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Medicine

गुब्बारा आधारित चोट के लिए प्रेरित Myointimal हाइपरप्लासिया में माउस पेट महाधमनी

doi: 10.3791/56477 Published: February 7, 2018

Summary

यह लेख महाधमनी गुब्बारा चोट के बाद myointimal हाइपरप्लासिया (MH) के विकास का अध्ययन करने के लिए एक murine मॉडल प्रदर्शित करता है ।

Abstract

पशु मॉडलों का उपयोग MH, एक प्रकार का रोग के लिए एक प्रमुख कारण की एक बेहतर समझ के लिए आवश्यक है । इस अनुच्छेद में, हम एक murine गुब्बारा अनाच्छादन मॉडल है, जो बड़े पशुओं में स्थापित पोत चोट मॉडलों के साथ तुलनीय है प्रदर्शन करते हैं । गुब्बारा कैथेटर के साथ महाधमनी अनाच्छादन मॉडल नैदानिक सेटिंग नकल करता है और तुलनीय pathobiological और शारीरिक परिवर्तन की ओर जाता है । संक्षेप में, महाधमनी abdominalisमें एक क्षैतिज चीरा प्रदर्शन के बाद, एक गुब्बारे कैथेटर पोत में डाला जाएगा, फुलाया, और प्रतिगामी शुरुआत की । गुब्बारे की मुद्रास्फीति intima चोट और पोत के overdistension के लिए नेतृत्व करेंगे । कैथेटर को हटाने के बाद, महाधमनी चीरा एकल stiches के साथ बंद कर दिया जाएगा । इस लेख में दिखाया मॉडल प्रतिलिपि, प्रदर्शन करने के लिए आसान है, और जल्दी से और मज़बूती से स्थापित किया जा सकता है । यह महंगा प्रयोगात्मक चिकित्सकीय एजेंटों, जो एक किफायती फैशन में लागू किया जा सकता है मूल्यांकन के लिए विशेष रूप से उपयुक्त है । विभिंन नॉकआउट-माउस उपभेदों का उपयोग करके, MH विकास पर विभिंन जीनों के प्रभाव का आकलन किया जा सकता है ।

Introduction

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कोरोनरी और परिधीय धमनियों में धमनी का रोग और रोगियों की मृत्यु दर पर एक बड़ा प्रभाव है1। एक अंतर्निहित रोग तंत्र myointima हाइपरप्लासिया (MH) है, जो वृद्धि प्रसार, प्रवास, और संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं (एसएमसी)2से extracellular मैट्रिक्स प्रोटीन के संश्लेषण की विशेषता है । एसएमसी पोत की मीडिया परत में स्थित है और लुमेन की सतह को उत्तेजना पर माइग्रेट । Stimulatory संकेतों में वृद्धि कारकों, साइटोकिंस, सेल-सेल संपर्क, लिपिड, extracellular मैट्रिक्स घटकों, और यांत्रिक कतरनी और खिंचाव बलों3,4,5,6शामिल हैं । पोत दीवार की चोटों, रोग या iatrogenic, endothelial कोशिका और चिकनी मांसपेशी कोशिका क्षति का कारण है और भड़काऊ प्रतिक्रियाओं को उत्तेजित, और इस तरह MH7के लिए सीसा ।

विभिन्न पशु मॉडल वर्तमान में धमनी की चोट और myointima हाइपरप्लासिया अध्ययन करने के लिए उपलब्ध हैं । सूअर या कुत्तों की तरह बड़े जानवरों को मनुष्य के साथ एक समान धमनी और कोरोनरी एनाटॉमी साझा करने का लाभ है और एंजियोप्लास्टी तकनीक, प्रक्रिया की जांच अध्ययन के लिए विशेष रूप से उपयुक्त हैं, और उपकरणों8। हालांकि, सुअर मॉडल उच्च thrombogenicity9,10की खामी है, जबकि कुत्तों केवल पोत चोट11के लिए एक हल्के प्रतिक्रिया है । इसके अलावा, सभी बड़े पशु मॉडल विशेष आवास, उपकरण, और कर्मचारियों की आवश्यकता है, जो उच्च लागत के साथ जुड़े रहे है और एक संस्था में हमेशा उपलब्ध नहीं हैं । छोटे पशु मॉडल चूहों और चूहों में शामिल हैं । चूहों की तुलना में, चूहों कम लागत और मॉडल बाहर दस्तक की एक किस्म के अस्तित्व के फायदे हैं. इस वीडियो में वर्णित मॉडल ApoE के साथ जोड़ा जा सकता है-/चूहों को बारीकी से atherosclerotic वाहिकाओं में एंजियोप्लास्टी के नैदानिक सेटिंग की नकल करने के लिए एक पश्चिमी आहार के साथ खिलाया12. पिछले मॉडल तार चोट13, द्रव सुखाना14, वसंत15, या कफ चोट16के माध्यम से संवहनी चोट प्रेरित । चोट की प्रकृति के बाद से बहुत विकास और महाराष्ट्र के संविधान को प्रभावित करेगा, एक गुब्बारे कैथेटर का उपयोग करने के लिए पोत चोट प्रेरित नैदानिक सेटिंग की नकल करने के लिए सबसे अच्छा तरीका है ।

इस लेख में हम एक उपंयास विधि का वर्णन करने के लिए एक चूहे में गुब्बारा कैथेटर के साथ महाराष्ट्र प्रेरित । एक RX-बंदरगाह (चित्र 1a) के साथ एक गुब्बारा कैथेटर (१.२ मिमी x 6 मिमी) का उपयोग intimal परत के परिमार्जन की अनुमति देता है और, एक ही समय में, पोत के एक overdistension की प्रेरण । इन दोनों कारकों में से महाराष्ट्र के विकास के लिए महत्वपूर्ण ट्रिगर हैं । इस मॉडल के लिए प्रेक्षण समय 28 दिन17है ।

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Protocol

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पशु प्रयोगशाला पशुओं के सिद्धांतों के लिए गाइड के अनुपालन में मानव देखभाल प्राप्त, प्रयोगशाला पशु संसाधनों के संस्थान द्वारा तैयार है, और स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों द्वारा प्रकाशित । सभी पशु प्रोटोकॉल को जिंमेदार स्थानीय प्राधिकारी द्वारा अनुमोदित किया गया था (' ' Amt फर Gesundheit und Verbraucherschutz, Hansestadt (स्वास्थ्य और उपभोक्ता संरक्षण के लिए कार्यालय) हैंबर्ग ' ') ।

1. कैथेटर तैयारी

नोट: कैथेटर के बारे में जानकारी के लिए सामग्री की तालिका को देखें ।

  1. कैथेटर धारक से कैथेटर ले लो ।
  2. बाहर बाहर बंदरगाह के माध्यम से लुमेन से guidewire खींचो ।
  3. कैथेटर के बाहर के छोर पर चिपकने वाला cyanoacrylate की एक बूंद में रखो ।
    चेतावनी: लेटेक्स या नाइट्राइल दस्ताने पहनें ।
  4. कैथेटर के RX बंदरगाह पर guidewire प्लेस और यह बाहर का बंदरगाह के लिए लुमेन के माध्यम से अग्रिम । बाद में, guidewire को थोड़ा पीछे खींचने के लिए ~ 5 मिमी के अंत तक एक स्थान छोड़ दें ।
  5. 5 मिनट रुको करने के लिए चिपकने वाली सूखी अनुमति देते हैं ।
  6. guidewire ले जाएं, यह तय किया जाना चाहिए । यह अभी भी मोबाइल है, तो चरण १.३-१.६ दोहराएँ ।
  7. १.५ मिलीलीटर ०.९% खारा के साथ एक 3 मिलीलीटर सिरिंज भरें और यह गुब्बारा मुद्रास्फीति बंदरगाह से कनेक्ट ।
  8. पुश सिरिंज सवार का परीक्षण करने के लिए गुब्बारा मुद्रास्फीति । सिरिंज में ०.६ मिलीलीटर खारा छोड़ दें ।

2. माउस की तैयारी

  1. 14 सप्ताह की आयु में पुरुष चूहों को प्राप्त लगभग 30 ग्राम वजनी
    नोट: हम प्रयोगशाला पशुओं के संस्थान से प्राप्त जानवरों का इस्तेमाल किया । हम C57BL/6J यहां इस्तेमाल किया ।
  2. 2.0-2.5% isofurane (५०० मिलीलीटर/न्यूनतम ऑक्सीजन प्रवाह दर) के साथ माउस को anaesthetize करने के लिए एक प्रेरण कक्ष का उपयोग करें ।
  3. एक हीटिंग पैड पर अपनी पीठ पर माउस प्लेस और एक facemask के साथ संज्ञाहरण बनाए रखने के मुंह और माउस की नाक को कवर । एक सजगता के अभाव को सत्यापित करने के लिए हिंद पैर और पूंछ चुटकी द्वारा संज्ञाहरण के पर्याप्त गहराई के लिए जाँच करें ।
  4. एक बाल trimmer का उपयोग कर पेट के बाल निकालें ।
  5. हिंद पैर फैला और टेप का उपयोग कर अपनी स्थिति को ठीक ।
  6. povidone-आयोडीन, ८०% इथेनॉल के बाद का उपयोग उदर क्षेत्र को संक्रमित । इस चरण को दो बार दोहराएं ।
  7. शल्य साइट को दूषित नहीं मिलता है सुनिश्चित करने के लिए एक शल्य कपड़ा का प्रयोग करें । पेट अंगों को बेनकाब करने के लिए एक कैंची (या स्केलपेल) के साथ लीनिया अल्बा के साथ त्वचा और मांसपेशी परतों खोलें ।
  8. एक ०.९% खारा moisturized दस्ताने और लपेट में आंतों रखना उंहें नम रखने के लिए ।
  9. उदर महाधमनी के ऊपर के फैटी टिशू को हटाने के लिए दो महीन संदंश का प्रयोग करें ।
  10. एक इंसुलिन सिरिंज (30G) का उपयोग करना, २५० µ l के हेपरिन समाधान (५० U/mL) अवर वेना कावा (IVC) में इंजेक्ट करें और इसकी प्रणालीगत वितरण के लिए 3 मिनट प्रतीक्षा करें । हेपरिन रक्तस्तम्भन को दबाने और सर्जरी के दौरान अवांछित थक्के को रोकने जाएगा ।
  11. दो संदंश का उपयोग कर, टुकड़े infrarenal महाधमनी नीचे अपनी विभाजन और उसके जावक शाखा वाहिकाओं के लिए ।
  12. Ligate पक्ष वाहिकाओं, जो clamped क्षेत्र में रखा जाएगा की उंमीद कर रहे हैं, एक उच्च तापमान cauterizer के साथ ।
  13. infrarenal महाधमनी सीधे गुर्दे की धमनियों के नीचे clamping द्वारा रक्त का प्रवाह बंद करो ।
  14. बस महाधमनी विभाजन के ऊपर एक बाहर की स्थिति में एक दूसरे दबाना प्लेस ।
  15. पोत के साथ clamps के बीच मध्यबिंदु पर कैंची का उपयोग कर एक छोटे से क्षैतिज चीरा प्रदर्शन.
    नोट: चीरा का आकार पोत की परिधि के 1/3 के बराबर होना चाहिए ।
  16. चीरा में एक (30G) सुई के साथ एक सिरिंज डालें और २५० µ l हेपरिन समाधान (५० यू/एमएल) के साथ महाधमनी फ्लश.
  17. 10-0 टांके का प्रयोग, चीरा के प्रत्येक पक्ष पर एक ही गांठ जगह है ।
  18. चीरा में एक पोत फैलाव डालने और पोत थोड़ा फैला द्वारा महाधमनी फैली हुई है । फैलाव को 2 से 3 बार दोहराएं ।
  19. ०.९% खारा के साथ गुब्बारा कैथेटर moisturize ।
  20. महाधमनी में चपटा गुब्बारा-कैथेटर डालें और महाधमनी पर समीपस्थ क्लैंप की ओर अग्रिम ।
  21. समीपस्थ क्लैंप तक पहुँचने, ध्यान से समीपस्थ क्लैंप खोलने के लिए और खून का रिसाव को रोकने के लिए गुब्बारा फुलाना, इंजेक्शन द्वारा ~ खारा के ०.६ मिलीलीटर.
    नोट: पोत के लिए फुलाया गुब्बारा का अनुपात 1.5:1 है ।
  22. लगभग 2 सेमी के लिए कैथेटर प्रतिगामी अग्रिम ।
  23. विस्तारित कैथेटर वापस खींच, जबकि सिरिंज जारी करके थोड़ा गुब्बारा फुलाना ।
  24. कैथेटर महाधमनी के चीरा तक पहुँच जाता है जब समीपस्थ दबाना फिर से अनुलग्न करें । गुब्बारा पूरी तरह से खंडन करना और इसे हटा दें ।
  25. कुल्ला २५० µ l हेपरिन समाधान (५० U/एमएल) के साथ महाधमनी एक 30G सिरिंज का उपयोग कर ।
  26. महाधमनी चीरा 10-0 टांके का उपयोग बंद करें । प्रत्येक पार्श्व पक्ष पर जगह बाधित टांके, ventral ओर एक या दो टांके के बाद ।
  27. बाहर की क्लैंप खोलें । रक्तस्राव के मामले में, फिर से दबाना बंद करें और अतिरिक्त टांके लगाएं ।
  28. समीपस्थ क्लैंप सावधानी से खोलें ।
  29. इसे समर्थन और किसी भी रक्तस्राव को रोकने के लिए टांके पर दो झाड़ू लगाएं ।
  30. इसे बनाए रखने के लिए सीवन पर अवशोषित hemostats रखें ।
    नोट: एक महाधमनी पल्स चीरा से लंबा दिखाई होना चाहिए.
  31. आंतों को वापस पेट में लगाएं ।
  32. कुल्ला ०.९% खारा है, जो पूर्व किया गया है के साथ उदर गुहा ३७ डिग्री सेल्सियस के लिए गर्म ।
  33. 6-0 चल टांके का उपयोग कर पेट की मांसपेशी परत बंद करें ।
  34. 5-0 चल टांके के साथ त्वचा को बंद करें ।
  35. माउस को जगाने के लिए अनुमति देने से पहले 4-5 मिलीग्राम/किलोग्राम Carprofen सुई । पशु की निगरानी जब तक यह चेतना प्राप्त की है, स्टर्नल recumbency बनाए रखने । पूरी वसूली होने तक एक पिंजरे में अकेले जानवर रखें ।
  36. पीने के पानी के लिए Metamizole जोड़ें (५० मिलीग्राम/3 दिनों के लिए दर्द की दवा के रूप में और पशु दैनिक निगरानी । आमतौर पर चूहे metamizole के मीठे स्वाद की तरह और सर्जरी के तुरंत बाद पीना शुरू कर देते हैं. यदि पसंदीदा, निरंतर जारी इंजेक्शन एजेंटों metamizole के बजाय इस्तेमाल किया जा सकता है ।
    नोट: इस मॉडल के लिए अवलोकन अवधि 28 दिन है ।

3. Histopathology

  1. फसल को गुब्बारा-घायल महाधमनी ने 28 दिनों के बाद तैयार कर चूहों के रूप में बताए चरणों में २.२ से २.९.
  2. गुब्बारे को हटाने के लिए कैंची का प्रयोग करें-घायल महाधमनी (विभाजन और गुर्दे वाहिकाओं के ऊपर ०.३ मिमी के बीच) और अपने दिल को काटने के द्वारा माउस euthanize ।
  3. ०.९% NaCl के साथ पोत के लुमेन फ्लश ।
  4. 4% paraformaldehyde (पीएफए) में काटा पोत को ठीक रात भर और यह इथेनॉल की सांद्रता बढ़ाने में निर्जलीकरण, 2 घंटे के लिए ७०% इथेनॉल के साथ शुरू, 1 घंटे के लिए ८०% इथेनॉल, 2 घंटे के लिए ९५% इथेनॉल, और 5 घंटे के लिए १००% इथेनॉल । फिर, xylene में 2 घंटे 3 बार के लिए नमूनों की मशीन, तेल के साथ नमूनों घुसपैठ से पहले ।
    नोट: ०.९% NaCl के साथ काटा पोत निस्तब्धता के बजाय, यह 4% पीएफए के साथ फ्लश किया जा सकता है ।
    सावधानी: पीएफए और xylene विषैले होते हैं और इन्हें विशेष सावधानी के साथ हैंडल किया जाना चाहिए ।
  5. तेल में नमूना एंबेड और एक microtome का उपयोग कर 5 µm मोटाई के स्लाइस में कटौती ।
  6. Deparaffinize 5 मिनट के लिए xylene 3 बार के साथ स्लाइड ।
  7. इथेनॉल की एक घटते श्रृंखला का उपयोग ऊतक स्लाइड हाइड्रेट । १००% इथेनॉल 5 मिनट, ९५%, ८०% और ७०% इथेनॉल के 3 मिनट के बाद के लिए 2 बार के साथ शुरू करो ।
  8. Masson के trichrome धुंधला के रूप में18वर्णित के साथ स्लाइड दाग ।
  9. १००% इथेनॉल 10 मिनट प्रत्येक के लिए 2 बार में निर्जलीकरण सना हुआ स्लाइड । xylene के साथ स्पष्ट 10 मिनट प्रत्येक के लिए 2 बार और बढ़ते माध्यम में माउंट ।
  10. एक चमकदार क्षेत्र माइक्रोस्कोप के साथ स्लाइड देखें । एक सिंहावलोकन चित्र या विस्तृत अवलोकन के लिए ०.३५ के एक संख्यात्मक एपर्चर के साथ 20x आवर्धन के साथ एक लेंस के लिए ०.१२ के 5x आवर्धन और एक संख्यात्मक एपर्चर के साथ एक लेंस का प्रयोग करें ।

4. इम्यूनोफ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी

  1. इथेनॉल की एक घटते श्रृंखला का उपयोग ऊतक स्लाइड हाइड्रेट । 5 मिनट के लिए १००% इथेनॉल 2 बार, ९५%, ८०% और ७०% इथेनॉल के 3 मिनट के बाद के साथ शुरू करो ।
  2. antigen-पुनर्प्राप्ति को 20 मिनट के लिए एक स्टीमर में antigen-पुनर्प्राप्ति समाधान में स्लाइड को हीटिंग द्वारा निष्पादित करें ।
  3. स्लाइड्स को कमरे के तापमान के नीचे ठंडा होने दें ।
  4. फास्फेट (पंजाब) के साथ तीन बार के लिए स्लाइड धोने के बाद, 30 मिनट के लिए अनुभागों पर antigen ब्लॉकिंग समाधान लागू करें ।
  5. पंजाबियों के साथ 5 मिनट के लिए तीन बार स्लाइड धो लें ।
  6. प्राथमिक एंटीबॉडी मंदक में पतला प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ मशीन वर्गों ।
    ध्यान दें: सही एकाग्रता और मशीन समय प्रत्येक एंटीबॉडी के लिए अलग से चुना जाना चाहिए ।
  7. अनबाउंड एंटीबॉडी को दूर करने के लिए पंजाब के साथ 5 मिनट के लिए तीन बार स्लाइड धो लें ।
  8. एक पूर्व संयुग्मित माध्यमिक माध्यमिक एंटीबॉडी मंदक में पतला एंटीबॉडी के साथ एक मशीन वर्गों ।
    ध्यान दें: सही एकाग्रता और मशीन समय प्रत्येक एंटीबॉडी के लिए अलग से चुना जाना चाहिए ।
  9. 5 मिनट तीन बार के लिए स्लाइड धोने द्वारा असीम एंटीबॉडी निकालें ।
  10. Counterstain 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) का उपयोग करके सेल नाभिक 15 मिनट के लिए; अंतिम DAPI एकाग्रता ३५० एनएम होना चाहिए ।
  11. इम्यूनोफ्लोरेसेंस संगत बढ़ते समाधान में स्लाइड माउंट ।
    नोट: गलत बढ़ते समाधान का उपयोग प्रतिदीप्ति संकेत अस्पष्ट कर सकते हैं ।
  12. एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के साथ स्लाइड देखें । १.३ के एक संख्यात्मक एपर्चर के साथ एक 40x आवर्धन लेंस का प्रयोग करें ।

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Representative Results

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चूहों में MH के विकास का अध्ययन करने के लिए बैलून अनाच्छादन एक उपयुक्त मॉडल है । जानवरों की सर्जरी से अच्छी तरह से ठीक हो और एक उत्कृष्ट शारीरिक स्थिति के बाद आपरेशन दिखा । हम शल्य चिकित्सा प्रक्रिया के कारण से कम 3% मृत्यु दर के साथ ५० चूहों में इस मॉडल की स्थापना की । आंकड़े 1b -C कुंजी सर्जिकल चरण दिखाएं । लीनिया अल्बाके साथ एक त्वचा चीरा के बाद, महाधमनी abdominalisकी पहचान । जगह microsurgical clamps (चित्र 1b) । महाधमनी के बीच में एक छोटा सा चीरा बनाओ, पोत में एक गुब्बारा कैथेटर सेट और यह प्रतिगामी, रक्त प्रवाह की दिशा (चित्रा 1C) के खिलाफ स्लाइड । फुलाया गुब्बारा के आंदोलन intima के स्क्रैप करने के लिए सुराग और, एक ही समय में, पोत के overdistension । महाधमनी चीरा सिंगल stiches के साथ बंद किया जाएगा । एक महाधमनी नाड़ी चीरा से लंबी दिखाई जानी चाहिए ।

MH समय के साथ भ्रष्टाचार में उत्तरोत्तर विकसित करता है । Masson के trichrome के साथ ऊतकीय धुंधला आंतरिक लोचदार लेमिना (चित्र 2a) के अंदर myointima गठन को दर्शाता है । Myointimal घावों में मुख्य रूप से सेलुलर घटकों के SM22 और कुछ extracellular मैट्रिक्स घटकों (चित्रा बीसी) के लिए सकारात्मक शामिल हैं । Myointimal कोशिकाओं को आगे इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला द्वारा मूल्यांकन कर रहे हैं । myointima में मुख्य आबादी चिकनी मांसपेशी (चिकनी मांसपेशी actin (SMA) सकारात्मक) कोशिकाओं और myofibroblasts (fibroblast सक्रियकरण प्रोटीन (FAP) सकारात्मक) कोशिकाओं (चित्रा बी) के होते हैं ।

Figure 1
चित्र 1. कैथेटर और इसके आरोपण के योजनाबद्ध । (क) कैथेटर की विस्तृत योजनाबद्ध । बाहर का बंदरगाह, गुब्बारा, रैपिड एक्सचेंज पोर्ट (rx-बंदरगाह), guidewire, rx के लिए एक लुमेन-बंदरगाह, rx से डबल लुमेन-बंदरगाह गुब्बारा करने के लिए, हब, गुब्बारा मुद्रास्फीति बंदरगाह । (ख) शल्य प्रक्रिया का योजनाबद्ध चित्रण. महाधमनी abdominalis के रक्त प्रवाह दो माइक्रो clamps के साथ बंद कर दिया है और एक छोटा सा चीरा किया जाता है । ग. फुलाया कैथेटर के अंदर महाधमनी abdominalisकृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्र 2. आंतरिक लोचदार लेमिना के अंदर Myointima गठन । (क) निर्वस्त्र माउस aortas काटा, आयल एंबेडेड हैं, और एक प्रतिनिधि पार अनुभाग trichrome धुंधला में दिखाया गया है । (ख) गुब्बारों का डबल इम्यूनोफ्लोरेसेंस दाग-नंगा aortae दिखाया गया है. ऊपरी पंक्ति myointimal SM22 और कोलेजन III के लिए दाग घावों को दर्शाया गया है । नीचे पंक्ति में, जहाजों SMA और FAP के लिए दाग रहे हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

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Discussion

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यह आलेख myointimal हाइपरप्लासिया के विकास का अध्ययन करने के लिए एक murine मॉडल को प्रदर्शित करता है और अंतर्निहित रोग प्रक्रियाओं की खोज और नई दवाओं या चिकित्सीय विकल्पों के परीक्षण की अनुमति देता है ।

इस प्रोटोकॉल में सबसे महत्वपूर्ण कदम महाधमनी के अनाच्छादन है । विशेष देखभाल इस कदम के दौरान भुगतान किया जाना चाहिए के रूप में अत्यधिक अनाच्छादन धमनीविस्फार गठन और मॉडल विफलता के लिए नेतृत्व करेंगे । दूसरी ओर, यदि अनाच्छादन अपर्याप्त प्रदर्शन किया है, बहुत कम myointima का विकास होगा । इसलिए, अनाच्छादन कदम की तीव्रता परिणाम और इस पशु मॉडल की सफलता के लिए महत्वपूर्ण है ।

शल्य प्रक्रिया के संबंध में, यह महत्वपूर्ण है पोत की दो दीवारों stiches, जो पोत प्रत्यक्षता की जल्दी विफलता में परिणाम हो सकता है की स्थापना से छेदा नहीं कर रहे हैं । हम पहले एक माउस मॉडल है जिसमें हम चूहों के उदर महाधमनी में पोत एक प्रकार का रोग प्रेरित18वर्णित है । हालांकि, यह और सबसे अंय मॉडलों केवल विश्लेषण के लिए ऊतक की बहुत छोटी मात्रा में प्रदान करते हैं । इस विधि का एक लाभ (~ 1 सेमी पोत खंड) प्राप्त ऊतक की अपेक्षाकृत बड़ी राशि है । एक पोत भ्रष्टाचार इस प्रकार कई भागों में विभाजित किया जा सकता है और विभिन्न विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया, प्रभावी ढंग से आवश्यक प्रयोगात्मक पशुओं की संख्या को कम करने.

इसके अलावा, उपयुक्त दस्तक बाहर जानवरों के लिए विभिंन रोग की स्थिति में myointima हाइपरप्लासिया के विकास का अध्ययन किया जा सकता है । आनुवंशिक पृष्ठभूमि भी इस जानवर मॉडल सेटिंग्स की एक किस्म या कुछ जीन के प्रभाव में myointimal हाइपरप्लासिया के तंत्र को समझने के लिए के साथ जोड़ा जा सकता है ।

सारांश में, मॉडल यहां वर्णित प्रतिलिपि, प्रदर्शन करने के लिए आसान है, और जल्दी से और मज़बूती से स्थापित किया जा सकता है । सफलतापूर्वक इस मॉडल में उपचार के विकल्प का परीक्षण आगे बड़े पशु मॉडल19में पुष्टि की जा सकती है ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

लेखक उसे तकनीकी सहायता के लिए ईसाई Pahrmann धंयवाद ।

dw अधिकतम कदे फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था । T.D. और kröner स्नेहन (2012_EKES. 04) और ड्यूश Forschungsgemeinschaft (DE2133/2 -1 _ से अनुदान प्राप्त किया । एस. एस. ड्यूश Forschungsgemeinschaft से अनुसंधान अनुदान प्राप्त (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/

Materials

Name Company Catalog Number Comments
10-0 Ethilon suture Ethicon 2814G
3 mL Syringe BD Medical 309658
37% HCl Sigma-Aldrich H1758
5-0 prolene suture Ethicon EH7229H
6-0 prolene suture Ethicon 8706H
Acid Fuchsin Sigma-Aldrich F8129-25G Trichrome staining
Antigen retrieval solution Dako S1699
Azophloxin Waldeck 1B-103 Trichrome staining
Bepanthen Eye and Nose ointment Bayer 1578675 Eye ointment
Betadine Solution Betadine Purdue Pharma NDC:67618-152
C57BL/6J Charles River Stock number 000664
Clamp applicator Fine Science Tools 18056-14 JAW DIMS: 4 x 0.75 mm LENGTH: 13 mm
Collagen 3 abcam ab7778 Antibody
DAPI Thermo Fischer D1306
Donkey anti-Goat IgG AF555 Invitrogen A21432 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF488 Invitrogen A21206 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF488 Invitrogen A11055 Secondary antibody
Donkey anti-Rabbit IgG AF555 Invitrogen A31572 Secondary antibody
Ethanol 70% Th. Geyer 2270
Ethanol 96% Th. Geyer 2295
Ethanol absolute Th. Geyer 2246
FAP abcam ab28246 Antibody
Forceps fine Fine Science Tools 11251-20
Forceps standard Fine Science Tools 11023-10
Glacial Acetic Acid Sigma-Aldrich 537020
Hair clipper WAHL 8786-451A ARCO SE
Heparin Rotexmedica PZN 3862340 25.000 I.E./mL
High temperature cautery kit Bovie 18010-00
Image-iT FX Signal Enhancer Invitrogen I36933 Blocking solution
Light Green SF Waldeck 1B-211 Trichrome staining
Microsurgical clamp Fine Science Tools 18055-04 Micro-Serrefine - 4mm
MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange Abbott 1012268-06U
Molybdatophosphoric acid hydrate Merck 1.00532.0100 Trichrome staining
NaCl 0,9% B.Braun PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160
Needle holder Fine Science Tools 12075-14
Novaminsulfon Ratiopharm PZN 03530402 Metamizole
Orange G Waldeck 1B-221 Trichrome staining
Paraffin Leica biosystems REF 39602004
PBS pH 7,4 Gibco 10010023
PFA 4% Electron Microscopy Sciences #157135S
Ponceau S solution Serva Electrophoresis 33427 Trichrome staining
Primary antibody diluent Dako S3022
Prolong Gold Mounting solution Thermo Fischer P36930 Mounting solution for immunofluorescence stained slides
Replaceable Fine Tip Bovie H101
Resorcin-Fuchsin Weigert Waldeck 2E-30 Trichrome staining
Rimadyl Pfizer 400684.00.00 Carprofen
Scissors Fine Science Tools 14028-10
Scissors Vannas-style Fine Science Tools 15000-03
Secondary antibody diluent Dako S0809
Fast acting Adhesive MINIS 3x1g UHU 45370 Cyanoacrylate
Slide Rack Ted Pella 21057
SM22 abcam ab10135 Antibody
SMA abcam ab21027 Antibody
Staining dish Ted Pella 21075
Surgical microscope Leica M651
Tabotamp fibrillar Ethicon 431962 Absorbable hemostat
Transpore Surgical Tape 3M 1527-1
U-100 Insulin syringe BD Medical 324825
Vessel Dilator Fine Science Tools 18603-14
Vitro-Clud Langenbrinck 04-0001
Weigerts iron hematoxylin Kit Merck 1.15973.0002 Trichrome staining
Xylene Th. Geyer 3410

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References

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गुब्बारा आधारित चोट के लिए प्रेरित Myointimal हाइपरप्लासिया में माउस पेट महाधमनी
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Tediashvili, G., Wang, D., Reichenspurner, H., Deuse, T., Schrepfer, S. Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta. J. Vis. Exp. (132), e56477, doi:10.3791/56477 (2018).More

Tediashvili, G., Wang, D., Reichenspurner, H., Deuse, T., Schrepfer, S. Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta. J. Vis. Exp. (132), e56477, doi:10.3791/56477 (2018).

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