमेह रेटिनोपैथी अध्ययन (EDTRS) की तुलना में 4 मीटर की दूरी पर logMAR में चार्ट.
  3. २००९ में निर्धारित मानकों के अनुसार इलेक्ट्रिकल scotopic, mesopic, और photopic सेल गतिविधि, या फ्लैश एर्ग रिकॉर्ड, नैदानिक इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के लिए इंटरनेशनल सोसायटी (ISCEV)11द्वारा ।

2. Anesthetization

नोट: LRRT के दौरान संज्ञाहरण में सोने के मानक सामयिक संज्ञाहरण है, संवेदनाहारी और बेहोशी की उप-tenon घुसपैठ द्वारा प्रबलित । विशिष्ट मामलों में, सामान्य संज्ञाहरण पसंद है ।

  1. lidocaine के साथ सर्जरी से पहले सामयिक स्थानीय निश्चेतक जगाकर dropwise 15-20 मिनट लागू करने से corneal और नेत्रश्लेष्मला संज्ञाहरण प्राप्त करें 4% और ropivacaine पर 1% ।
  2. उप-नेत्रश्लेष्मला और subtenon के रिक्त स्थान में सीधे घुसपैठ द्वारा संज्ञाहरण इंजेक्षन ।
  3. दोनों उदर क्षेत्र में स्थानीय घुसपैठ का उपयोग करें, इससे पहले कि वसा ऊतक निकाला जाता है, और उप नेत्रश्लेष्मला और उप tenon के रिक्त स्थान, limbus से 12 मिमी में । १,२०० IU एड्रेनालाईन के साथ मिश्रित carbocaine या marcain के स्थानीय संवेदनाहारी को गोद लें ।
  4. संवेदनाहारी के माध्यम से intraoperative बेहोशी प्रदान, जो ठीक से दोहराया छोटे boli के माध्यम से एक मादक एनाल्जेसिक के रूप में fentanyl का उपयोग करके किया जा सकता है । खुराक आम तौर पर है ०.०२५ मिलीग्राम fentanyl के साथ 1 मिदाजोलम प्रति मिलीग्राम बोल्स.

3. Limoli रेटिना बहाली तकनीक तैयारी

नोट: यह तकनीक Pelaez के हस्तक्षेप के द्वारा जो कक्षीय ऑटोलॉगस वसा subscleral स्थान1,6,7,12में प्रत्यारोपित किया जाता है के एक संस्करण का प्रतिनिधित्व करता है । सर्जिकल भ्रष्टाचार कोशिकाओं आसपास के ऊतकों में neurotrophic और angiotrophic गुणों के साथ कई GFs का उत्पादन कर सकते हैं, रंजित, और रेटिना18,19,20,21,22 ,23,24,25. LRRT में, भ्रष्टाचारी ऑटोलॉगस कोशिकाओं और धमनियां के बीच की दूरी गहरी sclerectomy के माध्यम से कम हो जाती है, और डंठल और धमनियां के बीच का संपर्क क्षेत्र धमनियां प्रवाह9में paracrine ऑटोलॉगस कोशिका स्राव को बढ़ावा देने के लिए विस्तारित होता है, 10,14.

  1. धमनियां और श्वेतपटल, Limoli रेटिना बहाली तकनीक (LRRT)15,16,17नामक प्रक्रिया के बीच भ्रष्टाचार करने वाले सेलुलर के साथ सर्जरी से पहले प्रत्येक आंख के समुचित संक्रमण प्रदर्शन ।
  2. भ्रष्टाचार ADSCs, कोलमैन एट अल और लॉरेंस की तकनीक से प्राप्त (चित्रा 1) उदर वसा से, sovrachoroidal अंतरिक्ष में SVF में15,16,17.
  3. पीआरपी जेल से प्राप्त प्लेटलेट्स के साथ वसा pedicle घुसपैठ निंनलिखित चरणों के माध्यम से प्राप्त की ।
  4. रक्त6,12 और इकट्ठा प्लेटलेट युक्त प्लाज्मा (पीआरपी) । प्लेटलेट दानेदार करने के लिए उत्तेजना वसा pedicle6,12में GF रिहाई का कारण बनता है ।

4. तकनीकी विनिर्देशों और रणनीति

नोट: वसा ऊतक एकत्र की है और रोगियों के उदर चमड़े के नीचे की परत से शुद्ध, लॉरेंस और कोलमैन तकनीक के अनुसार17(सामग्री की तालिका) ।

  1. मैंयुअल रूप से प्रत्येक रोगी के उदर चमड़े के नीचे परत से वसा ऊतक के 10 मिलीलीटर फसल, एक 3 मिमी कुंद प्रवेशनी एक लॉकिंग सिरिंज से जुड़ा का उपयोग कर, लॉरेंस और कोलमैन तकनीक के अनुसार17 (आंकड़े 2a/
  2. रक्त से वसा ऊतक के अलग शुद्ध SVF, वसा, तेल, और 5 मिनट के लिए केंद्रापसारक द्वारा तरल पर १,५०० x g पर 20 ° c (चित्रा 2) । SVF ADSCs17के बहुत अमीर है ।
  3. एक 22 जी सुई के साथ और पीआरपी तैयारी के लिए एक अलग ट्यूब में मानव परिधीय रक्त के 8 मिलीलीटर ले लीजिए ।
  4. 20 डिग्री सेल्सियस पर १,५०० x g पर 5 मिनट के लिए एकत्र रक्त केंद्रापसारक (चित्रा 2डी) । LRRT में, आगामी परिवर्तन ऑटोलॉगस वसा भ्रष्टाचार, ADSC प्रसार, जो धमनियां छिड़काव वृद्धि एहसान के बेहतर अस्तित्व में परिणाम है, और उन कारकों है कि केवल वसा7द्वारा स्रावित कर रहे हैं की कार्रवाई का एक और अधिक व्यापक मॉडुलन, 11,17.
  5. suprachoroidal पॉकेट बनाएं (4 चरण में अधिक विवरण, विशेष रूप से ४.४ और ४.५ में) परिक्रमा वसा से प्राप्त भ्रष्टाचार को समायोजित करने और SVF और पीआरपी से ADSCs का एक मिश्रण के साथ इस जेब के अवशिष्ट मात्रा संतृप्त, लॉरेंस के अनुसार प्राप्त और कोलमैन तकनीक17.

5. Suprachoroidal LRRT द्वारा भ्रष्टाचार (Limoli रेटिना बहाली तकनीक): सर्जिकल प्रक्रिया और तकनीकी विवरण

  1. 6-0 रेशम सीवन के साथ श्वेतपटल लंगर, अवर-लौकिक limbus के पास ।
  2. ५.५ "वेस् Tenetomy घुमावदार कैंची का प्रयोग करते हुए अवर-लौकिक limbus से 11 मि subconjunctival और subtenonian space को खोलें ।
  3. इस स्थान पर Limoli-बेसिल नेत्रश्लेष्मला रिट्रेक्टर डालें एक scleral सर्जिकल मैदान बनाएं ।
  4. एक 5 मिमी वर्धमान चाकू के ऊपर बेवल angled का उपयोग कर, पूर्व में एक प्रालंब पर श्वेतपटल में ओर 8 मिमी, limbus से काट । प्रालंब काज हमेशा रेडियल और सर्जन के बाईं ओर है ।
  5. अवर-लौकिक चक्र में, limbus से 8 मिमी में, एक वर्धमान चाकू का उपयोग करके रेडियल काज द्वारा पक्ष पर 5 मिमी के बारे में एक गहरी scleral दरवाजा खुला, angled बेवल ऊपर । धमनियां के स्लेटी रंग को देखने के लिए पर्याप्त गहराई पर sclerectomy बाहर ले जाएं ।
  6. बाद में suprachoroidal भ्रष्टाचार में रक्त परिसंचरण की सुविधा के क्रम में, प्रालंब के बाहर के हिस्से में एक छोटे से operculum को हटाने के द्वारा एक अंतर पैदा करते हैं ।
  7. नेत्र विज्ञान के साथ उद्धरण संदंश अवर टेढ़ा मांसपेशी के ऊपर एक अंतर से कक्षीय वसा । सुनिश्चित करें कि निकाली गई वसा पर्याप्त रूप से यह इसके आरोपण के बाद जीवित रहने के लिए अनुमति देने के लिए संवहनी है ।
  8. धीरे से धमनियां बिस्तर और दरवाजे के समीपस्थ किनारे पर धमनियां 6/0 polyglactin फाइबर के साथ सीवन पर ऑटोलॉगस वसा प्रालंब जगह है ।
  9. scleral प्रालंब पर वसा pedicle या उसके पोषक तत्वों वाहिकाओं पर संपीड़न से बचने के लिए सीवन ।
  10. पीआरपी जेल के 1 मिलीलीटर के साथ वसा pedicle के स्ट्रोमा घुसपैठ (रक्त सामग्री के केंद्रापसारक द्वारा प्राप्त की, घटक की जुदाई, और प्लेटलेट दानेदार26) का उपयोग कर एक 30 जी angled (30 °) प्रवेशनी ।
  11. सीवन के लिए कंजाक्तिवा के पक्षों को तैयार करें । फिर, नेत्रश्लेष्मला ट्रैक्टर निकालें ।
  12. कंजाक्तिवा टांका, 6/0 polyglactin फाइबर का उपयोग कर ।
  13. बंद करने से पहले, subscleral अंतरिक्ष में डालने के लिए एक जगह छोड़ दो, प्रालंब के बीच, रंजित, और धमनियां भ्रष्टाचार, ऑटोलॉगस वसा भ्रष्टाचार के साथ एक छोटे से लचीला प्लास्टिक ट्यूब ।
  14. ऑटोलॉगस वसा भ्रष्टाचार, रंजित, और SVF (ADSCs के अमीर) के ०.५ सीसी के साथ scleral फ्लैप के बीच अवशिष्ट अंतरिक्ष संतृप्त, पहले से ३.२ कदम में तैयार, एक छोटे से लचीला प्लास्टिक ट्यूब द्वारा, scleral जेब में डाला ।
  15. अवशिष्ट अंतरिक्ष संतृप्ति के बाद, टांका बंद करें ।
  16. सर्जरी के बाद, ५०० मिलीग्राम azithromycin के साथ एंटीबायोटिक चिकित्सा के तीन दिन प्रशासन । इसके अलावा, क्लॉरॅंफेनिकोल और बेटमेटसोने के रूप में एक एंटीबायोटिक और स्टेरॉयड संयोजन, के साथ आंख ड्रॉप थेरेपी के बारे में 15-20 दिनों के लिए प्रदान करते हैं ।
    नोट: एक-भ्रष्टाचार वसा कोशिकाओं से बना, SVF से ADSCs, और पीआरपी अब26प्राप्त किया गया है । ऑटोलॉगस कोशिकाओं की धमनियां प्रवाह में paracrine स्राव को उत्तेजित करने के लिए गहरे sclerectomy द्वारा भ्रष्टाचारी ऑटोलॉगस कोशिकाओं और धमनियां के बीच की दूरी को कम करें । इसी प्रयोजन के लिए, डंठल और धमनियां के बीच संपर्क के क्षेत्र का विस्तार करें ।

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Representative Results

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यहाँ प्रस्तुत प्रक्रिया का उपयोग करना, शुष्क AMD के दो समूहों-प्रभावित रोगियों, BCVA के बराबर या अधिक से अधिक 1 लघुगणक संकल्प (logMAR) के न्यूनतम कोण के, अध्ययन में नामांकित किए गए थे. 11 रोगियों की 11 आंखों सहित समूह ए, Limoli रेटिना बहाली तकनीक (LRRT) द्वारा suprachoroidal ऑटोलॉगस भ्रष्टाचार, जबकि 14 रोगियों की 14 आंखों सहित समूह बी, एक नियंत्रण समूह के रूप में इस्तेमाल किया गया था प्राप्त की ।

छात्र टी-टेस्ट और ची स्क्वायर टेस्ट तुलना करने के लिए उपयोग किया गया, क्रमशः, मतलब उंर और दो अध्ययन समूहों के बीच लिंग वितरण (तालिका 2) । सांख्यिकीय विश्लेषण और डेटा विज़ुअलाइज़ेशन से पहले और LRRT सर्जरी के बाद प्रदर्शन किया गया ।

एक Wilcoxon-मान-Whitney पर हस्ताक्षर किए रैंक परीक्षण किया गया था कि क्या पूर्व और बाद उपचार अंतर महत्वपूर्ण थे निर्धारित करने के लिए । यह गैर-पैरामीट्रिक सांख्यिकीय परिकल्पना परीक्षण दो आश्रित नमूनों की तुलना करने के लिए लागू किया गया था जब जनसंख्या को सामान्य रूप से वितरित नहीं माना जा सकता, जैसा कि इस मामले में है. VA मूल्यों विश्लेषण के प्रत्येक चरण में मापा गया । सांख्यिकीय महत्व p मान <०.०५ पर सेट किया गया था ।

ग्यारह आंखें (6 सही और 5 वाम आंखें) 11 रोगियों की (7 पुरुष और 4 महिला) शुष्क AMD के नैदानिक निदान के साथ इस अध्ययन में जांच की गई । रोगी की उम्र ६२ से ८४ साल, ७१.५ साल (± ३.८ एसडी) की एक मतलब की उम्र के साथ से लेकर ।

तालिका 2 LRRT के साथ इलाज रोगियों के नैदानिक प्रोफाइल का एक सिंहावलोकन प्रदान करता है, और औसत मान 0 पर दर्ज (टी0), ९० (T90), और १८० (T180) दिनों सर्जरी के बाद. प्रतिकूल प्रभाव हमेशा अधिकतम सुरक्षा की गारंटी करने के लिए सूचित किया गया । 0 (टी0), ९० (T90), और १८० (T180) दिनों सर्जरी के बाद किसी भी महत्वपूर्ण परिवर्तन रिकॉर्ड नहीं किया पर दर्ज की intraocular दबाव का मतलब मान ।

LRRT सर्जरी के बाद परिणाम निम्नानुसार थे:
समूह A में, BCVA ०.५८१ (टी0) से ०.५०४ को ९० दिनों (T90) पर, और १८०% (p < 0.01) की उल्लेखनीय वृद्धि के साथ ३५.२० दिनों (T180) पर ०.३७६ logMAR से बदल गया । कंट्रोल ग्रुप बी में 14 मरीजों की 14 आंखों सहित, 7 पुरुषों और 7 महिलाओं, ८०.४ वर्ष की एक मतलब की उंर के साथ, एसडी ± २.३, BCVA ०.५७३ (टी0) से ०.५८७ (T90) के लिए बदल गया है, और ०.६०१ logMAR (T180) के साथ एक गैर महत्वपूर्ण मतलब कमी ४.७२% (तालिका 2) (चित्रा 3 ). ग्रुप ए में मेरा टेस्ट ११.४४ डीबी (टी0) से १२.५९ डीबी (T180) तक काफी बढ़ गया (+ ९.५८%) (आरेख 4), जबकि समूह B में पश्चात मानों में कोई महत्वपूर्ण सुधार नहीं था ।

Figure 1
चित्र 1 : suprachoroidal ऑटोलॉगस भ्रष्टाचार का निरूपण. वृद्धि कारकों (GFs) वसा कोशिकाओं द्वारा उत्पादित, प्लेटलेट युक्त प्लाज्मा (पीआरपी), और वसा-व्युत्पन्न स्टेम सेल (ADSCs) रेटिना वर्णक उपकला (RPE) के माध्यम से धमनियां और रेटिना ऊतकों तक पहुँचने. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्र 2 : तकनीकी कार्यविधि. प्रवेशनी और उदर क्षेत्र (पैनल ) से वसा ऊतक के बाद वापसी । प्रवेशनी अपनी लुमेन में aspirating वसा कोशिकाओं द्वारा हल्के आकांक्षा के साथ चमड़े के नीचे वसा चालें (पैनल बी) । केंद्रापसारक के बाद, वहां तीन वसा ऊतक की परतें हैं: तेल (उच्च परत), सजातीय वसा (मध्यवर्ती परत), और रक्त द्रव (निचली परत) (पैनल सी) । तुरंत केंद्रापसारक के बाद खून से ट्यूब का निरीक्षण । इसमें तीन परतें हैं: प्लेटलेट्स खराब प्लाज्मा (पीपीपी), प्लेटलेट्स रिच प्लाज्मा (पीआरपी), और एरिथ्रोसाइट्स (पैनल डी) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्र 3 : सूखी उम्र से संबंधित धब्बेदार अध (AMD) में सर्वश्रेष्ठ सही दृश्य तीक्ष्णता (BCVA). Limoli रेटिना बहाली तकनीक (LRRT) द्वारा suprachoroidal ऑटोलॉगस भ्रष्टाचार के बाद समूह में परिवर्तित करें, और नियंत्रण समूह में (चेक), समय 0 पर मापा (टी0), ९० (T90), और १८० (T180) दिन. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्र 4 : Microperimetry (मेरे) ग्रुप ए के एक मरीज़ में. शुष्क उंर से संबंधित धब्बेदार अध-पतन (AMD) Limoli रेटिना बहाली तकनीक (LRRT) के बाद छह महीने । मेरा ११.४४ db (टी0) से बढ़कर १२.५९ db (T180) (+ ९.५८%). 0 से ३६ dB में रंग स्केल । निर्धारण स्थिरता: स्थिर, अपेक्षाकृत अस्थिर, अस्थिर । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

समावेशन मानदंड बहिष्करण मापदंड
कोकेशियान विषयों गोलाकार समतुल्य के साथ अपवर्तन त्रुटियां > 6 डी
अच्छी तरह से पाला प्रतिभागियों एसडी द्वारा स्त्रावी AMD के लक्षण-OCT और एफए
एसडी-OCT, AFI, और एफए द्वारा निदान नेत्र विकारों: सीटी, जीएल, पर, सांसद, वीएम, CRD, आदि
मापने योग्य VA नेत्र आघात
BCVA ≥ 1 logMAR प्रणालीगत रोग: एमएस; पीडी; डीएम; आरडी; hd; वाहिकाशोथ
सामान्य IOP उच्च रक्तचाप, कैंसर, और अंय प्रणालीगत रोगों
अच्छा भंडारण extrafoveal क्षेत्रों
LogMAR: रिज़ॉल्यूशन के न्यूनतम कोण का लघुगणक; SD-OCT: वर्णक्रमीय डोमेन-ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी; AFI: autofluorescence इमेजिंग; एफए: fluorescein एंजियोग्राफी; VA: दृश्य तीक्ष्णता; IOP: intraocular दाब; D: diopters; सीटी: मोतियाबिंद; GL: मोतियाबिंद; पर: ऑप्टिक न्युरैटिस; MP: धब्बेदार तह; VM: neovascular झिल्ली; CRD: chorioretinal रोग; MS: मल्टीपल स्केलेरोसिस; पीडी: पार्किंसंस रोग; डीएम: मधुमेह; RD: गुर्दे की बीमारियों; HD: यकृत रोगों ।

तालिका 1: शुष्क आयु से संबंधित धब्बेदार अध-पतन (AMD) रोगियों के लिए समावेशन और बहिष्करण मानदंड ।

पैरामीटर LRRT (n = 11) नियंत्रण (n = 14)
आयु (औसत) ७१.५ ± 3.8 एसडी ८०.४ ± 2.3 एसडी
Age (सीमा) ६२-८४ ७३-७९
लिंग F:4 M:7 F:7 M:7
BCVA टी0 ०.५८१ logMAR ०.५७३ logMAR
औसत)
BCVA टी0 (सीमा) ०.३०१-१.० ०.०-१.०
BCVA T90 (average) ०.५०४ logMAR ०.५८७ logMAR
BCVA T90 (सीमा) ०.२२२-1 ०.०-1
BCVA T180 (average) ०.३७६ logMAR ०.६०१ logMAR
BCVA T180 (सीमा) ०.०४६-०.६९९ ०.०-१.०
प्रतिशत ३५.१९ ४.७२
परिवर्तन
p मान < 0.01 > 0.5
वर्ष में आयु; n = रोगियों और नियंत्रण; SD = मानक विचलन; च स्त्री =; म = नर; BCVA = logMAR में सबसे अच्छा सही दृश्य तीक्ष्णता; टी0 = सर्जरी से पहले आधारभूत-भ्रष्टाचार; T90 = 90 दिन सर्जिकल भ्रष्टाचार के बाद; T180 = 180 दिन शल्य-भ्रष्टाचार के बाद ।

तालिका 2: अध्ययन में रोगियों की जांच की नैदानिक प्रोफाइल । सभी रोगियों में Limoli रेटिना बहाली तकनीक (LRRT) द्वारा सेल के बाद भ्रष्टाचार (टी0), ९० (T90), और १८० (T180) दिनों से पहले दर्ज औसत मान ।

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Discussion

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इस अध्ययन का प्राथमिक उद्देश्य adipocytes के suprachoroidal भ्रष्टाचार, SVF में ADSCs, और पीआरपी समय के साथ सूखी AMD प्रभावित आंखों में VA और रेटिना संवेदनशीलता में सुधार कर सकता है कि क्या मूल्यांकन करने के लिए किया गया था. एक अंय मुख्य उद्देश्य के लिए इन कोशिकाओं के संभावित उपचारात्मक प्रभाव प्रदर्शित किया गया, हाल के साहित्य के आधार पर, कई नैदानिक अध्ययन के बाद से सुझाव दिया है कि GF आधारित चिकित्सा कई रोगों में रोगी की देखभाल के लिए उपयोगी हो सकता है ।

वास्तव में, कुछ अध्ययनों से पता चला है कि ऑटोलॉगस मानव प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (iPSC) भ्रष्टाचार के लिए एक सेलुलर स्रोत का प्रतिनिधित्व कर सकता है, रेटिना वर्णक उपकला (RPE)18AMD के लिए ऊतक प्रतिस्थापन थेरेपी में पुनर्जनन के उद्देश्य से, 19. इन सेल शीट एक monolayer जो ठेठ RPE मार्करों और प्रदर्शन को व्यक्त सकता है के रूप में उत्पंन GF स्राव, phagocytotic क्षमता दिखा रहा है, साथ ही साथ जीन अभिव्यक्ति पैटर्न देशी RPE के उन लोगों के समान18,19 . प्रत्यारोपण पर, ऑटोलॉगस गैर मानव रहनुमा iPSC-RPE सेल शीट्स न प्रतिरक्षा अस्वीकृति और न ही ट्यूमर गठन18,19दिखाया ।

वर्तमान अध्ययन कुछ अलग विशेषताओं प्रस्तुत करता है । हम सूखे AMD में सीधे विश्लेषण-मानव आंखें suprachoroidal भ्रष्टाचार निरोधक कोशिका दृश्य प्रदर्शन में सुधार कर सकते हैं कि क्या प्रभावित.

इसके अलावा, LRRT के अनुसार ऑटोलॉगस कोशिकाओं के sovrachoroidal भ्रष्टाचार हमेशा के लिए सुरक्षित साबित हो गया है । हम पहले साल के बाद के हस्तक्षेप में उप रेटिना neovascularization, धब्बेदार शोफ, रेटिना टुकड़ी, या अन्य रेटिना समस्याओं को पंजीकृत नहीं किया है. दूसरी ओर, अनुचित शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं सैद्धांतिक रूप से बाद में रक्तस्राव के साथ रंजित के वेध करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, लेकिन हमारे अनुसंधान में कोई आँख क्षतिग्रस्त हो गया था. हालांकि, यह उप-नेत्रश्लेष्मला नकसीर है कि आम तौर पर कुछ ही दिनों के भीतर पुनः अवशोषित है और एक जटिलता के रूप में फिर से मौजूद नहीं है संभव है ।

हाल के अध्ययनों से ९० और १८० दिन ऑटोलॉगस भ्रष्टाचार के बाद scotopic एर्ग मूल्यों, BCVA और मेरे, में एक उल्लेखनीय वृद्धि के पर्याप्त सबूत प्रदान की है । हालांकि, वृद्धि अधिक थी अगर रेटिना मोटाई औसत (आरटीए) एसडी-OCT द्वारा दर्ज की गई उच्च11,26था । यह माना जाता है कि शल्य चिकित्सा के प्रकिया कोशिकाओं के आसपास के ऊतकों में GFs उत्पादन कर सकते हैं, रंजित, और रेटिना, और कि वे neurotrophic और angiotrophic गुण, जैसे बुनियादी fibroblast वृद्धि कारक (bFGF), संवहनी endothelial वृद्धि कारक (वीईजीएफ़) , वर्णक-उपकला-व्युत्पंन कारक (PEDF), interleukin (आईएल), मैक्रोफेज कॉलोनी-उत्तेजक कारक (एम-सीएसएफ), granulocyte-मैक्रोफेज कॉलोनी-उत्तेजक कारक (जीएम-सीएसएफ), और अपरा वृद्धि कारक (PlGF), प्लेटलेट्स का उत्पादन प्लेटलेट व्युत्पन्न बढ़ने फैक्टर (PDGF), प्लेटलेट-व्युत्पन्न angiogenesis फैक्टर (PDAF), आदि6,7,12,13,21

रंजित के पास भ्रष्टाचारी नियुक्ति endothelial सेल रिसेप्टर्स, RPEs, मुलर कोशिकाओं, photoreceptors, और अंत में उन लोगों के साथ बातचीत करने के लिए पहुंच करने के लिए, धमनियां प्रवाह में प्रवेश करने के लिए उत्पादित GFs अनुमति देने के लिए माना जाता है । LRRT में, ऑटोलॉगस भ्रष्टाचारी तत्वों उपयोगी हैं, अपने तरीके से प्रत्येक, पुनर्जनन के लिए । वसा कोशिकाओं bFGF उत्पादन, एपिडर्मल वृद्धि कारक (EGF), इंसुलिन जैसे विकास कारक-1 (IGF-1), आईएल, बदलने के विकास कारक β (TGF-β), PEDF, और adiponectin21. ADSCs उत्पादन bFGF, वीईजीएफ़, एम-सीएसएफ, जीएम-सीएसएफ, PlGF, TGF-β, hepatocyte वृद्धि कारक (एचजीएफ), IGF-1, आईएल, और angiogenin6,7. प्लेटलेट्स का उत्पादन PDGF, IGF-1, TGF-β, वीईजीएफ़, bFGF, EGF, PDAF, और thrombospondin (टीएसपी)6,12.

कुछ कारकों endothelial पुनर्जनन को बढ़ावा देने, और कुछ ADSC प्रसार उत्तेजित, इस प्रकार दोनों ऑटोलॉगस वसा और adipocyte अस्तित्व के पक्ष में है, जबकि अंय neovascular प्रक्रियाओं को बाधित22,23,24। PEDF और bFGF एहसान photoreceptor अस्तित्व है, जबकि EGF म्यूलर अंतर्जात प्रतिलेखन ट्रिगर द्वारा bFGF कोशिकाओं पर अपनी कार्रवाई डालती है और ADSCs उत्तेजक अपनी स्रावी गतिविधि को बढ़ाने के लिए25,27। हालांकि GFs आम तौर पर RPEs द्वारा स्रावित कर रहे हैं, यह RPE/choriocapillaris परिसर के एक परिणाम के रूप में एट्रोफिक maculopathy में उत्पन्न नहीं होती है । Paracrine प्रेमिका भ्रष्टाचार कोशिकाओं द्वारा स्राव photoreceptor और choriocapillaris अस्तित्व के पक्ष में योगदान देता है28. इसके अलावा, एम सीएसएफ, जीएम-सीएसएफ, और आईएल विरोधी भड़काऊ और मैक्रोफेज पर chemotactic प्रभाव है, जो intraretinal सेल मलबे के उन्मूलन में शामिल कर रहे हैं, एक समारोह है कि शारीरिक रूप से बाहर किया जाता है RPEs29,30.

कोशिका प्रकार रंजित के पीछे भ्रष्टाचारी धमनियां प्रवाह में लगातार GF स्राव सुनिश्चित कर सकते हैं । GFs रेटिना कोशिकाओं को धमनियां से पहुंच सकते हैं, उनकी झिल्ली रिसेप्टर्स के साथ बातचीत, और अंत में एक intracellular मार्ग को सक्रिय. प्रस्तुत आंकड़ों का सुझाव है कि LRRT धमनियां छिड़काव और photoreceptor trophism न केवल bFGF रिसेप्टर बातचीत के माध्यम से बढ़ा सकते हैं, लेकिन यह भी म्यूलर कोशिकाओं द्वारा उत्तेजना के माध्यम से, RPEs, और रेटिना photoreceptors. नतीजतन, जीन अभिव्यक्ति परिवर्तन और अंतिम antiapoptotic प्रभाव neuroenhancement समझा सकता है । यह सेलुलर तंत्र दृश्य प्रदर्शन को बढ़ाने की क्षमता पर निर्भर करता है, के रूप में भ्रष्टाचारी समूह में नैदानिक निष्कर्षों में प्रकाश डाला । सारांश में, LRRT लंबे समय में शुष्क AMD प्रभावित रोगियों के दृश्य समारोह को संरक्षित करने के लिए उपयोगी हो सकता है ।

हालांकि, जैसा कि हम पिछले अध्ययन में प्रदर्शन किया है, शंकु-रॉड एर्ग और रॉड एर्ग आरटीए के साथ एक बहुत महत्वपूर्ण संबंध दिखाने के लिए, जबकि यह शंकु एर्ग का मामला नहीं है । यह तथ्य यह है कि fovea समारोह के लिए समझौता किया प्रतीत होता है द्वारा समझाया जा सकता है, हालांकि शुष्क AMD में धब्बेदार मात्रा में नियमित रूप से जारी है, कम से प्रारंभिक चरणों में26। इस विकृति में, अवशिष्ट रेटिना trophism आरटीए द्वारा मापा LRRT उपचार के लिए एक शकुन कसौटी हो सकता है, के बाद से बेहतर परिणाम आरटीए के बराबर या अधिक से अधिक रोगियों में लगातार कर रहे है या अधिक से अधिक २५० µm26। उपलब्ध GF सेट neuroenhancement में परिणाम सकता है, जो की हद तक अधिक से अधिक सेलुलर के साथ क्षेत्रों की उपस्थिति के लिए आनुपातिक है, के रूप में विद्युत गतिविधि द्वारा दर्ज26। बाद के चरण में, गरीब ऊतक सेलुलर उपचारात्मक प्रभाव है कि प्रक्रिया के साथ के बाद की मांग की है, दुर्लभ GF-झिल्ली रिसेप्टर बातचीत के कारण नहीं देना होगा ।

इस शोध के अगले कदम सांख्यिकीय और जैव रासायनिक प्रभाव का अध्ययन करने के लिए पुष्टि करने के लिए आवश्यक सभी अपरिहार्य परीक्षणों का आकलन करके अधिक से अधिक VA और केंद्रीय निर्धारण के साथ विषयों की एक बड़ी संख्या की भर्ती की आवश्यकता होगी । यह तर्क दिया जा सकता है कि सेल trophism में वृद्धि सेल दृश्य गतिविधि में परिलक्षित होता है, एर्ग, BCVA, और मेरे11से मापा जाना चाहए । GF-आधारित चिकित्सा प्रदान कर सकता है एक अप करने की तारीख, चयनात्मक, सुरक्षित, और ophthalmologic रोगों में उचित उपचार ।

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Disclosures

डेनवर, CO-संयुक्त राज्य अमरीका-ARVO २०१५, मई 3-7 पर प्रस्तुत किया ।

Acknowledgments

लेखकों को कोई पावती नहीं है ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Blunt cannula, 3 mm.  Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.  RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge  RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0 IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope  Nidek Inc, Fremont, CA Nidek F10 
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany  SD-OCT 
Maia 100809 Microperimetry  CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system, C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy  Retimax for ERG 

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शुष्क आयु से संबंधित धब्बेदार अध: पतन में Suprachoroidal कोशिका भ्रष्टाचार द्वारा अपक्षयी चिकित्सा- <em>Vivo में</em> प्रारंभिक रिपोर्ट
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Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).More

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).

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