Summary
Kemik iliği hücrelerinden fare birincil makrofajlar türetmek için bir düz ileri yöntem göstermek ve BSA-yağ asidi hazırlamak için basit bir yöntem conjugates. Sonra doymuş yağ asitleri makrofaj hücre ölümüne neden olabilir ve bu tür hücre ölümü olumlu ceramide düzeyleri hücresel birikimi ile ilişkilidir gösterir.
Abstract
Makrofajlar epidermal yağ asidi bağlayıcı protein ve yağ yağ asidi bağlayıcı protein son derece hızlı. Onlar aktif alımı doymuş ve doymamış yağ asitleri, bağışıklık fonksiyonları düzenlenmesinde önemli bir rol oynayabilir. Çok sayıda çalışmalar çeşitli yağ asitleri, doymuş olduğunu göstermiştir veya doymamış, Mayıs hücre büyümesi ve fonksiyonu farklı etkileri sahip. Ancak, yağ asidi hazırlık için kullanılan yaklaşımlar değişir, hangi fizyolojik olmayan sonuçlara neden olabilir. Serum albümin, memeli periferik kan, yağ asitleri için doğal bir taşıyıcı yağ asitlerinin sodyum tuzu ile karmaşık eşlenik şekillendirme için yağ asidi işlevinde böylece yağ asidi sabun toksisite en aza indirerek memeli hücreleri, eğitim için önerilir. Bu nedenle, basit, nispeten hızlı Isıtma ve yöntem sonicating geliştirilen ve burada BSA-yağ asit eşlenik oluşumu için sunulan. Doymuş yağ asitleri, özellikle Stearik asitler şiddetli hücre ölümü fare kemik iliği türetilmiş makrofajlar içinde ikna etmek için bir iletişim kuralı'nı açıklar. Biz daha fazla doymuş yağ asidi indüklenen hücre ölümü olumlu birikmiş hücresel ceramide düzeyleri ile ilişkili olduğunu gösterir. Bu yöntem yağ asidi diğer memeli hücreleri üzerinde etkisini çalışmaları için genişletilebilir.
Introduction
Yağ asitleri enerji metabolizması ve farklı hücre membran fosfolipitler sentezi kritik bir rol oynamaktadır. Yağ asitleri sulu düşük bir çözünürlük var. Yağ asidi uygun hazırlanması biyolojik fonksiyonları memeli hücrelerinde yağ asitlerinin çalışmak için kritik önem taşıyor. Yağ asitleri etanol ile hazırlanır birçok yağ asitleri bile nispeten düşük konsantrasyonlarda1hücre zarının toksik sabun (deterjan) etkileri göstermek. Bir doğal, büyük taşıyıcı serum serbest yağ asitleri için serum albümin yağ asidi teslim vitro yağ asidi işlevi deneyleri için2,3,4için iyi bir taşıyıcı olarak kabul edilir. Birçok araştırma kağıtları yağ asitleri kullanarak yayımlanmış olsa bile ancak, yağ asidi ve serum albümin eşlenik hazırlanması ayrıntılarını genellikle kullanılabilir değil.
Makrofajlar epidermal yağ asidi bağlayıcı protein ve yağ yağ asidi bağlayıcı protein5,6,7,8son derece hızlı. Onlar aktif alımı doymuş ve doymamış yağ asitleri bağışıklık işlevleri düzenleyen. Makrofajlar ve diğer hücrelerin yağ asitlerinin etkisi çalışma için uygulanan1,7,9yağ asidi hazırlık farklı yöntemleri vardı. Yağ asitleri makrofaj fonksiyonları üzerine etkisini araştırmak için uygun şekilde hazırlanmış yağ asidi/serum albümin conjugates kullanarak biyolojik anlamlı veri almak üzere kritik önem taşımaktadır. Yağ asitleri makrofaj fonksiyonları üzerine etkisi üzerinde çalışmalar temel bilgi ve yağ asidi metabolizmasının hastalıklarda makrofaj söz konusu ile ilgili potansiyel tedavi hedefleri sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
protokol kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC), Louisville Üniversitesi tarafından kabul edildi.
1. fare kemik iliği türetilmiş makrofajlar (BMDMs)
- Euthanize CO 2 kullanarak bir 6 - için 8-hafta-yaşlı, sağlıklı vahşi tip fare. Bir köpük tahta aşağı pin ve sırılsıklam olana % 70 etanol ile sprey. Tibia/uyluk kemikleri forseps ve makas ile kaldırın. Onları 5 mL 1 x fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) ile petri kabına koyardım. Steril koşullar altında tüm yordamları gerçekleştirmek.
- Her iki ucunda da bir makas ile tibia/uyluk kemiği steril doku kültürü mahallede kesmiş. 15 mL tüp içine kemik PBS + % 2 fetal sığır serum (FBS) ile 25 G iğne ile flush.
- Kemik iliği hücreleri vasıl 500 x g, 4 ° C'de 5 dakika süreyle santrifüj kapasitesi
- Hücre Pelet 1 mL kırmızı kan hücre lizis arabelleği kırmızı kan hücreleri (RBC) koşullar için daha az 1 dk. Dilute 9 mL 1 x PBS ile hemen resuspend. Santrifüj tekrar adım 1.3 olduğu gibi. Supernatants dikkatle boşaltmak.
- 10 mL 1 x PBS içinde hücre Pelet resuspend, hücre süspansiyon hücre enkaz/kümeleri kaldırmak için başka bir 15 mL tüp içine steril 40 mikron naylon mesh aracılığıyla filtre. Santrifüj tekrar 1.3 olduğu gibi. Supernatants dikkatle boşaltmak.
- Hücre Pelet 15 mL Roswell Park Memorial Enstitüsü orta (RPMI) % 5 ile 1640 FBS ve 10 μg/mL gentamisin, yüzen dışarı 100-mm doku kültürü çanak 37 o C İnkübatör, hücrelerde alın 60 dk. yavaşça girdap için çanak, tabak resuspend hücreleri ve bunları kabul.
- 6 x 10 6 hücreler bir 100-mm tabak içinde 10 ng/mL rekombinant fare makrofaj ile medya (%5 FBS ve 10 μg/mL gentamisin, % 30 ' L929 şartına media 10 ile karışık RPMI 1640) ayırt 12 mL makrofaj ile plaka 2 gün için koloni uyarıcı faktör (M-CSF).
- % 5 CO 2 37 ° C kuluçka 2 gün boyunca kültür sonra her yemeğin medya 10 ng/mL M-CSF ile ayırt 6 mL taze makrofaj ile beslemek.
- 5 günde 8 mL eski medya hücreleri rahatsız etmeden alıp 10 mL taze makrofaj medya 10 ng/mL M-CSF ile ayırt ekleyin.
- 7 günde bir hücre lifter kullanarak kemik iliği türevi makrofajlar (BMDMs) hasat.
Not: Ekli makrofajlar da 5 mL 1 mM EDTA 1 x PBS için 5-10 dk içinde ile float hücreleri kaldırma ve iki kez 5 mL 1 x PBS ile tabak yıkama sonra ayrışmış. Adım 1.3 olduğu gibi hücreleri santrifüj kapasitesi., onları taze makrofaj medya ayırt resuspend ve bir hemasitometre ile Sayın.- Onayla BMDMs ' fenotip Akış Sitometresi tarafından açıklanan 5. Türetilmiş fare makrofajlar aşağıdaki çalışmalar için belirli bir konsantrasyon hazırlayın.
2. BSA-yağ asit eşlenik hazırlık
- hazırla 2 mM BSA steril PBS. Örneğin, tartmak 6,65 g BSA, çözülmeye, 30 mL 1 x PBS eklemek sonra eklemek daha fazla PBS 50 mL kadar bileşenleri 2 mM BSA 1 x PBS yapmak için ölçekleme.
- Hazırlama 5 mM bireysel sodyum tuzu 2 mM BSA yağ asitlerinin. 37 ° C veya daha yüksek, gerekirse ısı ve net bir çözüm elde edilir kadar 2 mM BSA karışımı ve yağ asitlerinin sodyum tuzu solüsyon içeren temizleyicide.
Not: doymamış yağ asitleri için karşılaştırıldığında, doymuş yağ asitleri daha yüksek bir sıcaklık ve sonication zamana eriterek için gerek. - Filtre bir 0,22 ile yağ-asit-BSA çözüme mikron filtre, aliquot 1,5 mL steril microcentrifuge içine borular, onları kısa süreli kullanım için 4 ° C'de veya uzun süreli depolama için-20 ° C'de ve saklayabilirsiniz. Hiç yağış depolama buzdolabında 4 ° C'de sonra dikkat edilmelidir.
3. Doymuş yağ asitleri neden hücre ölüm, fare kemik iliği türetilmiş makrofajlar
- BMDMs 24-iyi doku kültürü plaka 10 6 /mL medya ayırt makrofaj olarak x 0.4 ile plaka.
- 0.4 mM palmitik asit ve Stearik asit, 37 ° C kuluçka %5 CO 2 ile 16-24 h için hücrelerle tedavi. Negatif kontrol BSA kullanın.
- Tedaviden sonra hücre lifter hücrelerle hasat ve spin 500 x g, 4 ° C'de 5 dakika süreyle, hücreleri aşağı
- Annexin V-Alexa 488 ve 7-aminoactinomycin D (7-AAD) 100 hücrelerle leke μL V bağlama arabellek 15 dakika oda sıcaklığında annexin.
- Annexin-bağlama arabellek 200 µL örnekle sulandırmak, karışımı yavaşça, o zaman buz üzerinde örnekleri kuluçka süresinden sonra devam.
- Lekeli hücreleri en kısa zamanda Akış Sitometresi 5 tarafından analiz. V-Alexa 488 annexin FITC kanalda algılandığında ve 7-AAD PerCP/PerCP-Cy5.5 kanalda algılandı.
4. Hücre içi Ceramide boyama
- yağ asidi tedaviden sonra adım 3.3 olduğu gibi hücre hasat. % 4 paraformaldehyde 30 dakika süreyle hücreleri tamir
- Örnek 1 mL 1 x PBS ile yıkayın, aşağı spin olarak 3.3 içinde adım ve süpernatant dikkatle boşaltmak.
- 100 μL 1 x permeabilization tampon 30 dakika süreyle anti-ceramide birincil antikor (1: 200 seyreltme) hücrelerle leke
- Yıkama ve spin aşağı hücreleri tekrar olduğu gibi adım 4.2.
- 100 μL 1 x permeabilization tampon 30 dakika süreyle Anti-fare IgM ikincil antikor (1:500 seyreltme) hücrelerle leke
- Yıkama ve spin adım 4.2 olduğu gibi yine hücreleri aşağı. 250 μL 1 x PBS ekleyin ve lekeli hücreleri Akış Sitometresi 5 tarafından analiz.
Not: ekipmanları ve Kimyasalları tablosu ayrıntılı reaktif listesinde bakın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Obezite Serumda serbest yağ asitleri konsantrasyonları artar. Profesyonel fagositler makrofajlar aktif olarak ana bilgisayar homeostazı korumak için yağ asitleri götür. Bu işlemler sırasında aşırı yüklenmiş lipidler makrofaj hücre ölümüne neden olabilir. Bu amaçla, biz BMDMs vitro obez düzeyde diyet yağ asitleri ve akış sitometrik boyama kullanarak ölçülen makrofaj hücre ölümü ile kültürlü. Doymuş yağ asitleri, BSA denetimine göre özellikle Stearik asitler, indüklenen önemli hücre ölümü BMDMs. ölü hücreleri lekeli Annexin V ve 7-AAD (Şekil 1a-b) tarafından Çift Kişilik olumlu nüfus olarak gösterildi. Not, doymamış yağ asitleri önemli makrofaj hücre ölüm5neden değil. Verileri serbest doymuş yağ asitleri vivo içindeyüksek düzeyde toksik etkisini göstermektedir.
Benzer şekilde, kimin canlılığı palmitik asit veya Stearik asitler5tedavi için duyarlı bir makrofaj hücre satırı kullanarak, bulduk palmitik asit indüklenen hücre ölümü makrofajlar duyarlılık da hücre sayısı tarafından etkilenen Kültür (şekil 2a). Basitçe, aynı kültürel koşullar altında daha fazla makrofajlar Wells, yağ asitleri tarafından indüklenen daha az hücre ölümü. Ayrıca, palmitik asit indüklenen hücre ölümü olumlu hücresel Seramidler (şekil 2b) birikmiş düzeyleri ile ilişkili idi. Makrofajlar yüksek yoğunluklu bir durumda kültürlü, orta besin daha hızlı enerji metabolizması için tükenmiş, bu hücreler makrofajlar düşük yoğunluklu bir durumda kültürlü karşılaştırıldığında palmitik asit indüklenen hücre ölümü üzere. Ne zaman hücre besin zenginleştirilmiş koşul için (örneğin, obezite) maruz kaldılar, buna ek olarak, aşırı yağ asitleri toksik Seramidler, böylece yağ asidi indüklenen hücre ölümü için önde gelen üretmek için metabolize. Böylece, hücre kültürel koşullar doymuş yağ asidi indüklenen hücre ölümü sonuçlarını değişiklik getirebilir.
Şekil 1: yağ asitlerinin, özellikle Stearik asitler, yüksek konsantrasyon neden makrofaj hücre ölümü. BMDMs (7 gün) x 106/mL taze makrofaj medya ayırt 0,4 olarak kaplama. Sonra hücre ek 0,5-1 h, BMDMs için 24 h Media yalnız ve BSA negatif denetimler olarak kullanılmıştır için her yağ asidi belirlenen konsantrasyon ile tedavi edildi. Kullanımdan sonra hücreleri kaldırdı ve hasat, sonra 500 g 4 ° C'de 5 min için de aşağı bükülmüş Hücreleri 7-AAD ve V Alexa 488 Annexin ile 100 μL annexin bağlayıcı arabelleğe 15 dakika içinde lekeli. Daha sonra başka bir 200 μL annexin bağlama arabellek her örnek Akış Sitometresi Analizi önce ekleyin. (A) gösteri Akış Sitometresi veri hücrelerinin yağ asitleri tarafından indüklenen. (B) Özeti yağ asitleri tarafından indüklenen hücre ölümü. Hata çubuğu örnek SD temsil eder. Hücre ölümü palmitik asit (PA) tarafından indüklenen ve özellikle Stearik asit (SA) istatistiksel olarak anlamlı BSA denetimin karşılaştırılır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2: medya besin etkileri makrofajlar duyarlılık palmitik asit kullanılabilirliğini indüklenen hücre ölümü. (A) doymuş yağ asidi kaynaklı stres onun tolerans hücre beslenme durumu etkiler. (B) doymuş yağ asidi indüklenen hücre ölümü hücre duyarlılık son derece ceramide birikmiş hücresel düzeyde ile ilişkilidir. Medya besin degrade vahşi türü makrofaj hücre satır 1 m, 2 M, 4 M ve 6 mm petri yemeklerinde 6 mL RPMI 1640 ile % 5 ile 8 M (M = 1 x 106) kültür tarafından elde edildi FBS ve 10 μg/mL gentamisin 18 saat için. Hücreleri daha fazla sayıda yemekleri kültürlü zaman medya daha fazla besin tükenmesi nedeniyle sarı renktir. Hücreleri fazla % 90 hala son derece uygun. Ekli hücrelerin içinde PBS için 5 dk. oturduktan sonra pipetting tarafından kaldırdı ve hemen yeniden 0.2x106/mL 24-şey tabak taze medya, kültürlü. Hücreleri hemen 18 h BSA denetimin her kaynak hücreleri için (besin degrade) kullanarak için 0.4 mM palmitik asit ile tedavi edildi. Sonra tüm işlem görmüş hücreleri hasat ve hücre ölümü için 7-AAD ile lekeli veya ile hücre içi ceramide lekeli. Spontan hücre ölümü (7-AAD +) yüzde %8,6 daha az olduğunu. Tedavi belirli hücre ölümü %7 fark olarak tahmini-AAD + tedavi ve kendi BSA arasında kontrol (a). Tedavi belirli ceramide düzeyi tedavi ve kendi BSA denetim (b)arasındaki ortalama Floresans yoğunluğu (MFI) fark olarak tahmin edilmiştir. Bu deney tekrarlandı ve temsilcisi verileri sunulmaktadır. Hata çubuğu gösterir örnek SD Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Yağ asidi çözüm uygun hazırlanması yağ asitlerinin biyolojik işlev eğitim için kritik öneme sahiptir. Yağ asidi nötralize sulu çözüm onun çözünürlük artar. Ancak, hala su veya PBS düşük çözünürlük, yağ asitlerinin, özellikle doymuş yağ asitleri, sodyum tuzları şunlardır biz gözlenen. Bir yöntem yağ asidi1dağıtılması yardımcı olmak için % 95-100 etanol kullanmaktır. Bu yöntemi kullanarak, hücrelere daha yüksek toksisite daha az toksik doymamış yağ asitleri için daha düşük konsantrasyonlarda bile gözlenen. Böylece yağ asitleri optimal koşullar, onların monomeric formu9,11çözümde kalan yağ asidi çözüm hazırlamak için başka bir yol metil-β-cyclodextrin bir iletim sistemi kullanmaktır. Yağ asitleri böyle bir yöntem ile hazırlanan normal fonksiyonu için ortaya çıktı ama yöntem iletken karmaşıktır. Metil-β-cyclodextrin hücre büyüme üzerindeki etkisi yüksek konsantrasyon ölüm12hücre neden olabilir olduğunu. Doymuş palmitik ve Stearik asitler için yüksek sıcaklık (60 oC) solubilization9ile yardımcı olmak için kullanılır.
Serum albümin yağ asidi lenfatik ve vasküler sistemlerinde taşıma yardımcıları, hücre dışı sıvının içinde büyük bir yağ asidi bağlayıcı protein olduğundan yağ asitlerinin fonksiyonel çalışma için doğal taşıyıcı olarak tercih edilir. Yağ asidi düşük çözünürlük önlemek için tuz sulu çözümde sonication büyük ölçüde yağ asidi BSA, böylece yağ asidi solubilization yardım ile konjugasyon kolaylaştıracaktır. Bu birim ve konsantrasyon aynı miktarda doymuş yağ asitleri doymamış yağ asitleri (30 dk) daha solubilize için (çok uzun saat) alır. Isıtma ve sonication için BSA-yağ asit konjugasyon kritik olmakla birlikte, bir yüksek sıcaklık (50'den az oC) önerilen alma açık BSA-PA, için BSA-SA eşlenik çözümleri ve düşük sıcaklık şiddetle tavsiye edilir çözücü için doymamış yağ asitleri oksidasyonu yüksek sıcaklıkta onların duyarlılık nedeniyle. Yağ asidi BSA için 5:2 molar oranı 3: 1'e göre iyi kabul edilir veya yapıldı 6:1 molar oranı7yayınlandı. Bu daha az tamamen serbest yağ asidi çözümde yağ asidi sabun toksisite önlemek için emin olabilirsiniz. Bu şekilde hazırlanan BSA-yağ asitleri gibi görünüyor istikrarlı Çözümleri (yağış yok, en azından) onların işlevindeki makrofaj hücre ölümü üzerinde gösterildiği gibi en az 3 ay 4 ° C'de. Mühür yağ asitleri hazırlanan tüpün kapağı uzun bir süre için kullanılmak üzere vardır.
PBS BSA-yağ asit net bir çözüm alındığında, tutarlı sonuçlar yağ asidi tedaviden daha çok garanti altındadır. Ancak, aç ve iyi beslenmiş makrofajlar oldukça farklı yağ asidi tedaviye, özellikle doymuş yağ asitleri yanıt. Aşırı besin makrofajlar açlıktan daha doymuş yağ asidi indüklenen hücre ölümüne daha duyarlı veya hungered Hücreler metabolik olarak doymuş yağ asitleri onların hayatta kalma ve büyüme isteği sonucunda Detoks çünkü olanlar aç. Böyle hücre ölümü çok birikmiş hücresel ceramide düzeyleriyle ilişkilidir. Notu, ceramide toksisite sadece ne zaman hücre içi ceramide düzeyleri belirli bir eşiğe ulaşmak oluşur. Yağ asidi tedavi makrofajlar veya diğer her türlü hücreleri tutarlı sonuçlar sağlamak için hücreleri bol besin ile taze medya ile kültürlü. Herhangi bir alt-optimal hücre kültür koşulları alt-optimal verilerde neden olabilir.
Genel olarak, bu protokoller çok ayrıntıları yağ asitleri makrofajlar tarafından ultraviyole üzerinde etkisini eğitimi için gerekli sağlar. Diğer yöntemlerine göre doğrudan bu yaklaşım BSA-yağ asit conjugates etanol gibi ilave bir solvent kullanmadan oluşturur. Doğru hazırlamak için en zor adımdır kararlı BSA-yağ asit solüsyonu sonication ısı üretir ve denetim sýcaklýðýna zordur çünkü. Neyse ki, doymamış yağ asitleri kısa sürede hazırlamak ve istikrarlı, doymuş yağ asitleri nispeten yüksek sıcaklıklarda doymuş ve böyle bir durumda oksidasyon dirençli oldukları için durmak için görünür kütüphanemizin kolaydır. Şimdiye kadar biz herhangi bir sorun veya sınırlama BSA-yağ asit conjugates ile bu şekilde hazırlanan gözlemledik değil. Bizim iletişim kuralı bir değişiklik daha duyarlı deneyler gerekirse gerekli olacaktır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar hiçbir maddi çıkar çatışmaları bildirin.
Acknowledgments
Bu eser kısmen Louisville Üniversitesi başlangıç fonlar tarafından desteklendi ve Ulusal Kanser Enstitüsü (Bethesda, MD) R01CA177679, R01CA180986 verir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| CPX Ultrasonic Bath | Bransonic | Model 2800 | |
| Sodium palmitate (PA) | Nu-Chek Prep, Inc. | S-1109 | M.W. 278 |
| Sodium stearate (SA) | Nu-Chek Prep, Inc. | S-1111 | M.W. 306 |
| Bovine serum albumin (BSA), fatty acid-free | Fisher Scientific | 9048-46-8 | |
| Mouse macrophage colony stimulating factor (mM-CSF) | Cell Signaling Technology, Inc. | 5228 | |
| RPMI 1640 | VWR International | 71002-878 | |
| Annexin V, Alexa Fluor 488 conjugate | Fisher Scientific | A13201 | |
| 7-AAD | BD Biosciences | 559925 | |
| Monoclonal anti-ceramide antibody (mouse IgM) | Sigma | C8104-50TST | Clone: MID 15B4 |
| Goat Anti-Mouse IgM Antibody, µ chain, FITC conjugate | Sigma | AP128F | |
| Fixation buffer | Biolegend | 420801 | |
| Permeabilization buffer | Ebioscience | 4307693 | |
| Red Blood Cell Lysis Buffer | Sigma | 11814389001 | |
| Annexin V Binding Buffer | BD Biosciences | 556454 | |
| L929 cells | ATCC | CCL-1 | |
| Corning Cell Lifter | Fisher Scientific | 07-200-364 | |
| Note: M.W. is for molecular weight. |
References
- Martins de Lima, T., Cury-Boaventura, M. F., Giannocco, G., Nunes, M. T., Curi, R. Comparative toxicity of fatty acids on a macrophage cell line (J774). Clin Sci (Lond). 111 (5), 307-317 (2006).
- Simard, J. R., Zunszain, P. A., Hamilton, J. A., Curry, S. Location of high and low affinity fatty acid binding sites on human serum albumin revealed by NMR drug-competition analysis. J Mol Biol. 361 (2), 336-351 (2006).
- Penn, A. H., Dubick, M. A., Torres Filho, I. P. Fatty Acid Saturation of Albumin Used in Resuscitation Fluids Modulates Cell Damage in Shock: In Vitro Results Using a Novel Technique to Measure Fatty Acid Binding Capacity. Shock. , (2017).
- Vusse, G. J. Albumin as fatty acid transporter. Drug Metab Pharmacokinet. 24 (4), 300-307 (2009).
- Zhang, Y., et al. Adipose Fatty Acid Binding Protein Promotes Saturated Fatty Acid-Induced Macrophage Cell Death through Enhancing Ceramide Production. J Immunol. 198 (2), 798-807 (2017).
- Zhang, Y., et al. Epidermal Fatty Acid binding protein promotes skin inflammation induced by high-fat diet. Immunity. 42 (5), 953-964 (2015).
- Wen, H., et al. Fatty acid-induced NLRP3-ASC inflammasome activation interferes with insulin signaling. Nat Immunol. 12 (5), 408-415 (2011).
- Zhang, Y., et al. Fatty acid-binding protein E-FABP restricts tumor growth by promoting IFN-beta responses in tumor-associated macrophages. Cancer Res. 74 (11), 2986-2998 (2014).
- Ulloth, J. E., Casiano, C. A., De Leon, M. Palmitic and stearic fatty acids induce caspase-dependent and -independent cell death in nerve growth factor differentiated PC12 cells. J Neurochem. 84 (4), 655-668 (2003).
- Weischenfeldt, J., Porse, B. Bone Marrow-Derived Macrophages (BMM): Isolation and Applications. CSH Protoc. , (2008).
- Dansen, T. B., et al. High-affinity binding of very-long-chain fatty acyl-CoA esters to the peroxisomal non-specific lipid-transfer protein (sterol carrier protein-2). Biochem J. 339 (Pt 1), 193-199 (1999).
- Ulloth, J. E., et al. Characterization of methyl-beta-cyclodextrin toxicity in NGF-differentiated PC12 cell death. Neurotoxicology. 28 (3), 613-621 (2007).
