Summary
ويصف هذا البروتوكول مقايسة غزو عمودي مقلوب التي يمكن أن تستخدم لقياس قدرات الهجرة وغزو الخلايا في أجواء ثلاثية الأبعاد مع الحفاظ على المكروية الخلية. هذا التحليل مناسبة لخلايا نادرة و/أو الحساسة.
Abstract
على الرغم من أن قد وضعت فحوصات غزو 3D، يظل التحدي هو دراسة الخلايا دون التأثير على سلامة المكروية بهم. فحوصات 3D التقليدية مثل قاعة Boyden تتطلب أن الخلايا المشردين من موقع الثقافة الأصلية ونقلها إلى بيئة جديدة. هذا تعطيل العمليات الخلوية التي متأصلة المكروية، بل أنه كثيرا ما يؤدي إلى فقدان الخلايا. هذه المشاكل تنطوي على تحديات خاصة عند التعامل مع الخلايا التي أما نادرة، أو حساسة للغاية لتلك المكروية. هنا، نحن تصف وضع مقايسة 3D غزو أن يتجنب كل الشواغل. في هذا الفحص، يتم مطلي الخلايا داخل صغيرة جيدا ووضعت مصفوفة إدارة المحتوى في المؤسسة التي تحتوي على تشيمواتراكتانت من فوق الخلايا. هذا يتطلب لا خلية التشرد، ويسمح للخلايا بغزو صعودا في المصفوفة. في هذا التحليل، يمكن تقييم غزو الخلية، فضلا عن مورفولوجيا الخلايا داخل جل الكولاجين. يمكننا استخدام هذا الفحص، تميز الغازية قدرة خلايا نادرة وحساسة؛ الخلايا المختلطة الناتجة عن اندماج بين خلايا سرطان الثدي MCF7 والوسيطة/multipotent الخلايا الجذعية/ستروما (MSCs).
Introduction
خلية حركية عملية إنمائية والفسيولوجية طبيعية من الخلايا. ومع ذلك، تغييرات في النمط وقدرة الخلايا على الهجرة وغزو ترتبط بالحالات المرضية بما في ذلك أمراض التهابات وسرطان خبيث1،،من23. ورم خبيث هو يمكن القول أن الجانب الأكثر غير مفهومة في السرطان. السرطاني، خلايا السرطان يجب أن تتحلل المصفوفة الخلوية إضافية (ECM)، تغزو الأنسجة المحلية وإينترافاساتي. مرة واحدة في الدورة الدموية، والخلايا السرطانية سيتم نشر إلى الموقع البعيد واكسترافاساتي وتشكل الأورام الثانوية. ولذلك، القدرة الخلايا تتحلل إدارة المحتوى في المؤسسة، لترحيل، وغزو مرتبط بامكاناتهم المنتشر. وضعت نهوج مختلفة لتحليل وقياس قدرات الهجرة وغزو الخلايا. وتشمل النهج الأكثر استخداماً الجرح الشفاء المقايسة والوقت الفاصل بين الفحص المجهري والمقايسة الدائرة Boyden. الجرح الشفاء المقايسة4 ووقت مرور الفحص المجهري هي فحوصات بسيطة ومريحة التي سوف تعطي فكرة أولية عن الهجرة الخلية. ومع ذلك، وكلاهما فحوصات 2D لا تعكس البيئة ثلاثية الأبعاد التي توجد فيها الخلايا في الجسم الحي. وقد أظهرت الدراسات أن الخلايا تستجيب بشكل مختلف لبيئة ثلاثية الأبعاد بالمقارنة مع واحد 2D5،6. وعلاوة على ذلك، يصعب فحوصات شفاء الجرح إلى إنتاج وأن تسفر عن نتائج كمية7،،من89. والرزن خلية منطقة الاستبعاد، وتعديل 3D للجرح شفاء المقايسة، تحليل ذات صلة أكثر فسيولوجيا لكن أنها ليست مناسبة للخلايا منخفض في عدد مثل الخلايا المختلطة الناتجة عن خلية الانصهار الأحداث10،11 .
فحص الدائرة Boyden هو فحص ثلاثي الأبعاد الذي يوفر ميكرونفيرونمينتس ذات الصلة للدراسات الخلوية. ومع ذلك، فإنه يتطلب الخلايا المراد إزالتها من على المكروية الأصلي وأن تودع في مجلس الشيوخ نظام مقايسة Boyden لترحيل وغزو نازلا نحو المتوسطة المحتوية على تشيمواتراكتانت. هذا النهج ثلاثي الأبعاد غير المناسبة في تحليل القدرة على الهجرة وغزو الخلايا الضعيفة المكروية و/أو محدودة في عدد10،،من1112. اتباع نهج جديدة لتحليل الهجرة الخلية وغزو هو مقايسة13دائرة التدرج موائع جزيئية. على الرغم من مناسبة وموثوق بها في دراسات الهجرة والغزو، هذا التحليل هو أكثر تكلفة ويمكن أن تكون صعبة من الناحية الفنية لمختبر نموذجي. يصف لنا هنا مقايسة بسيطة غزو عمودي مقلوب هو متوافق مع العديد من أنواع الخلايا بما فيها الخلايا الحساسة لما المكروية و/أو المقيدة في عدد. وكان هذا التحليل مقتبس من البروتوكول المقترح من هوبر وآخرون 14-في هذا التحليل، تبقى الخلايا في بهم المكروية الأصلي وهجرتها ويرصد الغزو كما أنها تتحرك صعودا في جل الكولاجين التي تحتوي على تشيمواتراكتانت11. هذا التحليل استنساخه وقد الأمثل والتحقق من صحتها في الطبق الثقافة 35 ملم. فإنه يمكن تكييفه لظروف المقايسة مختلفة بما في ذلك الثقافة خلية مختلفة الأحجام، ومصفوفات مختلفة أو قوة الالتصاق، وتشيمواتراكتانتس المختلفة. يمكن هذا التحليل بمثابة منصة في المختبر للفحص الأولى في عملية اكتشاف المخدرات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ملاحظة: يتم وصف هذا البروتوكول في مكاردلي et al. 11-وضع جدول زمني ويرد في الشكل 1.
1-إعداد لوحة الثقافة
- أغسل الطبق الثقافة 35 ملم التي تحتوي على 10 ملم زجاج السفلي جيدا مع 1 مل حامض الهيدروكلوريك 1 م (HCl) لمدة 15 دقيقة لخفض hydrophobicity من الزجاج-الأسفل.
- أغسل لوحة الثقافة مرتين مع 1 مل من المحلول الملحي العازلة الفوسفات (PBS) للتخلص من جميع HCl.
- أغسل لوحة الثقافة مرتين مع 1 مل إيثانول 70%.
- شطف لوحة الثقافة مع 1 مل مستنبت الخلية المحددة (هنا، استخدام α-الفنزويلية وتستكمل مع الحرارة 10% إبطال FBS والأحماض الأمينية غير الأساسية 1%).
ملاحظة: يمكن تخزين لوحة الثقافة المعالجة التي تحتوي على المتوسط الثقافة في الحاضنة2 CO مع مرطب عند 37 درجة مئوية حتى اليوم التالي. - تنمو الخلايا (MSCs و MCF-7 ثقافة المشاركة) في أسفل الزجاج المعالجة جيدا للطبق الثقافة 35 ملم إلى 100% كونفلوينسي. شارك الثقافة 35,000 MSC الخلايا و 000 75 خلايا MCF7 ح 24.
2-إعداد جل الكولاجين
- تخزين نصائح ميكروبيبيتي تستخدم بيبيتينج جل الكولاجين في الثلاجة لمنع البلمرة الكولاجين عند الاتصال.
ملاحظة: وهذه هي الخطوة الأكثر أهمية. - تحديد وحدة تخزين الكولاجين ذيل الجرذ الأول لاستخدامها استناداً إلى تركيز المخزون الكولاجين. إعداد 100 ميليلتر من جل الكولاجين لهذا التحليل.
ملاحظة: تركيزات عالية من الكولاجين ذيل الجرذ أنا الأسهم يعمل بشكل أفضل. تحديد حجم 10 × المتوسطة "تعديل النسر" دولبيكو لاستخدامها لتمييع الكولاجين تبعاً لذلك. - ضم على الجليد فأر الذيل الكولاجين أنا (3.8 ميكروغرام/مل الأسهم) والمتوسطة "تعديل النسر" دولبيكو x 10 والمتوسطة الثقافة الخلية x 1 تستكمل مع 2% مصل بقرى الجنين و chemoattractant مناسبة لتركيز نهائي للكولاجين من 2.4 ملغ/مل.
- إضافة إلى الخليط 4.5% من حل بيكربونات الصوديوم لتحييد جل الكولاجين.
ملاحظة: قد تختلف حجم الحل بيكربونات الصوديوم المضافة على درجة الحموضة الدقيق الكواشف الأخرى. فمن الأفضل لاختبار الخليط مع شرائح الأس الهيدروجيني ضمان حل محايدة، أو استخدام مؤشر الرقم الهيدروجيني في الأجلين المتوسط والثقافة. - تكمن ميليلتر 80 من خليط الكولاجين فوق الخلايا داخل الزجاج-أسفل جيدا للطبق الثقافة.
- السماح الكولاجين هلام بلمرة لمدة 30 دقيقة في حاضنة2 CO مع مرطب عند 37 درجة مئوية.
- تغطي جل الكولاجين مع 2 مل من الخلية المتوسطة مع انخفاض مصل (2 في المائة)، واحتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية في حاضنة2 CO مع مرطب 24 أو 48 أو 72 ح.
تنبيه: اللوحة يجب أن تعالج الرعاية للحيلولة دون فصل من أسفل الزجاج جل الكولاجين.
3-مثال لإعداد الكولاجين هلام استخدام مخزون الكولاجين ذيل فأر من 3.8 ميكروغرام/mL
- على الجليد، والجمع بين ميليلتر 114.5 الكولاجين ذيل الفئران، 16.6 ميليلتر من 10 × دميم، وميليلتر 33.1 متوسطة الثقافة التي تحتوي على تشيمواتراكتانت.
- تحييد الخليط الكولاجين مع 14.0 ميليلتر من بيكربونات الصوديوم.
- ما زالت كما في الخطوة 2، 5.
4-التصوير من الخلايا
- قم بإزالة الوسائط بلطف من الطبق.
- بلطف شطف الجل مع 1 مل من برنامج تلفزيوني.
- إصلاح الخلايا مع 1 مل بارافورمالدهيد 4% لمدة 15 دقيقة.
- تغسل الخلايا مرتين مع 1 مل من برنامج تلفزيوني.
- وصمة عار في الخلايا التي تحتوي على الحل DAPI (100 نانوغرام/مل) لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
- صورة الخلايا باستخدام مجهر [كنفوكل] في مواقع مختلفة، وأخذ 400 ميكرون z-رص الصور من كل موقع في 16 ميكرومتر الخطوات. وقد المجهر يستخدم قرص المسح الضوئي وحدة تمكن [كنفوكل] التصوير باستخدام الضوء الأبيض، ومصدر الإثارة القوس. استخدام عدسة X 20 المستخدمة مع الفتحة العددية من 0.75.
- إعادة تشكيل الصور.
- فتح الصور لجل معين (حوالي 25 الصور) وإنشاء رصة صورة عن طريق النقر فوق الصورة ← مكدسات ← الصور المكدس. تقابل الصورة الأولى إلى الجزء السفلي من الهلام (z = 0 ميكرومتر)، الصورة الثانية يناظر الخطوة الأولى في اتجاه z (z = 16 ميكرومتر)، تقابل الصورة الثالثة إلى الخطوة الثانية في اتجاه z (z = 32 ميكرون). تقييم كل نواة في كل عمق الصورة وتعيين العمق الذي كان النواة في أشد التركيز كعمق الغزو لأن خلية معينة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
لقد استخدمنا طبق ثقافة 35 ملم مع زجاج السفلي والفئران الكولاجين ذيل الأول لتطوير وتحسين في المختبر غزو 3D الاعتداء البروتوكول. باستخدام هذا الفحص، واظهرنا ذلك الثدي الخلايا السرطانية MCF7 ولجنة السلامة البحرية يمكن أن تغزو الخلايا في جل الكولاجين إلى متوسط مسافة من 0.04 ± 1.8 ميكرومتر، و 41.3 ± 76.0 ميكرومتر على التوالي بعد 48 ساعة عندما IGF1 (18.6 نانوغرام/ملليلتر) استخدمت ك chemoattractant (الشكل 2). الأهم من ذلك، لقد أظهرنا أن يمكن أن تغزو المنتجات الانصهار من الخلايا ماجستير و MCF7، وخلايا نادرة، في جل الكولاجين، وكذلك. متوسط المسافة من الغزو في 48 ساعة كان 10.7 ± 12.4 ميكرومتر عندما الأنسولين الأول في 18.6 نانوغرام/مل تستخدم ك chemoattractant (الشكل 2). الفرق في القدرة على غزو بين MCF7 و MSCs معتدا به إحصائيا (P < 0.01)11. الفرق بين القدرة على غزو المنتجات الانصهار وواحدة من MCF7 أو MCSs لم يكن معتدا به إحصائيا. بيد أظهر هذا التحليل دائماً أن سرطان الخلية الانصهار المنتجات قدرة الكثيرة الارتحال والغازية أكبر من الخلايا السرطانية الأبوية، MCF7.
وظلت خلايا صحية في جميع أنحاء هذه التجارب كما هو موضح من قبل على مورفولوجيا وكمية ح 48 وظيفة جل البلمرة (الشكل 3). مع تصميم المقايسة غزو العمودي المقلوب، يمكن حركية الهجرة الخلية وغزو تم تحليلها (الشكل 3ب، 4) ومورفولوجيا الخلايا يمكن أن يكون تقييم (الشكل 4).
الشكل 1 : الخط الزمني لتصميم المقايسة غزو العمودي المقلوب الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : القدرة على غزو سرطان الخلية الانصهار المنتجات. ويمكن تحديد قدرة غزو سرطان الخلية الانصهار المنتجات باستخدام مقايسة غزو العمودي المقلوب. تمثل الأرقام غزو متوسط قدرة المنتجات الانصهار المستقلة الأربعة من ثلاث ثقافات المشارك منفصلة وخطوط الخلية الأبوية حلل من ثمانية مجالات مختلفة داخل كل المقايسة. وأجريت هذه التجربة في ثلاث نسخ. ANOVA مع HSD المخصصة بعد الاختبار في توكي. * * ف < 0.01. أشرطة الخطأ تمثل الانحراف المعياري (SD). وهذا الرقم تم تكييف من 11. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 : الخلية الجدوى وسلسلة Z للمقايسة غزو العمودي المقلوب.
أ) 20 × الصور الميدانية مشرق عرض مورفولوجيا الخلايا تحت جل الكولاجين بعد يومين. من اليسار إلى MCF7 الحق والثقافة المشتركة لجنة السلامة البحرية، و MCF7 ولجنة السلامة البحرية؛ ب) تمثيل سلسلة z عرض موقعين (الأول والثاني) داخل طبق من الأسفل إلى الأعلى. الصور المتتالية هي إلى جانب 16 ميكرومتر. 3.8% FBS استخدمت تشيمواتراكتانت. الأخضر الدوائر على كلا الفريقين تشير إلى الخلايا الغازية؛ ملاحظة، من التركيز في الجزء السفلي من الجل وفي التركيز في جل أعلى، الغازية إلى الهلام. دوائر حمراء على كلا الفريقين تشير إلى الخلايا المتبقية في الطبقة السفلي من سلسلة z (خلايا غير الغازية). مقياس بار (أ): 15 ميكرون؛ تغيير حجم شريط (ب): 10 ميكرون. وهذا الرقم تم تكييف من 11. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 : خلية مورفولوجيا في مقايسة غزو العمودي المقلوب. مورفولوجيا MSCs في جل الكولاجين في موقع واحد من الأسفل (Z = 0 ميكرومتر) إلى Z = 20 ميكرومتر. 3.8% FBS استخدمت تشيمواتراكتانت. يشير السهم طويلة إلى أطرافهم غزو ماجستير في الهلام. يشير رأس السهم إلى درجة ماجستير، والانحياز على طول الجزء السفلي من الهلام، وغير الغازية. يظهر الأزرق وصمة DAPI النووية بينما الأحمر يظهر خيوط أكتين فالويدين الملون. وهذا الرقم تم تكييف من 11. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
هنا، نحن تصف مقايسة غزو عمودي مقلوب بسيطة وملائمة لمجموعة متنوعة من أنواع الخلايا، بما في ذلك الخلايا التي نادرة و/أو تعتمد على بهم المكروية. في هذه المقايسة غزو 3D، الخلايا تظل في بهم المكروية الأصلي ومشمولة جل الكولاجين التي تحتوي على تشيمواتراكتانت. الخلايا ثم ترحيل وغزو في الكولاجين. في هذا التحليل، يمكن الملون الخلايا ورصدها بسهولة داخل الجل. بالبساطة وإمكانية تكرار نتائج من هذا التحليل يجعله أداة ملائمة لدراسة سرطان الخلية الهجرة والغزو في نظام ثلاثي الأبعاد. ومع ذلك، يبدو تشيمواتراكتانتس قوية المطلوبة لكسر تقارب الخلية إلى أسفل الطبق الثقافة.
نحن الأمثل المقايسة غزو العمودي المعكوس في الطبق الثقافة 35 ملم. وقد طبق هذه الثقافة زجاج 10 مم-قاع جيدا الذي مجهز جيدا للتصوير. واحد الحد من هذا الطبق الثقافة هو القدر الكبير من جل الكولاجين المطلوبة للقيام تحليل. وسيكون إيجاد أطباق الثقافة أصغر مع تصميم متوافق مع تصوير أكثر اقتصادا. جل الطبقة المناسبة لتصميم طبق 35 ملم حساس جداً بسبب قوتها ويمكن فصلها بسهولة من الجزء السفلي من اللوحة إذا لم تعالج بعناية. تصميم ثقافة خلية مختلفة قد تحسين استقرار طبقة جل الكولاجين ولكن ينبغي أن يكون الأمثل التوافق بين صلاحية القوة وخلية جل الكولاجين.
وعلى الرغم من هذه القيود، يعرض المقايسة غزو العمودي المقلوب العديد من المزايا مقارنة بالأشكال المقايسة غزو ثلاثية الأبعاد الأخرى. الفائدة الرئيسية هي أن الخلايا تظل في بيئتهم الثقافة الأصلية، الذي ليس هو الحال في فحص الدائرة Boyden. يحتفظ هذا البروتوكول المكروية الخلية التي مفيدة لخلايا صارم يسيطر على المكروية مثل الخلايا الجذعية البالغة15. كما يمنع هذا التحليل تلف الخلايا أو فقدان خلية خاصة بالنسبة للخلايا التي تكون حساسة أو نادرة10،11. وبالإضافة إلى ذلك، مع هذا التحليل، مورفولوجيا الخلايا والحركية المرتبطة بها يمكن تقييم داخل الجل، الذي غير ممكن مع المقايسة الدائرة Boyden. علاوة على ذلك، لا يستخدم البولي غير الفيزيولوجي أو تصفية البوليبروبيلين نظام مقايسة الدائرة Boyden في مقايسة غزو العمودي المقلوب. مقايسة غزو العمودي المقلوب تصميم ثابت، فإنه لا تقليد في فيفو دينامية البيئة أن يوفر تصميم المقايسة غزو موائع جزيئية لكنه يوفر أبسط، أقل البيئة 3D الصعبة وفعالة من حيث التكلفة لقياس الهجرة وغزو لمجموعة متنوعة من أنواع الخلايا في المكروية التي تسيطر عليها والحفاظ عليها.
وقد المقايسة غزو العمودي المقلوب العديد من التطبيقات المحتملة في الدراسات الفيزيولوجية المرضية. هذا النهج يمكن أن يفيد كمنصة في المختبر لدراسة حركية الخلية أثناء التطور الجنيني، الجرح الشفاء، و/أو استجابات التحريضية3. ويمكن أيضا استقصاء خلية التفاعل مع إدارة المحتوى في المؤسسة وأنواع الخلايا الأخرى أثناء الهجرة وغزو استخدام هذا البروتوكول. هذا التحليل يمكن أن تمثل أيضا أداة مفيدة للفحص الأولى المخدرات المنتشر لمكافحة المخدرات. ويمكن وضع نظام نموذجية الخاصة بالجهاز سرطان خبيث باستخدام مقايسة غزو العمودي المقلوب، فضلا عن.
ووضعت المقايسة غزو العمودي المقلوب للتحايل على التحدي الذي يقدم إلى تشريد بعض الخلايا من بهم المكروية الأصلي في منظومة المقايسة الدائرة Boyden. هذا التحليل سهل وموثوق بها، واستنساخه؛ أنه يتسم بالمرونة ويمكن استخدامها لتقدير الإمكانات الغازية من طائفة واسعة من أنواع الخلايا، بما في ذلك أنواع الخلايا حساسة ونادرة. هذا التحليل يمكن تطبيقها على الكشف عن نشاط الهجرة المرتبطة بتدهور مصفوفة، ويمكن تكييفها لدراسة النشاط المهينة انتقائية على ركائز مصفوفة مختلفة أيضا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وقد أعلن الكتاب أنه لا يوجد أي المصالح المتنافسة.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل "المعاهد الوطنية للصحة" (نيمهد-G12MD007581) من خلال ركمي-المركز "الصحة البيئية" في جامعة ولاية جاكسون والإدارة الأمريكية للدفاع، فكرة جائزة 11-1-0205.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MatTek P35G-1.5-10C | MatTek Corporation, Ashland, MA | P35G-1.5-10-C | mattek glass bottom dishes |
| Rat tail collagen I | Corning, Corning, NY, USA | 354236 | Collagen gel |
| Hydrochloric acid | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA | H1758 | HCl |
| Phosphate buffered saline | Thermo Fisher Scientific Inc., Whaltham, MA, USA | 10010023 | PBS |
| 10X Dulbecco's Modified Eagle's Medium | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA | D2429 | 10X DMEM |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA | S5761 | NaHCO3 |
| Confocal Fluorescent microscope | Olympus America, Center Valley, PA, USA | Olympus IX81 | Confocal microscope |
| Defined Fetal Bovine Serum | GE Healthcare Life Sciences HyClone Laboratories, Utah, USA | SH30070.03 | FBS |
| Ti:Sapphire multi-photon laser scanning microscope | Prarie Technologies, Sioux Falls, SD, USA | 40x NA 0.8 objective | MPLSM |
| Imaris software | Bitplane Inc. Zurich, CH | Imaris 7.5.2 | Imaris software |
| DAPI | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178, USA | D9542 | DAPI |
| Paraformaldehyde | Thermo Fisher Scientific Inc., Whaltham, MA, USA | 50980487 | PFA |
| α-minimum essential medium | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178, USA | M0894 | |
| MDA-MB-231 | ATCC; Manassas, VA, USA | HBT-22 | |
| MSC | Trivedi and Hematti, 2007 | ||
| 20X lens UPLAPO | Olympus America, Center Valley, PA, USA | 36-064 | Olympus UPLSAPO 20X Objective |
References
- Friedl, P., Brocker, E. B. The biology of cell locomotion within three-dimensional extracellular matric. Cell Mol Life Sci. 57, 41-64 (2000).
- Bissell, M. J., Rizki, A., Mian, I. S. Tissue architecture: the ultimate regulator of breast epithelial function. Curr Opin Cell Biol. 15, 753-762 (2003).
- Friedl, P., Wolf, K. Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms. Nat Rev Cancer. 3, 362-374 (2003).
- Yarrow, J. C., Perlman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparison of image-based readout methods. BMC Biotechnol. 4, 21 (2004).
- Wolf, K., et al. Compensation mechanism in tumor cell migration: mesenchymal-amoeboid transition after blocking of pericellular proteolysis. J Cell Biol. 160, 267-277 (2003).
- Sahai, E., Marshall, C. J. Differing modes of tumour cell invasion have distinct requirements for Rho/ROCK signalling and extracellular proteolysis. Nat Cell Biol. 5, 711-719 (2003).
- Kam, Y., Guess, C., Estrada, L., Weidow, B., Quaranta, V. A novel circular invasion assay mimics in vivo invasive behavior of cancer cell lines and distinguishes single-cell motility in vitro. BMC Cancer. 8, 198 (2008).
- Staton, C. A., Reed, M. W., Brown, N. J. A critical analysis of current in vitro and in vivo angiogenesis assays. Int J Exp Pathol. 90, 195-221 (2009).
- Poujade, M., et al. Collective migration of an epithelial monolayer in response to a model wound. Proc Natl Acad Sci USA. 104, 15988-15993 (2007).
- Noubissi, F. K., Harkness, T., Alexander, C. M., Ogle, B. M. Apoptosis-induced cancer cell fusion: a mechanism of breast cancer metastasis. FASEB J. 29, 4036-4045 (2015).
- McArdle, T. J., Ogle, B. M., Noubissi, F. K. An In Vitro Inverted Vertical Invasion Assay to Avoid Manipulation of Rare or Sensitive Cell Types. J Cancer. 7, 2333-2340 (2016).
- Noubissi, F. K., Ogle, B. M. Cancer Cell Fusion: Mechanisms Slowly Unravel. Int J Mol Sci. 17, (2016).
- Meyvantsson, I., Beebe, D. J. Cell culture models in microfluidic systems. Annu Rev Anal Chem. 1, 423-449 (2008).
- Hooper, S., Marshall, J. F., Sahai, E. Tumor cell migration in three dimensions. Methods In Enzymol. 406, 625-643 (2006).
- Yang, C., Tibbitt, M. W., Basta, L., Anseth, K. S. Mechanical memory and dosing influence stem cell fate. Nat Materials. 13, 645-652 (2014).
