Summary
يسمح هذا الأسلوب تلطيخ انتقائية والتقدير الكمي للدنا في المواد الهلامية بامتصاص الجل في "أخضر سيبر" أنا/الحل "نيترو تيترازوليوم الأزرق" وثم يعرضها لأشعة الشمس أو مصدر ضوء أزرق. وهذا ينتج من ترسبات مرئية وتتطلب تقريبا أي معدات، مما يجعله مثاليا للاستخدام الميداني.
Abstract
أساليب المصبوغة الحمض النووي مهمة جداً للبحوث الطبية الحيوية. لقد قمنا بتصميم أسلوب بسيط يسمح التصور الحمض النووي للعين المجردة بتشكيل ترسبات الملونة. أنه يعمل من خلال نقع الاكريلاميد أو الحمض النووي [اغروس] هلام في حل من 1 x (أي ما يعادل 2، 0 ميكرومتر) الأخضر سيبر أنا (SG أنا) و 0.20 ملم نيترو الأزرق تيترازوليوم التي تنتج أرجواني يعجل من فورمازان عند التعرض لأشعة الشمس أو الضوء الأزرق على وجه التحديد. أيضا، أجريت اختبارات الحمض النووي لاسترداد باستخدام بلازميد مقاومة الأمبيسلّين في [اغروس] هلام ملطخة باسلوبنا. تم الحصول على عدد أكبر من المستعمرات باسلوبنا من تقليدية تلطيخ استخدام SG أنا مع إضاءة الأشعة فوق البنفسجية. وصف طريقة سريعة ومحددة، وغير سامة للكشف عن الحمض النووي، مما يسمح التصور الجزيئات الحيوية إلى "العين المجردة" دون ترانسيلوميناتور، وغير مكلفة وملائمة للاستخدام الميداني. ولهذه الأسباب، قد الحمض جديدة تلوين الأسلوب الفوائد المحتملة للبحوث والصناعة.
Introduction
مع التقدم في مجال الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية، الدراسات المتعلقة بالحمض النووي قد يتطلب تقنيات أفضل لتحليل الحمض النووي. الطريقة الأولى لتلطيخ الحمض النووي الفضة تلطيخ، وهي حساسة للغاية ولكن تفتقر إلى الانتقائية ولا يسمح باسترداد عينة. في وقت لاحق، يسمح تطوير تلطيخ DNA الفلورسنت انتقائية التحديد الكمي للحمض النووي مع إمكانية استرداد عينة. كان أحد الأصباغ الفلورية الأولى المستخدمة لتقدير حجم الحمض النووي اثيديوم بروميد1، وهي مطفرة2. ومع ذلك، والآن هناك صبغات الفلورسنت المحسنة التي أكثر أماناً وأكثر حساسية، مثل جيلريد والأخضر سيبر أنا (SG أنا)3؛ ولكن كل هذه الأصباغ الفلورية تتطلب استخدام الأشعة فوق البنفسجية (الأشعة فوق البنفسجية) ترانسيلوميناتور أو فلوريميتير.
وهناك تقنيات أخرى لتلطيخ واضح الحمض النووي، مثل الميثيلين الأزرق4 والكريستال البنفسجي5،،من67،،من89، ولكن كل هذه تعاني من انخفاض حساسية و الانتقائية. أملاح تيترازوليوم مركبات عضوية قابلة للتخفيض، وعندما يحدث هذا فإنها تشكل غير قابلة للذوبان ويعجل formazan الملونة10،11. في الآونة الأخيرة، أظهرت بعض الأملاح tetrazolium الثنائي التكافؤ لربط الحمض النووي بسبب تلك الحلقات tetrazolium إيجابية12.
في منشور مؤخرا13، اقترح تقنية مرئية جديدة لوصمة عار وتحديدها كمياً الحمض النووي في الهلام بولياكريلاميدي، استخدام الحد من الملح tetrazolium الثنائي التكافؤ يسمى tetrazolium نيترو الأزرق (NBT)، والأصباغ الفلورية مثل اثيديوم بروميد، جيلريد، سيبر الأخضر الأول والذهب سيبر. رد الفعل هذا عملت بحضور الضوء الأزرق أو أشعة الشمس، ويسمح باسترداد عينة مع تحسين نوعية مقارنة باستعمال SG أنا مع ترانسيلوميناتور الأشعة فوق البنفسجية. والهدف من هذه الورقة هو تقديم بروتوكول مفصل لتقنية المصبوغة باستخدام تيترازوليوم الأملاح.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1-إعداد وتشغيل هلام
- إعداد غير يشوه 12% هلام polyacrylamide المواد الهلامية استخدام الوصفة الصوديوم دوديسيل كبريتات-Polyacrylamide "هلام التفريد" (الحزب الديمقراطي الصربي صفحة) وجدت في سامبروك وراسل14 ولكن باستخدام المياه بدلاً من الحزب الديمقراطي الصربي.
- إعداد 5 مل من حل جل، استخدام 1.7 مل ماء المقطر مل 2 اكريلاميد الاكريلاميد/مكررا (30/0.8% w/v)، 1.3 مل من 1.5 م تريس الأس الهيدروجيني 8.8، 0.05 مل من فوق كبريتات الأمونيوم 10% ومل 0.002 من تيميد.
- لإعداد 2 مل من التراص هلام استخدام 1.5 مل مياه 0.33 مل اكريلاميد الاكريلاميد/مكررا (30/0.8% w/v)، 0.25 مل م 1 تريس الأس الهيدروجيني 6.8، 0.02 مل من فوق كبريتات الأمونيوم 10% ومل 0.002 من تيميد. أبعاد الجل 7.3 سم × 8.2 سم × 0.075 سم (ل س د س ث).
ملاحظة: استخدام مشط جيدا 15 سمك 0.75 مم لحساسية أفضل.
- إضافة المبالغ المناسبة من 6 × تحميل المخزن المؤقت وعينه الحمض النووي لأنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل (مثل استخدام 1 ميليلتر من المخزن المؤقت للتحميل x 6 إلى 5 ميليلتر من عينات الحمض النووي).
- ضع الجل في قاعة الرأسي التفريد.
- ملء الدائرة مع 750 مل من المخزن المؤقت x TAE 1 لتشغيل المواد الهلامية 2. لتحضير 1 لتر 50 x TAE، استخدم ز 442 من قاعدة تريس و 57.1 مل من حمض الخليك الجليدية 100 مل من 0.5 م يدتا درجة الحموضة 8. إضافة الماء المقطر لوحدة تخزين نهائي للأم 1
- تحميل العينات في الهلام. تشغيل الهلام في 100 الخامس ح 2.
- وبدلاً من ذلك، إعداد 1 x TAE [اغروس] هلام استخدام الوصفة موجودة في سامبروك14.
- إضافة 300 مل 1 x TAE لقاعة التفريد الأفقي. تشغيل هلام لمدة 45 دقيقة في 100 V.
2-NBT-سان جرمان أنا تلطيخ (الشكل 1).
-
هلام الاكريلاميد تلطيخ.
- إعداد الحلول: 0.1% w/v NBT و 1.2 x سان جرمان أنا.
ملاحظة: من الممكن استخدام اثيديوم بروميد، جيلريد والذهب سيبر بدلاً من سان جرمان أنا، لكن سان جرمان كان أفضل أداء. - صب مل 16.75 1.2 x SYBR الأخضر أنا الحل في حاوية ذات الحجم المناسب.
ملاحظة: يمكننا استخدام غطاء مربع تلميح ماصة كحاوية، وتحسب هذه الكميات لتغطية جل استخدام هذه الحاويات؛ أبعاده 11.6 سم × 7.6 سم × 2.6 سم (ل س د س ث). - ضع الجل في الحل. إضافة مل 3.25 من 0.1% w/v NBT الحل إعطاء 0.2 مم NBT و 1 x (أي ما يعادل 2، 0 ميكرومتر) SG أنا التركيزات النهائية.
- ختم الحاوية مع الأفلام البلاستيكية، والتفاف تماما الحاوية مع رقائق الألومنيوم لحجب أي ضوء المحيطة.
ملاحظة: ويستخدم الفيلم البلاستيك لمنع الرش وتجنب رد فعل رقائق الألومنيوم مع الحل المصبوغة. - اهتزاز لمدة 25 دقيقة على شاكر مداري 60 لفة في الدقيقة.
- قم بإزالة غطاء من البلاستيك والألومنيوم. تعرض لأشعة الشمس لمدة 90 دقيقة كحد أقصى. تحقق من كل 5 دقائق حتى تظهر الفرقة للفائدة.
- لاستخدام الضوء الأزرق، إعداد بروتوبوارد مع 3 الضوء – ينبعث الثنائيات (الصمام) ووضع المصابيح حوالي 5 مم من سطح هلام (الاختيار تلطيخ باستمرار، كالوقت اللازمة سوف يعتمد على كثافة مصدر الضوء LED).
- إعداد الحلول: 0.1% w/v NBT و 1.2 x سان جرمان أنا.
-
[اغروس] هلام تلطيخ.
- بعد إعداد وتشغيل 1% [اغروس] هلام كما هو موضح في الأقسام 1.4 (الأبعاد 1 سم × 6.2 سم × 7 سم؛ ول س د ث x)، اتبع نفس الخطوات كما هو الحال في 2.1 مع هذه التعديلات:
- صب مل 41.9 1.2 x سان جرمان أنا الحل في غطاء مربع تلميح ماصة؛ أبعاده 11.6 سم × 7.6 سم × 2.6 سم (ل س د س ث). إضافة 8.1 مل من محلول NBT 0.1%.
- ختم الحاوية مع الأفلام البلاستيكية، وثم التفاف تماما الحاوية مع رقائق الألومنيوم لحجب أي ضوء المحيطة.
- اهتزاز ح 1 على شاكر مداري 60 لفة في الدقيقة.
3-بيانات تحليل.
-
سان جرمان NBT أنا منحنيات المعايرة.
- الحصول على الصور جل بالمسح في 1200 نقطة في البوصة.
- الحصول على البرمجيات المفتوحة لتحليل الصور. تصويب الصور باستخدام محرر صور. تشغيل قياس كثافة صورة.
- حساب المساحة تحت المنحنى. إعداد رسم بياني لإشارة/إشارةماكس مقابل تركيز الحمض النووي.
4-الحمض النووي الانتعاش.
- تعد من 1% [اغروس] هلام في 1 x TAE استخدام الوصفة موجودة في سامبروك14.
- إضافة 300 مل 1 x TAE لقاعة التفريد الأفقي. تحميل ميليلتر 4 100 نانوغرام/ميليلتر pDJ10015 بلازميد وسلم الحمض النووي بعد مخطط النظر في الشكل 2. تشغيل الهلام ح 1 في 100 V.
- مارك وتزن أنبوبين ميكروسينتريفوجي 2 مل.
- خفض الهلام الأوسط كي يكون نصفي متطابقة. ينبغي أن تتضمن كل واحد السلم وبلازميد عينة للمقارنة بين مختلف التقنيات المصبوغة. يتم تمثيل تخطيطي في الشكل 2.
- وصمة عار واحد النصف مع سان جرمان NBT أنا كما في الخطوة 2.
- قطع بلازميد الفرقة استخدام مشرط نظيف. حفظ قطعة جل في أنبوب واحد ووزنها.
- وصمة عار الجزء الآخر من الجل مع سان جرمان أنا مع 50 مل 1 × سان جرمان أنا الحل ويهز ببطء (60 لفة في الدقيقة) الجل ح 1 في الظلام.
- وضع الجل على ترانسيلوميناتور وفضح للحد الأدنى 2 قطع بها الفرقة بلازميد استخدام مشرط نظيف.
- حفظ قطعة جل في الأنبوبة الأخرى وتزن.
ملاحظة: يمكن أن يكون مؤقتاً البروتوكول هنا مع الحفاظ الأنابيب عند-20 درجة مئوية.
- القيام باستخراج بلازميد استخدام مجموعة أدوات استخراج هلام تجارية.
5-بلازميد التطبيع.
- في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل، إضافة 10 ميليلتر من بلازميد المستخرجة و 60 ميليلتر من نوع أنا الماء. ميكس ونقل إلى ومبومو كوارتز ميليلتر 60 أو استخدام 2 ميليلتر مباشرة في نانودروب.
- قياس أطياف الامتصاص بين 230 إلى 320 نانومتر. حساب تركيز بلازميد العينة باستخدام الصيغة التالية:
حيث D هو عامل إضعاف المطبق (في هذه الحالة هو 70/10)، Ax الاستيعاب في العاشر شمال البحر الأبيض المتوسط، وهو 50 عامل التحويل إلى ميكروغرام/مل دسدنا. - تمييع عينات إلى 9.1 نانوغرام/ميليلتر.
- تحويل خلايا الإشريكيّة القولونية (كولاي) المختصة (مثل الذهب XL10) عقب إجراء التحول إينو16 استخدام 5 ميليلتر لتمييع عينة.
- حساب عدد المستعمرات في أطباق بتري وملاحظة التخفيف. حساب في مستعمرة تشكيل وحدات (زيمبابوي) مع الصيغة التالية17:
حيث D هو عامل إضعاف المطبق من الثقافة الأولى. - القيام اختبار t مزاوج.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
يظهر ترسبات formazan أرجواني حيث يوجد الحمض النووي (التحقق من الطيف الكتلي13). في هذه التجربة، تم تحميل سلم الحمض النووي لجعل منحنى معايرة (الشكل 3). يعمل البروتوكول للهلام الاكريلاميد و [اغروس]، لكنها كثافة أقل ويأخذ وقتاً أطول في [اغروس]. ومع ذلك، يتيح استخدام المواد الهلامية [اغروس] استرداد العينة باستخدام مجموعة أدوات متوفرة تجارياً، وأنها لا تتداخل مع الاستخراج. عينات استرداد باستخدام هذا الأسلوب مع المصابيح الزرقاء بجودة أفضل بالمقارنة مع سان جرمان الأول باستخدام ترانسيلوميناتور (الشكل 4).
الشكل 1. تحليل الحمض النووي التخطيطي من سان جرمان NBT I تلطيخ والتحديد الكمي- الخطوات: إضافة ألف سان جرمان الأول وحلول NBT إلى الهلام. ب فضح الهلام لأشعة الشمس أو الضوء الأزرق. جيم المسح الجل ب 1200 نقطة في البوصة. د تحليل الصورة هلام بصورة تجهيز البرمجيات للحصول على كثافة الفرقة. هاء التآمر البيانات في شدتها مقابل تركيز الأرض. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 . التخطيطي للمقايسة مقارنة بين الانتعاش وسلامة الحمض النووي- أ الحمض النووي التفريد. ب جل قطع إلى جزئين. جيم تلطيخ مع اثنين من أساليب مختلفة المصبوغة (سان جرمان NBT-سان جرمان وأنا). دال الاستغناء عن الفرقة بلازميد الحمض النووي. هاء الحمض النووي جل الاستخراج الداخلي باستخدام أدوات الاستخراج. واو الحمض النووي القياس الكمي بالقياس كانت. زاي تطبيع تركيز الحمض النووي للمقارنة بين هاتين الطريقتين. حاء التحول البكتيري مع العينات بعد تطبيع مستعمرة أولاً فرز وتحليل البيانات. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 . منحنى معايرة الحمض النووي في bp 1500 استخدام NBT-سان جرمان "الأول:" 12.5% polyacrylamide الجل محملة بتركيزات مختلفة من سلم الحمض النووي. تم تشغيل المواد الهلامية في 100 الخامس ح 2 في 1 x TAE. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 . مقارنة لكفاءة التحويل بين الحمض النووي تصور مع سان جرمان أنا وترانسيلوميناتور و "الأول:" NBT-سان جرمان تحميل في 1% [اغروس] هلام بلازميد pDJ100 وتشغيل 100 الخامس ح 1 في 1 x TAE. ثم كان قص الهلام في نصفين. نصف كان الملون مع سان جرمان الأول والنصف الآخر من الجل مع سان جرمان NBT أنا. الفرقة بلازميد ثم يستخرج من الجل باستخدام مجموعة أدوات استخراج هلام. وأخيراً، تطبيع بلازميد المستخرجة والمستخدمة في تحويل الخلايا المختصة كولاي . التحولات التي نفذت n = 3. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الحساسة، ورواية استناداً الحمض النووي تلطيخ أسلوب الحد NBT واستخدام سان جرمان قد عرضت في هذا المقال. والخطوة الحاسمة في هذا البروتوكول هي المرة الحضانة من الجل في NBT-سان جرمان أنا الحل وتركيز NBT. لقد حان وقت المصبوغة الجل [اغروس] أطول للمواد الهلامية الاكريلاميد بسبب زيادة سمك الهلام [اغروس]. لا يعمل هذا الأسلوب أيضا حضور الحزب الديمقراطي الصربي كما NBT رواسب اتصال معها. إذا لم يحصل الجل خلفية أرجواني، نوصي بأن يتم إعداد جيل آخر و لتقليل زمن التعرض للضوء. إذا هو الملون [اغروس] هلام، وليس هناك ما يكفي من حساسية، فمن المستحسن أن زيادة زمن التعرض للضوء. إذا كان هناك نقص الحساسية ومتسرعا براق في الجل، وهذا يمكن أن يكون نتيجة لتلوث مخزونات النشر الاستراتيجي. وفي هذه الحالة، تعد هلام جديد وشطف أنه قبل إضافة الكواشف المصبوغة.
يحدث هطول الأمطار بإضاءة الضوء الأزرق، سواء تم توفيره بواسطة الضوء أزرق الصمام أو هذا الضوء الأزرق بطبيعة الحال في ضوء الشمس. ونتيجة لهذا، هو حد من الأسلوب مصدر الضوء. إذا كان هناك ثمة حاجة إلى لا مصدر الضوء، مصدر ضوء أزرق، وإذا كان مصدر الضوء غير متجانسة، من غير الممكن القيام بمقارنة، للسبب نفسه، من غير الممكن القيام بالقياس الكمي. ومع ذلك، سوف تكون النتائج المتحصل عليها تعتمد إلى حد ما على مصدر الضوء المستخدمة. إذا كان مصدر الضوء غير متسقة أو الزي الرسمي (مثلاً بسبب التغييرات في الشدة من أشعة الشمس أثناء النهار أو غير متجانسة من مصدر الضوء الأزرق)، فإنه سيكون أكثر صعوبة مباشرة إجراء مقارنات أو التحديد الكمي لعينات مختلفة في مختلف مرات.
هذه الطريقة لا تحتاج الأجهزة الخاصة لتصور الحمض النووي، مما يجعله مثاليا للاستخدام الميداني. للحصول على النتائج الكمية، يمكن للمرء استخدام كاميرا ذات دقة عالية أو ماسح مكتب كما تبين في هذا العمل.
أننا نأمل في توسيع نطاق هذا الأسلوب في المستقبل عن طريق الجمع بين أنه ربما مع تلطيخ الجزيئات الحيوية الأخرى من خلال استخدام تقنيات المصبوغة مختلفة اثنين (مثل سان جرمان NBT أنا مع أخذ) في جل نفسه.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
هذا العمل كان يدعمها فوندو ناسيونال de Desarrollo Científico y تكنولوجيا البحار (التمويلية)، شيلي، 11130263 المشروع (للأسلحة الكيميائية)، ومشروع اللجنة + الأدنى + دي Programa Colaboración انترناسيونال PCI-PII20150073 (للأسلحة الكيميائية) ويو-إينيسيا من دي Vicerrectoría بحوث جامعة شيلي (للأسلحة الكيميائية).
شكرا على تاتيانا نارانخو-بالما للمساعدة في المرحلة الأولى من هذا المشروع، الدكتور خورخي بابول وروجيه كيروغا دييغو للمناقشة مفيدة، وروبرت ليش لتنقيح المخطوط والمديرية de extensión de la كلية دي y Químicas العلوم العامة من جامعة شيلي. شكرا جداً لبيريز مارسيلو لتحرير الفيديو ونيل ستيفنز لتصحيح النص وواطسون إيرول لتوفير الإدخال الصوتي.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Nitro blue tetrazolium | Gold Biotechnology | 298-83-9 | reagent used in the staining |
| SYBR Green I 10000X | Thermo-Fisher | S7563 | reagent used in the staining |
| Gel extraction kit | QIAGEN | 28704 | used to extract plasmid from the gel in integrity assay |
| DNA ladder | Thermo-Fisher | SM 1331 | used to make calibration curves and as reference to cut band in integrity assay |
| Agar Agar | Merck | used to make LB-ampicillin culture plates | |
| sodium chloride | Merck | 1064045000 | used to make LB-ampicillin culture plates |
| yeast extract | Becton, Dickinson and Company | 212750 | used to make LB-ampicillin culture plates |
| peptone | Merck | 72161000 | used to make LB-ampicillin culture plates |
| TEMED | AMRESCO | 761 | used to make polyacrylamide gels |
| ammonium persulfate | Calbiochem | 2310 | used to make polyacrylamide gels |
| acrylamide | invitrogen | 15512-023 | used to make polyacrylamide gels |
| bisacrylamide | SIGMA | 146072 | used to make polyacrylamide gels |
| Tris-base | Merck | 1083821000 | used to make TAE buffer and non-denaturing polyacrylamide gel tris-HCl buffer |
| EDTA | J.T. Baker | 8993-01 | used to make TAE buffer |
| Acetic acid | Merck | 1,000,632,500 | used to make TAE buffer |
| agarose | Merck | 16802 | used to make TAE buffer |
| spectrophotometer | Tecan | infinite 200 pro | used to quantify DNA plasmid |
| water purificatiom unit | Merck | Elix 100 | use to make water type 1 (ASTM) used in spectrophotometry and DNA dilutions\ |
| distilled water | - | used in gels, culture medium, stainings and general solutions | |
| HCl | J.T. Baker | 9535-03 | used to make non-denaturing polyacrylamide gel tris-HCl buffer |
| 6X DNA loading dye | Thermo-Fisher | R0610 | |
| 5 mm Blue LED | Jinyuan electronics | SP-021 | light source used in integrity assay |
| protoboard | KANDH | KH102 | light source support and circuit |
| 9 V battery | Duracell | - | used to power the LED's |
| horizontal electrophoresis chamber | Biorad | 1704486EDU | used to make and run agarose gel in integrity assay |
| vertical electrophoresis kit | Biorad | 1658002EDU | used to run polyacrylamide gels in calibration curves |
| power supply | Biorad | 1645050 | used to power the electrophoresis |
References
- LePecq, J. B., Paoletti, C. A fluorescent complex between ethidium bromide and nucleic acids: physical-chemical characterization. J. Mol. Biol. 27 (1), 87-106 (1967).
- Singer, V. L., Lawlor, T. E., Yue, S. Comparison of SYBR Green I nucleic acid gel stain mutagenicity and ethidium bromide mutagenicity in the Salmonella/mammalian microsome reverse mutation assay (Ames test). Mutat Res. 439 (1), 37-47 (1999).
- Xin, X., Yue, S., Wells, K. S., Singer, V. L. SYBR Green-I: a new fluorescent dye optimized for detection picogram amounts of DNA in gels. Biophys. J. 66 (A150), (1994).
- Flores, N., Valle, F., Bolivar, F., Merino, E. Recovery of DNA from agarose gels stained with methylene blue. Biotechniques. 13 (2), 203-205 (1992).
- Yang, Y. I., Jung, D. W., Bai, D. G., Yoo, G. S., Choi, J. K. Counterion-dye staining method for DNA in agarose gels using crystal violet and methyl orange. Electrophoresis. 22 (5), 855-859 (2001).
- Yang, Y. I., et al. Detection of DNA using a visible dye, Nile blue, in electrophoresed gels. Anal. Biochem. 280 (2), 322-324 (2000).
- Santillán-Torres, J. L. A novel stain for DNA in agarose gels. Trends Genet. 9 (2), 40 (1993).
- Adkins, S., Burmeister, M. Visualization of DNA in agarose gels as migrating colored bands: applications for preparative gels and educational demonstrations. Anal. Biochem. 240 (1), 17-23 (1996).
- Cong, W. T., et al. A visible dye-based staining method for DNA in polyacrylamide gels by ethyl violet. Anal. Biochem. 402 (1), 99-101 (2010).
- Altman, F. P. Tetrazolium salts and formazans. Prog. Histochem. Cytochem. 9 (3), 1-56 (1976).
- Nineham, A. W. The chemistry of formazans and tetrazolium salts. Chem. Rev. 55 (2), 355-483 (1955).
- Crandall, I. E., Zhao, B., Vlahakis, J. Z., Szarek, W. A. The interaction of imidazole-, imidazolium, and tetrazolium-containing compounds with DNA. Bioorg. Med. Chem. Lett. 23 (5), 1522-1528 (2013).
- Paredes, A. J., et al. New visible and selective DNA staining method in gels with tetrazolium salts. Anal. Biochem. 517, 31-35 (2017).
- Green, M. R., Sambrook, J. Molecular Cloning: a Laboratory Manual. , fourth, Cold Spring Harbor Laboratory Press. NY. (2012).
- Hansen, W., Garcia, P. D., Walter, P. In vitro protein translocation across the yeast endoplasmic reticulum: ATP-dependent post-translational translocation of the prepro-α-factor. Cell. 45 (3), 397-406 (1986).
- Inoue, H., Nojima, H., Okayama, H. High efficiency transformation of Escherichia coli with plasmids. Gene. 96 (1), 23-28 (1990).
- Madigan, M., Martinko, J., Parker, J. Brock biology of microorganisms. , 10th, Prentice Hall/Pearson Education. Upper Saddle River (NJ). (2003).
