Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Genetics

ايليجانس كاينورهابديتيس السلكية-نموذج تنوعاً في فيفو لدراسة التفاعلات بين الميكروبات والمضيف

doi: 10.3791/56487 Published: October 18, 2017

Summary

نقدم هنا، ديدان أسطوانية ايليجانس كاينورهابديتيس كنموذج مضيف تنوعاً لدراسة التفاعل الميكروبية.

Abstract

علينا أن نظهر أسلوب استخدام ايليجانس كاينورهابديتيس كمضيف نموذج لدراسة التفاعل الميكروبية. ويتم إدخال الميكروبات عن طريق النظام الغذائي يجعل الأمعاء الموقع الرئيسي للمرض. الأمعاء السلكية هيكلياً ووظيفيا يقلد أمعاء الثدييات وهو شفاف يجعلها قابلة للدراسة المجهرية للاستعمار. هنا نظهر أن مسببات الأمراض يمكن أن تسبب المرض والموت. نحن قادرون على تحديد طفرات الميكروبية التي تظهر ضراوة غيرت. يجعل استجابتها الفطرية المصانة الإجهادات الأحيائية C. ايليجانس نظاما ممتازا للتحقيق في أوجه التفاعلات المناعية الفطرية المضيف. نظهر أن تستضيف مع الطفرات في الجين أوكسيديز المزدوج لا يمكن أن تنتج الأنواع الأكسجين التفاعلية وغير قادر على مقاومة الميكروبات إهانة. كذلك ندلل على براعة المقايسة بقاء قدم بإظهار أنه يمكن استخدامه لدراسة تأثيرات مثبطات لنمو الميكروبات. كما يمكن استخدام هذا الفحص اكتشاف عوامل الفوعة الفطرية كأهداف لتطوير العوامل المضادة للفطور الرواية، فضلا عن إتاحة فرصة لمواصلة الكشف عن التفاعلات بين الميكروبات والمضيف. تصميم هذا التحليل يفسح المجال أيضا لإنتاجية عالية شاشات كل الجينوم، بينما القدرة على الديدان cryo-المحافظة لاستخدامها في المستقبل يجعل من نموذج حيوان كله جذابة وفعالة من حيث التكلفة لدراسة.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

C. ايليجانس قد استخدمت ككائن نموذج قوية لأكثر من 50 عاماً. وفي الستينات، رائدة الأحياء جنوب أفريقيا سيدني برينر استخدام C. ايليجانس لدراسة تطوير الخلايا العصبية، يمهد الطريق لنسب طويلة من العلماء لدراسة الجوانب المختلفة لبيولوجيا الخلية والحيوان في الديدان الخيطية. وتشمل هذه النسب الحائزين على جائزة نوبل كريغ ميلو وأندرو النار على العمل [رني]1وروبرت هورفيتز وجون سالستون للعمل على تطوير الجهاز والمبرمج2،،من34، ومارتن تشالفي لعمله على بروتين فلوري أخضر5. على الرغم من أن هذا الكائن الحي النموذجي قد استخدمت تقليديا لدراسة البيولوجيا الجزيئية والإنمائية، على مدى السنوات ال 15 الماضية، بدأ الباحثون استخدام C. ايليجانس للتحقيق بيولوجيا مختلف مسببات الأمراض البشرية بما في ذلك Pseudomonas الزّنجاريّة، انتيريكا السالمونيلا، المكوّرات العنقودية الذهبيةو marcescens السراتية6،،من78،9،10. وكشفت هذه الدراسات أن العديد من الآليات التي تشارك في التفاعل الإنسان-الممرض هي المحافظة في الديدان الخيطية، ولكن أيضا أن هناك بعض آليات الحصانة التي فريدة من نوعها لهذا النموذج الحي11،12. في الطبيعة، C. ايليجانس لقاءات مجموعة متنوعة من التهديدات من مسببات الأمراض المستهلكة الموجودة في التربة، ووفر هذا ضغط انتقائي قوية في التطور والحفاظ على نظام المناعة فطرية متطورة في التجويف المعوي،. العديد من الجينات والآليات التي تشارك في حماية التجويف المعوي هي مدبرة من قبل العناصر المحافظة جداً التي توجد أيضا في11،الثدييات العليا13. ولذلك يمثل C. ايليجانس نموذج عظيم لدراسة مسببات الأمراض المعدية المعوية مثل السالمونيلا انتيريكا14أو15من بويديي دوسنتاريا ضمه الكوليرا16.

هنا نسلط الضوء على براعة ملحوظة في C. ايليجانس كمضيف نموذج لدراسة العوامل المعدية مثل المبيضة. C. ايليجانس كمضيف نموذج يسمح لفحص إنتاجية عالية لضراوة التي أقل تكلفة وتستغرق وقتاً طويلاً من نموذج الفأر، الذي يستخدم عادة لدراسة داء المبيضات42.

في هذه الدراسة، تبين لنا أن هذا النموذج ومقايسة البقاء على قيد الحياة أسوسياتيد يمكن موثوق بها لدراسة المضيف المستجيبة المناعة الفطرية الهامة لمكافحة العدوى، والمحددات الخاصة بالعوامل الممرضة التي تدفع بضراوة، والمركبات الدوائية التي يمكن أن أن تتدخل في نشوء المرض. تختلف عن الاختبارات الموصوفة سابقا، هذا الأسلوب يوفر وسيلة لدراسة التعرض للعوامل الممرضة على مدى فترة عمر الحيوان، من مرحلة اليرقات إلى مرحلة البلوغ، بدلاً من فقط سن البلوغ إلى وفاة43،44. وباختصار، لدينا C. ايليجانس -نموذج المبيضة هو أداة قوية وتنوعاً التي يمكن استخدامها ليس فقط لدراسة الأسس الوراثية التي تقود العدوى والحصانة ولكن أيضا لتحديد مركبات جديدة للتدخل العلاجي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1-التحضير لديدان أسطوانية النمو المتوسطة (NGM)

  1. ل 1 لتر من وسائط الإعلام، والجمع بين أجار 20 غ ومصدر النيتروجين العضوي 2.5 g (مثلاً، باكتو-ببتون) وكلوريد الصوديوم الجيل الثالث 3g في قارورة 2 ل. إضافة 975 مل الماء المعقم.
    1. إضافة في حانة ضجة عقيمة. في حالة استخدام الوسائط التلقائية برير، وأنابيب اﻷوتوكﻻف ووسائط الإعلام لمدة 15 دقيقة؛ ينبغي أن تكون وسائل الإعلام يعقم لفترة أطول إذا تم زيادة حجم-
  2. تعيين وسائط الإعلام على لوحة إثارة، والسماح لتبرد.
    1. بمجرد وسائل الإعلام الحارة للمس (حوالي 60 درجة مئوية) أسيبتيكالي إضافة 1 مل من 1 م MgSO 4 ● ح 2 س 1 مل كاكل 1 م 2، 25 مل من مشرف 4 و 1 مل من نسبة الكولسترول في الدم 0.5% في الإيثانول-
    2. صب وسائط الإعلام (باليد أو بمضخة التلقائي) تحت الاندفاق الصفحي في 35 مم × 10 مم أطباق بتري معقمة. السماح لتجف تحت غطاء لمدة 1-2 أيام قبل الاستخدام.
      ملاحظة: يجب تخزين لوحات عند 4 درجة مئوية لمنع التلوث.

2. مما يجعل "اختيار دودة"

  1. قطع قطعة 1.5 سم من أسلاك الألومنيوم. عناية إدراج حوالي 0.5 سم طول هذا غيض من ماصة باستور.
    1. باستخدام موقد بنسن أو مصباح الكحول، تذوب نصيحة ماصة زجاجية بالتناوب ببطء في اللهب حتى الأسلاك بشكل أمن التقيد الماصة، دون المساس بالشكل الأصلي من طرف ماصة.

3. إعداد الثقافة كولاي

  1. باستخدام حلقة عقيمة، تطعيم مستعمرة واحدة من سلالة كولاي OP50 في 200 مل من "مرق لوريا". تبني بين عشية وضحاها مع الهز في 37 درجة مئوية.
  2. ثقافة السائل جاهز للاستخدام وفي اليوم التالي وقد تكون مخزنة في 4 درجات مئوية عندما لا تكون قيد الاستعمال.
    ملاحظة: يستخدم كمصدر لغذاء لسلالة كولاي، OP50، C. ايليجانس. ويمكن استخدام هذه الثقافة لتصل إلى عدة أشهر عند تخزينها في 4 ° C.

4. أساسي صيانة C. ايليجانس

  1. البذور التي أعدتها اكتشاف حوالي 50-100 ميليلتر استعداد الثقافة السائل OP50 في وسط اللوحة NGM أجار لوحات مع كولاي.
  2. تغطي لوحات
  3. والسماح لهم جاف في درجة حرارة الغرفة ح 24. بمجرد جفاف، وضع لوحات في 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها للنمو السريع أو تبقى في درجة حرارة الغرفة، إذا كان المطلوب هو نمو أبطأ.
  4. إضافة الديدان إلى اللوحة أما عن طريق " chunking، " (راجع الخطوة 5 من بروتوكول " Chunking والديدان الانتقاء ")، والتقاط الديدان منفردة، أو وضع بيض دودة مباشرة على اللوحة (راجع الخطوة 6 من بروتوكول " "إعداد البيض" ").

5. Chunking والديدان الانتقاء

ملاحظة: " Chunking، " يشير إلى ممارسة شائعة في صيانة C. ايليجانس. وهذا ينطوي على قطع مقطع من لوحة أجار NGM يحتوي على الديدان، ونقل هذه القطعة على لوحة جديدة، وهكذا أيضا نقل عدد كبير من الديدان في هذه العملية. كما قد يكون قطع التلوث خارج اللوحة بهذه الطريقة. عند اختيار الديدان، من المهم الحفاظ على سلامة أجار سبب الديدان يمكن أن تضيع في الثقوب في أجار. وبالإضافة إلى ذلك، من المهم السماح لانتقاء لتبرد قبل لمس لوحة لمنع ذوبان في أجار أو حرق الديدان.

  1. من أجل سرعة نقل كميات كبيرة من الديدان على لوحات جديدة، قطع قطعة من أجار NGM يحتوي على الديدان المحدد باستخدام ملعقة. إزالة قطعة قطعة ووضعه الوجه لأسفل على حافة حديقة OP50 على لوحة جديدة.
  2. نقل الديدان على حدة كما هو موضح أدناه في البروتوكول خطوة 8.2، " "بقاء المقايسة"، " استخدام دودة بيك. لهب الأسلاك في انتقاء دودة حتى يصبح أحمر. إزالته من اللهب، والسماح لها لتبرد لبضع ثوان.
  3. باستخدام الأسلاك على الانتقاء، بلطف كشط الحديقة لثقافة OP50 نمت على لوحة جديدة، تغطي الأسلاك في الانتقاء.
  4. ثقافة لزج تغطي غيض السلك يجعل الديدان عصا غيض الانتقاء، وهكذا بلطف التقاط الديدان المحدد باستخدام اقتراحا بالضرب-
  5. مرة واحدة جمعت الديدان مختارة، وضعها على لوحة جديدة بالضرب بلطف الثقافة عبر أجار. وضع الأسلاك في الشعلة لإزالة ثقافة المتبقية في الانتقاء.

6. بيضة التحضير

  1. بوضع حوالي 20 الحيوانات الكبار (حوالي 2-3 أيام بعد الفقس عندما تزرع في 20 درجة مئوية) أما الانتقاء أو chunking كما هو موضح في الخطوة 5، من البروتوكول " Chunking والديدان الانتقاء، " على طبق من ذهب المصنف مع 50 ميليلتر سلالة كولاي، OP50-
  2. لجمع البيض، والفيضانات اللوحة مع 10 مل من المخزن المؤقت M9 بعد 1-2 يوم. استخدام ماصة مصلية زجاج، دوامة وتحرض بلطف المحتويات على لوحة أجار للإفراج عن البيض تمسك OP50 أو الحيوانات الكبار. جمع جميع السائل الذي يحتوي على البيض والكبار-
  3. أنبوب
  4. الحل نقل M9 و OP50 إلى 15 مل مخروطية الشكل. الطرد المركزي 15 مل الأنبوبة المخروطية في 2,100 س ز للحد الأدنى 2
  5. نضح حوالي 9 مل من المادة طافية دون إزعاج بيليه OP50.
  6. ريسوسبيند بيليه في 2 مل الماء المعقم ومل 1 من التبييض 1 مل من هيدروكسيد الصوديوم M 0.25.
  7. المزيج بلطف بعكس حتى يبدو أن غالبية (نحو 70 في المائة) من الحيوانات الكبار ليسيد؛ عادة، البيض تبقى سليمة خلال هذا العلاج التبييض قصيرة بسبب قذيفة بهم. الطرد المركزي الأنبوبة المخروطية في 990 س ز للحد الأدنى 2
  8. المادة طافية aspirate دون إزعاج بيليه. إعادة تعليق بيليه في 10 مل من المخزن المؤقت M9.
  9. الطرد المركزي الأنبوبة المخروطية في 990 س ز للمادة 2 دقيقة Aspirate طافية دون بيليه مثيرة للقلق. تعليق إعادة بيليه مع 200 ميليلتر من المخزن المؤقت M9.
    ملاحظة: قد يتطلب إعداد البيض عدة محاكمات. وقد دمرت البيض إذا تعرضوا للتبييض لفترة طويلة جداً. إذا لم يفقس البيض، أما انخفاض تركيز التبييض في حل أو تقليل مدة التعرض للتبييض.

7. إنشاء لوحة العدوى

  1. الاستغناء عن 3-5 مل YPD في أنبوب اختبار عقيمة وتطعيم ذلك مع مستعمرة واحدة من المبيضات البيض استخدام حلقة عقيمة.
    1. وضع الأنبوب على طبل الدنمارك لما يقرب من 16-18 ح في 30 درجة مئوية.
  2. واحد تسمية 1.5 مل [ميكروفوج] أنابيب تحتوي على المبيضة، وأخرى تحتوي على OP50. تسجيل وزن كل أنبوبة فارغة.
    1. ميليلتر 500 مكان للمبيت الثقافة المبيضة في أنبوب المسمى المبيضة وميليلتر 1,500 ثقافة OP50 بين عشية وضحاها (من الخطوة 3.1) إلى الأنبوبة المسماة OP50.
    2. الطرد المركزي لمدة 10 دقيقة في 16,100 س المادة زاي Aspirate طافية دون بيليه المزعجة.
    3. إعادة تعليق كل بيليه مع 500 ميليلتر من الماء المعقم. أجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 16,100 غ. س
    4. المادة طافية aspirate دون إزعاج بيليه. تسجيل الوزن النهائي [ميكروفوج] أنابيب-
    5. تحديد وزن كل بيليه بطرح وزن الأولى [ميكروفوج] أنابيب من الوزن النهائي.
  3. باستخدام الماء المعقم، تعليق إعادة بيليه المبيضة إلى 10 ملغ/مل، وبيليه OP50 إلى 200 ملغ/مل. جعل عدوى رئيسي مزيج من خلال الجمع بين 10 ميليلتر من حل 50 ملغ/مل من ستربتوميسين، 2.5 ميليلتر لثقافة OP50، 0.5 ميليلتر للثقافة المبيضة و 7 ميليلتر من الماء المعقم.
    1. على لوحات التحكم، وخلق مزيج رئيسي بالاستعاضة عن حجم الثقافة المبيضة بالماء المعقم. البذور 20 ميليلتر ميكس العدوى أو حل OP50 السيطرة على لوحات مركز NGM باستخدام ميكروبيبيتي.
      ملاحظة: الديدان حوالي 100 مطلوبة لتحديد الدلالة الإحصائية أثناء التحليل. عادة ما يتم تشغيل هذا الفحص في ثلاث نسخ. وهكذا، يرصد من 3.2 x ميكس العدوى وكذلك 3.2 x حل السيطرة. يمزج هذه مصنوعة لتكون يزيد قليلاً عن 3 × الأصلي لضمان أن ميليلتر الكامل 20 هو المصنف على كل لوحة، مما يتيح مجالاً للخطأ. يتم إنشاء هذا المزيج الرئيسي لأن البلعوم الدودة صغيرة جداً خلال المراحل الأولية اليرقات (L1 L3) تستهلك المبيضة. للتعرض للعوامل الدوائية مثل الفلوكونازول ( الشكل 3B)، هو عرض الوكيل إلى خليط العدوى. ويتحدد تجريبيا تركيز عامل. على سبيل المثال، في الشكل 3B، 50 ميكرومتر ويمثل الفلوكونازول، بيد أن 0 و 12.5، 25، 50 و 100 ميكرومتر الفلوكونازول كانت أيضا اختبار باستخدام البروتوكول نفسه.

8. تحليل النمط الظاهري "مشوه المنطقة الشرجية" (دار) والبقاء على قيد الحياة بالانزيم

  1. تصور النمط الظاهري دار
    ملاحظة: دار هو تصور أفضل في مرحلة المستوى 3 وما بعدها. دار يعرض نتوء صغير في منطقة الشرج وظيفة الدودة ( الشكل 2A)، الذي يصبح أكثر وضوحاً مع مرور الوقت.
    1. تأكيد إذا كان حيوان قد دار بسرعة النقر على اللوحة في مرحلة مجهر تشريح؛ والحيوانات دون إرادة دار الانتقال على الفور إلى الوراء، بينما الحيوانات مع دار سوف تحتاج أما تكرار جولات التنصت عكس اتجاهها، أو أنهم لن تفعل ذلك على الإطلاق-
  2. البقاء على قيد الحياة بالانزيم
    1. إعداد البيض كاملة كما سبق ذكره في البروتوكول الخطوة 6، " "إعداد البيض" ". عد البيض ضمن نطاق التشريح، وتمييع الحل البيض مع M9 حتى يتحقق بتركيز حوالي 5-6 بيضة صحية في ميليلتر. استخدام ماصة، الاستغناء عن 20 ميليلتر عينة تحتوي على حوالي 30 البيض على استعداد NGM لوح، في المنطقة الواقعة بين ثقافة البكتيرية والجانب من لوحة (البيض والأغذية دودة، OP50، في المكانين متميزة)-
    2. لوحات إينكوباتي في 20 درجة مئوية ح 48. تحت مجهر تشريح، عد عدد الديدان الحية وقتل الكبار في كل لوحة، وكذلك العدد من الديدان مع دار. سجل المئة مع دار.
    3. النظر في حيوان الميت إذا لم يستجب يجري استغلالها على رأسه بأسلاك الألومنيوم أو التنصت على اللوحة-
    4. كل يوم، نقل الديدان الكبار المتبقية بالانتقاء كما هو موضح في الخطوة 5، من البروتوكول " Chunking والديدان الانتقاء، " على لوحة العدوى أو عنصر التحكم جديد. عند هذه النقطة، إذا لزم الأمر، القيام مقايسة البقاء على قيد الحياة بتعقب عدد الديدان حية والقتلى والمفقودين كل يوم-
      ملاحظة: قد يعمل هذا التحليل لمدة أسبوعين، ابتداء من إعداد البيض. وبالإضافة إلى ذلك، لا يمكن الاستغناء الحل البيض على ثقافة البكتيرية، كما أن الحل قد تحتوي على آثار التبييض التي يمكن أن تقتل في OP50. كما ينبغي أن يكون الحل الاستغناء عن حوالي 0.5 سم بعيداً عن حافة اللوحة، كما أن البيض يمكن أن تصبح عالقاً بين جانبي اللوحة واجار. بالإضافة إلى ذلك، نظراً للانتشار السريع للديدان، نقل الكبار على لوحات جديدة أمر بالغ الأهمية لفصلها عن ذريتهم.
  3. بقاء تحليل
    1. تحليل النتائج باستخدام برمجيات تحليل منحنى البقاء على قيد الحياة (الرجوع إلى قائمة المواد)-
    2. بقاء مقارنة منحنيات باستخدام الأسلوب Grehan-بريسلو-الرتبي (مع افتراض أن البيانات من أوقات مبكرة من البقاء على قيد الحياة أكثر دقة من أوقات لاحقة، وزن البيانات تبعاً لذلك) فضلا عن الأدوات الإحصائية لوجرانك 45-
      ملاحظة: على سبيل المثال، في الشكل 4 باء ، بقاء الديدان تعامل مع المسخ المبيضة هو مقارنة بتلك التي تعامل مع عناصر التحكم البرية من نوع اسوي أو كومبليمينتاريستراينس-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

قد سبق وصف المرضية مقايسة (الشكل 1) استخدام المبيضة و C. ايليجانس لدينا مختبر17،18 و19،مختبرات أخرى20. نبدي الانقياد لاستخدام C. ايليجانس لدراسة الفوعة المبيضة تبين أن الخلايا المبيضة هي بلعها بسرعة من الديدان، وتتراكم في التجويف المعوي تسبب الحركة أبطأ، مشوهاً الشرج المنطقة (دار) (الشكل 2A)، وتورم الفرج (الشكل 2)، وانتفاخ الأمعاء (الشكل 3 ألف)، والقدرة على الفتك (الشكل 3، الرقم 4). ونحن أيضا قياس عمر الديدان المصابة كمقياس كمي للياقة البدنية. على سبيل المثال، يعيش C. ايليجانس المصابين المبيضة 10-12 يوما بالمقارنة مع 20-22 للضوابط غير مصاب. في C. ايليجانس مصابة المبيضة ضرب مزدوجة المسخ، efg1/efg1 cph1/cph1، وهما عاملان الفوعة الرئيسية المطلوبة للإصابة في الماوس، الجرذان والإنسان الظهارية نماذج21، 23، نجا من الديدان الخيطية أطول كثيرا من الضوابط (الشكل 3B). وتشير هذه التجارب إلى بعض الدروس التي نتعلمها في هذا الطراز أبسط حول ضراوة المبيضة قد تظل صالحة في الثدييات العليا، والعكس بالعكس.

نعرض أيضا أنه يمكن أن يكون النظام النموذجي السلكية عقاقيري التضمين (الشكل 3B). حضور الفلوكونازول، العقاقير المضادة للفطور الأكثر شيوعاً المنصوص عليها، نجا من الديدان وتحدي مع المبيضة أطول كثيرا من عناصر التحكم. هذا دليل على مبدأ التجربة تشير إلى أن نموذج السلكية يمكن استخدامها لفحص جزيء صغير. والواقع أن نموذجنا C. ايليجانس كان مفيداً في تحديد فيلاستاتين، جزيء صغيرة التي تعوق مختلف جوانب الفوعة الفطرية24.

تعمل المرض وتحليل مجهرية C. ايليجانس العدوى
C. ايليجانس كانت تتعرض المبيضة على مدى فترة ستة أيام ولاحظت علامات العدوى، وتطور المرض، والموت. النمط الظاهري دار الأكثر وضوحاً من يوم 4 من مقايسة البقاء على قيد الحياة، كما لوحظ بمنطقة الشرج بارزة أن لا يكون مرئياً في الحيوان غير مصاب (الشكل 2A). الديدان المصابة المبيضة ومن المعروف أيضا يحمل تورم في منطقة الفرج (الشكل 2). وفي كلتا الحالتين، الدودة غير قادر على مسح العدوى بعد أن وصلت إلى هذه المرحلة. من أجل تصور استعمار المبيضة في التجويف المعوي، غذيت الديدان البرية من نوع المبيضة معلم مع طلب تقديم العروض، التي تتسبب في مناطق استعمار فلوريسسي الأحمر (الشكل 3A). من أجل إنتاج هذه الصور، تم تخديره من الديدان على لوح [اغروس] 2% يحتوي على 0.01 M أزيد الصوديوم. الديدان قد تعرضت للبرية من نوع المبيضة أو معلم RFP المبيضة، وحولت إلى 5 ميكرومتر M9 العازلة على منصة [اغروس]. اللوحة [اغروس] كانت مغطاة ثم ساترة. واعتبرت الديدان في 200 X و 400 X التكبير باستخدام مجهر مقلوب مع قدرات الفحص المجهري نيون. الصور تم إنشاؤها ضمن التباين التدخل التفاضلية (نومارسكي)، والبصريات ابيفلوريسسينسي. وتم تعزيز الصور الفلورية استخدام البرمجيات (الشكل 3A). تحدد الوقت سلسلة ميكروجرافس من الديدان المصابة أن المبيضة استعمر التجويف المعوي اليوم الثالث ل المقايسة17. وأظهرت الديدان المصابة انتفاخ الأمعاء أكثر حدة مما لوحظ في عنصر التحكم غير مصاب.

أدوات الجينية والدوائي لدراسة الإصابة
بعد ذلك، قمنا باختبار الطراز باستخدام التحوير الوراثي والدوائية. ونحن أيضا اختبار عوامل الفوعة الموثقة سابقا التي تنظم انتقال أصله من المبيضة25 وقد ثبت أن تكون هامة في التهابات في الجسم الحي من الفئران والديدان الخيطية20،26 . وقمنا باختبار قدرة الديدان على البقاء على قيد الحياة العدوى الناجمة عن المسخ مزدوجة المبيضة efg1/efg1 cph1/cph1 . Efg1 هو عامل نسخ المحافظة جداً وعنصر أساسي لامبير سيكليك/البروتين كيناز ألف (PKA) المسار الأيضي. وينظم هذا المسار في المبيضة morphogenesis أصله27، أبيض-كامد تبديل28، وترسانة من عوامل الفوعة الرئيسية. وتشمل هذه العوامل ضراوة Hwp1 و Hwp2، اثنين من البروتينات جدار خلية الخميرة الخاصة المشاركة في الالتصاق وتشكيل بيوفيلم، Eap1، أدهيسين جدار خلية مشاركة في ملزمة للخلايا الظهارية البشرية29، و Sap5، إنزيم هيدروليكي مشاركة في نسيج طلائي غزو30. Cph1 هو عامل نسخ التي تنظم العديد من العمليات الأيضية بما في ذلك التزاوج، فيلامينتيشن، وتشكيل بيوفيلم، وقد ثبت أن تلعب دوراً حاسما في الخلايا الظهارية المدمرة31 وظهاره أعيد بناؤها البشرية21 . الإخلال بأي من هذه الجينات أثرا كبيرا على الفوعة وتعطل متزامن على حد سواء في نتائج cph1/cph1efg1/efg1 في الحد من ضراوة هائلة في مختلف النماذج الحيوانية بما في ذلك الفئران25، المورفولوجية 32و33،الزرد34 والعثه34. يعتبر المسخ مزدوجة cph1/cph1efg1/efg1 المجتمع المبيضة كسلالة أفيرولينت بتعريف ومعيار الذهب للتحقق من صحة نموذج رواية نظم. Efg1Δ و cph1Δ واحد طفرات أظهرت انخفاض دار (~ 10% و ~ 50%، على التوالي) مقارنة مع نوع البرية المشابهة، في حين efg1Δ cph1Δ مزدوجة المسخ فشل الحصول على استجابة دار17. هذه النتائج الخص النمط من ضراوة في الفئران، حيث المسخ cph1∆ هو يخفف قليلاً، المسخ efg1∆ سييخفف جنيفيكانتلي، وهو المسخ مزدوجة تماما avirulent25. المصابين بالديدان efg1 cph1/cph1/efg1C-البيض المسخ مزدوجة عاش أطول شكل يعتد به إحصائيا من عناصر التحكم (ف < 0.01 لكل رتبة سجل وبريسلو إحصائية الاختبار، ن = 60) مما يوحي بأن هذه الجينات اثنين مطلوبة من أجل جيم البيض ضراوة ضد C. ايليجانس (الشكل 3B).

بغية استكشاف إمكانية استخدام نموذجنا C. ايليجانس لفحص المخدرات المحتملين، قمنا باختبار تأثير إضافة الفلوكونازول على النتيجة النهائية للعدوى. ونحن تستخدم مجموعة متنوعة من تركيزات مختلفة من الفلوكونازول ووجدت أن 50 ميكرومتر أعطانا أهم نتائج. عاشت الديدان المصابين المبيضة و 50 ميكرومتر الفلوكونازول (الشكل 3B) شكل يعتد به إحصائيا أكثر من عناصر التحكم (ف < 0.01 في رتبة سجل وبريسلو إحصائية الاختبار، n = 60). هذا التركز مصممة تجريبيا (راجع الملاحظة في نهاية البروتوكول الخطوة 7، "إعداد لوحة العدوى"). هذه إثبات مبدأ التجارب أظهرت أن نموذجنا السلكية يمكن استخدامها لفحص مضاد فطري جزيء صغير. النموذج في الواقع مفيدة في اكتشاف فيلاستاتين، جزيء صغيرة التي تعوق مختلف جوانب الفوعة الفطرية التي يخضع حاليا لمواصلة الدراسات الإكلينيكية24. وبناء على ذلك، لدينا التحليل مناسبة لاستكشاف استراتيجيات الفوعة المبيضة ووكلاء الدوائية.

دراسة استجابة المضيف فطرية
بعد ذلك، أردنا دراسة دفاعات المضيف المتبادلة ضد مسببات الأمراض، نظراً إلى جوانب من هذه الحصانة الفطرية هي المصانة في الثدييات11،35. فمن المعروف جيدا أن تنتج ايليجانس جيم روس عند كلا العدوى البكتيرية والفطرية18،،من3637 كجزء من إليه الدفاع. روس أثرا قاتلتا على غزو الكائنات الحية، وتلعب دوراً رئيسيا في الحصانة الفطرية. zcf15/zcf15 فرط التعرض لروس في المختبر أدت بنا إلى افترض أن شدته انخفاض في C. ايليجانس كان بسبب انخفاض قدرة على الصمود في وجه المضيف التي تم إنشاؤها بروس. لاختبار الفرضية لدينا، نحن تحديد قدرة zcf15/zcf15 لقتل الديدان البرية من نوع أو الديدان مع ضعف قدرة على إنتاج روس. الممثلة المبيضة متحولة zcf15 حساسة للأنواع الأكسجين التفاعلية (الشكل 4 أ) أظهر انخفاض ضراوة في البرية من نوع C. ايليجانس. C. ايليجانس يستجيب لابتلاع الممرض بإنتاج روس خارج الخلية في التجويف المعوي عن طريق Ce-Duox1، أوكسيديز نادف ترميز الجينات bli-3. أثناء إنتاج روس، إنتاج الخلايا المعوية أيضا مضادات الأكسدة داخل الخلايا عن طريق DAF-16 لحماية الأنسجة الخاصة به من روس الضارة آثار36،38. Ce Duox1 بروتين مع مجال البيروكسيديز الطرفي ن، ج-محطة توليد فائق أكسيد أوكسيديز نادف المجال وموقعين كالمودولين-الربط المركزية39. على العدوى الميكروبية، يستخدم هذا البروتين سيتوسوليك نادف لتوليد روس السامة خارج الخلية في التجويف المعوي لمكافحة العدوى. في جميع أنحاء سلسلة من الاختبارات الكيميائية الحيوية في دراسة 2009، أظهرت جاين et al. روس تماما تنتج عند أنثوي، وتلك الخسارة bli-3 وظيفة عن طريق bli-3(e767) كبير يقلل من قدرة الديدان الخيطية على إنتاج روس. كما هو موضح في الشكل 4 باء، الديدان وتحدي مع zcf15/zcf15 نجا أطول بشكل ملحوظ من نوع البرية أو تستكمل سلالات (ف < 0.01 باختبار سجل رتبة) تشير إلى أن ZCF15 مطلوب لضراوة. ومع ذلك، عندما طالبنا تفتقر إلى روس جيم-اليجانسبلي-3(e767)، حصلنا على حركية في أعمال القتل التي كانت قابلة للمقارنة بين zcf15/zcf15، ونوع البرية ويكمل سلالة (الشكل 4). هذه الأدلة تشير إلى أن zcf15/zcf15 تفشل لقتل الديدان الخيطية إلا إذا تعرض للخطر قدرة المضيف على إنتاج روس. أخذت معا، تشير هذه النتائج إلى أن ZCF15 مطلوب لضراوة كامل وأن هذا الجين المحتمل أن تشارك في الممرض قدرتها على مقاومة المضيف التي تم إنشاؤها بروس. على حد علمنا، هذا هو المرة الأولى التي قد تبين ZCF15 أن تشارك في القدرة الإمراضية والمقاومة روس.

Figure 1
الشكل 1: تمثيل تخطيطي للعدوى C. ايليجانس . C. ايليجانس يتعرضون لمزيج من سلالة كولاي OP50 وممرض ولوحظ خلال فترة 4 أيام بعد بلوغ سن الرشد لعلامات الإصابة وتطور المرض.

Figure 2
رقم 2: تعمل المرض. (أ) المنطقة الشرجية Deformed (دار) مرئياً (المشار إليها سهم) تورم في منطقة الشرج بعد الديدان المصابة (اللوحة اليمنى) بعد أربعة أيام من التعرض. الديدان في اللوحة اليسرى مصابة وتكون بمثابة عنصر تحكم. (ب) مجموعة فرعية (~ 15 ٪) من الديدان المصابة تظهر تورم الفرج (اللوحة اليمنى، يشار إليه سهم) مقارنة بالديدان التحكم غير مصاب (اللوحة اليمنى) الذي يمثل نشر العدوى أدى إلى وفاة ماتريسيدال. وقد اتخذت جميع الصور كما هو موضح في نتائج تمثيلية18.

Figure 3
الشكل 3: المبيضة - C. ايليجانس نموذج قابلة للتلاعب المجهرية، ويمكن أن يكون عقاقيري ووراثيا والتضمين. الموسومة (A) المبيضة مع تراكم طلبات تقديم العروض في التجويف المعوي السلكية يوم 3 وظيفة العدوى. خلايا الخميرة يتم بلعها بسرعة من الديدان، وتتراكم في التجويف المعوي سليمة تماما، مما يشير إلى أنها قادرة على البقاء على قيد الحياة الميكانيكية سحق البلعوم. وقد اتخذت الصور كما هو موضح في نتائج تمثيلية18. (ب) منحنيات البقاء على قيد الحياة كابلان-ماير من الديدان الخيطية وتحدي مع البرية من نوع المبيضة، متحولة مزدوجة cph1/cph1efg1/efg1 أو البرية من نوع المبيضة + 50 ميكرون من الفلوكونازول مقارنة بالديدان التحكم غير مصاب.

Figure 4
الشكل 4. ZCF15 مطلوب لتحمل C. ايليجانس ولدت روس. (أ) ZCF15 المسؤولة عن نوع البرية مقاومة بركات، الذي يعرف بتوليد أنواع الأكسجين التفاعلية. نوع البرية، وخروج المغلوب أو تستكمل سلالات كانت تزرع في ثقافة السائل بين عشية وضحاها وحراكه للتطوير التنظيمي = 1. الثقافات كل المخفف 1:5 ومطلي على YPD أو YPD التي تحتوي على بركات 1 مم. إنتاج ايليجانس جيم روس عن طريق bli-3 بغية مكافحة مسببات الأمراض التي تغزو التجويف المعوي38. (ب) إظهار منحنيات البقاء على قيد الحياة كابلان-ماير أن الحذف ZCF15 يحد من قتل الديدان البرية من نوع. (ج) كابلان-ماير بقاء منحنى يبين معدلات مماثلة للبقاء على قيد الحياة بين zcf15/zcf15، ونوع البرية، ويكمل سلالة عندما تفتقر إلى روس C. elegansbli-3(e767) مصابين.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

يمكن تعديل طرق المعايرة C. ايليجانس العدوى والبقاء على قيد الحياة على مدى التعرض مدى الحياة المبيضة التي وصفناها لاختبار آخر الممرض. قد السائل ثقافات أخرى من البكتيريا أو الفطريات وتتغذى على C. ايليجانس بطريقة مماثلة. بالإضافة إلى ذلك، قد تكون جزيئي التهابات المسلسل بتعريض اليرقة إلى أحد مسببات المرض أولاً كما هو موضح، ثم قم بنقل الحيوانات إلى لوحة جديدة تحتوي على مسببات المرض منفصلة بعد بلوغ سن الرشد.

أثناء إجراء هذا التحليل، من المهم إيلاء اهتمام دقيق لتوقيت. أولاً، عند الانتهاء من إعداد البيض أجل حصاد البيض للمقايسة، من المهم للحد من مقدار الوقت ويتعرض البيض للتبييض. ويختلف مقدار الوقت اللازم لإذابة الكبار في حل التبييض للإفراج عن البيض. فورا بعد إدارة الحل التبييض، يجب أن يكون شاهد الحل دودة عن كثب تحت مجهر تشريح. مرة واحدة قد تفككت حوالي 70% الديدان، ثم ينبغي فصل الحل. إذا كانت لا تؤدي إلى إعداد البيض البيض قابلة للاستمرار، انخفاض تركيز التبييض أو مدة التعرض للتبييض. في استكمال هذا التحليل، من المهم أيضا أن يولي اهتمام لنقل الديدان الكبار على لوحات جديدة حسب الحاجة لتجنب الخلط بين موضوعات الدراسة مع ذريتهم. الحد من عدد البيض مطلي في بداية الفحص للبيض 25-30 ينبغي أن يمنع هذا كذلك. وأخيراً، نقل الديدان الكبار على لوحات جديدة كثيرا ما يقلل من أيضا فرص الديدان الزحف حتى على جانبي الطبق بيتري والموت.

أننا استخدمت ايليجانس كاينورهابديتيس كمضيف متعدد الاستخدامات نموذجية لدراسة العلاقات المسببة للأمراض أو كومينسال بين الميكروبات أو ميكروب والمضيفة لها. يمكن استخدام النظام كأداة لدراسة العوامل الجرثومية أو ميكروب المضيف التفاعل على الصعيد الخلوية والجزيئية باستخدام النهج الوراثية إلى الأمام وعكس ولكن أيضا لاستكشاف جزيئات جديدة للتدخل العلاجي. لقد أظهرنا براعة في هذا النظام بإجراء شاشة وراثية لتحديد الجينات التي تسهم في الفوعة40، تلك المرتبطة باللياقة البدنية الميكروبية41، تلك التي تتوسط استجابة المضيف للميكروبات17، 18عاماً، وكذلك باستخدام النموذج لتطبيقات الإنتاجية العالية ل اكتشاف المخدرات24. هذا نموذج جيد للاستخدام من قبل طلاب المرحلة الجامعية لأنها لا تحتاج إلى تكلفة البنية التحتية للمحافظة على المستعمرات، إذ ترى أن الحيوانات يمكن أن يكون الحفاظ على البرد للتطبيقات المستقبلية. وأخيراً، وهذا يوفر الكمال "وسيط" للدراسات في المختبر ونماذج مورين.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgments

وكان هذا العمل المنجز في ويدعمها معهد البوليتكنيك ورسيستر.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Agar (granulated, bacterilogical grade) Apex BioResearch Products 20-248
Aluminum Wire (95% Pt, 32 Gauge) Genesee Scientific 59-1M32P
Axiovision Zeiss Inverted Microscope Axiovision Zeiss
Bacto-Peptone Fisher BioReagants BP1420-500
C. elegans strain Bli-3 Caenorhabditis Genetics Center Bli-3(e767) CB767
Calcium Chloride Fisher Scientific BP51-250
Cholesterol, Sigma Grade, minimum 99% Sigma C8667-25G
Disposable Culture Tubes (20 x 150 mm) FIsherBrand 14-961-33
Dissection Microscope (NI-150 High Intensity Illuminator) Nikon Instrument Inc.
E. coli Caenorhabditis Genetics Center OP50
GraphPad Prism (Survival Curve Analysis Software) GraphPad Software
LB Broth (Miller's) Apex BioResearch Products 11-120
Magnesium Sulfate Fisher Scientific 10034-99-8
Medium Petri Dishes (35 X 10 mm) Falcon 353001
Potassium Phosphate monobasic Sigma P0662-500G
Sodium Chloride Fisher Scientific BP358-1
Sodium Phosphate Fisher Scientific BP332-500
Wildtype C. albicans SC5314 ATCC SC5314
Wildtype C. elegans Caenorhabditis Genetics Center N2

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Fire, A., et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, (6669), 806-811 (1998).
  2. Ellis, H. M., Horvitz, H. R. Genetic control of programmed cell death in the nematode C. elegans. Cell. 44, (6), 817-829 (1986).
  3. Hengartner, M. O., Ellis, R. E., Horvitz, H. R. Caenorhabditis elegans gene ced-9 protects cells from programmed cell death. Nature. 356, (6369), 494-499 (1992).
  4. Sulston, J. E., Horvitz, H. R. Post-embryonic cell lineages of the nematode, Caenorhabditis elegans. Dev Biol. 56, (1), 110-156 (1977).
  5. Chalfie, M., Tu, Y., Euskirchen, G., Ward, W. W., Prasher, D. C. Green fluorescent protein as a marker for gene expression. Science. 263, (5148), 802-805 (1994).
  6. Kong, C., Yehye, W. A., Abd Rahman, N., Tan, M. W., Nathan, S. Discovery of potential anti-infectives against Staphylococcus aureus using a Caenorhabditis elegans infection model. BMC Complement Altern Med. 14, 4 (2014).
  7. Marsh, E. K., May, R. C. Caenorhabditis elegans, a model organism for investigating immunity. Appl Environ Microbiol. 78, (7), 2075-2081 (2012).
  8. Kaletta, T., Hengartner, M. O. Finding function in novel targets: C. elegans as a model organism. Nat Rev Drug Discov. 5, (5), 387-398 (2006).
  9. Sem, X., Rhen, M. Pathogenicity of Salmonella enterica in Caenorhabditis elegans relies on disseminated oxidative stress in the infected host. PLoS One. 7, (9), e45417 (2012).
  10. Irazoqui, J. E., et al. Distinct pathogenesis and host responses during infection of C. elegans by P. aeruginosa and S. aureus. PLoS Pathog. 6, e1000982 (2010).
  11. Kim, D. H., et al. A conserved p38 MAP kinase pathway in Caenorhabditis elegans innate immunity. Science. 297, (5581), 623-626 (2002).
  12. Bae, T., et al. Staphylococcus aureus virulence genes identified by bursa aurealis mutagenesis and nematode killing. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, (33), 12312-12317 (2004).
  13. Couillault, C., et al. TLR-independent control of innate immunity in Caenorhabditis elegans by the TIR domain adaptor protein TIR-1, an ortholog of human SARM. Nat Immunol. 5, (5), 488-494 (2004).
  14. Aballay, A., Drenkard, E., Hilbun, L. R., Ausubel, F. M. Caenorhabditis elegans innate immune response triggered by Salmonella enterica requires intact LPS and is mediated by a MAPK signaling pathway. Curr Biol. 13, (1), 47-52 (2003).
  15. Kesika, P., Balamurugan, K. Studies on Shigella boydii infection in Caenorhabditis elegans and bioinformatics analysis of immune regulatory protein interactions. Biochem Biophys Acta. 1824, (12), 1449-1456 (2012).
  16. Cinar, H. N., et al. Vibrio cholerae hemolysin is required for lethality, developmental delay, and intestinal vacuolation in Caenorhabditis elegans. PLoS One. 5, (7), e11558 (2010).
  17. Jain, C., Pastor, K., Gonzalez, A. Y., Lorenz, M. C., Rao, R. P. The role of Candida albicans AP-1 protein against host derived ROS in in vivo models of infection. Virulence. 4, (1), 67-76 (2013).
  18. Jain, C., Yun, M., Politz, S. M., Rao, R. P. A pathogenesis assay using Saccharomyces cerevisiae and Caenorhabditis elegans reveals novel roles for yeast AP-1, Yap1, and host dual oxidase BLI-3 in fungal pathogenesis. Eukaryot Cell. 8, (8), 1218-1227 (2009).
  19. Tampakakis, E., Okoli, I., Mylonakis, E. A C. elegans-based, whole animal, in vivo screen for the identification of antifungal compounds. Nat. Protoc. 3, (12), 1925-1931 (2008).
  20. Pukkila-Worley, R., Ausubel, F. M., Mylonakis, E. Candida albicans infection of Caenorhabditis elegans induces antifungal immune defenses. PLoS Pathog. 7, (6), e1002074 (2011).
  21. Dieterich, C., et al. In vitro reconstructed human epithelia reveal contributions of Candida albicans EFG1 and CPH1 to adhesion and invasion. Microbiology. 148, (Pt 2), 497-506 (2002).
  22. Chen, C. G., et al. Non-lethal Candida albicans cph1/cph1 efg1/efg1 transcription factor mutant establishing restricted zone of infection in a mouse model of systemic infection. Int J Immunopathol Pharmacol. 19, (3), 561-565 (2006).
  23. Ricicova, M., et al. Candida albicans biofilm formation in a new in vivo rat model. Microbiology. 156, (Pt 3), 909-919 (2010).
  24. Fazly, A., et al. Chemical screening identifies filastatin, a small molecule inhibitor of Candida albicans adhesion, morphogenesis, and pathogenesis. Proc Natl Acad Sci U S A. 110, (33), 13594-13599 (2013).
  25. Lo, H. J., et al. Nonfilamentous C. albicans mutants are avirulent. Cell. 90, (5), 939-949 (1997).
  26. Koh, A. Y., Kohler, J. R., Coggshall, K. T., Van Rooijen, N., Pier, G. B. Mucosal damage and neutropenia are required for Candida albicans dissemination. PLoS Pathog. 4, (2), e35 (2008).
  27. McDonough, K. A., Rodriguez, A. The myriad roles of cyclic AMP in microbial pathogens: from signal to sword. Nat Rev Microbiol. 10, (1), 27-38 (2011).
  28. Sonneborn, A., Tebarth, B., Ernst, J. F. Control of white-opaque phenotypic switching in Candida albicans by the Efg1p morphogenetic regulator. Infect Immun. 67, (9), 4655-4660 (1999).
  29. Li, F., Palecek, S. P. EAP1, a Candida albicans gene involved in binding human epithelial cells. Eukaryot Cell. 2, (6), 1266-1273 (2003).
  30. Staib, P., Kretschmar, M., Nichterlein, T., Hof, H., Morschhauser, J. Transcriptional regulators Cph1p and Efg1p mediate activation of the Candida albicans virulence gene SAP5 during infection. Infect Immun. 70, (2), 921-927 (2002).
  31. Korting, H. C., et al. Reduced expression of the hyphal-independent Candida albicans proteinase genes SAP1 and SAP3 in the efg1 mutant is associated with attenuated virulence during infection of oral epithelium. J .Med Microbiol. 52, (Pt 8), 623-632 (2003).
  32. Chamilos, G., et al. Drosophila melanogaster as a facile model for large-scale studies of virulence mechanisms and antifungal drug efficacy in Candida species. J Infect Dis. 193, (7), 1014-1022 (2006).
  33. Brothers, K. M., Newman, Z. R., Wheeler, R. T. Live imaging of disseminated candidiasis in zebrafish reveals role of phagocyte oxidase in limiting filamentous growth. Eukaryot Cell. 10, (7), 932-944 (2011).
  34. Brennan, M., Thomas, D. Y., Whiteway, M., Kavanagh, K. Correlation between virulence of Candida albicans mutants in mice and Galleria mellonella larvae. FEMS Immunol Med Microbiol. 34, (2), 153-157 (2002).
  35. Mallo, G. V., et al. Inducible antibacterial defense system in C. elegans. Curr Biol. 12, (14), 1209-1214 (2002).
  36. Chavez, V., Mohri-Shiomi, A., Maadani, A., Vega, L. A., Garsin, D. A. Oxidative stress enzymes are required for DAF-16-mediated immunity due to generation of reactive oxygen species by Caenorhabditis elegans. Genetics. 176, (3), 1567-1577 (2007).
  37. Moy, T. I., Mylonakis, E., Calderwood, S. B., Ausubel, F. M. Cytotoxicity of hydrogen peroxide produced by Enterococcus faecium. Infect Immun. 72, (8), 4512-4520 (2004).
  38. Hoeven, R., McCallum, K. C., Cruz, M. R., Garsin, D. A. Ce-Duox1/BLI-3 generated reactive oxygen species trigger protective SKN-1 activity via p38 MAPK signaling during infection in C. elegans. PLoS Pathog. 7, (12), e1002453 (2011).
  39. Meitzler, J. L., Ortiz de Montellano, P. R. Caenorhabditis elegans and human dual oxidase 1 (DUOX1) "peroxidase" domains: insights into heme binding and catalytic activity. J Biol Chem. 284, (28), 18634-18643 (2009).
  40. Issi, L., et al. Zinc Cluster Transcription Factors Alter Virulence in Candida albicans. Genetics. 205, (2), 559-576 (2017).
  41. Ford, C. B., et al. The evolution of drug resistance in clinical isolates of Candida albicans. Elife. 4, e00662 (2015).
  42. Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. Animal models of mucosal Candida infection. FEMS microbiology letters. 283, (2), 129-139 (2008).
  43. Garsin, D. A., et al. A simple model host for identifying Gram-positive virulence factors. Proceedings of the National Academy of Sciences. 98, (19), 10892-10897 (2001).
  44. Sifri, C. D., Begun, J., Ausubel, F. M., Calderwood, S. B. Caenorhabditis elegans as a Model Host for Staphylococcus aureus Pathogenesis. Infection and immunity. 71, (4), 2208-2217 (2003).
  45. Jain, C., Yun, M., Politz, S. M., Rao, R. P. A pathogenesis assay using Saccharomyces cerevisiae and Caenorhabditis elegans reveals novel roles for yeast AP-1, Yap1, and host dual oxidase BLI-3 in fungal pathogenesis. Eukaryotic cell. 8, (8), 1218-1227 (2009).
ايليجانس كاينورهابديتيس السلكية-نموذج تنوعاً <em>في فيفو</em> لدراسة التفاعلات بين الميكروبات والمضيف
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Issi, L., Rioux, M., Rao, R. The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions. J. Vis. Exp. (128), e56487, doi:10.3791/56487 (2017).More

Issi, L., Rioux, M., Rao, R. The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions. J. Vis. Exp. (128), e56487, doi:10.3791/56487 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter