Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

乾燥 - 加齢黄斑変性症の視細胞の細胞移植による再生療法:体内の予備的なレポート

doi: 10.3791/56469 Published: February 12, 2018

Summary

本研究の目的は、間質血管の一部に含まれている脂肪由来幹細胞と血小板由来血小板豊富な血しょう Limoli 網膜修復技術の視細胞移植が視力を改善できるかどうかを評価するためには、乾燥 - 加齢黄斑変性症の影響を受ける目の網膜感度応答。

Abstract

自己細胞の視細胞移植は最高矯正視力 (BCVA) を向上させることが、microperimetry (MY) によって影響を受ける目のレスポンスを時間をかけて加齢による黄斑変性症 (AMD) を乾燥かどうかを調べることを本研究の目的は、生産と周囲の組織の成長因子 (GFs) が分泌。患者は各研究グループにランダムに割り当てられました。すべての患者は、乾燥 AMD BCVA (ログマー) の解像度の最小角度の 1 対数以上と診断されました。脈絡自家移植 Limoli 網膜修復法 (LRRT) では 11 患者から 11 目を含んだグループ A で実施されました。テクニックは、脂肪細胞、間質の血管分数と脈絡で多血小板血漿血小板から得られる脂肪幹細胞の注入によって行われました。逆に、14 人の患者の 14 目を含む B 群は対照群として使用されました。それぞれの患者の診断は、共焦点走査型レーザー検眼鏡、スペクトル ドメイン光コヒーレンストモグラフィー (SD 10 月) によって確認されました。グループ A の BCVA によって改善 0.581 に 0.504 0.376 ログマーと 90 日間で 180 日 (+32.20%) 術後。さらに、私のテスト 180 日 12.59 db 11.44 db 増加します。定数 GF 分泌脈絡膜の流れを確保するためは、脈絡膜の背後に接ぎ木した異なった細胞のタイプができました。したがって、結果を示す移植グループの視力 (VA) を増やすことができます 6 ヵ月後コントロール群よりも。

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

複数の慢性疾患を治療する患部に幹/前駆細胞の全身またはローカル注入から成る細胞療法は最後の十年の1で細心の注意を描画されます。1990 年代、網膜萎縮2における潜在的治療役割で成長因子 (GFs) を調べた。実際には、多くのヒトの細胞はアポトーシス、すなわち、プログラムされた死細胞3のブロックを遅らせたりすることができます特定の蛋白質である GFs を生成できます。

それは漸進的かつ不可逆的な細胞死が視細胞層と、その結果、中央視覚機能4の損失への損傷を含む萎縮性網膜疾患を乾燥 - 加齢黄斑変性症 (AMD) には知られています。AMD は、先進国および日付に有効な治療法がないすべての黄斑変性の 80% を占める 55 歳以上の人の失明の主要な原因です。

いくつかの研究では、自家の GFs を取得できる様々 なソースがあることを示しています。これらは異なる種類の細胞、脂肪由来幹細胞 (ADSCs) の脂肪5 間質血管の分数 (SVF) に含まれる、血小板血小板血漿 (PRP) から派生した眼窩脂肪由来間質細胞の脂肪を含む、構成します。 ,6,7。現在の GF セットにより網膜 neuroenhancement フィラトフ、Meduri、Pelaez、調査と Limoli は自家脂肪移植 (AFT) が効果的な8,9,10であることを示しています。

また、事前調査は網膜電図 (ERG) データの重要な改善を示したと、AMD の影響を受けた目の乾燥11にポスト脈絡自家移植が記録されます。脈絡で外科的移植組織は変調のアポトーシス6,7,12を遅らせること、網膜細胞のパラクリン分泌です。核の外側の層の厚さを考慮したモルモットの網膜の病理組織学的検討は GFs が網膜に栄養効果を持っていることを示しています。したがって、GFs の直接または間接的な使用は、分子の誘導剤と阻害剤6,7,12のバランスのとれた関係を治療上の利点をもたらすことができる可能性があります。

このメソッドの目的は、脂肪細胞、SVF で PRP ADSCs の視細胞移植が最も向上するかどうかを評価するために修正視力 (BCVA) と microperimetry (MY) 反応 AMD の影響を受けた目の乾燥です。本研究は文献6,7,12,13によると、GF 生産に基づいて再建の治療効果を発揮することを目的と。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

低ビジョン アカデミーの倫理委員会で承認された研究のプロトコルとすべての科目はヘルシンキ宣言に従って書面による同意署名します。この研究は、ラフバラからシェフィールド大学倫理的な承認を受けた。

注: 脈絡自家移植 Limoli 網膜修復法 (LRRT) による乾燥 - 加齢黄斑変性症患者の包含と除外基準は、表 1に示すです。

1. 乾燥 - 加齢黄斑変性症患者の診断

  1. 共焦点走査型レーザー検眼鏡、SD-10 月、私と診断を確認します。
  2. 遠くと近くの各グループの BCVA を評価します。メジャー メーカー ポイント単位 (Pts) で近いビジョン (クローズ アップ) のために。BCVA 時間 0 (T0) 90 (T90) を測定し、180 日間初期の治療糖尿病網膜症の研究と比較して (T180) ログマー 4 メートルで (EDTRS) グラフ。
  3. レコード電気幼魚、薄明視と明所視細胞の活動、または国際臨床視覚電気生理学 (ISCEV)11会によって 2009 年に設定された基準によると、フラッシュの ERG。

2. anesthetization

注: LRRT の中に麻酔のゴールド スタンダードは局所麻酔、麻酔と鎮静のサブほぞの含浸による補強です。特定のケースで全身麻酔をお勧めします。

  1. 角膜を取得し、外用局所麻酔薬を適用することで結膜の麻酔注入 4% リドカイン 1% ロピバカインと手術前に、の滴の 15 〜 20 分。
  2. サブ結膜に直接浸潤麻酔を注入とテノン嚢下のスペース。
  3. 局所浸潤の腹部の脂肪組織を抽出すると、前とサブ結膜と角膜輪部から 12 mm サブほぞのスペースの両方を使用します。Carbocaine または 1,200 IU エピネフリン混合 marcain の局所麻酔薬を採用してください。
  4. 繰り返される小さなボリを通じて麻薬性鎮痛薬としてフェンタニルを使用して正しく行うことができる麻酔薬を用いた術中の鎮静を提供します。投与量は、一般的にボーラスあたりミダゾラムの 1 mg とフェンタニルの 0.025 mg です。

3. Limoli 網膜修復技術準備

注: この手法は、subscleral スペース1,6,7,12軌道自家脂肪を移植する Pelaez の介入のバリアントを表します。外科的移植細胞が周囲の組織、脈絡膜と網膜18,19,20,21,22 で神経栄養因子や原因プロパティの多くの GFs を作り出すことができます。 ,23,24,25。LRRT、深い sclerectomy による移植自家細胞と脈絡膜の間の距離を削減し、脈絡膜流れ9、パラクリン自家細胞分泌を促進するために茎と脈絡膜の接触面積を拡大 10,14

  1. 脈絡膜と強膜、Limoli 網膜修復手法 (LRRT)15,16,17と呼ばれるプロシージャの間の細胞移植手術の前にそれぞれの目の適切な消毒を行います。
  2. コールマンと sovrachoroidal スペース15,16,17の SVF で、腹部の脂肪からのローレンスの法 (図 1) を用いて、ADSCs を移植します。
  3. 血小板と潜入脂肪椎弓根は、次の手順により得られた PRP ゲルから派生します。
  4. 遠心分離機の血6,12と多血小板血漿 (PRP) を収集します。血小板顆粒への刺激は、脂肪椎弓根6,12GF リリースします。

4. 技術仕様および戦略

注: 脂肪質のティッシュの収集し、ローレンスとコールマン技術17(材料表) によると、患者の腹部の皮下層から精製します。

  1. 手動で収穫 3 mm 鈍カニューレを使用して、各患者の腹部の皮下層からの脂肪組織の 10 mL は、ローレンスとコールマン技術17 (図 2 a ・ 2 b) によるとロック注射器に接続します。
  2. 20 ° C (図 2C) で 1,500 × g で 5 分間遠心分離して血や脂肪、油、液体から脂肪質のティッシュの純粋な SVF を区切ります。SVF は、ADSCs17の非常に豊富です。
  3. 22 G 針と PRP の準備のための別々 のチューブは、ひと末梢血の 8 mL を収集します。
  4. 20 ° c (図 2D) 1,500 × g で 5 分間収集した血液を遠心分離します。LRRT、その後で変更結果 ADSC の増殖は、脈絡膜血流の増加を支持する、自家脂肪移植の生存率と脂肪7、によってだけ分泌されるこれらの要因の作用のより包括的な変調で 11,17
  5. 眼窩脂肪から得られる移植を収容し、SVF から PRP、ローレンスに従って得られる ADSCs の混合物ではこのポケットの残留量が飽和に脈絡ポケット (詳細については手順 4 で、特定 4.4 と 4.5) を構築し、コールマン技術17

5 LRRT (Limoli 網膜修復技術) によって視細胞移植: 外科手術と技術的な詳細

  1. 6-0 シルク縫合糸、サルの角膜輪部近くで強膜を固定します。
  2. 5.5「ウェストコット Tenetomy 曲線はさみを使用して、劣った一時的な角膜輪部から 11 ミリメートルで結膜下と subtenonian スペースを開きます。
  3. Limoli バジーレ結膜リトラクターを強膜手術野をするこの空間に挿入します。
  4. 角膜輪部からの 8 mm の強膜側にフラップをカット済み、5 mm 三日月ナイフの角度面取りを使用しています。フラップのヒンジは、ラジアルと外科医の左側に常にです。
  5. 角膜輪部から 8 mm で、サルの象限には、クレッセント ナイフ、斜め傾斜面を使用して、放射状のヒンジ側に約 5 mm の深い強ドアを開きます。脈絡膜のスレートの色を表示するのには十分な深さで sclerectomy を実行します。
  6. 後続の視細胞移植で血液の循環を促進するために、フラップの遠位部で少し蓋を削除することによってギャップを作成します。
  7. 眼科ピンセットで下斜筋上のギャップから眼窩脂肪を抽出します。抽出された脂肪は十分にその注入後生き残るためにそれを許可する血管であることを確認します。
  8. 脈絡膜のベッドとドアの近位端に脈絡膜 6/0 polyglactin 繊維縫合糸に自家脂肪弁をそっと置きます。
  9. 脂肪の茎またはその栄養血管の圧縮を避けるために強膜フラップを縫合します。
  10. (血液材料の遠心分離、コンポーネント、および血小板顆粒26の分離によって得られた) PRP ゲル 1 mL で脂肪の椎弓根の間質に潜入 30 G 斜め (30 °) カニューレを使用します。
  11. 縫合糸を結膜の側面を準備します。結膜のリトラクターを削除します。
  12. 6/0 polyglactin ファイバーを用いた結膜を縫合します。
  13. 閉じる前に、フラップ、脈絡膜と脈絡膜の自家移植との間の subscleral スペースに自家脂肪移植を併用した小さな柔軟なプラスチック製のチューブを挿入するスペースを残します。
  14. 飽和自家脂肪移植、脈絡膜、強膜フラップの残留容量 0.5 cc SVF (ADSCs のリッチ)、以前 3.2 で、小さな柔軟なプラスチック製のチューブで強膜のポケットに挿入準備します。
  15. 残余空間を飽和後の縫合を閉じます。
  16. 手術後、抗生物質アジスロマイシン 500 mg との 3 日間を管理します。また、組み合わせて抗生物質やステロイド、クロラムフェニ コールなどベタメタゾン、約 15-20 日目ドロップ療法を提供します。
    注: ADSCs、SVF PRP から脂肪細胞から成っている、自家今得られている26。脈絡膜の流れに自己細胞の傍分泌の分泌を刺激するために深い sclerectomy 移植自家細胞と脈絡膜の間の距離を減らします。同じ目的のためには、茎と脈絡膜の間の接触のエリアを展開します。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

ここに示す手順を使用して、BCVA (ログマー) の解像度の最小角度の 1 対数以上と、AMD の影響を受けた患者の中でも乾燥の 2 つのグループの研究で在籍していた。グループ A に対し受信脈絡自家移植 Limoli 網膜修復法 (LRRT) による 11 患者の 11 目を含むグループ B、14 患者の 14 目を含む、対照群として使われました。

スチューデントの t 検定とカイ二乗検定は、それぞれ、(表 2) の 2 群間の平均年齢・性別分布を比較する使用されました。LRRT 手術の前後には、統計解析やデータの可視化を行った。

前と治療後の違いが有意かどうかを決定するウィルコクソン ‒ マン ‒ ホイットニーの符号付き順位検定を行った。この例のように、通常配布される人口を想定できない依存の 2 つのサンプルを比較するこの非パラメトリック統計的仮説検定を行った.VA 値は、解析の各ステップで測定しました。統計的有意性は、 p<0.05 に設定されました。

本研究では 11 患者乾燥 AMD の臨床診断 (7 男性と 4 女) の 11 目 (6 左右 5 左目) を調べた。患者の年齢は 84 歳, 平均年齢は 71.5 歳 (± 3.8 SD) 62 から 〜。

0 (T0)、90 (T90) (T180) から 180 日手術後で記録された平均値 LRRT、患者の臨床プロフィールの概要を表 2に示します。副作用は常に最大の安全性を保証する報告されました。眼圧の平均値は、0 (T0)、90 (T90)、180 (T180) 日手術の大幅な変更を記録していない後に記録されます。

LRRT 手術後の結果は次のとおりだった。
グループ A の BCVA 0.581 (T0) から術前とに変更された 90 日 (T90) 0.504 35.20% の大幅な増加と 180 日 (T180) 0.376 ログマー (p < 0.01)。コントロールのグループ B、14 目 14 患者・男性 7 名・女性 7 の平均年齢 80.4 歳、SD ± 2.3, BCVA 0.573 (T0) から 0.587 (T90) に変更を含むと非重要な意味を持つ 0.601 ログマー (T180) に 4.72% (表 2) (図 3の減少).グループ A で、私のテストは、12.59 dB (T180) に 11.44 dB (T0) から大幅増加 (+9.58%)(図 4), B 群で術後の値に有意な改善があったに対し

Figure 1
図 1: 脈絡自家移植の表現。成長因子 (GFs) が脂肪細胞、血小板血漿 (PRP) によって生成される、脂肪由来幹細胞 (ADSCs) に達する網膜色素上皮 (RPE) を脈絡膜および網膜組織。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 2
図 2: 技術プロシージャ。カニューレと (パネルA) 腹部の脂肪組織の後撤退。カニューレは、独自の内腔 (パネルB) に脂肪細胞を吸引して穏やかな吸引と皮下脂肪を移動します。遠心分離の後にある脂肪組織の 3 層: 石油 (高層)、均一な脂肪 (中間層)、および血流体 (下層) (パネルC)。遠心分離後すぐに血の管を観察します。3 つの層がある: 血小板貧しい血しょう (PPP)、血小板血漿 (PRP)、赤血球 (パネルD)。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 3
図 3: 乾燥 - 加齢黄斑変性症 (AMD) の最高矯正視力 (BCVA) です。脈絡自家移植 Limoli 網膜修復法 (LRRT) による後のグループ A、0 (T0)、90 (T90) 180 (T180) 日数で測定制御グループ (チェック) に変更します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 4
図 4: Microperimetry (MY) グループ A の患者の加齢に伴う黄斑変性症 (AMD) 半年後 Limoli 網膜修復手法 (LRRT) を乾燥させます。私の増加 11.44 dB (T0) 12.59 dB (T180) から (+9.58%)。カラーのスケールは、0 から 36 dB で。固定の安定性: 安定、比較的不安定、不安定。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

選択基準 除外基準
白人被験者 等価球面で屈折異常 > 6 D
栄養状態が良く参加者 SD 10 月と FA によって滲出性 AMD の兆候
FA、AFI、SD OCT による診断 眼疾患: CT, GL, オンタリオ、MP、VM、CRD 等。
測定可能な VA 眼の外傷
BCVA ≥ 1 ログマー 全身性疾患: MS;奇妙ですDM;RD;HD;血管炎
正常眼圧 高血圧、がん、その他の全身性疾患
よい記憶 extrafoveal 域
解像度の最小角度のログマー: 対数SD-10 月: スペクトル ドメイン光コヒーレンストモグラフィー;AFI: 蛍光イメージング。FA: フルオレセイン造影;VA: 視力;IOP: 眼圧。D: ジオプター;CT: 白内障;GL: 緑内障;視神経炎;MP: 黄斑パッカ。VM: 新生血管膜;CRD: 網脈絡膜疾患;MS: 多発性硬化症;PD: パーキンソン病;DM: 糖尿病;RD: 腎疾患;HD: 肝疾患。

表 1: 包含と除外基準乾燥 - 加齢黄斑変性症 (AMD) 患者。

パラメーター LRRT (n = 11) コントロール (n = 14)
年齢 (平均) 71.5 ±3.8SD 80.4 ±2.3SD
年齢 (範囲) 62-84 73-79
セックス F:4 M:7 F:7 M:7
BCVA T0 0.581 ログマー 0.573 ログマー
(平均)
BCVA T0 (範囲) 0.301 - 1.0 0.0 ~ 1.0
BCVA T90 (平均) 0.504 ログマー 0.587 ログマー
BCVA T90 (範囲) 0.222 - 1 0.0 - 1
BCVA T180 (平均) 0.376 ログマー 0.601 ログマー
BCVA T180 (範囲) 0.046 - 0.699 0.0 ~ 1.0
割合 35.19 4.72
変更
p 値 < 0.01 > 0.5
年; 年齢します。n = 患者とコントロール;SD = 標準偏差;F = 女性;M = 男性;BCVA = ログマー; で最高矯正視力T0 = 手術再建; 前にベースラインT90 = 90 日間ポスト手術再建;T180 180 日間ポスト外科的再建を =。

表 2: 研究では、患者の臨床プロフィール。平均値 (T0)、前に記録された 90 (T90) と (T180) から 180 日後すべての患者で細胞移植 Limoli 網膜修復法 (LRRT) による。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

本研究の主な目的は、脂肪細胞、ADSCs、SVF で PRP の視細胞移植 VA と AMD の影響を受けた目の乾燥で網膜の感度を時間をかけて改善するかどうかを評価するためだった。別の主な目的は、GF を用いた治療法がいくつかの病気の患者にとって役に立つかもしれないいくつかの臨床研究が示唆しているので、最近の文献に基づいて、これらの細胞の可能な治療効果を実証することでした。

実際には、いくつかの研究は自家ひと誘導多能性幹細胞 (iPSC) が AMD18,組織補充療法における網膜色素上皮 (RPE) の再生を目的とした、移植細胞源を表すことができる示されている19. 典型的な RPE マーカーを表現、展示できる単層偏 GF 分泌を示す貪食能力と同様、遺伝子発現パターン ネイティブ RPE18,19 のそれらに類似するようにこれらの細胞シートが生成されます.移植時に、自己非ひと霊長類 iPSC RPE 細胞シートはどちらも免疫拒絶反応や腫瘍形成18,19を示した。

本研究は、いくつかの異なる特性を示します。視細胞移植細胞の視覚的パフォーマンスが向上するかどうかを AMD の影響を受けた人間の目の乾燥に直接行った。

その上、sovrachoroidal LRRT による自家細胞移植常に安全であることを証明されています。サブ網膜血管新生、黄斑浮腫、網膜剥離が登録されていることや 1 年で他の網膜の問題投稿の介入。その一方で、不適切な手術はその後出血、脈絡膜の穿孔に理論的につながることができますが、本研究で目は破損していません。ただし、サブ結膜の出血は通常、数日以内に再吸収され、合併症として再度示さないことを持つことが可能です。

最近の研究は、幼魚の ERG 値の大幅な増加の十分な証拠を提供している、BCVA と 90 と 180 日で、私のポスト自家移植。しかし、増加は大きい SD 10 月によって記録された網膜の厚さ平均 (RTA) 高い11,26であった場合。外科的移植細胞が周囲の組織、脈絡膜、網膜で GFs を作り出すことができるおよび塩基性繊維芽細胞成長因子 (bFGF) 血管内皮増殖因子 (VEGF) などの神経栄養因子・原因の特性があるといわれています。、色素上皮由来因子 (する PEDF)、インターロイキン (IL)、大食細胞のコロニー刺激因子 (M-CSF)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子 (GM-CSF)、および胎盤成長因子 (PlGF) 血小板生成血小板得られた成長因子 (PDGF)、血小板由来血管新生因子 (PDAF)など6,7,12,13,21

脈絡膜に近い移植配置、生産の GFs 光受容体、受容体、RPEs、ミュラー細胞内皮細胞に到達するため、脈絡膜の流れを入力するを許可するように考えられている、最終的に彼らと対話します。LRRT、自家移植要素が役に立つ、再生のための独自の方法でそれぞれ。脂肪細胞を生産 bFGF、上皮成長因子 (EGF)、インスリン様成長因子 1 (IGF-1)、IL、変換の増殖因子 β (TGF-β)、する PEDF、およびアディポネクチン21。ADSCs 生成 bFGF、VEGF、M-CSF、GM-CSF、PlGF、TGF-β、肝細胞増殖因子 (HGF)、IGF-1、IL、およびアンジオジェニン6,7。血小板は、PDGF、IGF-1、TGF-β、VEGF、bFGF、EGF、PDAF、トロンボスポンジン (TSP)6,12を生成します。

いくつかの要因は、内皮の再生を促進していくつかはこのように自家脂肪と脂肪細胞生存を支持する一方、他の人は血管新生のプロセス22,23,24を阻害する ADSC 増殖を刺激します。EGF は、内因性の bFGF 転写をトリガーし、その分泌活動25,27を増加する ADSCs を刺激することによって Müller 細胞に作用を発揮しながらする PEDF と bFGF は視細胞の生存を支持します。GFs は、通常 RPEs から分泌される、しかしこれは複雑な網膜色素上皮・脈絡の結果として萎縮性黄斑症の発生しません。光受容細胞と毛細血管の生存のための28を支持するパラクリン GF 移植細胞によって分泌が貢献しています。また、GM-CSF、M-CSF と抗炎症と走化性に及ぼす網膜細胞の残骸、RPEs29,30で行われる生理学的機能の除去に関与しているマクロファージがある IL。

脈絡膜の後ろに移植細胞の種類は、脈絡膜の流れに一定の GF 分泌を確保できます。GFs では、脈絡膜から網膜の細胞に着く、膜受容体と対話し、最後に細胞内経路をアクティブにすることができます。表示されているデータは、LRRT が脈絡膜血流と bFGF 受容体相互作用のみならず、ミュラー細胞、RPEs と網膜光受容体刺激による光受容体 trophism を高めることをお勧めします。その結果、遺伝子発現変動と最終的な抗アポトーシス効果は、neuroenhancement を説明できます。この細胞メカニズム移植グループの臨床所見で強調されているよう、視覚的パフォーマンスを向上させる能力の基礎となります。要約すると、LRRT は、長期的に乾燥 AMD の影響を受けた患者の視機能を維持するために役立ちます。

しかし、以前の研究で実証してきた、円錐ロッド ERG、エルグの棒表示、RTA と非常に高い相関これはエルグの円錐形のケースではありません。これは、ドライ型の amd 黄斑のボリュームを続けている定期的に、少なくとも初期段階26が危険にさらされる、中心窩の機能が表示されるという事実によって説明できます。この病理学の RTA を用いて残留網膜 trophism はより良い成果は RTA 250 μ m26以上の患者でより頻繁に LRRT 治療の予後の基準をすることができます。利用可能な GF セットの範囲は大きい細胞型との区域の存在に比例して電気的活動26で記録された neuroenhancement される可能性があります。後の段階で貧しい人々 の組織細胞性は乏しい GF 膜受容体相互作用によるプロシージャの後に求められている治療効果を与えない。

本研究の次のステップでは、統計的手法が有効であることを確認し、生化学的効果を研究するために必要なすべての必須テストを評価することによって大きい VA 患者の大きい数の募集中央固定を必要があります。それは細胞の視覚的活動、網膜電図、BCVA と私の11によって客観的に測定セル trophism の増加が反映されていると主張することができます。GF を用いた治療法は、眼科疾患の最新、選択的、安全、かつ合理的な治療を提供できます。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ARVO 2015 年に 5 月 3-7-デンバー、コロラド州 - 米国を提示しました。

Acknowledgments

著者の謝辞があります。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Blunt cannula, 3 mm.  Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.  RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge  RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0 IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope  Nidek Inc, Fremont, CA Nidek F10 
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany  SD-OCT 
Maia 100809 Microperimetry  CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system, C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy  Retimax for ERG 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Daftarian, N., Kiani, S., Zahabi, A. Regenerative therapy for retinal disorders. J. Ophthalmic Vis. Res. 5, 250-264 (2010).
  2. Thanos, C., Emerich, D. Delivery of neurotrophic factors and therapeutic proteins for retinal diseases. Expert. Opin. Biol. Ther. 5, 1443-1452 (2005).
  3. Cao, W., et al. In vivo protection of photoreceptors from light damage by pigment epithelium-derived factor. Inv. Ophthalmol. Vis. Sci. 42, 1646-1652 (2001).
  4. Bhutto, I., Lutty, G. Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex. Mol. Aspects Med. 33, (4), 295-317 (2012).
  5. McHarg, S., Brace, N., Bishop, P. N., Clark, S. J. Enrichment of Bruch's membrane from human donor eyes. J. Vis. Exp. (105), (2015).
  6. Kevy, S. V., et al. Preparation of growth factor enriched autologous platelet gel. Transactions of the Society for Biomaterials 27th Annual Meeting. St. Paul, Minnesota, USA. April 24-29 (2001).
  7. Schaffler, A., Buchler, C. Concise review: adipose tissue-derived stromal cells-basic and clinical implications for novel cell-based therapies. Stem Cells. 25, 818-882 (2007).
  8. Filatov, V. P. Tissue therapy. Med. Gen. Fr. 11, 3-5 (1951).
  9. Pelaez, O. Retinitis pigmentosa. Cuban experience. Editorial Cientifico Técnica. La Habana, Cuba. (1997).
  10. Meduri, R., et al. Effect of basic fibroblast growth factor on the retinal degeneration of B6(A)- Rperd12/J (retinitis pigmentosa) mouse: a morphologic and ultrastructure study. ARVO 2007 Annual Meeting. Fort Lauderdale. May 6-10 (2007).
  11. Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Morales, M. U., Nebbioso, M., Limoli, C. Preliminary Study on Electrophysiological Changes After Cellular Autograft in Age-Related Macular Degeneration. Medicine. 93, (29), 355 (2014).
  12. Tischler, M. Platelet rich plasma: The use of autologous growth factors to enhance bone and soft tissue grafts. N. Y. State Dent. J. 68, 22 (2002).
  13. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, (12), 4279-4295 (2002).
  14. Lin, K. J., et al. Topical administration of orbital fat-derived stem cells promotes corneal tissue regeneration. Stem Cell Res. Ther. 4, (3), 72 (2013).
  15. Limoli, P. The retinal cell-neurorigeneration. Principles, applications and perspectives. The growth factors. FGE Reg. Canelli (AT). 159-206 (2014).
  16. Coleman, W. P., et al. Guidelines of care for liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 45, 438-447 (2001).
  17. Lawrence, N., Coleman, W. P. Liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 47, 105-108 (2002).
  18. Kamao, H., et al. Characterization of human induced pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelium cell sheets aiming for clinical application. Stem Cell Reports. 23, (2), 205-218 (2014).
  19. Dang, Y., Zhang, C., Zhu, Y. Stem cell therapies for age-related macular degeneration: the past, present, and future. Clin. Interv. Aging. 10, 255-264 (2015).
  20. Nebbioso, M., Livani, M. L., Steigerwalt, R. D., Panetta, V., Rispoli, E. Retina in rheumatic diseases: Standard full field and multifocal electroretinography in hydroxychloroquine. Clin. Exp. Optom. 94, (3), 276-283 (2011).
  21. Wang, P., Mariman, E., Renes, J., Keijer, J. The secretory function of adipocytes in the physiology of white adipose tissue. J. Cell. Physiol. 216, 3-13 (2008).
  22. Chen, G., et al. VEGF-Mediated Proliferation of Human Adipose Tissue-Derived Stem Cells. PloS One. 8, 73673 (2013).
  23. Bagchi, M., et al. Vascular endothelial growth factor is important for brown adipose tissue development and maintenance. FASEB J. 27, 3257-3271 (2013).
  24. Carron, J. A., et al. Cultured human retinal pigment epithelial cells differentially express thrombospondin-1, -2, -3,and -4. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 32, 1137-1142 (2000).
  25. Kim, S. Y., et al. Expression of pigment epithelium-derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in sickle cell retina and choroid. Exp. Eye Res. 77, 433-445 (2003).
  26. Limoli, P. G., Limoli, C., Vingolo, E. M., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Cell surgery and growth factors in dry age-related macular degeneration: visual prognosis and morphological study. Oncotarget. 7, (30), 46913-46923 (2016).
  27. Ueki, Y., Reh, T. A. EGF stimulates Müller glial proliferation via a BMP-dependent mechanism. Glia. 61, 778-789 (2013).
  28. Kozlowski, M. R. RPE cell senescence: A key contributor to age-related macular degeneration. Med. Hypotheses. 78, 505-510 (2012).
  29. Schneider, A., et al. The hematopoietic factor G-CSF is a neuronal ligand that counteracts programmed cell death and drives neurogenesis. J. Clin. Invest. 115, 2083-2098 (2015).
  30. Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat. Neurosci. 9, 843-852 (2006).
乾燥 - 加齢黄斑変性症の視細胞の細胞移植による再生療法:<em>体内</em>の予備的なレポート
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).More

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter